大腸菌群檢測操作規(guī)范課件

大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)1目錄一、細菌介紹二、大腸桿菌生物學(xué)特性三、大腸桿菌檢測儀器、設(shè)備四、檢測培養(yǎng)基及試劑五、檢測前培養(yǎng)基準(zhǔn)備六、接種培養(yǎng)七、MPN單位介紹八、檢測注意事項目錄一、細菌介紹2一、細菌介紹細菌是單細胞原核微生物，個體微?。毎睆郊s0.5μm,0.5-5μm），結(jié)構(gòu)簡單，以二等分裂方式繁殖。在自然界中，細菌分布最廣、數(shù)量最多。一、細菌介紹細菌是單細胞原核微生物，個體微?。毎睆郊s0.31、細菌的形態(tài)

細菌個體微小、形態(tài)各異球菌桿菌弧菌與彎曲菌螺旋菌及螺旋體不規(guī)則形弧菌1、細菌的形態(tài)細菌個體微小、形態(tài)各異弧菌42、細菌的結(jié)構(gòu)

細菌的基本結(jié)構(gòu)包括：細胞壁、細胞膜、間體、細胞漿、核糖體、細胞質(zhì)。細菌的附屬結(jié)構(gòu)包括：質(zhì)粒、莢膜、鞭毛、菌毛和芽胞。2、細菌的結(jié)構(gòu)細菌的基本結(jié)構(gòu)包括：細胞壁、細胞膜、間體、53、細菌的繁殖

細菌最普遍、最主要的繁殖方式：二分分裂繁殖。在分裂前先延長菌體，染色體復(fù)制為二，然后垂直于長軸分裂，細胞赤道附近的細胞質(zhì)膜凹陷生長，直至形成橫隔膜，同時形成橫隔壁，這樣便產(chǎn)生兩個子細胞。

3、細菌的繁殖細菌最普遍、最主要的繁殖方式：二分分裂繁殖。64、細菌的菌落

單個或少數(shù)細菌細胞生長繁殖后，會形成以母細胞為中心的一堆肉眼可見、有一定形態(tài)構(gòu)造的子細胞集團－菌落。4、細菌的菌落單個或少數(shù)細菌細胞生長繁殖后，會形成以母細胞7革蘭氏染色：見《革蘭氏染色及鏡檢操作規(guī)范》。如果只有紅色或粉色菌落，應(yīng)挑取3個進行革蘭氏染色，并接種乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基。雙料的先接生理鹽水管，接1ml原樣，再接10ml的原樣。架盤藥物天平：0g～500g，精確至0.另用1ml滅菌移液管分別吸取1ml樣品試液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。食品大腸菌群是以每克或100ML中大腸菌群的最近似值，是用MPN來表示。4、先熄滅酒精燈再擦拭操作臺和酒精燈。在無菌條件下，用1ml滅菌吸管吸取1ml樣品試液于含有9ml0.4、接種過程操作錄像檢測\雙料大腸檢測.按產(chǎn)品品種將培養(yǎng)基分別放在試管架內(nèi)，同時將9ml0.乳糖膽鹽發(fā)酵管：用于大腸菌群的測定。3、拿刻度吸管時，注意用手托住吸管筒輕輕抖出。85%滅菌鹽水試管中，振蕩搖勻制成1:10的稀釋液；架盤藥物天平：0g～500g，精確至0.根據(jù)證實為大腸菌群的陽性管數(shù)，查MPN檢索表，查找每100ml樣品內(nèi)的大腸菌群的MPN值。在自然界中，細菌分布最廣、數(shù)量最多。如果有紅色和粉色菌落，則各挑取3個做革蘭氏染色，各挑取3個接種乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基混合接種。凡是革蘭氏陰性無芽孢桿菌乳糖發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣的菌落即可報告大腸菌群陽性。若有產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則要做證實試驗。滅菌吸管：1ml、10ml細菌菌落常表現(xiàn)為濕潤、粘稠、光滑、較透明、易挑取、質(zhì)地均勻以及菌落正反面或邊緣與中央部位顏色一致等。

革蘭氏染色：見《革蘭氏染色及鏡檢操作規(guī)范》。細菌菌落常表現(xiàn)為8細菌的菌落圖細菌的菌落圖9二、大腸桿菌生物學(xué)特性大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。主要包括埃希氏菌、檸檬酸細菌、腸桿菌、克雷伯氏菌等，均屬于腸桿菌。二、大腸桿菌生物學(xué)特性大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、10大腸菌群以大腸埃希氏菌為主，是革蘭氏陰性、兩端鈍圓的桿菌，無芽孢，以周生鞭毛運動或不運動。最適生長溫度為37℃，在42-44℃條件下仍能生長，生長溫度范圍為15-46℃。大腸菌群以大腸埃希氏菌為主，是革蘭氏陰性、兩端鈍圓的桿菌，無111、大腸桿菌平板菌落圖片1、大腸桿菌平板菌落圖片122、大腸桿菌革蘭氏染色圖片2、大腸桿菌革蘭氏染色圖片133、大腸桿菌微菌落圖片3、大腸桿菌微菌落圖片144、大腸桿菌透射電鏡圖片4、大腸桿菌透射電鏡圖片155、大腸桿菌掃描電鏡圖片5、大腸桿菌掃描電鏡圖片166、大腸桿菌分裂圖片6、大腸桿菌分裂圖片17三、檢測儀器、設(shè)備

