非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測課件

非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測精品非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測精品主要內(nèi)容EGFR檢測的背景及意義EGFR檢測的標(biāo)本類型EGFR檢測的臨床開展及成功關(guān)鍵精品主要內(nèi)容EGFR檢測的背景及意義精品肺癌精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)是精確診斷與靶向治療的結(jié)合精確診斷靶向治療分子靶點藥物EGFR吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、阿法替尼、CO-1686,AZD9291ALK克唑替尼、AlectinibMetTivantinib(ARQ197),Onartuzumab(MetMab)Cabozantinib(XL184)FGFR1Nintedanib,XL999HER-2阿法替尼RET/ROS融合基因克唑替尼,AP26113,ASP3026RAS/MAPK通路Trametinib(GSK1120212)，Pimastertib，Refametinib,TAK733……PI3K/PTEN/AKTBEZ235,XL-765……PD-1/PDL-1Nivolumab,MPDL3280AHSP90…..GanetespibLiTH,etal.JClinOncol2013;31:1039-1049.VariS,etal.ExpertOpinDrugDiscov2013;8(11):1381-1397.精品肺癌精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)是精確診斷與靶向治療的結(jié)合精確診斷多部權(quán)威指南強(qiáng)調(diào)治療前的EGFR突變檢測ASCO2015指南：考慮用EGFRTKI進(jìn)行一線治療的非小細(xì)胞肺癌患者應(yīng)該進(jìn)行腫瘤EGFR突變檢測來確定適合一線使用EGFRTKI還是一線使用化療藥物治療。

ESMO2015指南：進(jìn)行個體化治療決定前應(yīng)有足夠的組織材料進(jìn)行組織學(xué)診斷和分子檢測在疾病進(jìn)展時應(yīng)考慮重新檢測應(yīng)當(dāng)系統(tǒng)分析EGFR突變狀態(tài)——在晚期非小細(xì)胞肺癌患者組織中進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)檢測A].NCCN2016指南：對晚期非鱗NSCLC及不吸煙/小標(biāo)本鱗癌的治療強(qiáng)調(diào)了治療前必須檢測EGFR/ALK，并指出“多重/下一代測序項目應(yīng)該包含這2個靶點的檢測”中國原發(fā)性肺癌診療規(guī)范（2016版）在推薦所有NSCLC患者的腫瘤組織都應(yīng)進(jìn)行EGFR基因突變檢測基礎(chǔ)上，補充了如果腫瘤標(biāo)本不可評估可使用從血液（血漿）標(biāo)本中獲得的ctDNA進(jìn)行評估.精品多部權(quán)威指南強(qiáng)調(diào)治療前的EGFR突變檢測ASCO2015指南EGFR基因突變和EGFR靶向治療中國肺腺癌驅(qū)動基因突變圖譜NSCLC中藥物療效相關(guān)的EGFR突變研究RR中位PFSIPASS71.2%vs47.3%9.8vs6.4月First-SIGNAL84.6%vs37.5%8.4vs6.7月WJTOG340562.1%vs32.2%9.6vs6.6月NEJGSG00273.7%vs30.7%10.8vs5.4月OPTIMAL83%vs36%13.1vs4.6月EURTAC58%vs15%9.7vs5.2月LUX-LUNG361%

vs22%11.1vs6.9月LUX-LUNG667%vs23%11.0vs5.6月八項隨機(jī)研究奠定了TKI在EGFR基因突變陽性患者中一線治療的地位NCCNGuidelinesVersion3.2016Non-SmallCellLungCancerMoketal.,2008;Kimetal.,2008;Hirschetal.,2006突變類型所占比例對EGFR-TKI敏感性19del;L858R~90%敏感G719X;L861Q;S768I~7%亞敏感T790Malone;20ins~3%不敏感精品EGFR基因突變和EGFR靶向治療中國肺腺癌驅(qū)動基因突變圖譜EGFR檢測樣本來源組織活檢（腫瘤蠟片）目前檢測金標(biāo)準(zhǔn)

