常見微生物性食物中毒

常見微生物性食物中毒

2017年5月30日.1前言常見細(xì)菌性食物中毒沙門氏菌屬（鼠傷寒豬傷寒腸炎）、副溶血性弧菌（嗜鹽菌）、肉毒梭菌、葡萄球菌（金黃色葡萄球菌）、致瀉性大腸埃希菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、蠟樣芽孢桿菌、志賀氏菌、單增李斯特菌、變形桿菌、椰毒假單孢菌酵米面亞種、其他致病性弧菌（河弧菌、創(chuàng)傷弧菌等）。常見霉菌性食物中毒霉變谷物（黃曲霉：黃曲霉毒雪腐鐮刀菌：脫氧雪腐鐮刀菌稀醇）、霉變甘蔗（節(jié)菱孢屬：3-硝基丙酸）.2一、沙門氏菌屬食物中毒致病原潛伏期臨床特點(diǎn)診斷參考實(shí)驗(yàn)室檢查常見中毒食品沙門菌屬6-72h（一般12-36h）惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉，黃綠色水樣便，便中有時(shí)帶膿血和粘液，高熱，大于38℃，重者有寒戰(zhàn)、驚厥、抽搐、昏迷食品、嘔吐物或糞便中檢出血清學(xué)型別相同的沙門菌預(yù)增菌：緩沖蛋白胨水（BPW）增菌：四硫磺酸鈉煌綠(TTB)、亞硒酸鹽胱氨酸(SC)分離特征：亞硫酸鉍（BS）瓊脂上菌落為黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色,菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色;有些菌株形成灰綠色的菌落,周圍培養(yǎng)基不變。HE瓊脂上藍(lán)綠色或藍(lán)色,多數(shù)菌落中心黑色或幾乎全黑色;有些菌株為黃色,中心黑色或幾乎全黑色。木糖賴氨酸脫氧膽鹽（XLD）瓊脂上菌落呈粉紅色,帶或不帶黑色中心,有些菌株可呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色中心,或呈現(xiàn)全部黑色的菌落;有些菌株為黃色菌落,帶或不帶黑色中心。三糖鐵瓊脂：斜面產(chǎn)堿（K）底層產(chǎn)酸（A）產(chǎn)氣+（-）硫化氫+（-）血清學(xué)鑒定：多價(jià)菌體抗原(O)鑒定，多價(jià)鞭毛抗原(H)鑒定分型：被A-F多價(jià)O血清凝集者,依次用O4;O3;O10;O7;O8;O9;O2和O11因子血清做凝集試驗(yàn)。屬于A-F各O群的常見菌型,依次用H因子血清檢查第1相和第2相的H抗原。用Vi因子血清檢查，已知具有Vi抗原的菌型有:傷寒沙門氏菌,丙型副傷寒沙門氏菌,都柏林沙門氏菌。肉、禽、蛋、魚、奶類及其制品等.3沙門氏菌檢驗(yàn)程序.4二、副溶血性弧菌食物中毒致病原潛伏期臨床特點(diǎn)診斷參考實(shí)驗(yàn)室檢查常見中毒食品副溶血性弧菌（嗜鹽菌）8-12h惡心、嘔吐次數(shù)不多、腹痛，多在臍部，呈陣發(fā)性脹痛或絞痛，腹瀉，無里急后重，水樣或洗肉水樣便，少數(shù)便中有粘液，可能發(fā)熱38℃-40℃，重者脫水、虛脫、血壓下降。病程2-3d食品、容器、嘔吐物、糞便中檢出生物學(xué)特征或血清型一致的副溶血性弧菌增菌：1:10樣品勻液（3%NaCl堿性蛋白胨水）于36℃±1℃培養(yǎng)8h～18h。分離：典型的副溶血性弧菌在硫代硫酸鹽-檸檬酸鹽-膽鹽-蔗糖（TCBS）瓊脂上呈圓形、半透明、表面光滑的綠色菌落，用接種環(huán)輕觸，有類似口香糖的質(zhì)感，直徑2mm～3mm。