血液學-細胞化學染色

第二篇

造血細胞及其檢驗

第二章

造血基礎理論第三章

造血細胞檢驗方法第四章

造血細胞檢驗的臨床應用目的要求第三章

造血細胞檢驗方法

第一節(jié)

造血細胞形態(tài)學第二節(jié)

細胞化學染色第三節(jié)

骨髓活體組織檢驗（自學）第四節(jié)

血細胞超微結構檢驗（自學）第五節(jié)

造血祖細胞培養(yǎng)檢驗（自學）第六節(jié)

血細胞遺傳學檢驗（自學）第七節(jié)

分子血液學檢驗（自學）細胞化學染色的種類過氧化物酶染色蘇丹黑染色酯酶染色過碘酸-雪夫反應中性粒細胞堿性磷酸酶染色酸性磷酸酶染色鐵染色急性白血病分型急性白血病分型

急性淋巴細胞白血?。ˋLL）

急性髓細胞白血?。ˋML,NALL）M0急性髓細胞白血病微小分化型M1急性粒細胞白血病未分化型M2急性粒細胞白血病部分分化型M3急性早幼粒細胞白血病M4急性粒單核細胞白血病M5急性單核細胞白血病M6急性紅白細胞白血病M7急性巨核細胞白血病一

、過氧化物酶染色

peroxidase(POX)血細胞所含的POX主要為髓過氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）1985年血液學國際標準化委員會（ICSH）推薦三種方法：二氨基聯(lián)苯胺法（DAB）、過氧化物酶氨基－甲基卡巴唑染色法及二鹽酸聯(lián)苯胺法。以前常用復方聯(lián)苯胺法（Washburn法）

下一頁二氨基聯(lián)苯胺法（DAB）的原理

血細胞內(nèi)的POX，在H2O2存在的情況下，氧化二氨基聯(lián)苯胺，形成金黃色不溶性沉淀，定位于POX酶所在的活性部位二氨基聯(lián)苯胺法（DAB）復方聯(lián)苯胺法的原理

（Washburn法）

四甲基聯(lián)苯胺

聯(lián)苯胺藍→棕黑色↓POXH2O2H2O復方聯(lián)苯胺法POX染色的結果判斷在細胞漿中出現(xiàn)陽性的顆粒，根據(jù)陽性物質(zhì)有無、多少分為（-）至（++++）結果應報陽性率（觀察100個白血病細胞，陽性細胞所占的比例）及陽性分布情況

下一頁POX染色的結果分級（-）

無陽性顆粒。（±）

顆粒細小、分布稀疏（+）

顆粒較粗、常呈局灶性分布、約占胞漿1/4（++）

顆粒粗大、分布較密、約占胞漿1/4～1/2（+++）

顆粒粗大、團塊狀分布、約占胞漿1/2～3/4（++++）布滿整個細胞、可覆蓋核上POX染色結果分級：各種細胞POX染色的結果粒細胞系統(tǒng)：早期原粒為陰性，隨著細胞的成熟陽性率和陽性程度逐漸增強單核細胞：早期單核細胞呈陰性，其余各期均呈陽性（弱陽性至＋）白血病時Auer小體可呈陽性吞噬細胞有時陽性，其余細胞系均呈陰性POX－中性、嗜酸性中幼粒POX－單核細胞POX－淋巴、粒、巨核POX了－粒、紅、漿細胞POX染色的臨床意義是輔助判斷急性白血病細胞類型的首選、最重要的細胞化學染色

ALL：陰性（陽性率＜3%）M3、M2b：強陽性M2a、M1、M6、M4、M5:多數(shù)陽性POX染色陽性為急性髓細胞白血??！POX－ALLPOX-M1POX-M2POX-M3POX-M3-2POX-M5二、蘇丹黑染色法

SudanblackB（SB）原理：細胞漿內(nèi)的中性脂肪、類固醇、磷脂+蘇丹黑→脂類物質(zhì)被染成黑色結果分級：基本同POX染色臨床意義：基本同POX染色。但蘇丹黑比POX更為敏感，但特異性差一些SB染色－M3SB染色－M5SB染色－急單三、酯酶染色的種類不同血細胞中所含酯酶的成分不同根據(jù)酯酶特異性高低分為：特異性酯酶（specificesterase,SE）非特異性酯酶（nonspecificesterase,NSE）特異性酯酶就是指氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色非特異性酯酶的種類有多種，根據(jù)pH值不同分為酸性：酸性α-醋酸萘酚酯酶中性：α-醋酸萘酚酯酶、醋酸AS-D萘酚酯酶等堿性：α-丁酸萘酚酯酶1．氯乙酸AS-DCE）D萘酚酯酶染色