細(xì)胞學(xué)標(biāo)本（惡性胸水）樣本品質(zhì)和腫瘤細(xì)胞含量可能比組織樣本較低血液標(biāo)本（ctDNA）-

當(dāng)無法獲取組織或細(xì)胞學(xué)樣本的晚期轉(zhuǎn)移患者，作為有效補充DNA片段化/假陰性較多，需要高敏感度技術(shù)+++--+--侵入性每個病人都適用動態(tài)檢測對于組織和胸水都取不到的患者，血液樣本是一個很好的補充PirkerRetal.JThoracOncol2010;5:1706–1713;SavicSetal.BrJCancer2008;98:154–160;RekhtmanNetal.JThoracOncol2011;6:451–458;TanakaTetal.CancerSci2007;98:246–252;-++質(zhì)量控制EGFR檢測樣本來源組織活檢目前檢測金標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞學(xué)標(biāo)本樣本品組織/細(xì)胞學(xué)檢測是目前的金標(biāo)準(zhǔn)目前國內(nèi)送檢以組織和細(xì)胞學(xué)標(biāo)本為主，組織/細(xì)胞學(xué)檢測仍是目前的金標(biāo)準(zhǔn)目前的低送檢率源于：醫(yī)生觀念經(jīng)濟(jì)因素約20%患者無組織標(biāo)本FromAZ2015internaldata組織/細(xì)胞學(xué)檢測是目前的金標(biāo)準(zhǔn)目前國內(nèi)送檢以組織和細(xì)胞學(xué)標(biāo)本肉眼判斷是否

>10%腫瘤組織H&E染色

&確定腫瘤組織Step1標(biāo)本病理質(zhì)控

DNA樣本制備DNA純化DNA定量Step2DNA的抽提建立PCR反應(yīng)體系Step3PCR反應(yīng)

數(shù)據(jù)的分析Step4報告的解讀報告組織檢測基本流程肉眼判斷是否

>10%腫瘤組織H&E染色&確定腫瘤組組織及細(xì)胞學(xué)標(biāo)本的處理-需要臨床科室的協(xié)助與配合組織學(xué)標(biāo)本固定要及時，離體后即時處理（15-30分鐘內(nèi))固定液：10%中性緩沖福爾馬林（終濃度4%）；固定液的量一般為組織體積的10-15倍.固定時間：活檢標(biāo)本直接放入固定液，支氣管鏡活檢標(biāo)本的固定時間為6～24h，手術(shù)切除標(biāo)本的固定時間為12h-48h.細(xì)胞學(xué)標(biāo)本采用95%乙醇固定液，時間不宜少于15min，或采用非婦科液基細(xì)胞學(xué)固定液，固定時間和方法可按說明書進(jìn)行操作所有細(xì)胞學(xué)標(biāo)本應(yīng)盡量制作福爾馬林固定石蠟包埋（formalin-fixedandparrffin-enbedded,FFPE）細(xì)胞學(xué)蠟塊。將細(xì)胞學(xué)標(biāo)本離心沉淀置于包埋盒中，后續(xù)操作同組織學(xué)標(biāo)本制作蠟塊流程中國原發(fā)性肺癌診療規(guī)范2016版組織及細(xì)胞學(xué)標(biāo)本的處理-需要臨床科室的協(xié)助與配合組織學(xué)標(biāo)本中病理評估和質(zhì)控對于基因檢測至關(guān)重要-蠟塊未染色切片H&E染色切片標(biāo)記腫瘤細(xì)胞比例高的區(qū)域刮取標(biāo)記以內(nèi)的區(qū)域組織處理、蠟塊和H&E染色切片制作病理質(zhì)量控制EGFR基因突變檢測無EGFR基因突變檢測標(biāo)本接收質(zhì)量達(dá)標(biāo)質(zhì)量不達(dá)標(biāo)為什么EGFR檢測要在病理科開展？病理評估和質(zhì)控對于基因檢測至關(guān)重要-蠟塊腫瘤細(xì)胞含量評估對于EGFR結(jié)果判讀影響病理腫瘤細(xì)胞含量評估對于EGFR突變結(jié)果影響較大，檢測流程如果沒有該步驟，會造成較多的假陰性。腫瘤細(xì)胞含量評估對于EGFR結(jié)果判讀影響病理腫瘤細(xì)胞含量評估血液檢測的價值與優(yōu)勢作為無法獲取組織標(biāo)本的補充，無創(chuàng)取樣后的檢測結(jié)果指導(dǎo)臨床用藥實現(xiàn)實時動態(tài)監(jiān)測，提高全程管理水平循環(huán)而勻質(zhì)的血液標(biāo)本，在一定程度有效克服異質(zhì)性*已可以指導(dǎo)EGFR敏感性突變治療用藥1.Molina-VilaMetal.JThoracOncol2008;3:1224–1235;

