細菌性食物中毒樣品的采集及實驗室檢測程序課件

細菌性食物中毒樣品的

采集及實驗室檢測程序北京市疾病預(yù)防控制中心陳倩2013年4月細菌性食物中毒樣品的

采集及實驗室檢測程序北京市疾病預(yù)防控制1

食物中毒樣品種類和采集方法采樣注意事項實驗室應(yīng)急檢測程序細菌性食物中毒樣品的采集及實驗室檢測程序2食源性疾病WHO：由于食物中含有致病因子引起的以急性病理過程為主要臨床特征的感染性或中毒性疾病美國CDC：由于食用了受污染的食品或飲料而引起的疾病包括常見的食物中毒、腸道傳染病、人畜共患傳染病、寄生蟲病及化學(xué)性有毒有害物質(zhì)所引起的疾病。食源性疾患的發(fā)病率居各類疾病總發(fā)病率的前列，是當(dāng)前世界上最突出的衛(wèi)生問題。

食源性疾病WHO：由于食物中含有致病因子引起的以急性病理過程3食源性疾病特點爆發(fā)和散發(fā)兩種形式腸道傳染病存在人與人之間傳播種類多、潛伏期不同不一定出現(xiàn)明顯消化道癥狀食源性疾病特點爆發(fā)和散發(fā)兩種形式4細菌性食源性疾病細菌性食源性疾病：是進食被細菌或細菌毒素污染的食物而引起的感染性或中毒性疾病。細菌性腸道傳染病（霍亂、痢疾、傷寒副傷寒、O157短期內(nèi)集中發(fā)病常被診斷為細菌性食物中毒散發(fā)或潛伏期較長病例常被診斷為胃腸炎或其他疾病細菌性食源性疾病細菌性食源性疾?。菏沁M食被細菌或細菌毒素污染5食物中毒相關(guān)概念食物中毒：攝入了含有生物性、化學(xué)性有毒有害物質(zhì)的食品或者把有害物質(zhì)當(dāng)作食品攝入后出現(xiàn)的非傳染性(不屬于傳染病)的急性、亞急性疾病。食物中毒診斷標準主要以流行病學(xué)調(diào)查資料及病人的潛伏期和中毒的特有表現(xiàn)為依據(jù)，實驗室診斷是為了確定中毒的病因而進行的食物中毒相關(guān)概念食物中毒：攝入了含有生物性、化學(xué)性有毒有害物6食物中毒的致病因素2012年全國報告食物中毒917起

微生物引起的患者數(shù)最多，占總數(shù)的50%美國食源性疾病爆發(fā)細菌性的占總起數(shù)的75%，占病例數(shù)86%。我國細菌性食物中毒發(fā)生起數(shù)同樣常年居首位食物中毒的致病因素2012年全國報告食物中毒917起7美國食源性病原體空腸彎曲菌產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌出血性大腸桿菌O157單增李斯特菌沙門氏菌金黃色葡萄球菌圓孢子蟲隱孢子蟲美國食源性病原體空腸彎曲菌8常見細菌性食物中毒沙門氏菌、志賀氏菌、致瀉性大腸桿菌、副溶血性弧菌、其它致病性弧菌、金黃色葡萄球菌、蠟樣芽胞桿菌、肉毒梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、出血性大腸桿菌O157、單增李斯特菌、耶爾森氏菌、空腸彎曲菌、變形桿菌、耶毒假單胞菌酵米面亞種、氣單胞菌、腸球菌等常見細菌性食物中毒沙門氏菌、志賀氏菌、致瀉性大腸桿菌、副溶血9細菌性食物中毒的特點與飲食有密切關(guān)系，去除原因食品后，不再有新的患者。臨床癥狀以急性胃腸炎為主，基本相同。短時期內(nèi)多人發(fā)病，無人傳染人的現(xiàn)象。中毒發(fā)生與不同區(qū)域人群飲食習(xí)慣有密切關(guān)系。與季節(jié)相關(guān)。細菌繁殖條件及人體防御機能。發(fā)病率高，病死率較低、恢復(fù)快、多數(shù)預(yù)后良好

細菌性食物中毒的特點與飲食有密切關(guān)系，去除原因食品后，不再有10細菌性食源性疾病的流行病學(xué)傳染源：被病原菌感染的動物或人傳播途徑：通過進食被細菌或其毒素污染的食物人群易感性：普遍，無病后免疫力，可重復(fù)感染流行特征：夏秋季高發(fā)；病例可散發(fā)或爆發(fā)流行；發(fā)病急，時間集中，潛伏期短；有共同進餐史；癥狀輕重與進食量有關(guān)。細菌性食源性疾病的流行病學(xué)傳染源：被病原菌感染的動物或人11細菌性食源性疾病的發(fā)病機制

感染型細菌污染食物在條件適宜時大量繁殖，人食入大量活菌的食物，引起消化道感染而造成的中毒。細菌毒力、細菌污染程度、進食量多少、人體抵抗力等因素與癥狀輕重直接相關(guān)。較少引起敗血癥或嚴重毒血癥，病程較短（沙門氏菌、副溶血性弧菌）細菌性食源性疾病的發(fā)病機制感染型12感染型活菌污染食品

|適宜條件食品中大量繁殖（菌量一般106）

|人攝入侵犯消化道粘膜

—消化道—體死亡放出內(nèi)毒素引起充血、水腫、滲出等炎癥作用于體溫調(diào)節(jié)中樞

發(fā)燒

消化道癥狀

感染型13細菌性食源性疾病的發(fā)病機制毒素型細菌污染食物在其中繁殖并產(chǎn)生大量毒素，人食入大量毒素的食物而造成的中毒。臨床癥狀與食入毒素量正相關(guān)起病急，不發(fā)熱，病程短，可引起敗血癥或嚴重毒血癥（葡萄球菌腸毒素、肉毒毒素）細菌性食源性疾病的發(fā)病機制毒素型14毒素型活菌污染食品

|適宜條件食品中大量繁殖產(chǎn)生外毒素（如腸毒素、神經(jīng)毒素等）|攝入含外毒素的食品而中毒|出現(xiàn)相應(yīng)外毒素的特殊臨床表現(xiàn)毒素型15食物中毒診斷標準和處理原則GB14938產(chǎn)氣莢膜梭菌食物中毒診斷及技術(shù)處理原則病原性大腸艾希氏菌食物中毒診斷及技術(shù)處理原則變形桿菌食物中毒診斷及技術(shù)處理原則變質(zhì)甘蔗食物中毒診斷及技術(shù)處理原則霉變谷物中嘔吐毒素食物中毒診斷及技術(shù)處理原則耶毒假單胞菌酵米面亞種食物中毒診斷及技術(shù)處理原則沙門氏菌食物中毒診斷及技術(shù)處理原則葡萄球菌食物中毒診斷及技術(shù)處理原則副溶血性弧菌食物中毒診斷及技術(shù)處理原則蠟樣芽胞桿菌食物中毒診斷及技術(shù)處理原則肉毒梭菌食物中毒診斷及技術(shù)處理原則食物中毒診斷標準和處理原則GB14938產(chǎn)氣莢膜梭菌食物中毒16現(xiàn)場調(diào)查流程建立病例定義，制定采樣計劃（提出假設(shè)）驗證假設(shè)可疑樣本采集和送檢實驗室檢驗采取控制措施調(diào)查結(jié)論和書面報告現(xiàn)場調(diào)查流程建立病例定義，制定采樣計劃（提出假設(shè)）17建立病例定義72h內(nèi)食用了共同餐次食品是否到醫(yī)院就診、是否服藥24h腹瀉3次以上癥狀體征明顯建立病例定義72h內(nèi)食用了共同餐次食品18建立病例定義核實病例數(shù)確定事件的存在描述疾病的三間分布時間分布地區(qū)分布人群分布建立病例定義核實病例數(shù)19現(xiàn)場調(diào)查主要物品清單采集工具長柄勺、剪刀、鏟子、小刀、鑷子、夾子、吸管、啟瓶器、采便管、注射器、消毒棉簽、采樣棉球、消毒紗布、酒精燈、壓舌板、皮筋、記號筆、標簽紙等樣品容器無菌塑料袋、廣口瓶（200-500mL)、運送培養(yǎng)基試管、生理鹽水、滅菌平皿、一次性小試管、便盒、樣品冷藏設(shè)施等現(xiàn)場調(diào)查主要物品清單采集工具20現(xiàn)場調(diào)查主要物品清單防護用品白色工作服或隔離衣、醫(yī)用手套、口罩等調(diào)查用表食物中毒個案調(diào)查表、衛(wèi)生監(jiān)督文書、采樣單等取證工具照相機、攝像機、錄音機其他相關(guān)專業(yè)參考資料現(xiàn)場調(diào)查主要物品清單防護用品21食物中毒采樣目的