純培養(yǎng)：挑取3個(gè)或以上可疑菌落，劃線接種3%NaCl胰蛋白胨大豆瓊脂平板。初步鑒定：氧化酶試驗(yàn)陽性，涂片鏡檢革蘭氏陰性，呈棒狀、弧狀、卵圓狀等多形態(tài)，無芽胞，有鞭毛。3%NaCl三糖鐵瓊脂中的反應(yīng)為底層變黃不變黑，無氣泡，斜面顏色不變或紅色加深，有動(dòng)力。嗜鹽性試驗(yàn)無NaCl和10%NaCl的胰胨水中不生長或微弱生長，在6%NaCl和8%NaCl的胰胨水中生長旺盛。確定鑒定：3%NaCl甘露醇試驗(yàn)（+）、3%NaCl賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)（+）、3%NaClMR-VP培養(yǎng)基（-）；3%NaCl三糖鐵瓊脂隔夜培養(yǎng)物進(jìn)行β-半乳糖苷酶(ONPG)試驗(yàn)（-）。選做項(xiàng)目:血清學(xué)分型、神奈川試驗(yàn)（在我妻氏瓊脂上測試是否存在特定溶血素。神奈川試驗(yàn)陽性結(jié)果與副溶血性弧菌分離株的致病性顯著相關(guān)。陽性結(jié)果為菌落周圍呈半透明環(huán)的β溶血。）海產(chǎn)品、鹵菜、咸菜等.5副溶血性弧菌檢驗(yàn)程序.6三、肉毒梭菌食物中毒致病原潛伏期臨床特點(diǎn)診斷參考實(shí)驗(yàn)室檢查常見中毒食品肉毒梭菌1h-7d頭暈、無力、視力模糊、復(fù)視、眼瞼下垂、咀嚼無力、張口或伸舌困難、咽喉阻塞感、飲水發(fā)嗆、吞咽困難、呼吸困難、頭頸無力、垂頭等。病死率較高食品、血液、糞便中檢出肉毒毒素，食品檢出肉毒梭菌樣品制備：液態(tài)5mL，固態(tài)與半固態(tài)25g+25mL(或50mL)明膠磷酸鹽緩沖液。離心、胰酶處理制備毒素液。1.肉毒毒素檢測分別取離心上清液和胰酶處理上清液腹腔注射小鼠3只,每只0.5mL,觀察和記錄小鼠48h內(nèi)的中毒表現(xiàn)。典型肉毒毒素中毒癥狀多在24h內(nèi)出現(xiàn),通常在6h內(nèi)發(fā)病和死亡,其主要表現(xiàn)為豎毛、四肢癱軟,呼吸困難,呈現(xiàn)風(fēng)箱式呼吸、腰腹部凹陷、宛如峰腰,多因呼吸衰竭而死亡。若在24h后發(fā)病或死亡,應(yīng)仔細(xì)觀察小鼠癥狀,必要時(shí)濃縮上清液重復(fù)試驗(yàn),以排除肉毒毒素中毒。若小鼠出現(xiàn)猝死(30min內(nèi))導(dǎo)致癥狀不明顯時(shí),應(yīng)將毒素上清液進(jìn)行適當(dāng)稀釋,重復(fù)試驗(yàn)。確證試驗(yàn)：上清液或(和)胰酶處理上清液的毒素試驗(yàn)陽性者,取相應(yīng)試驗(yàn)液3份,每份0.5mL,其中第一份加等量多型混合肉毒毒素診斷血清,混勻,37℃孵育30min;第二份加等量明膠磷酸鹽緩沖液,混勻后煮沸10min;第三份加等量明膠磷酸鹽緩沖液,混勻。將三份混合液分別腹腔注射小鼠各兩只,每只0.5mL,發(fā)酵豆、谷類制品（面醬、臭豆腐）、肉制品、低酸性罐頭等.7三、肉毒梭菌食物中毒致病原潛伏期臨床特點(diǎn)診斷參考實(shí)驗(yàn)室檢查常見中毒食品肉毒梭菌1h-7d頭暈、無力、視力模糊、復(fù)視、眼瞼下垂、咀嚼無力、張口或伸舌困難、咽喉阻塞感、飲水發(fā)嗆、吞咽困難、呼吸困難、頭頸無力、垂頭等。病死率較高。食品、血液、糞便中檢出肉毒毒素，食品檢出肉毒梭菌觀察96h內(nèi)小鼠的中毒和死亡情況。結(jié)果判定:若注射第一份和第二份混合液的小鼠未死亡,而第三份混合液小鼠發(fā)病死亡,并出現(xiàn)肉毒毒素中毒的特有癥狀,則判定檢測樣品中檢出肉毒毒素。2.肉毒梭菌檢驗(yàn)