2.SmouseJetal.CancerCytopathol2009;117:67–72;

3.VanEjikRetal.PLoSOne2011;6:e177791;

4.RekhtmanNetal.JThoracOncol2011;6:451–458血液檢測的價值與優(yōu)勢作為無法獲取組織標(biāo)本實現(xiàn)實時動態(tài)監(jiān)測，循吉非替尼獲得血液ctDNA伴隨診斷適應(yīng)癥歐盟和中國相繼批準(zhǔn)阿斯利康易瑞沙血液ctDNA伴隨診斷非小細(xì)胞肺癌患者用藥前檢測EGFR突變精品吉非替尼獲得血液ctDNA伴隨診斷適應(yīng)癥歐盟和中國相繼批準(zhǔn)阿循環(huán)血腫瘤細(xì)胞(circulatingtumourcell，CTC)即釋放到外周血中的腫瘤細(xì)胞，目前CTC的捕獲比較困難循環(huán)腫瘤DNA(circulatingtumorDNA，ctDNA)即循環(huán)腫瘤DNA，指由腫瘤細(xì)胞釋放到血液循環(huán)系統(tǒng)中的DNA血液標(biāo)本的檢測對象精品循環(huán)血腫瘤細(xì)胞(circulatingtumourcel總量少–

<500

DNA拷貝數(shù)/200uL血漿ctDNA豐度低血漿ctDNA的特點片段小–集中在170bp左右，檢測方法需要能夠耐受In-housedataFractionofEGFRmutantintotalcfDNANumberofEGFRM+plasmasamples61376353activatingmutations,N=32T790M,N=11Newman

etal.,Nat

Med(2014)Taniguchietal.,ClinCancerRes(2011)

信息丟失-能代表全基因組信息？TranslationalOncology.2013NatureVolume.2013精品總量少–<500DNA拷貝數(shù)/200uL血漿ctIPASS日本亞組血液/組織對比

EGFR突變狀態(tài)研究

靈敏性:43%

特異性:100%一致性:66%86對血清和組織樣本參與比較突變狀態(tài)組織合計EGFR(+)EGFR(-)血液EGFR（+）22022EGFR（-）293564合計513586EGFR突變型吉非替尼組的PFS顯著長于卡鉑/紫杉醇組(HR,0.29;95%CI,0.14–0.60;p0.001)EGFR野生型吉非替尼組的PFS與卡鉑/紫杉醇組無顯著差異(HR,0.88;95%CI,0.61–1.28;p0.50)GotoK.etal.JThoracOncol2012;7(1):115-121精品IPASS日本亞組血液/組織對比

EGFR突變狀態(tài)研究靈一致性敏感性特異性n/N(%)95%CIn/N(%)95%CIn/N(%)95%CIAsiaPac(n=1687)1310/1687(77.7)75.6,79.6343/692(49.6)45.8,53.4967/995(97.2)96.0,98.1Russia(n=894)767/894(85.8)83.3,88.033/109(30.3)21.8,39.8734/785(93.5)91.5,95.1亞太和俄羅斯晚期NSCLC組織/細(xì)胞學(xué)和配對的血漿樣本(IGNITE)中國(N=1355)一致性敏感性特異性PPVNPVn/N(%)95%CIn/N(%)95%CIn/N(%)95%CIn/N(%)95%CIn/N(%)95%CI1051/1355(77.6)75.2,79.8267/548(48.7)44.5,53.0784/807(97.1)95.8,98.2267/290(92.1)88.3,94.9784/1065(73.6)70.9,76.2ChunleiShi,etal.2015ESMOAsia,abstract422PD精品一致性敏感性特異性n/N(%)95%CIn/N(%)9IFUM吉非替尼治療EGFR突變的

高加索NSCLC652對血液和組織樣本參與比較突變狀態(tài)組織合計EGFR(+)EGFR(-)血液EGFR(+)69170EGFR(-)36546582合計105547652JThoracOncol.2014Sep;9(9):1345-53.