冰箱：0～4℃

恒溫培養(yǎng)箱：36±1℃

恒溫水浴鍋：46±1℃

微生物顯微鏡三、檢測儀器、設(shè)備冰箱：0～4℃18架盤藥物天平：0g～500g，精確至0.5g

三角瓶：500ml

滅菌吸管：1ml、10ml

滅菌平皿：直徑90mm

試管：18×180mm架盤藥物天平：0g～500g，精確至0.5g19四、檢測培養(yǎng)基及試劑乳糖膽鹽發(fā)酵管伊紅美藍瓊脂乳糖發(fā)酵管革蘭氏染色液生理鹽水四、檢測培養(yǎng)基及試劑乳糖膽鹽發(fā)酵管20乳糖膽鹽發(fā)酵管：用于大腸菌群的測定。35g乳糖膽鹽于1升蒸餾水中，溶解，分裝于發(fā)酵試管中，放入小倒管，115℃15分鐘高壓滅菌。雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管除蒸餾水外，其它成分加倍。乳糖膽鹽發(fā)酵管：用于大腸菌群的測定。35g乳糖膽鹽于1升蒸餾21細菌是單細胞原核微生物，個體微?。毎睆郊s0.5-5μm），結(jié)構(gòu)簡單，以二等分裂方式繁殖。架盤藥物天平：0g～500g，精確至0.若有產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則要做證實試驗。最適生長溫度為37℃，在42-44℃條件下仍能生長，生長溫度范圍為15-46℃。35g乳糖膽鹽于1升蒸餾水中，溶解，分裝于發(fā)酵試管中，放入小倒管，115℃15分鐘高壓滅菌。85%滅菌鹽水試管中，振蕩搖勻制成1:10的稀釋液；活性乳酸菌飲料系列產(chǎn)品接種雙料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基3支管，單料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基6支，分別接種樣品量為10ml3支，1ml3支，0.伊紅美蘭瓊脂：用于大腸菌群的固體平板檢測。在伊紅美藍瓊脂平板上的菌落如為深紫色有金屬光澤，則為典型菌落，98%以上為大腸菌群。在無菌條件下，用1ml滅菌吸管吸取1ml樣品試液于含有9ml0.另用1ml滅菌移液管分別吸取1ml樣品試液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。1、伊紅美藍瓊脂平板分離凡是革蘭氏陰性無芽孢桿菌乳糖發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣的菌落即可報告大腸菌群陽性。如果有紅色和粉色菌落，則各挑取3個做革蘭氏染色，各挑取3個接種乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基混合接種。伊紅美蘭瓊脂：用于大腸菌群的固體平板檢測。85%滅菌鹽水試管中，振蕩搖勻制成1:10的稀釋液；根據(jù)證實為大腸菌群的陽性管數(shù)，查MPN檢索表，查找每100ml樣品內(nèi)的大腸菌群的MPN值。4、先熄滅酒精燈再擦拭操作臺和酒精燈。挑取可疑菌落進行革蘭氏染色后接種乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基，置于36±1℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h，觀察產(chǎn)氣情況。滅菌平皿：直徑90mm乳糖發(fā)酵管：大腸菌群證實試驗用。30g乳糖于1升蒸餾水中，溶解，分裝于發(fā)酵試管中，放入小倒管，115℃15分鐘高壓滅菌。細菌是單細胞原核微生物，個體微?。毎睆郊s0.乳糖發(fā)酵管：22伊紅美蘭瓊脂：用于大腸菌群的固體平板檢測。37.5g于1升蒸餾水中，搖勻，加熱煮沸，121℃15分鐘高壓滅菌。伊紅美蘭瓊脂：用于大腸菌群的固體平板檢測。37.5g于1升23五、檢測前培養(yǎng)基準(zhǔn)備

檢查預(yù)先經(jīng)過滅菌處理的乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基小導(dǎo)管內(nèi)是否有氣體。按產(chǎn)品品種將培養(yǎng)基分別放在試管架內(nèi)，同時將9ml0.85%滅菌鹽水管也放入相應(yīng)的試管架內(nèi)。五、檢測前培養(yǎng)基準(zhǔn)備檢查預(yù)先經(jīng)過滅菌處理的乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)24六、接種培養(yǎng)

（一）酸牛奶系列產(chǎn)品酸牛奶系列產(chǎn)品接種單料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基9支管，分別接種樣品量為1ml(原濃度)3支，0.1ml(10-1濃度)3支，0.01ml(10-2濃度)3支。

六、接種培養(yǎng)（一）酸牛奶系列產(chǎn)品251、1ml接種培養(yǎng)在無菌條件下，用1ml滅菌吸管吸取1ml樣品試液于含有9ml0.85%滅菌鹽水試管中，振蕩搖勻制成1:10的稀釋液；同時分別吸取1ml樣品試液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。1、1ml接種培養(yǎng)在無菌條件下，用1ml滅菌吸管吸取1ml262、0.1ml接種培養(yǎng)另換1根1ml滅菌移液管吸取1:10的稀釋液1ml于含有9ml0.85%滅菌鹽水試管中，振蕩搖勻制成1:100的稀釋液；同時分別吸取1ml1:10稀釋液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。2、0.1ml接種培養(yǎng)另換1根1ml滅菌移液管吸取1:10273、