增菌培養(yǎng)與檢出試驗(yàn)：庖肉培養(yǎng)基4支和TPGY肉湯管2支,隔水煮沸10min~15min,排除溶解氧,迅速冷卻,切勿搖動(dòng),在TPGY肉湯管中緩慢加入胰酶液至液體石蠟液面下肉湯中,每支1mL,制備成TPGYT。按要求進(jìn)行培養(yǎng)。肉毒梭菌培養(yǎng)物為產(chǎn)氣、肉湯渾濁(庖肉培養(yǎng)基中A型和B型肉毒梭菌肉湯變黑)、消化或不消化肉粒、有異臭味。取增菌培養(yǎng)物陽性管的上清液進(jìn)行毒素檢出和確證試驗(yàn)，陽性結(jié)果可證明樣品中有肉毒梭菌存在。分離與純化培養(yǎng)：取增菌培養(yǎng)物和經(jīng)乙醇處理的增菌液分別劃線接種至卵黃瓊脂平板,35℃±1℃厭氧培養(yǎng)48h。肉毒梭菌菌落隆起或扁平、光滑或粗糙,易成蔓延生長,邊緣不規(guī)則,在菌落周圍形成乳色沉淀暈圈(E型較寬,A型和B型較窄)，發(fā)酵豆、谷類制品（面醬、臭豆腐）、肉制品、低酸性罐頭等.8三、肉毒梭菌食物中毒致病原潛伏期臨床特點(diǎn)診斷參考實(shí)驗(yàn)室檢查常見中毒食品肉毒梭菌1h-7d頭暈、無力、視力模糊、復(fù)視、眼瞼下垂、咀嚼無力、張口或伸舌困難、咽喉阻塞感、飲水發(fā)嗆、吞咽困難、呼吸困難、頭頸無力、垂頭等。病死率較高。食品、血液、糞便中檢出肉毒毒素，食品檢出肉毒梭菌在斜視光下觀察,菌落表面呈現(xiàn)珍珠樣虹彩,這種光澤區(qū)可隨蔓延生長擴(kuò)散到不規(guī)則邊緣區(qū)外的暈圈。菌株純化培養(yǎng),在分離培養(yǎng)平板上選擇5個(gè)肉毒梭菌可疑菌落,分別接種卵黃瓊脂平板,35℃±1℃,厭氧培養(yǎng)48h,按5.3.2.3觀察菌落形態(tài)及其純度。鑒定試驗(yàn)：染色鏡檢為革蘭氏陽性粗大桿菌、芽胞卵圓形、大于菌體、位于次端,菌體呈網(wǎng)球拍狀。毒素基因檢測（PCR檢測）陰性對(duì)照和空白對(duì)照均未出現(xiàn)條帶,陽性對(duì)照出現(xiàn)預(yù)期大小的擴(kuò)增條帶，判定本次PCR檢測成立;待測樣品出現(xiàn)預(yù)期大小的擴(kuò)增條帶,判定為PCR結(jié)果陽性，,待測樣品未出現(xiàn)預(yù)期大小的擴(kuò)增條帶,判定PCR結(jié)果為陰性。菌株產(chǎn)毒試驗(yàn)將PCR陽性菌株或可疑肉毒梭菌菌株接種庖肉培養(yǎng)基或TPGYT肉湯(用于E型肉毒梭菌),厭氧培養(yǎng)5d，進(jìn)行毒素檢測和(或)定型試驗(yàn),毒素確證試驗(yàn)陽性者,判定為肉毒梭菌,根據(jù)定型試驗(yàn)結(jié)果判定肉毒梭菌型別。3.結(jié)果報(bào)告：（1）報(bào)告25g(mL)樣品中檢出或未檢出肉毒毒素，（2）報(bào)告25g(mL)樣品中檢出某型肉毒毒素。（3）報(bào)告樣品中檢出或未檢出肉毒梭菌或檢出某型肉毒梭菌。發(fā)酵豆、谷類制品（面醬、臭豆腐）、肉制品、低酸性罐頭等.9肉毒梭菌及肉毒毒素檢驗(yàn)程序.10四、葡萄球菌食物中毒致病原潛伏期臨床特點(diǎn)診斷參考實(shí)驗(yàn)室檢查常見中毒食品葡萄球菌一般2-4h，不超過6h突然惡心、反復(fù)劇烈嘔吐、上腹痙攣性疼痛、腹瀉呈水樣便，一般不發(fā)熱，常因劇烈嘔吐導(dǎo)致失水和休克。