一致性:94.3%;

敏感性:65.7%;

特異性:99.8%AllmutationsMedianPFSmoTumor(n=106)9.7Plasma(n=65)10.2MedianPFSctDNA作為EGFR檢測的有效補充69.876.959.5所有突變類型N=74/10650/6522/37TumorEGFR

mutation-positiveTumorEGFR

mutation-positivePlasmaEGFRmutation-positiveTumorEGFR

mutation-positivePlasmaEGFRmutation-negativeObjectiveresponserate(%)精品IFUM吉非替尼治療EGFR突變的

高加索NSCLC652IFUM研究：血液檢測陽性可以指導(dǎo)TKI用藥IFUM(易瑞沙后續(xù)評估)研究中，血液與配對組織不同EGFR突變狀態(tài)患者ORR的一致，19外顯子缺失患者PFS也一致(10.3月vs9.6月)ORR(%)PFS(月)組織血液ctDNA檢測EGFR突變陽性可用于指導(dǎo)EGFR-TKI治療Douillard,J.-Y.,etal.(2014)."JournalofThoracicOncology9(9):1345.精品IFUM研究：血液檢測陽性可以指導(dǎo)TKI用藥IFU

RocheARMS:敏感性:75%,特異性:96%ADxARMS:敏感性67.5%特異性100%Liuetal2013.JclinpATHMoketal.2015,CCRQiagenARMS敏感性65.7%，特異性:99%123ARMS法特異性較好，靈敏度有限，但ADxARMS是目前唯一獲得CFDA批準(zhǔn)的血液檢測方法一代ARMS：EGFR敏感突變，組織vs血液RocheARMS:敏感性:75%,特異性:9血液檢測的獲益人群轉(zhuǎn)移>未轉(zhuǎn)移4期>3期>2期>1期晚期、無法獲得組織標(biāo)本的NSCLC患者100806040200結(jié)直腸胃食管胰腺乳腺局限期轉(zhuǎn)移性可檢測ctDNA的發(fā)生率(%)100806040200可檢測ctDNA的發(fā)生率(%)I期III期II期IV期1.0*10061.0*10051.0*10041.0*10031.0*10021.0*10011.0*1001.0*10-01每5ml的突變片斷I期III期II期IV期Bettegowdaet.al.,SciTranslMed(2014)精品血液檢測的獲益人群轉(zhuǎn)移>未轉(zhuǎn)移100806040200結(jié)直腸非小細(xì)胞肺癌血液EGFR基因突變檢測中國專家共識(2015年12月)

中國國家食品藥品監(jiān)督管理總局（CFDA）在2015年2月已批準(zhǔn)吉非替尼說明書更新，在推薦所有NSCLC患者的腫瘤組織都應(yīng)進(jìn)行EGFR基因突變檢測基礎(chǔ)上，如果腫瘤標(biāo)本不可評估，則可使用從血液（血漿）標(biāo)本中獲得的ctDNA進(jìn)行評估。EGFR基因突變檢測流程精品非小細(xì)胞肺癌血液EGFR基因突變檢測中國國血液檢測實驗流程血漿cfDNAEGFR突變檢測cfDNA提取加樣分離全血采集時間采集方式采血管（EDTA抗凝）及時高效避免污染使用可信賴的血漿cfDNA提取試劑盒使用可信賴的檢測試劑盒篩選合適人群cfDNA（腫瘤標(biāo)本不可評估）（2h內(nèi)）采用EDTA抗凝管，采集10mL全血2小時內(nèi)將全血充分低溫離心兩次，分離出不含細(xì)胞成分的血漿，放置于-70℃凍存精品血液檢測實驗流程血漿cfDNAEGFR突變檢測cfDNA提取慎重對待ARMS法的血液檢測結(jié)果EMQNExternalQualityAssessmentSchemeforLungCancer(2014).檢測到突變未檢測到突變根據(jù)突變類型指導(dǎo)用藥參考臨床優(yōu)勢特征用藥血液檢測報告精品慎重對待ARMS法的血液檢測結(jié)果EMQNExternal非小細(xì)胞肺癌EGFR檢測——各標(biāo)本處理方式

