臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件

酶聯(lián)免疫吸附試驗(EL|SA)室內(nèi)質(zhì)量控制免疫室2011.8.22酶聯(lián)免疫吸附試驗(EL|SA)1室內(nèi)質(zhì)量控制(nternalQualityControl,Qc)的概念由實驗室工作人員,采取一定的方法和步驟,連續(xù)評價本實驗室工作的可靠性程度,旨在監(jiān)測和控制本實驗室工作的精密度,提高本室常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢驗的一致性,以確定測定結(jié)果是否可靠、可否發(fā)出報告的一項工作?？筛爬?(1)執(zhí)行者:實驗室技術(shù)人員;(2)目的監(jiān)測實驗室測定的重復(fù)性;(3)功能:決定了當(dāng)批測定的有效性,報告可否發(fā)出。是對實驗室測定的即時性評價。室內(nèi)質(zhì)量控制2臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件3酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELSA)操作簡單,靈敏度高,特異性好,經(jīng)濟安全等特點而在臨床上廣泛應(yīng)用,但是由于其操作步驟復(fù)雜,一般包括試劑準(zhǔn)備,樣本收集,加樣,溫育,洗滌,顯色,比色,結(jié)果判定等,其中任何一項操作不當(dāng)都會對檢測結(jié)果產(chǎn)生很大影響。因此,必須加強ELSA檢測的全面質(zhì)量控制,保證其結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELSA)4試劑優(yōu)質(zhì)的試劑是保證檢驗質(zhì)量的基礎(chǔ)。近年來,國家采用批檢的形式對ELSA試劑嚴(yán)格把關(guān),但不同廠家的試劑在使用效果上仍存在差異,試劑質(zhì)量在很大程度上決定了檢測水平我們從去年將原來使用的北京科衛(wèi)試劑,更換成現(xiàn)在的英科新創(chuàng),同時采用上?？迫A對可疑樣本進行復(fù)檢,目前來看效果很好。試劑5從4°C冰箱取出的試劑必須放置室溫20~30min后再啟用,否則水化層的形成可能影響試劑的原始濃度及試劑中溶質(zhì)分子的均勻分布。根據(jù)蛋白質(zhì)在冷凍過程中出現(xiàn)蛋白分子分布改變的特點,試劑正式啟用前應(yīng)充分混勻。不同批次的試劑在制作過程中很難保證質(zhì)量完全一致,因此必須選擇和訂購長批號的試劑,并保證保存條件,嚴(yán)格執(zhí)行這一標(biāo)準(zhǔn)可以避兔試劑批號改變而重建質(zhì)控體系及重新評估試劑的復(fù)雜過程,并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性。從4°C冰箱取出的試劑必須放置室溫20~30min6標(biāo)本在低溫下保存時間過長,lgG可聚合成多聚體,在間接法EL|SA測定中會導(dǎo)致本底加深,甚至出現(xiàn)假陽性結(jié)果。通常血清標(biāo)本可在2~8℃保存1周,冷凍保存時間會更長。血清標(biāo)本應(yīng)充分離心,否則可因纖維蛋白原非特異吸附于微孔而造成假陽性結(jié)果。冷凍保存標(biāo)本避免反復(fù)凍融,標(biāo)本的反復(fù)凍融會因其所產(chǎn)生的機械剪切力對標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,使抗體效價下降從而引起假陰性結(jié)果標(biāo)本7操作因素加樣加樣器是一種比較精密的工具,其在長時間使用時會因機械磨損或推動桿內(nèi)附著的血痂等原因造成加樣不準(zhǔn),因此必須定期對加液器進行維護和校準(zhǔn)。每次加速度不可太快,以免將標(biāo)本加在孔壁上部,并注意不要濺出或產(chǎn)生氣泡。因此建議在加酶結(jié)合物和底物時用多道加液器,或者雙人同時加樣以減少操作時差對結(jié)果的影響,另外有些項目在檢測前需要稀釋以減少非特異性反應(yīng)。操作因素8●溫育●溫育的溫度:育常采用的溫度有43、37°C、室溫或4℃C等。37℃C是實驗室中常用的溫育溫度,也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的最適反應(yīng)溫度。抗原抗體反應(yīng)一般在37℃C經(jīng)1~2h產(chǎn)物的生成可達頂峰,為加速反應(yīng),可在一定范圍內(nèi)提高反應(yīng)的溫度并在反應(yīng)過程中連續(xù)振蕩來增加抗原抗體接觸的概率?？乖贵w反應(yīng)在4°C更為徹底,形成的產(chǎn)物更多、更穩(wěn)定,但因所需時間太長,在EL|SA檢測中一般不予采用?！駵赜?干擾因素標(biāo)本患者標(biāo)本中有可能含有干擾試驗的免疫物質(zhì),導(dǎo)致假陽性或假陰性的結(jié)果,干擾因素一般可分為兩類即內(nèi)源性和外源性干擾因素。內(nèi)源性干擾因素一般包括類風(fēng)濕因子、補體、高濃度的非特異性免疫球蛋白、異嗜性抗體及某些自身抗體等,避免內(nèi)源性干擾因素主要通過選擇合適的試劑;外源性干擾因素包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時間過長及標(biāo)本凝干擾因素10臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件11臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件12臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件13臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件14臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件15臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件16臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件17臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件18臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件19臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件20臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件21臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件22臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件23臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件24臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件25臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件26臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件27臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件28臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件29臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件30臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件31臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件32臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件33臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件34臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件35臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件36臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件37臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件38臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件39臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件40臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件41臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件42臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件43臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件44臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件45臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件46臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件47臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件48臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件49臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件50臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件51臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件52臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件53臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件54臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件55臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件56臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件57臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件58臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件59臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件60臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件61臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件62臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件63臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件64臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件65酶聯(lián)免疫吸附試驗(EL|SA)室內(nèi)質(zhì)量控制免疫室2011.8.22酶聯(lián)免疫吸附試驗(EL|SA)66室內(nèi)質(zhì)量控制(nternalQualityControl,Qc)的概念由實驗室工作人員,采取一定的方法和步驟,連續(xù)評價本實驗室工作的可靠性程度,旨在監(jiān)測和控制本實驗室工作的精密度,提高本室常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢驗的一致性,以確定測定結(jié)果是否可靠、可否發(fā)出報告的一項工作?？