病程1-3d食品中檢出葡萄球菌腸毒素，食品、嘔吐物和糞便培養(yǎng)檢出金黃色葡萄球菌增菌：金黃色葡萄球菌在7.5%氯化鈉肉湯中呈混濁生長。分離：增菌后的培養(yǎng)物,分別劃線接種于血平板36±1℃18h~4h，Baird-Parker平板36±1℃24h~48h。初步鑒定：Baird-Parker平板上呈圓形,表面光滑、凸起、濕潤、菌落直徑為2mm~3mm,顏色呈灰黑色至黑色,有光澤,常有淺色(非白色)的邊緣,周圍繞以不透明圈(沉淀),其外常有一清晰帶。接種針觸及菌落時(shí)具有黃油樣黏稠感。有時(shí)可見到不分解脂肪的菌株,除沒有不透明圈和清晰帶外,其他外觀基本相同。在血平板上,形成菌落較大,圓形、光滑凸起、濕潤、金黃色(有時(shí)為白色),菌落周圍可見完全透明溶血圈。確證鑒定:革蘭氏染色陽性球菌,排列呈葡萄球狀,無芽胞,無莢膜,直徑約為0.5μm~1μm。血漿凝固酶試驗(yàn):5個(gè)可疑菌落(小于5個(gè)全選),分別接種到5mLBHI和營養(yǎng)瓊脂小斜面,36℃±1℃培養(yǎng)18h~24h。新鮮配制兔血漿0.5mL,放入小試管中,再加入BHI培養(yǎng)物0.2mL~0.3mL,振蕩搖勻,置36℃±1℃溫箱或水浴箱內(nèi),每半小時(shí)觀察一次,觀察6h,如呈現(xiàn)凝固)或凝固體積大于原體積的一半,被判定為陽性結(jié)果。同時(shí)以血漿凝固酶試驗(yàn)陽性和陰性葡萄球菌菌株的肉湯培養(yǎng)物作為對(duì)照。葡萄球菌腸毒素的檢驗(yàn)(選做)奶、蛋及其制品、糕點(diǎn)、熟肉等.11金黃色葡萄球菌定性檢驗(yàn)程序.12五、致瀉性大腸埃希菌性食物中毒致病原潛伏期臨床特點(diǎn)診斷參考實(shí)驗(yàn)室檢查常見中毒食品致瀉性大腸埃希菌6-72h產(chǎn)腸毒素型ETEC：水樣腹瀉、腹痛、惡心、低熱；腸道侵襲型EIEC：發(fā)熱、劇烈腹痛、水樣腹瀉、糞便中有少量粘液和血，與痢疾相似；腸道致病型EPEC：發(fā)熱、嘔吐、腹瀉，糞便中有大量粘液但無血，有類似感冒癥狀；腸道出血型EHEC：潛伏期長，3-10d，突發(fā)性腹部痙攣，類似闌尾炎的疼痛，水樣便繼而轉(zhuǎn)為血性腹瀉，可引起多器官損害，病死率高；腸聚集性粘附型EAEC：成年人中度腹瀉，病程1-2d、嬰幼兒為2周以上的持續(xù)性腹瀉食品、嘔吐物和糞便檢出血清型相同的致瀉性大腸埃希菌增菌：1：10樣品勻液（營養(yǎng)肉湯）于36±1℃6h。取10μL,接種于30mL腸道菌增菌肉湯管內(nèi),42±1℃18h。分離：36±1℃18h-24h在MAC瓊脂平板上,分解乳糖的典型菌落為磚紅色至桃紅色,不分解乳糖的菌落為無色或淡粉色;在EMB瓊脂平板上,分解乳糖的典型菌落為中心紫黑色帶或不帶金屬光澤,不分解乳糖的菌落為無色或淡粉色。生化試驗(yàn)：TSI斜面產(chǎn)酸或不產(chǎn)酸,底層產(chǎn)酸,靛基質(zhì)陽性,H2S陰性和尿素酶陰性的培養(yǎng)物為大腸埃希氏菌。TSI斜面底層不產(chǎn)酸,或H2S、KCN、尿素有任一項(xiàng)為陽性的培養(yǎng)物,均非大腸埃希氏菌。大腸埃希氏菌為革蘭氏陰性桿菌,氧化酶陰性。