患者手術(shù)標(biāo)本小活檢標(biāo)本細(xì)胞學(xué)標(biāo)本新鮮組織于10%中性福爾馬林固定>12h纖支鏡標(biāo)本——取材后固定于10%中性福爾馬林穿刺標(biāo)本——取材后固定于10%中性福爾馬林血液標(biāo)本針對晚期轉(zhuǎn)移、且取不到組織（或胸水）標(biāo)本的患者，以EDTA抗凝管取10mL全血，務(wù)必于2h內(nèi)送至分子檢測平臺將胸水引入500ml玻璃瓶中，并按照1支肝素鈉/100ml添加抗凝，及時送到病理科處理胸水抽取原則：抽多少送多少，送多少包埋多少，最少≥50ml，但有無腫瘤細(xì)胞與胸水量沒有直接關(guān)系精品非小細(xì)胞肺癌EGFR檢測——各標(biāo)本處理方式患者手術(shù)小活檢細(xì)胞總結(jié)——重要訊息回顧EGFR突變樣本檢測方法在中國NSCLC患者中，約50%存在EGFR突變準(zhǔn)確的驅(qū)動基因檢測是實現(xiàn)精準(zhǔn)治療的基礎(chǔ)與關(guān)鍵嚴(yán)格的質(zhì)量控制是保障報告準(zhǔn)確的關(guān)鍵組織活檢是目前金標(biāo)準(zhǔn)，胸水是另一選擇。血液檢測適用于晚期、轉(zhuǎn)移且取不到組織標(biāo)本的NSCLC患者，可作為補充血液檢測的優(yōu)勢在于便捷，無創(chuàng)，并可實現(xiàn)動態(tài)、定量監(jiān)測對EGFR敏感突變，ARMs有較高靈敏度和特異性ARMS檢測血液EGFR突變的陰性結(jié)果需慎重解讀精品總結(jié)——重要訊息回顧EGFR突變樣本檢測方法在中國NSCLC謝謝！精品謝謝！精品非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測精品非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測精品主要內(nèi)容EGFR檢測的背景及意義EGFR檢測的標(biāo)本類型EGFR檢測的臨床開展及成功關(guān)鍵精品主要內(nèi)容EGFR檢測的背景及意義精品肺癌精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)是精確診斷與靶向治療的結(jié)合精確診斷靶向治療分子靶點藥物EGFR吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、阿法替尼、CO-1686,AZD9291ALK克唑替尼、AlectinibMetTivantinib(ARQ197),Onartuzumab(MetMab)Cabozantinib(XL184)FGFR1Nintedanib,XL999HER-2阿法替尼RET/ROS融合基因克唑替尼,AP26113,ASP3026RAS/MAPK通路Trametinib(GSK1120212)，Pimastertib，Refametinib,TAK733……PI3K/PTEN/AKTBEZ235,XL-765……PD-1/PDL-1Nivolumab,MPDL3280AHSP90…..GanetespibLiTH,etal.JClinOncol2013;31:1039-1049.VariS,etal.ExpertOpinDrugDiscov2013;8(11):1381-1397.精品肺癌精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)是精確診斷與靶向治療的結(jié)合精確診斷多部權(quán)威指南強(qiáng)調(diào)治療前的EGFR突變檢測ASCO2015指南：考慮用EGFRTKI進(jìn)行一線治療的非小細(xì)胞肺癌患者應(yīng)該進(jìn)行腫瘤EGFR突變檢測來確定適合一線使用EGFRTKI還是一線使用化療藥物治療。