查明病因和來源確定檢驗項目,驗證假設(shè)為以后的分析結(jié)論提供證據(jù)食物中毒采樣目的查明病因和來源22食物中毒采樣意義

實驗室檢測結(jié)果是查明爆發(fā)原因的證據(jù)科學(xué)準確合理地采集、運送、保存標本直接影響實驗結(jié)果的可靠性食物中毒采樣意義實驗室檢測結(jié)果是查明爆發(fā)原因的證據(jù)23食物中毒采樣原則目的明確代表性典型性重點突出有的放矢適時性把握時機程序性食物中毒采樣原則目的明確24食物中毒樣品種類剩余食品病人排泄物血液標本尸體解剖標本炊具類標本現(xiàn)場環(huán)境標本原料、半成品和成品從業(yè)人員標本食物中毒樣品種類剩余食品25無菌操作采樣無菌操作：防止外界微生物的污染和病原菌擴散所采用的操作技術(shù)食物中毒采樣目的是檢測標本的實際污染狀況，故應(yīng)嚴格避免由于采樣對檢品造成的新的污染。要求采樣容器、用具、培養(yǎng)基需嚴格滅菌同時以無菌操作取樣。無菌操作采樣無菌操作：防止外界微生物的污染和病原菌擴散所采用26無菌操作采樣采樣前用75%酒精棉球進行手消毒或戴手套采樣用棉拭子、鹽水等要求經(jīng)高壓滅菌消毒采樣容器要求密閉、內(nèi)壁光滑、清潔干燥經(jīng)高壓消毒鑷子、剪刀等用具，使用前在酒精燈灼燒滅菌后使用妥善保管消毒用品。生理鹽水和運送培養(yǎng)基要定期更換。（常溫一個月）無菌操作采樣采樣前用75%酒精棉球進行手消毒或戴手套27食物中毒采樣方法--剩余食品餐桌上病人吃過的最好。無菌操作用滅菌鑷子夾取置于滅菌容器。用滅菌鹽水沖洗盛裝過可疑中毒食物的容器，收集洗滌水置于滅菌容器或使用沾有滅菌鹽水的棉拭子涂抹盛裝過可疑中毒食物的容器，置于鹽水管內(nèi)。體積較大的肉食、魚類表面消毒后取內(nèi)部采樣半成品和原料罐頭：直接采樣或取空盒送檢無剩余食品時，采集餐廳48小時留樣食品食物中毒采樣方法--剩余食品餐桌上病人吃過的最好。無菌操作用28食物中毒采樣方法--生物標本嘔吐物、洗胃液取新鮮即時的，避免混入其他雜質(zhì)和細菌，容器應(yīng)保證無菌糞便：黏液或膿血部分，液狀糞便采取絮狀物1-2mL,成型便取蠶豆大小糞塊（約5g）盛于滅菌容器，勿混入尿液或水。注意密封和標簽肛拭子（直腸拭子法）：告知病人采樣目的使其配合

食物中毒采樣方法--生物標本嘔吐物、洗胃液29食物中毒采樣方法--生物標本確定體位，詢問有無肛腸疾病，確定是否適合肛拭子采樣取出滅菌采便管觀察有無破損站在病人側(cè)位，矚病人深呼吸放松以采便管用生理鹽水浸濕后，插入肛門內(nèi)3—5cm,轉(zhuǎn)動360度后取出，插入運送培養(yǎng)基。觀察病人情況有無出血等食物中毒采樣方法--生物標本確定體位，詢問有無肛腸疾病，確定30食物中毒采樣方法--生物標本咽喉涂抹令患者仰頭張口、用壓舌板壓舌、將無菌棉拭子伸入口腔涂抹咽部數(shù)次，放入鹽水管血液：無菌穿刺取靜脈血2—3mL移入無菌試管中送檢。食物中毒采樣方法--生物標本咽喉涂抹令患者仰頭張口、用壓31

生物標本的采樣時機嘔吐物、洗胃液取新鮮即時的糞便（肛拭子）急性腹瀉期及藥前根據(jù)患者人數(shù)，決定采集數(shù)量咽喉涂抹：發(fā)病第一日，最遲不超過3日,最好在體溫38度以上時采集血液：無菌穿刺靜脈血。發(fā)病初期血液可做細菌培養(yǎng)。急性期（3天內(nèi)）和恢復(fù)期（2周左右）各采血一次，制備血清，有助于感染型食物中毒診斷。生物標本的采樣時機嘔吐物、洗胃液取新鮮即時的32食物中毒采樣方法—工用具標本鍋、盆、桶、刀、菜板滅菌棉拭子沾鹽水后反復(fù)涂擦，置于滅菌容器。棉拭子接觸手的部分及時用無菌鑷子折斷后置于鹽水管中。如菜板已洗過，可刮下表面木屑置于滅菌容器。抹布可剪下一塊置于滅菌容器。食堂環(huán)境涂抹：冰箱、水池等食物中毒采樣方法—工用具標本鍋、盆、桶、刀、菜板滅菌棉拭33食物中毒采樣方法--從業(yè)人員對直接接觸食品的廚師和餐廳工作人員，可根據(jù)不同目的做帶菌檢查。采集手(皮膚)涂抹、肛拭子等樣本食物中毒采樣方法--從業(yè)人員對直接接觸食品的廚師和餐廳工作人34食物中毒采樣數(shù)量樣品名稱采樣數(shù)量固體食品200-500g(不同部位）液體及半流體食物200-500mL(充分攪拌）嘔吐物50—100g（每人）糞便5—10g（每人）容器洗滌水100—200mL（每件）血液5—10mL（每人）尸體標本10—20g（每種臟器）食物中毒采樣數(shù)量樣品名稱采樣數(shù)量固體食品200-500g(不35標本保存要求直腸拭子：48h內(nèi)檢測,保存于4℃;48h后檢測，保存于—70℃新鮮糞便：采集2h后冰箱保存腦脊液、尿液、唾液（24h內(nèi)處理）可室溫保存，長期保存條件4--8℃標本保存要求直腸拭子：48h內(nèi)檢測,保存于4℃;36標本保存要求分離病毒標本：保溫容器（0--4℃）不可超過2天。無條件立即運送和分離，需凍存。檢測抗體的血清：4℃可保存7—10天，最好不要冷凍，防止反復(fù)凍融使用冰袋保持樣品運送溫度4—8℃保證-20℃條件應(yīng)使用2kg干冰標本保存要求分離病毒標本：保溫容器（0--4℃）不可超過237病原微生物樣本的包裝WHO傳染性物質(zhì)和診斷性標本的安全運送指南確保人員安全和標本完整使用三個包裝層對包裝物進行三層包裝防漏、吸附材料標簽標識病原微生物樣本的包裝WHO傳染性物質(zhì)和診斷性標本的安全運送指38病原微生物樣本的運送固定備有吸水材料、消毒劑、手套、口罩、密封防水廢棄物容器車載冷藏裝置、冰袋、冰壺等及時、專人、快速送檢病原微生物樣本的運送固定39采樣注意事項樣品應(yīng)做詳細記錄，體現(xiàn)樣本全部信息根據(jù)不同樣本性狀，檢驗項目要求，合理保存和運送樣品。一般要求4小時內(nèi)送到實驗室。夏秋季冷藏運送。樣品采集時注意無菌操作，防止污染采樣量不受常規(guī)采樣數(shù)量限制。檢驗?zāi)康拿鞔_重點突出采樣注意事項樣品應(yīng)做詳細記錄，體現(xiàn)樣本全部信息40食物中毒標本的送檢與保存為避免樣本變質(zhì)和樣本中微生物增殖或死亡，送檢時間越快越好。運送培養(yǎng)基中運送并保持于合適溫度最好在采樣后4小時內(nèi)送檢，最好冷藏運送。血液標本低溫保存，不可冷凍包裝完整，密封良好，標識清晰