0.01ml接種培養(yǎng)另換1根1ml滅菌移液管分別吸取1ml1:100稀釋液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。3、0.01ml接種培養(yǎng)另換1根1ml滅菌移液管分別吸取12835g乳糖膽鹽于1升蒸餾水中，溶解，分裝于發(fā)酵試管中，放入小倒管，115℃15分鐘高壓滅菌。在自然界中，細菌分布最廣、數(shù)量最多。5、剪刀用完后及時的進行擦拭干凈。挑取可疑菌落進行革蘭氏染色后接種乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基，置于36±1℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h，觀察產(chǎn)氣情況。同時用10ml滅菌吸管分別吸取10ml樣品試液于3支雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。滅菌吸管：1ml、10ml同時分別吸取1ml樣品試液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。1、用酒精棉球擦拭操作臺，點酒精燈，消毒手，擦拭樣品表面并記錄，消毒手，消毒剪刀，剪開樣品袋。4、接種過程操作錄像檢測\雙料大腸檢測.雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管除蒸餾水外，其它成分加倍。5、剪刀用完后及時的進行擦拭干凈。試管：18×180mm85%滅菌鹽水試管中，振蕩搖勻制成1:10的稀釋液；試管：18×180mm主要包括埃希氏菌、檸檬酸細菌、腸桿菌、克雷伯氏菌等，均屬于腸桿菌。在分裂前先延長菌體，染色體復(fù)制為二，然后垂直于長軸分裂，細胞赤道附近的細胞質(zhì)膜凹陷生長，直至形成橫隔膜，同時形成橫隔壁，這樣便產(chǎn)生兩個子細胞。1、大腸桿菌平板菌落圖片挑取可疑菌落進行革蘭氏染色后接種乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基，置于36±1℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h，觀察產(chǎn)氣情況。在自然界中，細菌分布最廣、數(shù)量最多。1、伊紅美藍瓊脂平板分離4、接種過程操作錄像檢測\單料大腸檢測.MPG35g乳糖膽鹽于1升蒸餾水中，溶解，分裝于發(fā)酵試管中，放入小29討論錄像中存在的問題：1、整個微生物檢測前應(yīng)先消毒手。2、為了盡量減少污染，接種培養(yǎng)時先接生理鹽水管再接乳糖膽鹽發(fā)酵管。3、拿刻度吸管時，注意用手托住吸管筒輕輕抖出。4、先熄滅酒精燈再擦拭操作臺和酒精燈。5、剪刀用完后及時的進行擦拭干凈。討論錄像中存在的問題：305、接種后培養(yǎng)將接種完的試管連同試管架一起置于36±1℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h，觀察乳糖膽鹽發(fā)酵管的變化情況。5、接種后培養(yǎng)將接種完的試管連同試管架一起置于36±1℃的培316、結(jié)果查詢并記錄若所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則報告大腸菌群陰性。若有產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則要做證實試驗。6、結(jié)果查詢并記錄若所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則報告大32（二）活性乳酸菌飲料系列產(chǎn)品活性乳酸菌飲料系列產(chǎn)品接種雙料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基3支管，單料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基6支，分別接種樣品量為10ml3支，1ml3支，0.1ml3支。（二）活性乳酸菌飲料系列產(chǎn)品活性乳酸菌飲料系列產(chǎn)品接種雙料乳331、10ml接種培養(yǎng)在無菌條件下，用1ml滅菌吸管吸取1ml樣品試液于含有9ml0.85%滅菌鹽水試管中，振蕩搖勻制成1:10的稀釋液；同時用10ml滅菌吸管分別吸取10ml樣品試液于3支雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。1、10ml接種培養(yǎng)在無菌條件下，用1ml滅菌吸管吸取1m34另換1根1ml滅菌移液管分別吸取1ml1:10稀釋液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。在伊紅美藍瓊脂平板上的菌落如為深紫色有金屬光澤，則為典型菌落，98%以上為大腸菌群。另換1根1ml滅菌移液管分別吸取1ml1:10稀釋液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。試管：18×180mm在自然界中，細菌分布最廣、數(shù)量最多。將產(chǎn)酸產(chǎn)氣乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)的培養(yǎng)物分別接種于伊紅美蘭瓊脂平板(劃線分離)，置于36±1℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h。試管：18×180mm1、伊紅美藍瓊脂平板分離試管：18×180mm同時分別吸取1ml樣品試液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。如果有紅色和粉色菌落，則各挑取3個做革蘭氏染色，各挑取3個接種乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基混合接種。根據(jù)證實為大腸菌群的陽性管數(shù)，查MPN檢索表，查找每100ml樣品內(nèi)的大腸菌群的MPN值。最適生長溫度為37℃，在42-44℃條件下仍能生長，生長溫度范圍為15-46℃。2、大腸桿菌革蘭氏染色圖片在自然界中，細菌分布最廣、數(shù)量最多。4、接種過程操作錄像檢測\雙料大腸檢測.恒溫培養(yǎng)箱：36±1℃凡是革蘭氏陰性無芽孢桿菌乳糖發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣的菌落即可報告大腸菌群陽性。4、接種過程操作錄像檢測\雙料大腸檢測.85%滅菌鹽水試管中，振蕩搖勻制成1:100的稀釋液；2、1ml接種培養(yǎng)另用1ml滅菌移液管分別吸取1ml樣品試液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。另換1根1ml滅菌移液管分別吸取1ml1:10稀釋液于3支353、0.1ml接種培養(yǎng)另換1根1ml滅菌移液管分別吸取1ml1:10稀釋液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。3、0.1ml接種培養(yǎng)另換1根1ml滅菌移液管分別吸取1m364、接種過程操作錄像檢測\雙料大腸檢測.MPG4、接種過程操作錄像檢測\雙料大腸檢測.MPG37討論錄像中存在的細節(jié)問題：1、整個微生物檢測前應(yīng)先消毒手。2、為了盡量減少污染，接種培養(yǎng)時先接生理鹽水管再接乳糖膽鹽發(fā)酵管。3、拿刻度吸管時，注意用手托住吸管筒輕輕抖出。4、先熄滅酒精燈再擦拭操作臺和酒精燈。5、剪刀用完后及時的進行擦拭干凈。討論錄像中存在的細節(jié)問題：385、接種后培養(yǎng)將接種完的試管連同試管架一起置于36±1℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h，觀察乳糖膽鹽發(fā)酵管的變化情況。5、接種后培養(yǎng)將接種完的試管連同試管架一起置于36±1℃的培396、結(jié)果查詢并記錄若所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則報告大腸菌群陰性。若有產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則要做證實試驗。6、結(jié)果查詢并記錄若所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則報告大40（三）證實試驗1、伊紅美藍瓊脂平板分離將產(chǎn)酸產(chǎn)氣乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)的培養(yǎng)物分別接種于伊紅美蘭瓊脂平板(劃線分離)，置于36±1℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h。（三）證實試驗1、伊紅美藍瓊脂平板分離41接種和分離工具1．接種針2.接種環(huán)3.接種鉤4.5.玻璃涂棒6.接種圈7.接種鋤8.小解剖刀接種和分離工具1．接種針2.接種環(huán)3.接種鉤4.5.玻42平板分離畫線法1.斜線法2.曲線法3.方格法4.放射法5.四格法平板分離畫線法1.斜線法2.曲線法3.方格法4.放射法43將伊紅美藍瓊脂平板從培養(yǎng)箱取出后,觀察菌落形態(tài)，并做革蘭氏染色和乳糖復(fù)發(fā)酵試驗。革蘭氏染色：見《革蘭氏染色及鏡檢操作規(guī)范》。將伊紅美藍瓊脂平板從培養(yǎng)箱取出后,觀察菌落形態(tài)，并做革蘭氏染44挑取可疑菌落進行革蘭氏染色后接種乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基，置于36±1℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h，觀察產(chǎn)氣情況。若有產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則要做證實試驗。根據(jù)證實為大腸菌群的陽性管數(shù)，查MPN檢索表，查找每100ml樣品內(nèi)的大腸菌群的MPN值。細菌的附屬結(jié)構(gòu)包括：質(zhì)粒、莢膜、鞭毛、菌毛和芽胞。5、大腸桿菌掃描電鏡圖片二、大腸桿菌生物學(xué)特性4、接種過程操作錄像檢測\雙料大腸檢測.大腸菌群以大腸埃希氏菌為主，是革蘭氏陰性、兩端鈍圓的桿菌，無芽孢，以周生鞭毛運動或不運動。滅菌吸管：1ml、10ml3、拿刻度吸管時，注意用手托住吸管筒輕輕抖出。4、接種過程操作錄像檢測\雙料大腸檢測.細菌個體微小、形態(tài)各異若有產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則要做證實試驗。1、伊紅美藍瓊脂平板分離伊紅美蘭瓊脂：用于大腸菌群的固體平板檢測。細菌是單細胞原核微生物，個體微?。毎睆郊s0.將產(chǎn)酸產(chǎn)氣乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)的培養(yǎng)物分別接種于伊紅美蘭瓊脂平板(劃線分離)，置于36±1℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h。1、整個微生物檢測前應(yīng)先消毒手。乳糖膽鹽發(fā)酵管：用于大腸菌群的測定。試管：18×180mm（四）乳糖發(fā)酵試驗挑取可疑菌落進行革蘭氏染色后接種乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基，置于36±1℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h，觀察產(chǎn)氣情況。挑取可疑菌落進行革蘭氏染色后接種乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基，置于36±145凡是革蘭氏陰性無芽孢桿菌乳糖發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣的菌落即可報告大腸菌群陽性。凡是革蘭氏陰性無芽孢桿菌乳糖發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣的菌落即可報告大腸46根據(jù)證實為大腸菌群的陽性管數(shù)，查MPN檢索表，查找每100ml樣品內(nèi)的大腸菌群的MPN值。根據(jù)證實為大腸菌群的陽性管數(shù)，查MPN檢索表，查找每100m47七、MPN單位介紹MPN=MostProbableNumber，最大可能數(shù)，是一種利用統(tǒng)計學(xué)檢測微生物的方法。食品大腸菌群是以每克或100ML中大腸菌群的最近似值，是用MPN來表示。七、MPN單位介紹MPN=MostProbableNum48采用9管法，對樣品選三個稀釋度，每個稀釋度接種三管相應(yīng)的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，然后根據(jù)情況做出判斷陽性和陰性，再根據(jù)不同稀釋度的陽性管數(shù)查表即可得到被測樣品相應(yīng)指標(biāo)的MPN值。采用9管法，對樣品選三個稀釋度，每個稀釋度接種三管相應(yīng)的培養(yǎng)49八、注意事項

乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)小導(dǎo)管內(nèi)如無氣泡，需輕振試管，若有氣泡上冒，也算產(chǎn)氣。在伊紅美藍瓊脂平板上的菌落如為深紫色有金屬光澤，則為典型菌落，98%以上為大腸菌群。八、注意事項乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)小導(dǎo)管內(nèi)如無氣泡，需輕振試管50革蘭氏染色和乳糖復(fù)發(fā)酵時如有典型菌落，則挑取典型菌落；無典型菌落，應(yīng)挑取紅色和粉色菌落。如果只有紅色或粉色菌落，應(yīng)挑取3個進行革蘭氏染色，并接種乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基。如果有紅色和粉色菌落，則各挑取3個做革蘭氏染色，各挑取3個接種乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基混合接種。革蘭氏染色和乳糖復(fù)發(fā)酵時如有典型菌落，則挑取典型菌落；無典型51另換1根1ml滅菌移液管吸取1:10的稀釋液1ml于含有9ml0.5-5μm），結(jié)構(gòu)簡單，以二等分裂方式繁殖。3、拿刻度吸管時，注意用手托住吸管筒輕輕抖出。革蘭氏染色和乳糖復(fù)發(fā)酵時如有典型菌落，則挑取典型菌落；細菌個體微小、形態(tài)各異革蘭氏染色：見《革蘭氏染色及鏡檢操作規(guī)范》。將產(chǎn)酸產(chǎn)氣乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)的培養(yǎng)物分別接種于伊紅美蘭瓊脂平板(劃線分離)，置于36±1℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h。挑取可疑菌落進行革蘭氏染色后接種乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基，置于36±1℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h，觀察產(chǎn)氣情況。同時分別吸取1ml樣品試液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。4、接種過程操作錄像檢測\單料大腸檢測.挑取可疑菌落進行革蘭氏染色后接種乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基，置于36±1℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h，觀察產(chǎn)氣情況。大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。細菌是單細胞原核微生物，個體微?。毎睆郊s0.根據(jù)證實為大腸菌群的陽性管數(shù)，查MPN檢索表，查找每100ml樣品內(nèi)的大腸菌群的MPN值。乳糖發(fā)酵管：大腸菌群證實試驗用。革蘭氏染色和乳糖復(fù)發(fā)酵時如有典型菌落，則挑取典型菌落；乳糖膽鹽發(fā)酵管：用于大腸菌群的測定。滅菌吸管：1ml、10ml2、為了盡量減少污染，接種培養(yǎng)時先接生理鹽水管再接乳糖膽鹽發(fā)酵管。4、先熄滅酒精燈再擦拭操作臺和酒精燈。在伊紅美藍瓊脂平板上的菌落如為深紫色有金屬光澤，則為典型菌落，98%以上為大腸菌群。大腸桿菌接種培養(yǎng)流程1、用酒精棉球擦拭操作臺，點酒精燈，消毒手，擦拭樣品表面并記錄，消毒手，消毒剪刀，剪開樣品袋。2、接種培養(yǎng)時，先接生理水管，再接乳糖膽鹽發(fā)酵管。雙料的先接生理鹽水管，接1ml原樣，再接10ml的原樣。3、操作完后，先熄滅酒精燈再消毒操作臺和擦拭酒精燈外周。另換1根1ml滅菌移液管吸取1:10的稀釋液1ml于含有9m52大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)53目錄一、細菌介紹二、大腸桿菌生物學(xué)特性三、大腸桿菌檢測儀器、設(shè)備四、檢測培養(yǎng)基及試劑五、檢測前培養(yǎng)基準(zhǔn)備六、接種培養(yǎng)七、MPN單位介紹八、檢測注意事項目錄一、細菌介紹54一、細菌介紹細菌是單細胞原核微生物，個體微?。毎睆郊s0.5μm,0.5-5μm），結(jié)構(gòu)簡單，以二等分裂方式繁殖。在自然界中，細菌分布最廣、數(shù)量最多。一、細菌介紹細菌是單細胞原核微生物，個體微?。毎睆郊s0.551、細菌的形態(tài)