ESMO2015指南：進(jìn)行個體化治療決定前應(yīng)有足夠的組織材料進(jìn)行組織學(xué)診斷和分子檢測在疾病進(jìn)展時應(yīng)考慮重新檢測應(yīng)當(dāng)系統(tǒng)分析EGFR突變狀態(tài)——在晚期非小細(xì)胞肺癌患者組織中進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)檢測A].NCCN2016指南：對晚期非鱗NSCLC及不吸煙/小標(biāo)本鱗癌的治療強(qiáng)調(diào)了治療前必須檢測EGFR/ALK，并指出“多重/下一代測序項目應(yīng)該包含這2個靶點的檢測”中國原發(fā)性肺癌診療規(guī)范（2016版）在推薦所有NSCLC患者的腫瘤組織都應(yīng)進(jìn)行EGFR基因突變檢測基礎(chǔ)上，補充了如果腫瘤標(biāo)本不可評估可使用從血液（血漿）標(biāo)本中獲得的ctDNA進(jìn)行評估.精品多部權(quán)威指南強(qiáng)調(diào)治療前的EGFR突變檢測ASCO2015指南EGFR基因突變和EGFR靶向治療中國肺腺癌驅(qū)動基因突變圖譜NSCLC中藥物療效相關(guān)的EGFR突變研究RR中位PFSIPASS71.2%vs47.3%9.8vs6.4月First-SIGNAL84.6%vs37.5%8.4vs6.7月WJTOG340562.1%vs32.2%9.6vs6.6月NEJGSG00273.7%vs30.7%10.8vs5.4月OPTIMAL83%vs36%13.1vs4.6月EURTAC58%vs15%9.7vs5.2月LUX-LUNG361%

vs22%11.1vs6.9月LUX-LUNG667%vs23%11.0vs5.6月八項隨機(jī)研究奠定了TKI在EGFR基因突變陽性患者中一線治療的地位NCCNGuidelinesVersion3.2016Non-SmallCellLungCancerMoketal.,2008;Kimetal.,2008;Hirschetal.,2006突變類型所占比例對EGFR-TKI敏感性19del;L858R~90%敏感G719X;L861Q;S768I~7%亞敏感T790Malone;20ins~3%不敏感精品EGFR基因突變和EGFR靶向治療中國肺腺癌驅(qū)動基因突變圖譜EGFR檢測樣本來源組織活檢（腫瘤蠟片）目前檢測金標(biāo)準(zhǔn)

細(xì)胞學(xué)標(biāo)本（惡性胸水）樣本品質(zhì)和腫瘤細(xì)胞含量可能比組織樣本較低血液標(biāo)本（ctDNA）-

當(dāng)無法獲取組織或細(xì)胞學(xué)樣本的晚期轉(zhuǎn)移患者，作為有效補充DNA片段化/假陰性較多，需要高敏感度技術(shù)+++--+--侵入性每個病人都適用動態(tài)檢測對于組織和胸水都取不到的患者，血液樣本是一個很好的補充PirkerRetal.JThoracOncol2010;5:1706–1713;SavicSetal.BrJCancer2008;98:154–160;RekhtmanNetal.JThoracOncol2011;6:451–458;TanakaTetal.CancerSci2007;98:246–252;-++質(zhì)量控制EGFR檢測樣本來源組織活檢目前檢測金標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞學(xué)標(biāo)本樣本品組織/細(xì)胞學(xué)檢測是目前的金標(biāo)準(zhǔn)目前國內(nèi)送檢以組織和細(xì)胞學(xué)標(biāo)本為主，組織/細(xì)胞學(xué)檢測仍是目前的金標(biāo)準(zhǔn)目前的低送檢率源于：醫(yī)生觀念經(jīng)濟(jì)因素約20%患者無組織標(biāo)本FromAZ2015internaldata組織/細(xì)胞學(xué)檢測是目前的金標(biāo)準(zhǔn)目前國內(nèi)送檢以組織和細(xì)胞學(xué)標(biāo)本肉眼判斷是否

>10%腫瘤組織H&E染色

&確定腫瘤組織Step1標(biāo)本病理質(zhì)控

DNA樣本制備DNA純化DNA定量Step2DNA的抽提建立PCR反應(yīng)體系Step3PCR反應(yīng)

