血清r-球蛋白提純課件

生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)JiLinUniversityChina實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求：題目，組號實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩?shí)驗(yàn)原理：實(shí)驗(yàn)操作：如實(shí)記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)果分析：實(shí)事求是討論或小結(jié)：生化實(shí)驗(yàn)內(nèi)容安排第一實(shí)驗(yàn)室DEAE－離子交換層析法分離血清蛋白質(zhì)第二實(shí)驗(yàn)室血清γ－球蛋白提純、醋酸纖維素薄膜電泳第三實(shí)驗(yàn)室聚丙烯酰胺凝膠電泳第四實(shí)驗(yàn)室蛋白質(zhì)的比色分析、血清脂蛋白電泳第五實(shí)驗(yàn)室基因組DNA的提取及鑒定第六實(shí)驗(yàn)室酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)十七血清γ－球蛋白的提純技術(shù)關(guān)鍵及提純過程的主要原理二、脫鹽一、鹽析(Saltingout)、離心分離操作注意實(shí)驗(yàn)原理操作注意實(shí)驗(yàn)原理提問式小結(jié)三、檢測與分析四、濃縮血清γ-球蛋白的提純實(shí)驗(yàn)八醋酸纖維素薄膜電泳

---分離血清蛋白質(zhì)[目的]

熟悉醋酸纖維素薄膜電泳的基本原理及電泳分離血清蛋白質(zhì)的方法。一、電泳的基本原理1、電泳指帶電顆粒在電場中向著與其所帶電荷極性相反的電極方向移動(dòng)的現(xiàn)象。許多重要的生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、核苷酸、核酸等都具有可電離基團(tuán);在電場的作用下，這些帶電粒子會(huì)向著與其所帶電荷極性相反的電極方向移動(dòng)。二、血清蛋白質(zhì)的分離1、蛋白質(zhì)的兩性解離性質(zhì)蛋白質(zhì)分子兩端的氨基和羧基氨基酸殘基側(cè)鏈中某些基團(tuán)在一定的溶液pH條件下解離成帶負(fù)電荷或正電荷的基團(tuán)3、血清蛋白質(zhì)1）各蛋白質(zhì)的分子量清蛋白(69.000)

1-球蛋白(200.000)

2-球蛋白(300.000)

-球蛋白(90.000-150.000)

-球蛋白(156.000-950.000)A

清蛋白

12清蛋白

12B血清蛋白電泳圖譜1．電泳介質(zhì)

——醋纖膜的準(zhǔn)備醋酸纖維素膜（2×8cm）放入pH8.6的巴比妥緩沖液[操作][操作]2．樣品1)γ-球蛋白前面分離提純、濃縮2)血清:對照[操作]3、點(diǎn)樣注意：點(diǎn)樣量適度

過多：拖尾和擴(kuò)散過少：則無法檢出1.5cm粗糙面點(diǎn)樣[操作][操作]（四）顯色與脫色1、顯色氨基黑10B（1-2min）2、脫色5%冰醋酸漂洗3次注意：用干凈鑷子夾電泳槽中的膜污染鑷子用于