食物中毒標本的送檢與保存為避免樣本變質(zhì)和樣本中微生物增殖或死41

采樣基本生物安全注意事項采樣前進行手消毒或帶手套避免接觸不同患者時重復(fù)使用手套，防止交叉污染必要時穿防護服，采便時戴口罩廢棄物處理依生物安全相關(guān)規(guī)定執(zhí)行采樣基本生物安全注意事項采樣前進行手消毒或帶手套42檢驗項目選擇根據(jù)本起食物中毒臨床和流行病學(xué)資料分析初步推斷致病因素性質(zhì)和中毒原因（建立假設(shè)）確定檢驗項目檢驗項目選擇根據(jù)本起食物中毒臨床和流行病學(xué)資料分析43初步假設(shè)發(fā)病時間臨床表現(xiàn)：發(fā)熱、惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉人群分布“三間分布”趨勢病例之間有食物同源性，食用者發(fā)病、不吃者不發(fā)病，停止進食發(fā)病即停止，為“劍鋒”初步假設(shè)發(fā)病時間44初步判斷接報后通過初步分析和假設(shè)得出初步判斷是否是一個事件？什么性質(zhì)的事件？事件涉及范圍及嚴重性？事件的發(fā)展趨勢？爆發(fā)？流行？有無危重病人？需配合采取何措施？如何調(diào)動人力？準備哪些個人防護、儀器設(shè)備？初步判斷接報后通過初步分析和假設(shè)得出初步判斷45檢驗項目選擇

假設(shè)的特征合理有現(xiàn)場調(diào)查事實支持能夠解釋大多數(shù)病例注意現(xiàn)場觀察，保持開放性思維，請教相關(guān)領(lǐng)域?qū)＜覚z驗項目選擇假設(shè)的特征46目前食物中毒采樣的偏差廣泛性采樣，缺乏針對性盲目性（采集現(xiàn)場所有樣本，做全項致病菌檢測）大海撈針采樣不全面，檢測項目為固定模式缺乏溝通，前后脫節(jié)目前食物中毒采樣的偏差廣泛性采樣，缺乏針對性47致病物質(zhì)不明食物中毒食入可疑中毒食品引起的食物中毒由于取不到樣品或已經(jīng)無法查出致病物質(zhì)在學(xué)術(shù)上中毒物質(zhì)不明診斷依據(jù)流行病學(xué)調(diào)查資料病人潛伏期和特有臨床表現(xiàn)致病物質(zhì)不明食物中毒食入可疑中毒食品引起的食物中毒48致病物質(zhì)不明食物中毒報告遲赴現(xiàn)場遲、不能及時采樣不能采集到關(guān)鍵樣本或病人已用藥檢測項目針對性不強實驗室能力致病物質(zhì)不明食物中毒報告遲49致病物質(zhì)不明食物中毒分離不到病原性微生物可能的原因有

L型細菌技術(shù)和設(shè)備的原因病原性微生物的數(shù)量很少，培養(yǎng)不出來細菌處于非可培養(yǎng)的狀態(tài)現(xiàn)有的培養(yǎng)基和培養(yǎng)技術(shù)不適合這種微生物的生長新的病原微生物？致病物質(zhì)不明食物中毒分離不到病原性微生物可能的原因有50細菌性食物中毒實驗室檢驗原則盡快找到病原，快速準確允許與傳統(tǒng)方法不一致細菌性食物中毒實驗室檢驗原則盡快找到病原，快速準確51實驗室應(yīng)急準備實驗室必須常規(guī)配備各類樣品的采集材料、常用的培養(yǎng)基、微量生化管或生化試劑條、常用的診斷血清，并保證在有效期內(nèi)對不常用的采樣材料，細菌鑒定所用的試劑、試紙條也應(yīng)適量儲備從事細菌性食物中毒檢驗工作的檢驗人員需經(jīng)過專業(yè)知識和專業(yè)技能的學(xué)習(xí)，并能勝任檢驗工作的實際需要。

實驗室應(yīng)急準備實驗室必須常規(guī)配備各類樣品的采集材料、常用的培52細菌性食物中毒實驗室應(yīng)急檢測程序初步檢驗直接涂片檢查（霍亂弧菌、彎曲菌）活菌數(shù)測定蠟樣芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌等分離培養(yǎng)初篩純培養(yǎng)全面鑒定細菌鑒定生化、血清、分子生物學(xué)抗體測定血清凝集效價毒素檢測免疫學(xué)、儀器法、PCR、動物實驗細菌性食物中毒實驗室應(yīng)急檢測程序初步檢驗53細菌性食物中毒實驗室應(yīng)急檢測程序應(yīng)用直接分離及增菌雙重培養(yǎng),直接分離可檢出樣品中的優(yōu)勢菌(包括一些條件致病菌)增菌可將樣品中污染的但與菌量較少的致病菌檢出對服藥患者肛拭樣品中被抗生素抑制的細菌達到復(fù)蘇和增加菌量的作用。細菌性食物中毒實驗室應(yīng)急檢測程序應(yīng)用直接分離及增菌雙重培養(yǎng),54檢樣處理生物樣本一般不需要預(yù)增菌但服用抗生素的檢樣需要預(yù)增菌，直接插入2mLTSB37℃4—6h按檢驗方法要求接種相應(yīng)增菌液，再轉(zhuǎn)種相應(yīng)培養(yǎng)基檢樣處理生物樣本一般不需要預(yù)增菌55初篩方法三糖鐵PCRVIDASBAX初篩方法三糖鐵56直接培養(yǎng)將處理后的檢樣直接接種于各種培養(yǎng)基上

⑴需氧培養(yǎng)