PCR確認(rèn)試驗(yàn)：取生化反應(yīng)符合大腸埃希氏菌特征的菌落進(jìn)行PCR確認(rèn)試驗(yàn)。熟肉制品、蛋及其制品、奶、奶酪、蔬菜、水果、飲料等.13致瀉大腸埃希氏菌檢驗(yàn)程序.14六、產(chǎn)氣莢膜梭菌食物中毒致病原潛伏期臨床特點(diǎn)診斷參考實(shí)驗(yàn)室檢查常見中毒食品產(chǎn)氣莢膜梭菌8-24h腹痛和腹瀉食品、糞便檢出產(chǎn)氣莢膜梭菌，糞便檢出產(chǎn)氣莢膜梭菌毒素樣品應(yīng)盡快檢驗(yàn)，若不能及時(shí)檢驗(yàn)，可在2～5℃保存；如8h內(nèi)不能進(jìn)行檢驗(yàn)，應(yīng)以無菌操作稱取25g（mL）樣品加入等量緩沖甘油-氯化鈉溶液（液體樣品應(yīng)加雙料），并盡快至于-60℃低溫冰箱中冷凍保存或加干冰保存。培養(yǎng)：檢品（0.1%蛋白胨水稀釋，同稀釋度）1mL置于個(gè)平皿，傾注冷卻至50℃的TSC瓊脂，充分混勻，靜置凝固后，正置于厭氧培養(yǎng)裝置內(nèi)，36±1℃培養(yǎng)20h～24h。典型的產(chǎn)氣莢膜梭菌在TSC瓊脂平板上為黑色菌落。確證試驗(yàn)：從單個(gè)平板上任選5個(gè)（小于5個(gè)全選）黑色菌落，分別接種到FTG培養(yǎng)基，36±1℃厭氧培養(yǎng)18h～24h。培養(yǎng)液涂片革蘭氏染色鏡檢并觀察其純度。生長旺盛的FTG培養(yǎng)液1mL接種于含鐵牛乳培養(yǎng)基，在46±0.5℃水浴中培養(yǎng)2h后，每小時(shí)觀察一次有無“暴烈發(fā)酵”現(xiàn)象，該現(xiàn)象的特點(diǎn)是乳凝結(jié)物破碎后快速形成海綿樣物質(zhì)，通常會(huì)上升到培養(yǎng)基表面。5h內(nèi)不發(fā)酵者為陰性。產(chǎn)氣莢膜梭菌發(fā)酵乳糖，凝固酪蛋白并大量產(chǎn)氣，呈“暴烈發(fā)酵”現(xiàn)象，但培養(yǎng)基不變黑。用接種環(huán)（針）取FTG培養(yǎng)液穿刺接種緩沖動(dòng)力-硝酸鹽培養(yǎng)基，于36℃±1℃培養(yǎng)24h。產(chǎn)氣莢膜梭菌無動(dòng)力，能將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽。用接種環(huán)（針）取FTG培養(yǎng)液穿刺接種乳糖-明膠培養(yǎng)基，于36℃±1℃培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果。產(chǎn)氣莢膜梭菌能發(fā)酵乳糖，使明膠液化。肉類、水產(chǎn)品、熟食、奶等.15產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗(yàn)程序.16七、蠟樣芽孢桿菌食物中毒致病原潛伏期臨床特點(diǎn)診斷參考實(shí)驗(yàn)室檢查常見中毒食品蠟樣芽孢桿菌8-16h嘔吐型：惡心、嘔吐伴頭暈、四肢無力等；腹瀉型：腹痛和腹瀉為主。病程8-36h食品檢出蠟樣芽孢桿菌，嘔吐物或糞便中檢出相同型菌株樣品制備：制成1：10系列的磷酸鹽緩沖液（PBS）或生理鹽水稀釋液。樣品接種：根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，選擇2～3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），以0.3mL、0.3mL、0.4mL接種量分別移入三塊MYP瓊脂平板，然后用無菌L棒涂布整個(gè)平板，注意不要觸及平板邊緣。