細菌個體微小、形態(tài)各異球菌桿菌弧菌與彎曲菌螺旋菌及螺旋體不規(guī)則形弧菌1、細菌的形態(tài)細菌個體微小、形態(tài)各異弧菌562、細菌的結(jié)構(gòu)

細菌的基本結(jié)構(gòu)包括：細胞壁、細胞膜、間體、細胞漿、核糖體、細胞質(zhì)。細菌的附屬結(jié)構(gòu)包括：質(zhì)粒、莢膜、鞭毛、菌毛和芽胞。2、細菌的結(jié)構(gòu)細菌的基本結(jié)構(gòu)包括：細胞壁、細胞膜、間體、573、細菌的繁殖

細菌最普遍、最主要的繁殖方式：二分分裂繁殖。在分裂前先延長菌體，染色體復(fù)制為二，然后垂直于長軸分裂，細胞赤道附近的細胞質(zhì)膜凹陷生長，直至形成橫隔膜，同時形成橫隔壁，這樣便產(chǎn)生兩個子細胞。

3、細菌的繁殖細菌最普遍、最主要的繁殖方式：二分分裂繁殖。584、細菌的菌落

單個或少數(shù)細菌細胞生長繁殖后，會形成以母細胞為中心的一堆肉眼可見、有一定形態(tài)構(gòu)造的子細胞集團－菌落。4、細菌的菌落單個或少數(shù)細菌細胞生長繁殖后，會形成以母細胞59革蘭氏染色：見《革蘭氏染色及鏡檢操作規(guī)范》。如果只有紅色或粉色菌落，應(yīng)挑取3個進行革蘭氏染色，并接種乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基。雙料的先接生理鹽水管，接1ml原樣，再接10ml的原樣。架盤藥物天平：0g～500g，精確至0.另用1ml滅菌移液管分別吸取1ml樣品試液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。食品大腸菌群是以每克或100ML中大腸菌群的最近似值，是用MPN來表示。4、先熄滅酒精燈再擦拭操作臺和酒精燈。在無菌條件下，用1ml滅菌吸管吸取1ml樣品試液于含有9ml0.4、接種過程操作錄像檢測\雙料大腸檢測.按產(chǎn)品品種將培養(yǎng)基分別放在試管架內(nèi)，同時將9ml0.乳糖膽鹽發(fā)酵管：用于大腸菌群的測定。3、拿刻度吸管時，注意用手托住吸管筒輕輕抖出。85%滅菌鹽水試管中，振蕩搖勻制成1:10的稀釋液；架盤藥物天平：0g～500g，精確至0.根據(jù)證實為大腸菌群的陽性管數(shù)，查MPN檢索表，查找每100ml樣品內(nèi)的大腸菌群的MPN值。在自然界中，細菌分布最廣、數(shù)量最多。如果有紅色和粉色菌落，則各挑取3個做革蘭氏染色，各挑取3個接種乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基混合接種。凡是革蘭氏陰性無芽孢桿菌乳糖發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣的菌落即可報告大腸菌群陽性。若有產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則要做證實試驗。滅菌吸管：1ml、10ml細菌菌落常表現(xiàn)為濕潤、粘稠、光滑、較透明、易挑取、質(zhì)地均勻以及菌落正反面或邊緣與中央部位顏色一致等。