普通瓊脂平板蠟樣芽孢桿菌及其他未知菌血平板葡萄球菌、鏈球菌、蠟樣芽孢桿菌伊紅—美藍培養(yǎng)基大腸埃希氏菌、變形桿菌

麥康凱培養(yǎng)基大腸埃希氏菌、變形桿菌

HE、SS培養(yǎng)基沙門氏菌、志賀氏菌

TCBS培養(yǎng)基副溶血性弧菌⑵厭氧培養(yǎng)

葡萄糖血瓊脂平板產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌

CCDA空腸彎曲菌

直接培養(yǎng)57增菌培養(yǎng)（與直接培養(yǎng)同時進行）⑴需氧菌增菌培養(yǎng)基

7.5%NaCl肉湯金黃色葡萄球菌葡萄糖肉浸液肉湯溶血性鏈球菌

TTB、SC增菌液沙門氏菌志賀氏菌增菌液志賀氏菌3.5%NaClAPW副溶血性弧菌腸道菌增菌液EC病原性大腸埃希氏菌⑵厭氧菌增菌庖肉培養(yǎng)基產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌

增菌培養(yǎng)（與直接培養(yǎng)同時進行）58血清學(xué)試驗

將病人急性期和恢復(fù)期的血清與所分離的病原菌做試管凝集試驗，如恢復(fù)期血清凝集效價較發(fā)病初期有4倍以上升高，則有診斷價值。毒素檢測及動物試驗

依食物中毒種類而定，目的是確定分離菌株的致病力。血清學(xué)試驗59動物實驗在證實可疑食品（或分離菌株及其毒素）與該起食物中毒的關(guān)系時，是一個重要指標，特別是對某些條件致病菌引發(fā)的食物中毒尤為重要。常用動物有大白鼠、小白鼠、家兔、貓、猴等。給毒途徑有經(jīng)口灌胃、腹腔注射或結(jié)腸袢試驗。液體食品可直接灌胃或注射；固體食品需經(jīng)無菌水研磨浸出毒性物質(zhì)，離心后取上清液進行試驗。也可用分離菌株培養(yǎng)物或其濾液進行試驗。觀察時間一般3—6天。每次試驗必須設(shè)對照組。動物實驗動物實驗在證實可疑食品（或分離菌株及其毒素）與該起食物中毒的60毒力基因檢測金黃色葡萄球菌腸毒素——ELASAETEC侵襲毒素、ETEC腸毒素、副溶血性弧菌蠟樣芽孢桿菌腸毒素、產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌毒素——PCR毒力基因檢測金黃色葡萄球菌腸毒素——ELASA61

檢驗結(jié)果判定原則以找到病原體或其毒力基因為最終結(jié)論快速檢測結(jié)果僅供參考注意非病原檢樣與病原檢樣檢出病原菌的一致性

檢驗結(jié)果判定原則以找到病原體或其毒力基因為最終結(jié)論62判定原則

多數(shù)患者樣本中檢出的致病意義明確的細菌在其種類、生化、血清型、毒素型均一致時，可以報告非病原檢樣與病原檢樣檢出占有絕對優(yōu)勢的致病意義不甚明確的細菌（大腸桿菌、溶藻弧菌。。。）且細菌種類、生化血清型均一致，同時本次事件中非患者對照未檢出時，應(yīng)加做毒力、動物試驗，陽性結(jié)果可以報告判定原則多數(shù)患者樣本中檢出的致病意義明確的細菌在其種類、生63判定原則

樣本中檢出致瀉大腸桿菌、金葡時，一定要做腸毒素檢測為最終結(jié)論蠟樣芽胞桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌必須計數(shù)105cfu/g以上判定原則樣本中檢出致瀉大腸桿菌、金葡時，一定要做腸毒素檢測64食物中毒檢驗重要的篩檢試驗氧化酶分辨革蘭氏陰性桿菌中的腸桿菌科及弧菌科（氧化酶陽性）兩類細菌觸酶分辨葡萄球菌和鏈球菌食物中毒檢驗重要的篩檢試驗氧化酶65沙門氏菌有動力（除雞-雛沙門菌

）大多產(chǎn)硫化氫（除甲型副傷寒）產(chǎn)酸大多產(chǎn)氣（除傷寒、雞-雛沙門菌

）靛基質(zhì)-蔗糖-乳糖-甘露醇+葡萄糖+符合腸桿菌科特征沙門氏菌有動力（除雞-雛沙門菌）66初步生化:三糖鐵（TSI）現(xiàn)象說明底層黃色葡萄糖陽性紅色或不變色葡萄糖陰性黑色產(chǎn)H2S氣泡產(chǎn)氣斜面黃色乳糖和（或）蔗糖陽性紅色或不變色乳糖和（或）蔗糖陰性初步生化:三糖鐵（TSI）現(xiàn)象說明底層黃色葡萄糖陽67沙門氏菌血清凝集：A-F多價OH1H2如生化結(jié)果為沙門菌屬但A-F多價陰性考慮Vi抗原遮蔽，煮沸后再凝亞利桑那菌：遲緩發(fā)酵乳糖，延長平板培養(yǎng)時間可能使A-F以外的沙門菌可能是血清交叉凝集的檸檬酸桿菌沙門氏菌血清凝集：A-F多價OH1H268結(jié)果報告方式A群：甲副1,2,12;aB群：乙型副傷寒1,4,5,12：b:1,2

鼠傷寒1,4,5,12：i:1,2C群：丙型副傷寒6,7，vi:c:1,5

豬霍亂6,7：c:1,5D群：腸炎沙門菌菌1,9,12：g,m

傷寒沙門菌1,9：vi:d結(jié)果報告方式A群：甲副1,2,12;a69志賀氏菌無動力，乳糖-（除宋內(nèi)遲緩發(fā)酵乳糖）不產(chǎn)硫化氫，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣（除F6）靛基質(zhì)多數(shù)陽性（宋內(nèi)-）甘露醇+（痢疾志賀-）如生化結(jié)果為志賀氏菌屬，四種多價不凝K抗原遮蔽，煮沸后再凝EIEC補充生化ONPG產(chǎn)氣試驗等志賀氏菌無動力，乳糖-（除宋內(nèi)遲緩發(fā)酵乳糖）70志賀氏菌宋內(nèi)的R相，使用R相血清凝集蜂窩哈夫尼亞菌，做大生化鑒定類志賀鄰單胞菌動力氧化酶試驗志賀氏菌宋內(nèi)的R相，使用R相血清凝集71細菌革蘭氏染色形態(tài)細菌革蘭氏染色形態(tài)72常用快速檢測技術(shù)顯色培養(yǎng)基利用細菌專有酶進行快速篩選沙門、金葡、大腸、弧菌、單增等3M測試片細菌微量快速鑒定（手工API）標準化，縮短檢測時間自動生化鑒定：AMSATBBioLog直接從標本中檢測抗原——ELISA放免分析（RIA)酶免分析（EIA)化學(xué)發(fā)光（CIA)生物發(fā)光VIDAS膠體金技術(shù)常用快速檢測技術(shù)顯色培養(yǎng)基利用細菌專有酶進行快速篩選73細菌毒力基因快速檢測比細菌培養(yǎng)方法更可靠ETECLT(熱敏毒素）ST（耐熱毒素）EHECVT/SLT副溶：TDH金葡：腸毒素BAXIQ-Check普通PCR熒光定量PCR（實時、多重PCR）

細菌毒力基因快速檢測比細菌培養(yǎng)方法更可靠74常見食物中毒病原菌

病原菌致病機理特征食品標本沙門菌組織侵襲禽、蛋、肉（交叉污染的進口物）食品：血清分型培養(yǎng)病例：血清分型培養(yǎng)食品加工者：糞便、血清培養(yǎng)副溶血弧菌侵襲性腸毒素海產(chǎn)品食品／病例埃希氏大腸菌⒈產(chǎn)毒大腸桿菌腸毒素（STLT）生蔬菜食品：培養(yǎng)和血清分型病例：便培養(yǎng)、血清分型和腸毒素產(chǎn)生；侵襲性試驗

