凱氏定氮儀原理及操作步驟

凱氏定氮儀原理及操作步驟凱氏定氮儀原理：蛋白質(zhì)是含氮的有機(jī)化合物。食品與硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質(zhì)分解，分解的氨與硫酸結(jié)合生成硫酸鏤。然后堿化蒸儲(chǔ)使氨游離，用硼酸吸收后再以硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，根據(jù)酸的消耗量乘以換算系數(shù)，即為蛋白質(zhì)含量。.有機(jī)物中的胺根在強(qiáng)熱和CuSO4濃H2SO4作用下，硝化生成(NH4)2SO4反應(yīng)式為：2NH2+H2S04+2H(NH4)2S04(其中CuSO4故催化劑).在凱氏定氮器中與堿作用，通過(guò)蒸儲(chǔ)釋放出NH3,收集于H3BO3溶液中反應(yīng)式為：(NH4)2SO4+2NaOH2NH3+2H2O+Na2SO42NH3+4H3BO3(NH4)2B4O7+5H2O.用已知濃度的H2SO4或HCI)標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，根據(jù)HCI消耗的量計(jì)算出氮的含量，然后乘以相應(yīng)的換算因子，既得蛋白質(zhì)的含量反應(yīng)式為：(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2ONH4)2SO4+4H3BO3(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O2NH4C1+4H3BO3凱氏定氮儀操作步驟：（一）消化、準(zhǔn)備6個(gè)凱氏燒瓶，標(biāo)號(hào)。1、2、3號(hào)燒瓶中分別加入適當(dāng)濃度的蛋白溶液1.0mL,樣品要加到燒瓶底部，切勿沾在瓶口及瓶頸上。再依次加入硫酸鉀-硫酸銅接觸劑0.3g,濃硫酸2.0mL,30%過(guò)氧化氫1.0mL。4、5、6號(hào)燒瓶作為空白對(duì)照，用以測(cè)定試劑中可能含有的微量含氮物質(zhì)，對(duì)樣品測(cè)定進(jìn)行校正。4、5、6號(hào)燒瓶中加入蒸儲(chǔ)水1.0mL代替樣液，其余所加試劑與1、2、3號(hào)燒瓶相同。、將加好試劑的各燒瓶放置消化架上，接好抽氣裝置。先用微火加熱煮沸，此時(shí)燒瓶?jī)?nèi)物質(zhì)炭化變黑，并產(chǎn)生大量泡沫，務(wù)必注意防止氣泡沖出管口。待泡沫消失停止產(chǎn)生后，加大火力，保持瓶?jī)?nèi)液體微沸，至溶液澄清后，再繼續(xù)加熱使消化液微沸15min。在消化過(guò)程中要隨時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)燒瓶，以使內(nèi)壁粘著物質(zhì)均能流入底部，以保證樣品完全消化。消化時(shí)放出的氣體內(nèi)含SO2具有強(qiáng)烈刺激性，因此自始自終應(yīng)打開(kāi)抽水泵將氣體抽入自來(lái)水排出。整個(gè)消化過(guò)程均應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行。消化完全后，關(guān)閉火焰，使燒瓶冷卻至室溫。（二）蒸儲(chǔ)和吸收蒸儲(chǔ)和吸收是在微量凱氏定氮儀內(nèi)進(jìn)行的。凱氏定氮蒸儲(chǔ)裝置種類甚多，大體上都由蒸氣發(fā)生、氨的蒸儲(chǔ)和氨的吸收三部分組成。1、儀器的洗滌儀器安裝前，各部件需經(jīng)一般方法洗滌干凈，所用橡皮管、塞須浸在10%NaOH液中，煮約10min,水洗、水煮10min,再水洗數(shù)次，然后安裝并固定在一只鐵架臺(tái)上。儀器使用前，微量全部管道都須經(jīng)水蒸氣洗滌，以除去管道內(nèi)可能殘留的氨，正在使用的儀器，每次測(cè)樣前，蒸氣洗滌5min即可。較長(zhǎng)時(shí)間未使用的儀器，重復(fù)蒸氣洗滌，不得少于三次，并檢查儀器是否正常。仔細(xì)檢查各個(gè)連接處，保證不漏氣。首先在蒸氣發(fā)生器中加約2/3體積蒸儲(chǔ)水，加入數(shù)滴硫酸使其保持酸性，以避免水中的氨被蒸出而影響結(jié)果，并放入少許沸石（或毛細(xì)管等），以防爆沸。沿小玻杯壁加入蒸儲(chǔ)水約20mL讓水經(jīng)插管流入反應(yīng)室，但玻杯內(nèi)的水不要放光，塞上棒狀玻塞，保持水封，防止漏氣。蒸氣發(fā)生后，立即關(guān)閉廢液排放管上的開(kāi)關(guān)，使蒸氣只能進(jìn)入反應(yīng)室，導(dǎo)致反應(yīng)室內(nèi)的水迅速沸騰，蒸出蒸氣由反應(yīng)室上端口通過(guò)定氮球進(jìn)入冷凝管冷卻，在冷凝管下端放置一個(gè)錐形瓶接收冷凝水。