數(shù)據(jù)的分析Step4報告的解讀報告組織檢測基本流程肉眼判斷是否

>10%腫瘤組織H&E染色&確定腫瘤組組織及細(xì)胞學(xué)標(biāo)本的處理-需要臨床科室的協(xié)助與配合組織學(xué)標(biāo)本固定要及時，離體后即時處理（15-30分鐘內(nèi))固定液：10%中性緩沖福爾馬林（終濃度4%）；固定液的量一般為組織體積的10-15倍.固定時間：活檢標(biāo)本直接放入固定液，支氣管鏡活檢標(biāo)本的固定時間為6～24h，手術(shù)切除標(biāo)本的固定時間為12h-48h.細(xì)胞學(xué)標(biāo)本采用95%乙醇固定液，時間不宜少于15min，或采用非婦科液基細(xì)胞學(xué)固定液，固定時間和方法可按說明書進(jìn)行操作所有細(xì)胞學(xué)標(biāo)本應(yīng)盡量制作福爾馬林固定石蠟包埋（formalin-fixedandparrffin-enbedded,FFPE）細(xì)胞學(xué)蠟塊。將細(xì)胞學(xué)標(biāo)本離心沉淀置于包埋盒中，后續(xù)操作同組織學(xué)標(biāo)本制作蠟塊流程中國原發(fā)性肺癌診療規(guī)范2016版組織及細(xì)胞學(xué)標(biāo)本的處理-需要臨床科室的協(xié)助與配合組織學(xué)標(biāo)本中病理評估和質(zhì)控對于基因檢測至關(guān)重要-蠟塊未染色切片H&E染色切片標(biāo)記腫瘤細(xì)胞比例高的區(qū)域刮取標(biāo)記以內(nèi)的區(qū)域組織處理、蠟塊和H&E染色切片制作病理質(zhì)量控制EGFR基因突變檢測無EGFR基因突變檢測標(biāo)本接收質(zhì)量達(dá)標(biāo)質(zhì)量不達(dá)標(biāo)為什么EGFR檢測要在病理科開展？病理評估和質(zhì)控對于基因檢測至關(guān)重要-蠟塊腫瘤細(xì)胞含量評估對于EGFR結(jié)果判讀影響病理腫瘤細(xì)胞含量評估對于EGFR突變結(jié)果影響較大，檢測流程如果沒有該步驟，會造成較多的假陰性。腫瘤細(xì)胞含量評估對于EGFR結(jié)果判讀影響病理腫瘤細(xì)胞含量評估血液檢測的價值與優(yōu)勢作為無法獲取組織標(biāo)本的補充，無創(chuàng)取樣后的檢測結(jié)果指導(dǎo)臨床用藥實現(xiàn)實時動態(tài)監(jiān)測，提高全程管理水平循環(huán)而勻質(zhì)的血液標(biāo)本，在一定程度有效克服異質(zhì)性*已可以指導(dǎo)EGFR敏感性突變治療用藥1.Molina-VilaMetal.JThoracOncol2008;3:1224–1235;

2.SmouseJetal.CancerCytopathol2009;117:67–72;

3.VanEjikRetal.PLoSOne2011;6:e177791;

4.RekhtmanNetal.JThoracOncol2011;6:451–458血液檢測的價值與優(yōu)勢作為無法獲取組織標(biāo)本實現(xiàn)實時動態(tài)監(jiān)測，循吉非替尼獲得血液ctDNA伴隨診斷適應(yīng)癥歐盟和中國相繼批準(zhǔn)阿斯利康易瑞沙血液ctDNA伴隨診斷非小細(xì)胞肺癌患者用藥前檢測EGFR突變精品吉非替尼獲得血液ctDNA伴隨診斷適應(yīng)癥歐盟和中國相繼批準(zhǔn)阿循環(huán)血腫瘤細(xì)胞(circulatingtumourcell，CTC)即釋放到外周血中的腫瘤細(xì)胞，目前CTC的捕獲比較困難循環(huán)腫瘤DNA(circulatingtumorDNA，ctDNA)即循環(huán)腫瘤DNA，指由腫瘤細(xì)胞釋放到血液循環(huán)系統(tǒng)中的DNA血液標(biāo)本的檢測對象精品循環(huán)血腫瘤細(xì)胞(circulatingtumourcel總量少–