⒉。侵襲性大腸桿菌組織侵襲沙拉，水，奶酪⒊。腸出血性大腸桿菌（E.coliO157:H7和其它）細胞腸毒素VT牛肉，生奶

蠟樣芽孢桿菌腸毒素調(diào)味醬、米粉、布丁、香腸、肉塊食品：培養(yǎng)病例：便培養(yǎng)

志賀菌屬組織侵襲被感染的操作者污染食品，通常不是食傳的食品：培養(yǎng)和血清分型病例／操作者：便培養(yǎng)和血清分型常見食物中毒病原菌病原菌致病機理特征食品標本沙門菌組織侵襲75常見食物中毒病原菌

病原菌致病機理特征食品標本耶爾森氏菌組織侵襲，腸毒素被感染的人或低等動物污染的食品冷藏食品食品：培養(yǎng)病例：便，血培養(yǎng)，血清分型操作者：便培養(yǎng)動物：便，生病動物的尸檢材料培養(yǎng)霍亂弧菌Ｏ１群體內(nèi)生成的腸毒素感染者污染的食物或從污染的環(huán)境獲得食品：血清分型病例，血清分型霍亂弧菌非Ｏ１群體內(nèi)生成的腸毒素，組織侵襲貝類

彎曲桿菌不詳生奶，禽食品／病例：選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)，血清學(xué)分型金黃色葡萄球菌外毒素火腿／肉片／調(diào)味醬／奶油食品：腸毒素檢測食品加工者：培養(yǎng)鼻孔、皮膚病變病人：糞便、嘔吐物常見食物中毒病原菌病原菌致病機理特征食品標本組織侵襲，腸毒76蠟樣芽孢桿菌生成的腸毒素米飯食物：定性培養(yǎng)病例：糞便培養(yǎng)產(chǎn)氣莢膜梭菌體內(nèi)生成腸毒素肉、禽類食品：腸毒素檢測，定性培養(yǎng)和血清分型病例：糞便定性培養(yǎng)和血清分型對照：產(chǎn)氣莢膜桿菌的糞便培養(yǎng)和血清分型肉毒梭菌外毒素不當(dāng)?shù)穆犙b或類似的貯存食品食品：毒素檢測病例：在ＣＤＣ或國家級實驗室作血清或糞便的毒素檢測糞便：培養(yǎng)單增李斯特菌溶血素、內(nèi)化素奶制品、即食食品食物：定性培養(yǎng)血清分型病例：糞便培養(yǎng)血清分型毒素檢測變形桿菌組織侵襲，腸毒素動物性食品冷葷等食物：定性培養(yǎng)病例：糞便、吐瀉物培養(yǎng)血清效價測定動物實驗嗜水氣單胞菌耐熱和不耐熱腸毒素、溶血素、胞外酶。水產(chǎn)品、肉與肉制品、牛奶、蔬菜

食物：定性培養(yǎng)血清分型病例：糞便培養(yǎng)血清分型動物實驗生成的腸毒素米飯食物：定性培養(yǎng)產(chǎn)氣莢膜梭菌體內(nèi)生成腸毒素肉、77ThanksThanks78細菌性食物中毒樣品的

采集及實驗室檢測程序北京市疾病預(yù)防控制中心陳倩2013年4月細菌性食物中毒樣品的

采集及實驗室檢測程序北京市疾病預(yù)防控制79

食物中毒樣品種類和采集方法采樣注意事項實驗室應(yīng)急檢測程序細菌性食物中毒樣品的采集及實驗室檢測程序80食源性疾病WHO：由于食物中含有致病因子引起的以急性病理過程為主要臨床特征的感染性或中毒性疾病美國CDC：由于食用了受污染的食品或飲料而引起的疾病包括常見的食物中毒、腸道傳染病、人畜共患傳染病、寄生蟲病及化學(xué)性有毒有害物質(zhì)所引起的疾病。食源性疾患的發(fā)病率居各類疾病總發(fā)病率的前列，是當(dāng)前世界上最突出的衛(wèi)生問題。

食源性疾病WHO：由于食物中含有致病因子引起的以急性病理過程81食源性疾病特點爆發(fā)和散發(fā)兩種形式腸道傳染病存在人與人之間傳播種類多、潛伏期不同不一定出現(xiàn)明顯消化道癥狀食源性疾病特點爆發(fā)和散發(fā)兩種形式82細菌性食源性疾病細菌性食源性疾?。菏沁M食被細菌或細菌毒素污染的食物而引起的感染性或中毒性疾病。細菌性腸道傳染?。ɑ魜y、痢疾、傷寒副傷寒、O157短期內(nèi)集中發(fā)病常被診斷為細菌性食物中毒散發(fā)或潛伏期較長病例常被診斷為胃腸炎或其他疾病細菌性食源性疾病細菌性食源性疾病：是進食被細菌或細菌毒素污染83食物中毒相關(guān)概念食物中毒：攝入了含有生物性、化學(xué)性有毒有害物質(zhì)的食品或者把有害物質(zhì)當(dāng)作食品攝入后出現(xiàn)的非傳染性(不屬于傳染病)的急性、亞急性疾病。食物中毒診斷標準主要以流行病學(xué)調(diào)查資料及病人的潛伏期和中毒的特有表現(xiàn)為依據(jù)，實驗室診斷是為了確定中毒的病因而進行的食物中毒相關(guān)概念食物中毒：攝入了含有生物性、化學(xué)性有毒有害物84食物中毒的致病因素2012年全國報告食物中毒917起

微生物引起的患者數(shù)最多，占總數(shù)的50%美國食源性疾病爆發(fā)細菌性的占總起數(shù)的75%，占病例數(shù)86%。我國細菌性食物中毒發(fā)生起數(shù)同樣常年居首位食物中毒的致病因素2012年全國報告食物中毒917起85美國食源性病原體空腸彎曲菌產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌出血性大腸桿菌O157單增李斯特菌沙門氏菌金黃色葡萄球菌圓孢子蟲隱孢子蟲美國食源性病原體空腸彎曲菌86常見細菌性食物中毒沙門氏菌、志賀氏菌、致瀉性大腸桿菌、副溶血性弧菌、其它致病性弧菌、金黃色葡萄球菌、蠟樣芽胞桿菌、肉毒梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、出血性大腸桿菌O157、單增李斯特菌、耶爾森氏菌、空腸彎曲菌、變形桿菌、耶毒假單胞菌酵米面亞種、氣單胞菌、腸球菌等常見細菌性食物中毒沙門氏菌、志賀氏菌、致瀉性大腸桿菌、副溶血87細菌性食物中毒的特點與飲食有密切關(guān)系，去除原因食品后，不再有新的患者。臨床癥狀以急性胃腸炎為主，基本相同。短時期內(nèi)多人發(fā)病，無人傳染人的現(xiàn)象。中毒發(fā)生與不同區(qū)域人群飲食習(xí)慣有密切關(guān)系。與季節(jié)相關(guān)。細菌繁殖條件及人體防御機能。發(fā)病率高，病死率較低、恢復(fù)快、多數(shù)預(yù)后良好