分離：MYP瓊脂平板上，典型菌落為微粉紅色(表示不發(fā)酵甘露醇)，周圍有白色至淡粉紅色沉淀環(huán)（表示產(chǎn)卵磷脂酶）。純培養(yǎng)：每個(gè)平板挑取至少5個(gè)典型菌落（小于5個(gè)全選），分別劃線接種于營養(yǎng)瓊脂平板做純培養(yǎng)，30±1℃培養(yǎng)24h±2h，典型菌落為灰白色，偶有黃綠色，不透明，表面粗糙似毛玻璃狀或融蠟狀，邊緣常呈擴(kuò)展?fàn)?，直徑?mm～10mm。確定鑒定：蠟樣芽胞桿菌為革蘭氏陽性芽胞桿菌，大小為（1μm～1.3μm）×（3μm～5μm），芽胞呈橢圓形位于菌體中央或偏端，不膨大于菌體，菌體兩端較平整，短鏈或長鏈狀排列。生化鑒定：過氧化氫酶（+）、動(dòng)力（+/-）、硝酸鹽還原（+）、酪蛋白分解（+）、溶菌酶耐性（+）、卵黃反應(yīng)（+）、V-P（+）、甘露醇產(chǎn)酸（-）、葡萄糖利用(厭氧)（+）、根狀生長（-）、TSSB瓊脂溶血（羊紅細(xì)胞）（+）、蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶（-）。剩米飯、剩菜、涼拌菜、奶、肉、豆制品等.17蠟樣芽胞桿菌平板計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)程序.18八、單增李斯特菌食物中毒致病原潛伏期臨床特點(diǎn)診斷參考實(shí)驗(yàn)室檢查常見中毒食品單增李斯特菌8-24h初期為一般胃腸炎癥狀，重者可表現(xiàn)為敗血癥、腦膜炎等，有時(shí)引起心內(nèi)膜炎，孕婦可發(fā)生流產(chǎn)或死胎食品和糞便檢出單核細(xì)胞增多性李斯特菌增菌：一次增菌李氏增菌肉湯LB1；二次增菌李氏增菌肉湯LB2。分離：取LB2二次增菌液劃線接種于李斯特氏菌顯色平板和PALCAM瓊脂平板,36±1℃24～48h，典型菌落在PALCAM瓊脂平板上為小的圓形灰綠色菌落,周圍有棕黑色水解圈,有些菌落有黑色凹陷;在李斯特氏菌顯色平板上菌落顯藍(lán)色，周圍有一不透明環(huán)。初篩：挑取3～5個(gè)典型或可疑菌落,分別接種木糖、鼠李糖發(fā)酵管，同時(shí)在TSA-YE平板上劃線，36±1℃18～24h，然后選擇木糖陰性、鼠李糖陽性的純培養(yǎng)物繼續(xù)進(jìn)行鑒定。鑒定(或選擇生化鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)等)：鏡檢革蘭氏陽性短桿菌，生理鹽水制成菌懸液,在油鏡或相差顯微鏡下觀察,該菌出現(xiàn)輕微旋轉(zhuǎn)或翻滾樣的運(yùn)動(dòng)。半固體或SIM動(dòng)力培養(yǎng)基上方呈傘狀生長（25～30℃8h）。過氧化氫酶陽性反應(yīng)的菌落繼續(xù)做生化鑒定，溶血反應(yīng)（+）、葡萄糖（+）、麥芽糖（+）、MR-VP（+/+）、甘露醇（－）、鼠李糖（+）、木糖（－）、七葉苷（+）禽蛋類、奶、肉及期制品、水果、蔬菜等.19單核細(xì)胞增生李斯特氏菌定性檢驗(yàn)程序.20九、變形桿菌食物中毒致病原潛伏期臨床特點(diǎn)診斷參考實(shí)驗(yàn)室檢查常見中毒食品變形桿菌5-18h上腹部刀絞樣痛和急性腹瀉為主，伴有惡心、嘔吐、頭痛、發(fā)熱（38℃-39℃）。