革蘭氏染色：見《革蘭氏染色及鏡檢操作規(guī)范》。細菌菌落常表現(xiàn)為60細菌的菌落圖細菌的菌落圖61二、大腸桿菌生物學(xué)特性大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。主要包括埃希氏菌、檸檬酸細菌、腸桿菌、克雷伯氏菌等，均屬于腸桿菌。二、大腸桿菌生物學(xué)特性大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、62大腸菌群以大腸埃希氏菌為主，是革蘭氏陰性、兩端鈍圓的桿菌，無芽孢，以周生鞭毛運動或不運動。最適生長溫度為37℃，在42-44℃條件下仍能生長，生長溫度范圍為15-46℃。大腸菌群以大腸埃希氏菌為主，是革蘭氏陰性、兩端鈍圓的桿菌，無631、大腸桿菌平板菌落圖片1、大腸桿菌平板菌落圖片642、大腸桿菌革蘭氏染色圖片2、大腸桿菌革蘭氏染色圖片653、大腸桿菌微菌落圖片3、大腸桿菌微菌落圖片664、大腸桿菌透射電鏡圖片4、大腸桿菌透射電鏡圖片675、大腸桿菌掃描電鏡圖片5、大腸桿菌掃描電鏡圖片686、大腸桿菌分裂圖片6、大腸桿菌分裂圖片69三、檢測儀器、設(shè)備

冰箱：0～4℃

恒溫培養(yǎng)箱：36±1℃

恒溫水浴鍋：46±1℃

微生物顯微鏡三、檢測儀器、設(shè)備冰箱：0～4℃70架盤藥物天平：0g～500g，精確至0.5g

三角瓶：500ml

滅菌吸管：1ml、10ml

滅菌平皿：直徑90mm

試管：18×180mm架盤藥物天平：0g～500g，精確至0.5g71四、檢測培養(yǎng)基及試劑乳糖膽鹽發(fā)酵管伊紅美藍瓊脂乳糖發(fā)酵管革蘭氏染色液生理鹽水四、檢測培養(yǎng)基及試劑乳糖膽鹽發(fā)酵管72乳糖膽鹽發(fā)酵管：用于大腸菌群的測定。35g乳糖膽鹽于1升蒸餾水中，溶解，分裝于發(fā)酵試管中，放入小倒管，115℃15分鐘高壓滅菌。雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管除蒸餾水外，其它成分加倍。乳糖膽鹽發(fā)酵管：用于大腸菌群的測定。35g乳糖膽鹽于1升蒸餾73細菌是單細胞原核微生物，個體微?。毎睆郊s0.5-5μm），結(jié)構(gòu)簡單，以二等分裂方式繁殖。架盤藥物天平：0g～500g，精確至0.若有產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則要做證實試驗。最適生長溫度為37℃，在42-44℃條件下仍能生長，生長溫度范圍為15-46℃。35g乳糖膽鹽于1升蒸餾水中，溶解，分裝于發(fā)酵試管中，放入小倒管，115℃15分鐘高壓滅菌。85%滅菌鹽水試管中，振蕩搖勻制成1:10的稀釋液；活性乳酸菌飲料系列產(chǎn)品接種雙料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基3支管，單料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基6支，分別接種樣品量為10ml3支，1ml3支，0.伊紅美蘭瓊脂：用于大腸菌群的固體平板檢測。在伊紅美藍瓊脂平板上的菌落如為深紫色有金屬光澤，則為典型菌落，98%以上為大腸菌群。在無菌條件下，用1ml滅菌吸管吸取1ml樣品試液于含有9ml0.另用1ml滅菌移液管分別吸取1ml樣品試液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。1、伊紅美藍瓊脂平板分離凡是革蘭氏陰性無芽孢桿菌乳糖發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣的菌落即可報告大腸菌群陽性。如果有紅色和粉色菌落，則各挑取3個做革蘭氏染色，各挑取3個接種乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基混合接種。伊紅美蘭瓊脂：用于大腸菌群的固體平板檢測。85%滅菌鹽水試管中，振蕩搖勻制成1:10的稀釋液；根據(jù)證實為大腸菌群的陽性管數(shù)，查MPN檢索表，查找每100ml樣品內(nèi)的大腸菌群的MPN值。4、先熄滅酒精燈再擦拭操作臺和酒精燈。挑取可疑菌落進行革蘭氏染色后接種乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基，置于36±1℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h，觀察產(chǎn)氣情況。滅菌平皿：直徑90mm乳糖發(fā)酵管：大腸菌群證實試驗用。30g乳糖于1升蒸餾水中，溶解，分裝于發(fā)酵試管中，放入小倒管，115℃15分鐘高壓滅菌。細菌是單細胞原核微生物，個體微?。毎睆郊s0.乳糖發(fā)酵管：74伊紅美蘭瓊脂：用于大腸菌群的固體平板檢測。37.5g于1升蒸餾水中，搖勻，加熱煮沸，121℃15分鐘高壓滅菌。伊紅美蘭瓊脂：用于大腸菌群的固體平板檢測。37.5g于1升75五、檢測前培養(yǎng)基準(zhǔn)備