細菌性食物中毒的特點與飲食有密切關(guān)系，去除原因食品后，不再有88細菌性食源性疾病的流行病學(xué)傳染源：被病原菌感染的動物或人傳播途徑：通過進食被細菌或其毒素污染的食物人群易感性：普遍，無病后免疫力，可重復(fù)感染流行特征：夏秋季高發(fā)；病例可散發(fā)或爆發(fā)流行；發(fā)病急，時間集中，潛伏期短；有共同進餐史；癥狀輕重與進食量有關(guān)。細菌性食源性疾病的流行病學(xué)傳染源：被病原菌感染的動物或人89細菌性食源性疾病的發(fā)病機制

感染型細菌污染食物在條件適宜時大量繁殖，人食入大量活菌的食物，引起消化道感染而造成的中毒。細菌毒力、細菌污染程度、進食量多少、人體抵抗力等因素與癥狀輕重直接相關(guān)。較少引起敗血癥或嚴重毒血癥，病程較短（沙門氏菌、副溶血性弧菌）細菌性食源性疾病的發(fā)病機制感染型90感染型活菌污染食品

|適宜條件食品中大量繁殖（菌量一般106）

|人攝入侵犯消化道粘膜

—消化道—體死亡放出內(nèi)毒素引起充血、水腫、滲出等炎癥作用于體溫調(diào)節(jié)中樞

發(fā)燒

消化道癥狀

感染型91細菌性食源性疾病的發(fā)病機制毒素型細菌污染食物在其中繁殖并產(chǎn)生大量毒素，人食入大量毒素的食物而造成的中毒。臨床癥狀與食入毒素量正相關(guān)起病急，不發(fā)熱，病程短，可引起敗血癥或嚴重毒血癥（葡萄球菌腸毒素、肉毒毒素）細菌性食源性疾病的發(fā)病機制毒素型92毒素型活菌污染食品

|適宜條件食品中大量繁殖產(chǎn)生外毒素（如腸毒素、神經(jīng)毒素等）|攝入含外毒素的食品而中毒|出現(xiàn)相應(yīng)外毒素的特殊臨床表現(xiàn)毒素型93食物中毒診斷標準和處理原則GB14938產(chǎn)氣莢膜梭菌食物中毒診斷及技術(shù)處理原則病原性大腸艾希氏菌食物中毒診斷及技術(shù)處理原則變形桿菌食物中毒診斷及技術(shù)處理原則變質(zhì)甘蔗食物中毒診斷及技術(shù)處理原則霉變谷物中嘔吐毒素食物中毒診斷及技術(shù)處理原則耶毒假單胞菌酵米面亞種食物中毒診斷及技術(shù)處理原則沙門氏菌食物中毒診斷及技術(shù)處理原則葡萄球菌食物中毒診斷及技術(shù)處理原則副溶血性弧菌食物中毒診斷及技術(shù)處理原則蠟樣芽胞桿菌食物中毒診斷及技術(shù)處理原則肉毒梭菌食物中毒診斷及技術(shù)處理原則食物中毒診斷標準和處理原則GB14938產(chǎn)氣莢膜梭菌食物中毒94現(xiàn)場調(diào)查流程建立病例定義，制定采樣計劃（提出假設(shè)）驗證假設(shè)可疑樣本采集和送檢實驗室檢驗采取控制措施調(diào)查結(jié)論和書面報告現(xiàn)場調(diào)查流程建立病例定義，制定采樣計劃（提出假設(shè)）95建立病例定義72h內(nèi)食用了共同餐次食品是否到醫(yī)院就診、是否服藥24h腹瀉3次以上癥狀體征明顯建立病例定義72h內(nèi)食用了共同餐次食品96建立病例定義核實病例數(shù)確定事件的存在描述疾病的三間分布時間分布地區(qū)分布人群分布建立病例定義核實病例數(shù)97現(xiàn)場調(diào)查主要物品清單采集工具長柄勺、剪刀、鏟子、小刀、鑷子、夾子、吸管、啟瓶器、采便管、注射器、消毒棉簽、采樣棉球、消毒紗布、酒精燈、壓舌板、皮筋、記號筆、標簽紙等樣品容器無菌塑料袋、廣口瓶（200-500mL)、運送培養(yǎng)基試管、生理鹽水、滅菌平皿、一次性小試管、便盒、樣品冷藏設(shè)施等現(xiàn)場調(diào)查主要物品清單采集工具98現(xiàn)場調(diào)查主要物品清單防護用品白色工作服或隔離衣、醫(yī)用手套、口罩等調(diào)查用表食物中毒個案調(diào)查表、衛(wèi)生監(jiān)督文書、采樣單等取證工具照相機、攝像機、錄音機其他相關(guān)專業(yè)參考資料現(xiàn)場調(diào)查主要物品清單防護用品99食物中毒采樣目的

查明病因和來源確定檢驗項目,驗證假設(shè)為以后的分析結(jié)論提供證據(jù)食物中毒采樣目的查明病因和來源100食物中毒采樣意義

實驗室檢測結(jié)果是查明爆發(fā)原因的證據(jù)科學(xué)準確合理地采集、運送、保存標本直接影響實驗結(jié)果的可靠性食物中毒采樣意義實驗室檢測結(jié)果是查明爆發(fā)原因的證據(jù)101食物中毒采樣原則目的明確代表性典型性重點突出有的放矢適時性把握時機程序性食物中毒采樣原則目的明確102食物中毒樣品種類剩余食品病人排泄物血液標本尸體解剖標本炊具類標本現(xiàn)場環(huán)境標本原料、半成品和成品從業(yè)人員標本食物中毒樣品種類剩余食品103無菌操作采樣無菌操作：防止外界微生物的污染和病原菌擴散所采用的操作技術(shù)食物中毒采樣目的是檢測標本的實際污染狀況，故應(yīng)嚴格避免由于采樣對檢品造成的新的污染。要求采樣容器、用具、培養(yǎng)基需嚴格滅菌同時以無菌操作取樣。無菌操作采樣無菌操作：防止外界微生物的污染和病原菌擴散所采用104無菌操作采樣采樣前用75%酒精棉球進行手消毒或戴手套采樣用棉拭子、鹽水等要求經(jīng)高壓滅菌消毒采樣容器要求密閉、內(nèi)壁光滑、清潔干燥經(jīng)高壓消毒鑷子、剪刀等用具，使用前在酒精燈灼燒滅菌后使用妥善保管消毒用品。生理鹽水和運送培養(yǎng)基要定期更換。（常溫一個月）無菌操作采樣采樣前用75%酒精棉球進行手消毒或戴手套105食物中毒采樣方法--剩余食品餐桌上病人吃過的最好。無菌操作用滅菌鑷子夾取置于滅菌容器。用滅菌鹽水沖洗盛裝過可疑中毒食物的容器，收集洗滌水置于滅菌容器或使用沾有滅菌鹽水的棉拭子涂抹盛裝過可疑中毒食物的容器，置于鹽水管內(nèi)。體積較大的肉食、魚類表面消毒后取內(nèi)部采樣半成品和原料罐頭：直接采樣或取空盒送檢無剩余食品時，采集餐廳48小時留樣食品食物中毒采樣方法--剩余食品餐桌上病人吃過的最好。無菌操作用106食物中毒采樣方法--生物標本嘔吐物、洗胃液取新鮮即時的，避免混入其他雜質(zhì)和細菌，容器應(yīng)保證無菌糞便：黏液或膿血部分，液狀糞便采取絮狀物1-2mL,成型便取蠶豆大小糞塊（約5g）盛于滅菌容器，勿混入尿液或水。注意密封和標簽肛拭子（直腸拭子法）：告知病人采樣目的使其配合