病程1-3d食品、糞便檢出血清型相同的變形桿菌；病人急性期和恢復(fù)期（12-15d后）的血清凝集效價(jià)有4倍增高增菌：樣品接種于GN肉湯，36士1℃培養(yǎng)24h。分離培養(yǎng)：接種于EMB平板或SS平板，置37℃培養(yǎng)18～24h，觀察菌落形態(tài)特征。典型變形桿菌在EMB培養(yǎng)基上為無色透明，部分蔓延生長；在SS培養(yǎng)平板上形成單個(gè)菌落，有的菌落邊緣呈擴(kuò)散狀，有粘性，打開平皿時(shí)有臭味。將可疑菌落轉(zhuǎn)種三糖鐵斜面，37℃培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。初步鑒定：將三糖鐵培養(yǎng)基上乳糖反應(yīng)陰性、硫化氫陽性或陰性的菌株接種尿素和苯丙氨酸鑒定培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24h，變形桿菌二者均為陽性。變形桿菌易與沙門氏菌混淆，但變形桿菌能夠水解尿素。生化試驗(yàn)：根據(jù)生化結(jié)果，判定種屬或種群。也可用API20E和全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)進(jìn)行生化鑒定。動(dòng)物性食品和豆制品、涼拌菜等.21變形桿菌檢驗(yàn)程序計(jì)數(shù)TSI，37℃,24h檢樣

選擇性SS、EMB培養(yǎng)基37℃,18～24h報(bào)告血清學(xué)或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)生化實(shí)驗(yàn)WS/T9—1996.22十、椰毒假單孢菌酵米面亞種食物中毒致病原潛伏期臨床特點(diǎn)診斷參考實(shí)驗(yàn)室檢查常見中毒食品椰毒假單孢菌酵米面亞種2-24h上腹部不適，惡心、嘔吐（嘔吐物為胃內(nèi)容物，重者呈咖啡色），輕微腹瀉、頭暈、全身無力等；重者出現(xiàn)黃疸、肝大、皮下出血、嘔血、血尿、少尿、意識(shí)不清、煩躁不安、驚厥、抽搐、休克，一般無發(fā)熱。病死率極高，達(dá)40%-100%食品檢出椰毒假單孢菌酵米面亞種或檢出其代謝毒物米酵菌酸增菌：GVC增菌液36±1℃48h。分離：PDA平板36±1℃24-48h，菌落1～2mm，灰白色或乳白色，光滑、濕潤、邊緣整齊。培養(yǎng)48h后，中心有凸起，呈草帽狀，菌落周圍有黃綠色素?cái)U(kuò)散到基質(zhì)中?？梢删渥龈锾m染色和氧化酶試驗(yàn)，G－、氧化酶（－）的菌落再點(diǎn)種卵黃瓊脂平板和SS瓊脂平板，36±1℃分別培養(yǎng)48和24h。卵黃瓊脂平板上菌落表面光滑、濕潤，48h后，菌落周圍形成乳白色混濁環(huán)，斜射日光下可見環(huán)的表面呈虹彩現(xiàn)象；SS瓊脂平板上不生長或微弱生長。純化：從卵黃瓊脂平板上挑取卵黃脂酶陽性，并帶有虹彩環(huán)的單個(gè)菌落，接種PDA斜面，36±1℃培養(yǎng)24h。生化試驗(yàn)：Hugh－Leifson培養(yǎng)基、蛋白胨水、緩沖蛋白胨水、西檬氏檸檬酸鹽、糖發(fā)酵管及苯丙氨酸。產(chǎn)毒培養(yǎng)：確證菌株接種PDA斜面，36±1℃24h，然后制成粗毒素。動(dòng)物試驗(yàn)：灌胃體重為18～20g的小白鼠3只，觀察7天。