檢查預(yù)先經(jīng)過滅菌處理的乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基小導(dǎo)管內(nèi)是否有氣體。按產(chǎn)品品種將培養(yǎng)基分別放在試管架內(nèi)，同時將9ml0.85%滅菌鹽水管也放入相應(yīng)的試管架內(nèi)。五、檢測前培養(yǎng)基準(zhǔn)備檢查預(yù)先經(jīng)過滅菌處理的乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)76六、接種培養(yǎng)

（一）酸牛奶系列產(chǎn)品酸牛奶系列產(chǎn)品接種單料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基9支管，分別接種樣品量為1ml(原濃度)3支，0.1ml(10-1濃度)3支，0.01ml(10-2濃度)3支。

六、接種培養(yǎng)（一）酸牛奶系列產(chǎn)品771、1ml接種培養(yǎng)在無菌條件下，用1ml滅菌吸管吸取1ml樣品試液于含有9ml0.85%滅菌鹽水試管中，振蕩搖勻制成1:10的稀釋液；同時分別吸取1ml樣品試液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。1、1ml接種培養(yǎng)在無菌條件下，用1ml滅菌吸管吸取1ml782、0.1ml接種培養(yǎng)另換1根1ml滅菌移液管吸取1:10的稀釋液1ml于含有9ml0.85%滅菌鹽水試管中，振蕩搖勻制成1:100的稀釋液；同時分別吸取1ml1:10稀釋液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。2、0.1ml接種培養(yǎng)另換1根1ml滅菌移液管吸取1:10793、