筛爬?(1)執(zhí)行者:實驗室技術(shù)人員;(2)目的監(jiān)測實驗室測定的重復(fù)性;(3)功能:決定了當(dāng)批測定的有效性,報告可否發(fā)出。是對實驗室測定的即時性評價。室內(nèi)質(zhì)量控制67臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件68酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELSA)操作簡單,靈敏度高,特異性好,經(jīng)濟安全等特點而在臨床上廣泛應(yīng)用,但是由于其操作步驟復(fù)雜,一般包括試劑準(zhǔn)備,樣本收集,加樣,溫育,洗滌,顯色,比色,結(jié)果判定等,其中任何一項操作不當(dāng)都會對檢測結(jié)果產(chǎn)生很大影響。因此,必須加強ELSA檢測的全面質(zhì)量控制,保證其結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELSA)69試劑優(yōu)質(zhì)的試劑是保證檢驗質(zhì)量的基礎(chǔ)。近年來,國家采用批檢的形式對ELSA試劑嚴(yán)格把關(guān),但不同廠家的試劑在使用效果上仍存在差異,試劑質(zhì)量在很大程度上決定了檢測水平我們從去年將原來使用的北京科衛(wèi)試劑,更換成現(xiàn)在的英科新創(chuàng),同時采用上?？迫A對可疑樣本進行復(fù)檢,目前來看效果很好。試劑70從4°C冰箱取出的試劑必須放置室溫20~30min后再啟用,否則水化層的形成可能影響試劑的原始濃度及試劑中溶質(zhì)分子的均勻分布。根據(jù)蛋白質(zhì)在冷凍過程中出現(xiàn)蛋白分子分布改變的特點,試劑正式啟用前應(yīng)充分混勻。不同批次的試劑在制作過程中很難保證質(zhì)量完全一致,因此必須選擇和訂購長批號的試劑,并保證保存條件,嚴(yán)格執(zhí)行這一標(biāo)準(zhǔn)可以避兔試劑批號改變而重建質(zhì)控體系及重新評估試劑的復(fù)雜過程,并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性。從4°C冰箱取出的試劑必須放置室溫20~30min71標(biāo)本在低溫下保存時間過長,lgG可聚合成多聚體,在間接法EL|SA測定中會導(dǎo)致本底加深,甚至出現(xiàn)假陽性結(jié)果。通常血清標(biāo)本可在2~8℃保存1周,冷凍保存時間會更長。血清標(biāo)本應(yīng)充分離心,否則可因纖維蛋白原非特異吸附于微孔而造成假陽性結(jié)果。冷凍保存標(biāo)本避免反復(fù)凍融,標(biāo)本的反復(fù)凍融會因其所產(chǎn)生的機械剪切力對標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,使抗體效價下降從而引起假陰性結(jié)果標(biāo)本72操作因素加樣加樣器是一種比較精密的工具,其在長時間使用時會因機械磨損或推動桿內(nèi)附著的血痂等原因造成加樣不準(zhǔn),因此必須定期對加液器進行維護和校準(zhǔn)。每次加速度不可太快,以免將標(biāo)本加在孔壁上部,并注意不要濺出或產(chǎn)生氣泡。因此建議在加酶結(jié)合物和底物時用多道加液器,或者雙人同時加樣以減少操作時差對結(jié)果的影響,另外有些項目在檢測前需要稀釋以減少非特異性反應(yīng)。操作因素73●溫育●溫育的溫度:育常采用的溫度有43、37°C、室溫或4℃C等。37℃C是實驗室中常用的溫育溫度,也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的最適反應(yīng)溫度?？乖贵w反應(yīng)一般在37℃C經(jīng)1~2h產(chǎn)物的生成可達頂峰,為加速反應(yīng),可在一定范圍內(nèi)提高反應(yīng)的溫度并在反應(yīng)過程中連續(xù)振蕩來增加抗原抗體接觸的概率?？乖贵w反應(yīng)在4°C更為徹底,形成的產(chǎn)物更多、更穩(wěn)定,但因所需時間太長,在EL|SA檢測中一般不予采用。●溫育74干擾因素標(biāo)本患者標(biāo)本中有可能含有干擾試驗的免疫物質(zhì),導(dǎo)致假陽性或假陰性的結(jié)果,干擾因素一般可分為兩類即內(nèi)源性和外源性干擾因素。內(nèi)源性干擾因素一般包括類風(fēng)濕因子、補體、高濃度的非特異性免疫球蛋白、異嗜性抗體及某些自身抗體等,避免內(nèi)源性干擾因素主要通過選擇合適的試劑;外源性干擾因素包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時間過長及標(biāo)本凝干擾因素75臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件76臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件77臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件78臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件79臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件80臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件81臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件82臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件83臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件84臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件85臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件86臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件87臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件88臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件89臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件90臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件91臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件92臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件93臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件94臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件95臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件96臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件97臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件98臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件99臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件100臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件101臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件102臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件103臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件104臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件105臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件106臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件107臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件108臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件109臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件110臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件111臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件112臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件113臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件114臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件115臨床免疫測定的室內(nèi)質(zhì)量控制課件116臨床免疫測定的室內(nèi)