灌胃后20min～24h內(nèi)發(fā)病、死亡。主要癥狀為豎毛，萎靡不振，繼而躁動(dòng)，行步蹣跚、肢體麻痹、癱軟、抽搐，呈角弓反張狀，呼吸急促、死亡。玉米面制品、銀耳、淀粉類制品等.23椰毒假單孢菌酵米面亞種檢驗(yàn)程序.24十一、志賀氏菌性食物中毒致病原潛伏期臨床特點(diǎn)診斷參考實(shí)驗(yàn)室檢查常見中毒食品志賀氏菌10-24h劇烈腹痛、嘔吐和頻繁地腹瀉、水樣便混有血液或粘液，并有里急后重，寒戰(zhàn)、高熱，體溫達(dá)40℃，重者會(huì)出現(xiàn)痙攣食品、嘔吐物分離出志賀氏菌，恢復(fù)期血清凝集效價(jià)比初期明顯升高增菌：志賀氏菌增菌肉湯（新生霉素）41.5±１℃，厭氧培養(yǎng)16～20h。分離：36±1℃20～24h，宋內(nèi)氏志賀氏菌的單個(gè)菌落直徑大于其他志賀氏菌。MAC瓊脂上無色至淺粉紅色，半透明、光滑、濕潤、圓形、邊緣整齊或不齊；XLD瓊脂上粉紅色至無色，半透明、光滑、濕潤、圓形、邊緣整齊或不齊；志賀氏菌顯色培養(yǎng)基上顯白色或無色，有些宋內(nèi)氏志賀氏菌有藍(lán)色中心。初步生化：種TSI、半固體和營養(yǎng)瓊脂斜面各1管。三糖鐵瓊脂中斜面產(chǎn)堿、底層產(chǎn)酸（發(fā)酵葡萄糖，不發(fā)酵乳糖，蔗糖）、不產(chǎn)氣（福氏志賀氏菌6型可產(chǎn)生少量氣體）、不產(chǎn)硫化氫、半固體管中無動(dòng)力。生化試驗(yàn)：β-半乳糖苷酶、尿素、賴氨酸脫羧酶、鳥氨酸脫羧酶以及水楊苷和七葉苷的分解試驗(yàn)，除宋內(nèi)氏志賀氏菌、鮑氏志賀氏菌13型的鳥氨酸陽性;宋內(nèi)氏菌和痢疾志賀氏菌1型，鮑氏志賀氏菌13型的β-半乳糖苷酶為陽性以外，其余生化試驗(yàn)志賀氏菌屬的培養(yǎng)物均為陰性結(jié)果。血清學(xué)鑒定：志賀氏菌屬主要有菌體（O）抗原。菌體O抗原又可分為型和群的特異性抗原。含水量高的食品、熟食品，冷盤和涼拌菜等.25志賀氏菌檢驗(yàn)程序.26十二、其他致病性弧菌食物中毒致病原潛伏期臨床特點(diǎn)診斷參考實(shí)驗(yàn)室檢查常見中毒食品其他致病性弧菌（河弧菌、創(chuàng)傷弧菌等）24-48h惡心、嘔吐、水樣便、腹瀉，創(chuàng)傷弧菌還有發(fā)熱、畏寒、肌肉痛、血壓下降、血小板減少等食品、容器、嘔吐物和糞便檢出生物學(xué)特征或血清型相同的致病性弧菌；分離到的弧菌對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物具有毒性或與病人血清有抗原抗體反應(yīng)方法同嗜鹽性弧菌河弧菌生化特性：氧化酶（+）、賴氨酸（－）、精氨酸（+）、鳥氨酸（－）、明膠（+）、尿酶（－）、V－P（－）、42℃生長（V）、蔗糖（+）、D－纖維二糖（+）、乳糖（－）、阿拉伯糖（+）、D－甘露糖（+）、D－甘露醇（+）、ONPG（+）嗜鹽性試驗(yàn)（NaCl%）0（－）、3（+）、6（+）、8（V）、10（－）。創(chuàng)傷弧菌生化特性：氧化酶（+）、賴氨酸（+）、精氨酸（－）、鳥氨酸（+）、明膠（+）、尿酶（－）、V－P（－）、42℃生長（+）、蔗糖（－）、D－纖維二糖（+）、乳糖（+）、阿拉伯糖（－）、D－甘露糖（+）、D－甘露醇（V）、ONPG（+），嗜鹽性試驗(yàn)（NaCl%）0（－）、3（+）、6（+）、8（－