0.01ml接種培養(yǎng)另換1根1ml滅菌移液管分別吸取1ml1:100稀釋液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。3、0.01ml接種培養(yǎng)另換1根1ml滅菌移液管分別吸取18035g乳糖膽鹽于1升蒸餾水中，溶解，分裝于發(fā)酵試管中，放入小倒管，115℃15分鐘高壓滅菌。在自然界中，細菌分布最廣、數(shù)量最多。5、剪刀用完后及時的進行擦拭干凈。挑取可疑菌落進行革蘭氏染色后接種乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基，置于36±1℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h，觀察產(chǎn)氣情況。同時用10ml滅菌吸管分別吸取10ml樣品試液于3支雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。滅菌吸管：1ml、10ml同時分別吸取1ml樣品試液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。1、用酒精棉球擦拭操作臺，點酒精燈，消毒手，擦拭樣品表面并記錄，消毒手，消毒剪刀，剪開樣品袋。4、接種過程操作錄像檢測\雙料大腸檢測.雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管除蒸餾水外，其它成分加倍。5、剪刀用完后及時的進行擦拭干凈。試管：18×180mm85%滅菌鹽水試管中，振蕩搖勻制成1:10的稀釋液；試管：18×180mm主要包括埃希氏菌、檸檬酸細菌、腸桿菌、克雷伯氏菌等，均屬于腸桿菌。在分裂前先延長菌體，染色體復(fù)制為二，然后垂直于長軸分裂，細胞赤道附近的細胞質(zhì)膜凹陷生長，直至形成橫隔膜，同時形成橫隔壁，這樣便產(chǎn)生兩個子細胞。1、大腸桿菌平板菌落圖片挑取可疑菌落進行革蘭氏染色后接種乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基，置于36±1℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h，觀察產(chǎn)氣情況。在自然界中，細菌分布最廣、數(shù)量最多。1、伊紅美藍瓊脂平板分離4、接種過程操作錄像檢測\單料大腸檢測.MPG35g乳糖膽鹽于1升蒸餾水中，溶解，分裝于發(fā)酵試管中，放入小81討論錄像中存在的問題：1、整個微生物檢測前應(yīng)先消毒手。2、為了盡量減少污染，接種培養(yǎng)時先接生理鹽水管再接乳糖膽鹽發(fā)酵管。3、拿刻度吸管時，注意用手托住吸管筒輕輕抖出。4、先熄滅酒精燈再擦拭操作臺和酒精燈。5、剪刀用完后及時的進行擦拭干凈。討論錄像中存在的問題：825、接種后培養(yǎng)將接種完的試管連同試管架一起置于36±1℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h，觀察乳糖膽鹽發(fā)酵管的變化情況。5、接種后培養(yǎng)將接種完的試管連同試管架一起置于36±1℃的培836、結(jié)果查詢并記錄若所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則報告大腸菌群陰性。若有產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則要做證實試驗。6、結(jié)果查詢并記錄若所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則報告大84（二）活性乳酸菌飲料系列產(chǎn)品活性乳酸菌飲料系列產(chǎn)品接種雙料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基3支管，單料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基6支，分別接種樣品量為10ml3支，1ml3支，0.1ml3支。（二）活性乳酸菌飲料系列產(chǎn)品活性乳酸菌飲料系列產(chǎn)品接種雙料乳851、10ml接種培養(yǎng)在無菌條件下，用1ml滅菌吸管吸取1ml樣品試液于含有9ml0.85%滅菌鹽水試管中，振蕩搖勻制成1:10的稀釋液；同時用10ml滅菌吸管分別吸取10ml樣品試液于3支雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。1、10ml接種培養(yǎng)在無菌條件下，用1ml滅菌吸管吸取1m86另換1根1ml滅菌移液管分別吸取1ml1:10稀釋液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。在伊紅美藍瓊脂平板上的菌落如為深紫色有金屬光澤，則為典型菌落，98%以上為大腸菌群。另換1根1ml滅菌移液管分別吸取1ml1:10稀釋液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。試管：18×180mm在自然界中，細菌分布最廣、數(shù)量最多。將產(chǎn)酸產(chǎn)氣乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)的培養(yǎng)物分別接種于伊紅美蘭瓊脂平板(劃線分離)，置于36±1℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h。試管：18×180mm1、伊紅美藍瓊脂平板分離試管：18×180mm同時分別吸取1ml樣品試液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。如果有紅色和粉色菌落，則各挑取3個做革蘭氏染色，各挑取3個接種乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基混合接種。根據(jù)證實為大腸菌群的陽性管數(shù)，查MPN檢索表，查找每100ml樣品內(nèi)的大腸菌群的MPN值。最適生長溫度為37℃，在42-44℃條件下仍能生長，生長溫度范圍為15-46℃。2、大腸桿菌革蘭氏染色圖片在自然界中，細菌分布最廣、數(shù)量最多。4、接種過程操作錄像檢測\雙料大腸檢測.恒溫培養(yǎng)箱：36±1℃凡是革蘭氏陰性無芽孢桿菌乳糖發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣的菌落即可報告大腸菌群陽性。4、接種過程操作錄像檢測\雙料大腸檢測.85%滅菌鹽水試管中，振蕩搖勻制成1:100的稀釋液；2、1ml接種培養(yǎng)另用1ml滅菌移液管分別吸取1ml樣品試液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。另換1根1ml滅菌移液管分別吸取1ml1:10稀釋液于3支873、0.1ml接種培養(yǎng)另換1根1ml滅菌移液管分別吸取1ml1:10稀釋液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。3、0.1ml接種培養(yǎng)另換1根1ml滅菌移液管分別吸取1m884、接種過程操作錄像檢測\雙料大腸檢測.MPG4、接種過程操作錄像檢測\雙料大腸檢測.MPG89討論錄像中存在的細節(jié)問題：1、整個微生物檢測前應(yīng)先消毒手。2、為了盡量減少污染，接種培養(yǎng)時先接生理鹽水管再接乳糖膽鹽發(fā)酵管。3、拿刻度吸管時，注意用手托住吸管筒輕輕抖出。4、先熄滅酒精燈再擦拭操作臺和酒精燈。5、剪刀用完后及時的進行擦拭干凈。討論錄像中存在的細節(jié)問題：905、接種后培養(yǎng)將接種完的試管連同試管架一起置于36±1℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h，觀察乳糖膽鹽發(fā)酵管的變化情況。5、接種后培養(yǎng)將接種完的試管連同試管架一起置于36±1℃的培916、結(jié)果查詢并記錄若所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則報告大腸菌群陰性。若有產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則要做證實試驗。6、結(jié)果查詢并記錄若所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則報告大92（三）證實試驗1、伊紅美藍瓊脂平板分離將產(chǎn)酸產(chǎn)氣乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)的培養(yǎng)物分別接種于伊紅美蘭瓊脂平板(劃線分離)，置于36±1℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h。（三）證實試驗1、伊紅美藍瓊脂平板分離93接種和分離工具1．接種針2.接種環(huán)3.接種鉤4.5.玻璃涂棒6.接種圈7.接種鋤8.小解剖刀接種和分離工具1．接種針2.接種環(huán)3.接種鉤4.5.玻94平板分離畫線法1.斜線法2.曲線法3.方格法4.放射法5.四格法平板分離畫線法1.斜線法2.曲線法3.方格法4.放射法95將伊紅美藍瓊脂平板從培養(yǎng)箱取出后,觀察菌落形態(tài)，并做革蘭氏染色和乳糖復(fù)發(fā)酵試驗。革蘭氏染色：見《革蘭氏染色及鏡檢操作規(guī)范》。將伊紅美藍瓊脂平板從培養(yǎng)箱取出后,觀察菌落形態(tài)，并做革蘭氏染96挑取可疑菌落進行革蘭氏染色后接種乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基，置于36±1℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h，觀察產(chǎn)氣情況。若有產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則要做證實試驗。根據(jù)證實為大腸菌群的陽性管數(shù)，查MPN檢索表，查找每100ml樣品內(nèi)的大腸菌群的MPN值。細菌的附屬結(jié)構(gòu)包括：質(zhì)粒、莢膜、鞭毛、菌毛和芽胞。5、大腸桿菌掃描電鏡圖片二、大腸桿菌生物學(xué)特性4、接種過程操作錄像檢測\雙料大腸檢測.大腸菌群以大腸埃希氏菌為主，是革蘭氏陰性、兩端鈍圓的桿菌，無芽孢，以周生鞭毛運動或不運動。滅菌吸管：1ml、10ml3、拿刻度吸管時，注意用手托住吸管筒輕輕抖出。4、接種過程操作錄像檢測\雙料大腸檢測.細菌個體微小、形態(tài)各異若有產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則要做證實試驗。1、伊紅美藍瓊脂平板分離伊紅美蘭瓊脂：用于大腸菌群的固體平板檢測。細菌是單細胞原核微生物，個體微?。毎睆郊s0