食物中毒采樣方法--生物標本嘔吐物、洗胃液107食物中毒采樣方法--生物標本確定體位，詢問有無肛腸疾病，確定是否適合肛拭子采樣取出滅菌采便管觀察有無破損站在病人側(cè)位，矚病人深呼吸放松以采便管用生理鹽水浸濕后，插入肛門內(nèi)3—5cm,轉(zhuǎn)動360度后取出，插入運送培養(yǎng)基。觀察病人情況有無出血等食物中毒采樣方法--生物標本確定體位，詢問有無肛腸疾病，確定108食物中毒采樣方法--生物標本咽喉涂抹令患者仰頭張口、用壓舌板壓舌、將無菌棉拭子伸入口腔涂抹咽部數(shù)次，放入鹽水管血液：無菌穿刺取靜脈血2—3mL移入無菌試管中送檢。食物中毒采樣方法--生物標本咽喉涂抹令患者仰頭張口、用壓109

生物標本的采樣時機嘔吐物、洗胃液取新鮮即時的糞便（肛拭子）急性腹瀉期及藥前根據(jù)患者人數(shù)，決定采集數(shù)量咽喉涂抹：發(fā)病第一日，最遲不超過3日,最好在體溫38度以上時采集血液：無菌穿刺靜脈血。發(fā)病初期血液可做細菌培養(yǎng)。急性期（3天內(nèi)）和恢復(fù)期（2周左右）各采血一次，制備血清，有助于感染型食物中毒診斷。生物標本的采樣時機嘔吐物、洗胃液取新鮮即時的110食物中毒采樣方法—工用具標本鍋、盆、桶、刀、菜板滅菌棉拭子沾鹽水后反復(fù)涂擦，置于滅菌容器。棉拭子接觸手的部分及時用無菌鑷子折斷后置于鹽水管中。如菜板已洗過，可刮下表面木屑置于滅菌容器。抹布可剪下一塊置于滅菌容器。食堂環(huán)境涂抹：冰箱、水池等食物中毒采樣方法—工用具標本鍋、盆、桶、刀、菜板滅菌棉拭111食物中毒采樣方法--從業(yè)人員對直接接觸食品的廚師和餐廳工作人員，可根據(jù)不同目的做帶菌檢查。采集手(皮膚)涂抹、肛拭子等樣本食物中毒采樣方法--從業(yè)人員對直接接觸食品的廚師和餐廳工作人112食物中毒采樣數(shù)量樣品名稱采樣數(shù)量固體食品200-500g(不同部位）液體及半流體食物200-500mL(充分攪拌）嘔吐物50—100g（每人）糞便5—10g（每人）容器洗滌水100—200mL（每件）血液5—10mL（每人）尸體標本10—20g（每種臟器）食物中毒采樣數(shù)量樣品名稱采樣數(shù)量固體食品200-500g(不113標本保存要求直腸拭子：48h內(nèi)檢測,保存于4℃;48h后檢測，保存于—70℃新鮮糞便：采集2h后冰箱保存腦脊液、尿液、唾液（24h內(nèi)處理）可室溫保存，長期保存條件4--8℃標本保存要求直腸拭子：48h內(nèi)檢測,保存于4℃;114標本保存要求分離病毒標本：保溫容器（0--4℃）不可超過2天。無條件立即運送和分離，需凍存。檢測抗體的血清：4℃可保存7—10天，最好不要冷凍，防止反復(fù)凍融使用冰袋保持樣品運送溫度4—8℃保證-20℃條件應(yīng)使用2kg干冰標本保存要求分離病毒標本：保溫容器（0--4℃）不可超過2115病原微生物樣本的包裝WHO傳染性物質(zhì)和診斷性標本的安全運送指南確保人員安全和標本完整使用三個包裝層對包裝物進行三層包裝防漏、吸附材料標簽標識病原微生物樣本的包裝WHO傳染性物質(zhì)和診斷性標本的安全運送指116病原微生物樣本的運送固定備有吸水材料、消毒劑、手套、口罩、密封防水廢棄物容器車載冷藏裝置、冰袋、冰壺等及時、專人、快速送檢病原微生物樣本的運送固定117采樣注意事項樣品應(yīng)做詳細記錄，體現(xiàn)樣本全部信息根據(jù)不同樣本性狀，檢驗項目要求，合理保存和運送樣品。一般要求4小時內(nèi)送到實驗室。夏秋季冷藏運送。樣品采集時注意無菌操作，防止污染采樣量不受常規(guī)采樣數(shù)量限制。檢驗?zāi)康拿鞔_重點突出采樣注意事項樣品應(yīng)做詳細記錄，體現(xiàn)樣本全部信息118食物中毒標本的送檢與保存為避免樣本變質(zhì)和樣本中微生物增殖或死亡，送檢時間越快越好。運送培養(yǎng)基中運送并保持于合適溫度最好在采樣后4小時內(nèi)送檢，最好冷藏運送。血液標本低溫保存，不可冷凍包裝完整，密封良好，標識清晰

食物中毒標本的送檢與保存為避免樣本變質(zhì)和樣本中微生物增殖或死119

采樣基本生物安全注意事項采樣前進行手消毒或帶手套避免接觸不同患者時重復(fù)使用手套，防止交叉污染必要時穿防護服，采便時戴口罩廢棄物處理依生物安全相關(guān)規(guī)定執(zhí)行采樣基本生物安全注意事項采樣前進行手消毒或帶手套120檢驗項目選擇根據(jù)本起食物中毒臨床和流行病學(xué)資料分析初步推斷致病因素性質(zhì)和中毒原因（建立假設(shè)）確定檢驗項目檢驗項目選擇根據(jù)本起食物中毒臨床和流行病學(xué)資料分析121初步假設(shè)發(fā)病時間臨床表現(xiàn)：發(fā)熱、惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉人群分布“三間分布”趨勢病例之間有食物同源性，食用者發(fā)病、不吃者不發(fā)病，停止進食發(fā)病即停止，為“劍鋒”初步假設(shè)發(fā)病時間122初步判斷接報后通過初步分析和假設(shè)得出初步判斷是否是一個事件？什么性質(zhì)的事件？事件涉及范圍及嚴重性？事件的發(fā)展趨勢？爆發(fā)？流行？有無危重病人？需配合采取何措施？如何調(diào)動人力？準備哪些個人防護、儀器設(shè)備？初步判斷接報后通過初步分析和假設(shè)得出初步判斷123檢驗項目選擇

假設(shè)的特征合理有現(xiàn)場調(diào)查事實支持能夠解釋大多數(shù)病例注意現(xiàn)場觀察，保持開放性思維，請教相關(guān)領(lǐng)域?qū)＜覚z驗項目選擇假設(shè)的特征124目前食物中毒采樣的偏差廣泛性采樣，缺乏針對性盲目性（采集現(xiàn)場所有樣本，做全項致病菌檢測）大海撈針采樣不全面，檢測項目為固定模式缺乏溝通，前后脫節(jié)目前食物中毒采樣的偏差廣泛性采樣，缺乏針對性125致病物質(zhì)不明食物中毒食入可疑中毒食品引起的食物中毒由于取不到樣品或已經(jīng)無法查出致病物質(zhì)在學(xué)術(shù)上中毒物質(zhì)不明診斷依據(jù)流行病學(xué)調(diào)查資料病人潛伏期和特有臨床表現(xiàn)致病物質(zhì)不明食物中毒食入可疑中毒食品引起的食物中毒126致病物質(zhì)不明食物中毒報告遲赴現(xiàn)場遲、不能及時采樣不能采集到關(guān)鍵樣本或病人已用藥檢測項目針對性不強實驗室能力致病物質(zhì)不明食物中毒報告遲127致病物質(zhì)不明食物中毒分離不到病原性微生物可能的原因有