<500

DNA拷貝數(shù)/200uL血漿ctDNA豐度低血漿ctDNA的特點片段小–集中在170bp左右，檢測方法需要能夠耐受In-housedataFractionofEGFRmutantintotalcfDNANumberofEGFRM+plasmasamples61376353activatingmutations,N=32T790M,N=11Newman

etal.,Nat

Med(2014)Taniguchietal.,ClinCancerRes(2011)

信息丟失-能代表全基因組信息？TranslationalOncology.2013NatureVolume.2013精品總量少–<500DNA拷貝數(shù)/200uL血漿ctIPASS日本亞組血液/組織對比

EGFR突變狀態(tài)研究

靈敏性:43%

特異性:100%一致性:66%86對血清和組織樣本參與比較突變狀態(tài)組織合計EGFR(+)EGFR(-)血液EGFR（+）22022EGFR（-）293564合計513586EGFR突變型吉非替尼組的PFS顯著長于卡鉑/紫杉醇組(HR,0.29;95%CI,0.14–0.60;p0.001)EGFR野生型吉非替尼組的PFS與卡鉑/紫杉醇組無顯著差異(HR,0.88;95%CI,0.61–1.28;p0.50)GotoK.etal.JThoracOncol2012;7(1):115-121精品IPASS日本亞組血液/組織對比

EGFR突變狀態(tài)研究靈一致性敏感性特異性n/N(%)95%CIn/N(%)95%CIn/N(%)95%CIAsiaPac(n=1687)1310/1687(77.7)75.6,79.6343/692(49.6)45.8,53.4967/995(97.2)96.0,98.1Russia(n=894)767/894(85.8)83.3,88.033/109(30.3)21.8,39.8734/785(93.5)91.5,95.1亞太和俄羅斯晚期NSCLC組織/細(xì)胞學(xué)和配對的血漿樣本(IGNITE)中國(N=1355)一致性敏感性特異性PPVNPVn/N(%)95%CIn/N(%)95%CIn/N(%)95%CIn/N(%)95%CIn/N(%)95%CI1051/1355(77.6)75.2,79.8267/548(48.7)44.5,53.0784/807(97.1)95.8,98.2267/290(92.1)88.3,94.9784/1065(73.6)70.9,76.2ChunleiShi,etal.2015ESMOAsia,abstract422PD精品一致性敏感性特異性n/N(%)95%CIn/N(%)9IFUM吉非替尼治療EGFR突變的

高加索NSCLC652對血液和組織樣本參與比較突變狀態(tài)組織合計EGFR(+)EGFR(-)血液EGFR(+)69170EGFR(-)36546582合計105547652JThoracOncol.2014Sep;9(9):1345-53.

一致性:94.3%;

敏感性:65.7%;

特異性:99.8%AllmutationsMedianPFSmoTumor(n=106)9.7Plasma(n=65)10.2MedianPFSctDNA作為EGFR檢測的有效補充69.876.959.5所有突變類型N=74/10650/6522/37TumorEGFR

mutation-positiveTumorEGFR

mutation-positivePlasmaEGFRmutation-positiveTumorEGFR

mutation-positivePlasmaEGFRmutation-negativeObjectiveresponserate(%)精品IFUM吉非替尼治療EGFR突變的

高加索NSCLC652IFUM研究：血液檢測陽性可以指導(dǎo)TKI用藥IFUM(易瑞沙后續(xù)評估)研究中，血液與配對組織不同EGFR突變狀態(tài)患者ORR的一致，19外顯子缺失患者PFS也一致(10.3月vs9.6月)ORR(%)PFS(月)組織血液ctDNA檢測EGFR突變陽性可用于指導(dǎo)EGFR-TKI治療Douillard,J.-Y.,etal.(2014)."JournalofThoracicOncology9(9):1345.精品IFUM研究：血液檢測陽性可以指導(dǎo)TKI用藥IFU

RocheARMS:敏感性:75%,特異性:96%ADxARMS:敏感性67.5%特異性100%Liuetal2013.JclinpATHMoketal.2015,CCRQiagenARMS敏感性65.7%，特異性:99%123ARMS法特異性較好，靈敏度有限，但ADxARMS是目前唯一獲得CFDA批準(zhǔn)的血液檢測方法一代ARMS：EGFR敏感突變，組織v