（naphytholAS-Dchloroacetateesterasestain，NASNAS-DCE幾乎僅出現(xiàn)在粒細胞、特異性高。因此又稱為“粒細胞酯酶”、“特異性酯酶”氯乙酸ASD萘酚NAS-DCEASD萘酚重氮鹽有色沉淀

NAS-DCE的正常血細胞的染色反應

粒系：原粒細胞為陰性反應或陽性反應,自早幼粒細胞至成熟中性粒細胞均為陽性反應，EOS陰性或弱陽性,BAS陽性單系：個別可呈弱陽性反應其他：淋巴、漿、幼紅細胞和血小板均呈陰性反應

NAS-DCE的臨床意義

主要用于輔助鑒別急性白血病細胞類型急性粒細胞白血?。撼赎栃曰蛏贁?shù)陰性急性早幼粒細胞白血?。撼蕪婈栃约毙詥魏思毎籽。撼赎幮?，少數(shù)弱陽性急粒-單核細胞白血?。毫Ｏ店栃?，單系陰性急性淋巴細胞白血病：呈陰性

NAS-DCE染色：1中性成熟粒細胞，呈強陽性；2淋巴細胞，呈陰性；4單核細胞，呈陰性；5幼紅細胞，呈陰性

NAS-DCE染色：M1型中的1原始粒細胞細胞，呈陽性；其他均呈陰性NAS-DCE染色：M3--早幼粒細胞均呈強陽性，并可見柴捆細胞中的棒狀小體也呈陽

NAS-DCE染色：M3-NAS-DCE染色：M5--呈強陽性為中性成熟粒細胞，其他原幼單核細胞均呈陰性2．醋酸AS-D萘酚酯酶染色

naphythyolAS-Dacetateesterasestains，

NAS-DAE單核細胞系統(tǒng)的陽性可被氟化鈉抑制，通常同時做氟化鈉抑制試驗

醋酸ASD萘酚NAS-DAEASD萘酚重氮鹽有色沉淀氟化鈉抑制率的計算：氟化鈉試驗抑制率=

抑制前陽性率或陽性積分-抑制后陽性率或陽性積分

抑制前陽性率或陽性積分氟化鈉抑制試驗的抑制率大于0.50為抑制

NAS-DAE染色的正常血細胞染色反應

粒系：

常陽性，此反應不被氟化鈉抑制單系：

陽性（常較強），此反應能被氟化鈉抑制淋系：

陰性或弱陽性，此反應不被氟化鈉抑制紅系：

早期可呈陽性，隨著成熟而減弱

巨系：巨核細胞和血小板為陽性反應

NAS-DAE染色的臨床意義

用以輔助鑒別急性白血病的細胞類型急性粒細胞白血?。宏栃?，不被NaF抑制急性早幼粒細胞白血病:強陽性，不被NaF抑制急性單核細胞白血?。宏栃?常較強)，被NaF抑制急性粒單核細胞白血?。宏栃?，被NaF部分抑制急性淋巴細胞白血?。喝蹶栃曰蜿栃?，不被NaF抑制NAS-DAE染色:1中性成熟粒細胞，呈陽性；2單核細胞，陽性較強；3中幼紅細胞，呈陰性NAS-DAE染色:中性中幼粒細胞，呈陽性

NAS-DAE染色:M5呈強陽性NAS-DAE染色:M5被氟化鈉抑制NAS-DAE染色:M3強陽性，加氟化鈉不抑制NAS-DAE染色:ALL呈弱陽性3．α-丁酸萘酚酯酶染色—原理

α-naphtholbutyrateesterase，α-NBE)

血細胞內(nèi)的α-丁酸萘酚酯酶在堿性條件下,將基質(zhì)液中的α-丁酸萘酚水解,釋出α-萘酚,α-萘酚與基質(zhì)液中的堅牢紫醬GBC偶聯(lián),形成不溶性紅色沉淀,定位于胞質(zhì)內(nèi)