從定氮球發(fā)燙開(kāi)始計(jì)時(shí)，連續(xù)蒸煮5min,然后移開(kāi)煤氣燈。沖洗完畢，夾緊蒸氣發(fā)生器與收集器之間的連接橡膠管，由于氣體冷卻壓力降低，反應(yīng)室內(nèi)廢液自動(dòng)抽到反應(yīng)室外殼中，打開(kāi)廢液排出口夾子放出廢液。如此清洗2?3次，再在冷凝管下?lián)Q放一個(gè)盛有硼酸-指示劑混合液的錐形瓶使冷凝管下口完全浸沒(méi)在溶液中，蒸儲(chǔ)1?2min,觀察錐形瓶?jī)?nèi)的溶液是否變色。如不變色，表示蒸儲(chǔ)裝置內(nèi)部已洗干凈。移去錐形瓶，再蒸儲(chǔ)1?2min,用蒸儲(chǔ)水沖洗冷凝器下口，關(guān)閉煤氣燈，儀器即可供測(cè)樣品使用。2、無(wú)機(jī)氮標(biāo)準(zhǔn)樣品的蒸儲(chǔ)吸收由于定氮操作繁瑣，為了熟悉蒸儲(chǔ)和滴定的操作技術(shù)，初學(xué)者宜先用無(wú)機(jī)氮標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行反復(fù)練習(xí)，再進(jìn)行有機(jī)氮未知樣品的測(cè)定。常用巳知濃度的標(biāo)準(zhǔn)硫酸鏤測(cè)試三次取潔凈的100mL錐形瓶五只，依次加入2%月酸溶液20mL次甲基藍(lán)-甲基紅混合指示劑（呈紫紅色）3?4滴，蓋好瓶口待用。取其中一只錐形瓶承接在冷凝管下端，并使冷凝管的出口浸沒(méi)在溶液中。注意：在此操作之前必須先打開(kāi)收集器活塞，以免錐形瓶?jī)?nèi)液體倒吸。準(zhǔn)確吸取2mL硫酸鏤標(biāo)準(zhǔn)液加到玻杯中，小心提起棒狀玻塞使硫酸鏤溶液慢慢流入蒸儲(chǔ)瓶中，用少量蒸儲(chǔ)水沖洗小玻杯3次，一并放人蒸儲(chǔ)瓶中。然后用量筒向小玻杯中加入10mL3冊(cè)NaOH容液，使堿液慢慢流入蒸儲(chǔ)瓶中，在堿液尚未完全流入時(shí)，將棒狀玻塞蓋緊。向小玻杯中加約5mL蒸儲(chǔ)水，再慢慢打開(kāi)玻塞，使一半水流入蒸儲(chǔ)瓶，一半留在小玻杯中作水封。關(guān)閉收集器活塞，加熱蒸氣發(fā)生器，進(jìn)行蒸儲(chǔ)。錐形瓶中的硼酸-指示劑混合液由于吸收了氨，由紫紅色變成綠色。自變色時(shí)起，再蒸儲(chǔ)3?5min,移動(dòng)錐形瓶使瓶?jī)?nèi)液面離開(kāi)冷凝管下口約lcm,并用少量蒸儲(chǔ)水沖洗冷凝管下口，再繼續(xù)蒸儲(chǔ)1min,移開(kāi)錐形瓶，蓋好，準(zhǔn)備滴定。在一次蒸儲(chǔ)完畢后，移去煤氣燈，夾緊蒸氣發(fā)生器與收集器間的橡膠管，排除反應(yīng)完畢的廢液，用水沖洗小玻杯幾次，并將廢液排除。如此反復(fù)沖洗干凈后，即可進(jìn)行下一個(gè)樣品的蒸儲(chǔ)。按以上方法用標(biāo)準(zhǔn)硫酸鏤再做兩次。另取2mL蒸儲(chǔ)水代替標(biāo)準(zhǔn)硫酸鏤進(jìn)行空白測(cè)定二次。將各次蒸儲(chǔ)的錐形瓶一起滴定。3、未知樣品及空白的蒸儲(chǔ)吸收將消化好的蛋白樣品三支，空白對(duì)照液三支，依次作蒸儲(chǔ)吸收。加5mL熱的蒸儲(chǔ)水至消化好的樣品或空白對(duì)照液中，通過(guò)小玻杯加到反應(yīng)室中，再用熱蒸儲(chǔ)水洗滌小玻杯3次，每次用水量約3mL洗滌液一并倒入反應(yīng)室內(nèi)。其余操作按標(biāo)準(zhǔn)硫酸鏤的蒸儲(chǔ)進(jìn)行。由于消化液內(nèi)硫酸鉀濃度高而呈粘稠狀，不易從凱氏燒瓶?jī)?nèi)倒出，必須加入熱蒸儲(chǔ)水5mL稀釋之，如果有結(jié)晶析出，必須微熱溶解，趁熱加入玻杯，使其流入反應(yīng)室。止匕外，還應(yīng)當(dāng)注意趁儀器洗滌尚未完全冷卻時(shí)立即加入樣品或空白對(duì)照液，否則消化液通過(guò)冷卻的管道容易析出結(jié)晶，造成堵塞。（三）凱氏定氮儀滴定樣品和空白蒸儲(chǔ)完畢后，一起進(jìn)行滴定。打開(kāi)接受瓶蓋，用酸式微量滴定管以0.0100mol/L的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液進(jìn)行滴定。待滴至瓶?jī)?nèi)溶液呈暗灰色時(shí)，用蒸儲(chǔ)水將錐形瓶?jī)?nèi)壁四周淋洗一次。若振搖后復(fù)現(xiàn)綠色，應(yīng)再小心滴入標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液半滴，振搖觀察瓶?jī)?nèi)溶液顏色變化，暗灰