L型細菌技術(shù)和設(shè)備的原因病原性微生物的數(shù)量很少，培養(yǎng)不出來細菌處于非可培養(yǎng)的狀態(tài)現(xiàn)有的培養(yǎng)基和培養(yǎng)技術(shù)不適合這種微生物的生長新的病原微生物？致病物質(zhì)不明食物中毒分離不到病原性微生物可能的原因有128細菌性食物中毒實驗室檢驗原則盡快找到病原，快速準確允許與傳統(tǒng)方法不一致細菌性食物中毒實驗室檢驗原則盡快找到病原，快速準確129實驗室應(yīng)急準備實驗室必須常規(guī)配備各類樣品的采集材料、常用的培養(yǎng)基、微量生化管或生化試劑條、常用的診斷血清，并保證在有效期內(nèi)對不常用的采樣材料，細菌鑒定所用的試劑、試紙條也應(yīng)適量儲備從事細菌性食物中毒檢驗工作的檢驗人員需經(jīng)過專業(yè)知識和專業(yè)技能的學(xué)習(xí)，并能勝任檢驗工作的實際需要。

實驗室應(yīng)急準備實驗室必須常規(guī)配備各類樣品的采集材料、常用的培130細菌性食物中毒實驗室應(yīng)急檢測程序初步檢驗直接涂片檢查（霍亂弧菌、彎曲菌）活菌數(shù)測定蠟樣芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌等分離培養(yǎng)初篩純培養(yǎng)全面鑒定細菌鑒定生化、血清、分子生物學(xué)抗體測定血清凝集效價毒素檢測免疫學(xué)、儀器法、PCR、動物實驗細菌性食物中毒實驗室應(yīng)急檢測程序初步檢驗131細菌性食物中毒實驗室應(yīng)急檢測程序應(yīng)用直接分離及增菌雙重培養(yǎng),直接分離可檢出樣品中的優(yōu)勢菌(包括一些條件致病菌)增菌可將樣品中污染的但與菌量較少的致病菌檢出對服藥患者肛拭樣品中被抗生素抑制的細菌達到復(fù)蘇和增加菌量的作用。細菌性食物中毒實驗室應(yīng)急檢測程序應(yīng)用直接分離及增菌雙重培養(yǎng),132檢樣處理生物樣本一般不需要預(yù)增菌但服用抗生素的檢樣需要預(yù)增菌，直接插入2mLTSB37℃4—6h按檢驗方法要求接種相應(yīng)增菌液，再轉(zhuǎn)種相應(yīng)培養(yǎng)基檢樣處理生物樣本一般不需要預(yù)增菌133初篩方法三糖鐵PCRVIDASBAX初篩方法三糖鐵134直接培養(yǎng)將處理后的檢樣直接接種于各種培養(yǎng)基上

⑴需氧培養(yǎng)

普通瓊脂平板蠟樣芽孢桿菌及其他未知菌血平板葡萄球菌、鏈球菌、蠟樣芽孢桿菌伊紅—美藍培養(yǎng)基大腸埃希氏菌、變形桿菌

麥康凱培養(yǎng)基大腸埃希氏菌、變形桿菌

HE、SS培養(yǎng)基沙門氏菌、志賀氏菌

TCBS培養(yǎng)基副溶血性弧菌⑵厭氧培養(yǎng)

葡萄糖血瓊脂平板產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌

CCDA空腸彎曲菌

直接培養(yǎng)135增菌培養(yǎng)（與直接培養(yǎng)同時進行）⑴需氧菌增菌培養(yǎng)基

7.5%NaCl肉湯金黃色葡萄球菌葡萄糖肉浸液肉湯溶血性鏈球菌

TTB、SC增菌液沙門氏菌志賀氏菌增菌液志賀氏菌3.5%NaClAPW副溶血性弧菌腸道菌增菌液EC病原性大腸埃希氏菌⑵厭氧菌增菌庖肉培養(yǎng)基產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌

增菌培養(yǎng)（與直接培養(yǎng)同時進行）136血清學(xué)試驗

將病人急性期和恢復(fù)期的血清與所分離的病原菌做試管凝集試驗，如恢復(fù)期血清凝集效價較發(fā)病初期有4倍以上升高，則有診斷價值。毒素檢測及動物試驗

依食物中毒種類而定，目的是確定分離菌株的致病力。血清學(xué)試驗137動物實驗在證實可疑食品（或分離菌株及其毒素）與該起食物中毒的關(guān)系時，是一個重要指標，特別是對某些條件致病菌引發(fā)的食物中毒尤為重要。常用動物有大白鼠、小白鼠、家兔、貓、猴等。給毒途徑有經(jīng)口灌胃、腹腔注射或結(jié)腸袢試驗。液體食品可直接灌胃或注射；固體食品需經(jīng)無菌水研磨浸出毒性物質(zhì)，離心后取上清液進行試驗。也可用分離菌株培養(yǎng)物或其濾液進行試驗。觀察時間一般3—6天。每次試驗必須設(shè)對照組。動物實驗動物實驗在證實可疑食品（或分離菌株及其毒素）與該起食物中毒的138毒力基因檢測金黃色葡萄球菌腸毒素——ELASAETEC侵襲毒素、ETEC腸毒素、副溶血性弧菌蠟樣芽孢桿菌腸毒素、產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌毒素——PCR毒力基因檢測金黃色葡萄球菌腸毒素——ELASA139

檢驗結(jié)果判定原則以找到病原體或其毒力基因為最終結(jié)論快速檢測結(jié)果僅供參考注意非病原檢樣與病原檢樣檢出病原菌的一致性

檢驗結(jié)果判定原則以找到病原體或其毒力基因為最終結(jié)論140判定原則

多數(shù)患者樣本中檢出的致病意義明確的細菌在其種類、生化、血清型、毒素型均一致時，可以報告非病原檢樣與病原檢樣檢出占有絕對優(yōu)勢的致病意義不甚明確的細菌（大腸桿菌、溶藻弧菌。。。）且細菌種類、生化血清型均一致，同時本次事件中非患者對照未檢出時，應(yīng)加做毒力、動物試驗，陽性結(jié)果可以報告判定原則多數(shù)患者樣本中檢出的致病意義明確的細菌在其種類、生141判定原則

樣本中檢出致瀉大腸桿菌、金葡時，一定要做腸毒素檢測為最終結(jié)論蠟樣芽胞桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌必須計數(shù)105cfu/g以上判定原則樣本中檢出致瀉大腸桿菌、金葡時，一定要做腸毒素檢測142食物中毒檢驗重要的篩檢試驗氧化酶分辨革蘭氏陰性桿菌中的腸桿菌科及弧菌科（氧化酶陽性）兩類細菌觸酶分辨葡萄球菌和鏈球菌食物中毒檢驗重要的篩檢試驗氧化酶143沙門氏菌有動力（除雞-雛沙門菌

）大多產(chǎn)硫化氫（除甲型副傷寒）產(chǎn)酸大多產(chǎn)氣（除傷寒、雞-雛沙門菌

）靛基質(zhì)-蔗糖-乳糖-甘露醇+葡萄糖+符合腸桿菌科特征沙門氏菌有動力（除雞-雛沙門菌）