α-NBE染色的正常血細胞的染色反應

粒系：各期粒細胞均為陰性反應單系：原單為陰性或陽性，幼單和單核為陽性，此反應可被NaF抑制，組織細胞也可陽性,但不被NaF抑制淋系：外周血的T淋巴細胞可呈致密的局限性點狀陽性反應，B淋巴細胞為陰性反應，非T非B細胞也可出現(xiàn)散在顆粒狀陽性反應其它:如巨核細胞和漿細胞為陰性或弱陽性反應

α-NBE染色的臨床意義

急粒：陰性

急單：可呈陽性反應急粒單：部分白血病細胞呈陽性反應，部分白血病細胞呈陰性反應急淋：陰性

急性單核細胞白血病α-NBE染色四、過碘酸-雪夫反應(糖原染色)－－原理

（periodicacid-Schiffreaction，PAS）

過碘酸(periodicacid)

乙二醇基

雙醛基(-CHOH-CHOH)(-CHO-CHO)

有色品紅

無色品紅（shiff）

PAS的正常血細胞的染色反應

粒系：分化好的原粒至中性分葉核粒細胞均呈陽性反應，并隨著細胞的成熟而逐漸增強，陽性呈彌散性、細顆粒狀；EOS中的嗜酸性顆粒陰性，BAS中的嗜堿性顆粒呈陽性單系

分化差的原始單核細胞呈陰性，其他陽性，絕大多數(shù)陽性呈細顆粒狀淋系：大多數(shù)呈陰性，少數(shù)呈陽性（常小于20％），陽性呈粗顆粒狀或塊狀巨系

均呈陽性，呈顆粒狀或塊狀紅系：均呈陰性PAS的臨床意義紅細胞系統(tǒng)疾?。杭t血病、紅白血病、骨髓增生異常綜合征中有核紅細胞可陽性

輔助鑒別急性白血病類型：ALL呈粗顆粒狀或塊狀；急粒呈彌散紅色或細顆粒狀；急單：呈細顆粒狀其他細胞：戈謝細胞呈強陽性，尼曼-皮克細胞呈陰性或弱陽性；Reed-Sternberg細胞陰性或弱陽性；骨髓轉(zhuǎn)移性腺癌呈強陽性PAS染色2：小淋巴細胞呈陽性，呈顆粒狀（較粗）PAS染色1：1中性中幼粒細胞，呈彌散及顆粒狀陽性（較弱）；2中性成熟粒細胞，呈強陽性；3幼紅細胞，呈陰性；4淋巴細胞，呈陰性巨核細胞呈陽性PAS染色：1和2為有核紅細胞，呈陽性；其他有核紅細胞呈陰性PAS染色：原始及幼稚淋巴細胞均陽性，呈粗顆粒狀、、塊狀陽性PAS染色：淋巴瘤細胞均陽性，呈粗顆粒狀、塊狀陽性PAS染色：急粒PAS染色：M3PAS染色：M3尼曼-皮克細胞呈弱陽性細胞化學染色總結(1)對于不明原因貧血的初診患者：常規(guī)做鐵染色，必要時還應做中性粒細胞堿性磷酸酶染色和過碘酸－雪夫反應急性白血?。撼Ｒ?guī)做過氧化物酶染色、特異性酯酶染色、非特異性酯酶染色及過碘酸-雪夫反應等慢性粒細胞白血病：常規(guī)做NAP染色四種常見類型白血病的細胞化學染色結果M3M1、M2aM5

ALL

POX染色+++～+++++*或--或+**-SB染色+++～+++++*或--或+**-，個別+NAS-DCE染色+++～+++++*或--，個別+**-NAS-DAE染色+++～++++-或+*+～++++-或+NAS-DAE+NaF不抑制不抑制抑制不抑制α-NBE染色--+-α-NBE染色+NaF//抑制/PAS染色+，呈彌散狀+，呈彌散狀+，呈細顆粒狀+，呈粗顆粒狀細胞化學染色總結(3)第四章

造血細胞檢驗的臨床應用

第一節(jié)

在疾病診斷中的應用第二節(jié)

血液病治療監(jiān)測中的應用第一節(jié)

在疾病診斷中的應用

造血系統(tǒng)疾病

確診白血病及分型

多發(fā)性骨髓瘤的診斷

再生障礙性貧血和PNH

部分遺傳性溶血性貧血

非造血系統(tǒng)疾病

感染性疾病（包括寄