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1a1a2a2a3a3a課題目標說明植物組織培養(yǎng)的基本原理,學習植物組織培養(yǎng)的基本技術,進行菊花或其他植物的組織培養(yǎng)。課題重點與難點課題重點:植物組織培養(yǎng)過程中使用的無菌技術。課題難點:植物組織培養(yǎng)過程中使用的無菌技術。4a課題目標4a5a5a6a6a7a7a8a8a9a9a10a10a(一)旁欄思考題1.你能說出各種營養(yǎng)物質的作用嗎?同專題2中微生物培養(yǎng)基的配方相比,MS培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同?答:微量元素和大量元素提供植物細胞生活所必需的無機鹽;蔗糖提供碳源,同時能夠維持細胞的滲透壓;甘氨酸、維生素等物質主要是為了滿足離體植物細胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產生的特殊營養(yǎng)需求。微生物培養(yǎng)基以有機營養(yǎng)為主。與微生物的培養(yǎng)不同,MS培養(yǎng)基則需提供大量無機營養(yǎng),無機鹽混合物包括植物生長必須的大量元素和微量元素兩大類。11a(一)旁欄思考題11a12a12a13a13a14a14a15a15a16a16a17a17a18a18a19a19a20a20a21a21a2.你打算做幾組重復?你打算設置對照實驗嗎?答:教師可以安排學生分組,做不同的材料或配方,最后分別匯報成果。但每種材料或配方至少要做一組以上的重復。設置對照實驗可以取用一個經(jīng)過滅菌的裝有培養(yǎng)基的錐形瓶,與接種操作后的錐形瓶一同培養(yǎng),用以說明培養(yǎng)基制作合格,沒有被雜菌污染。22a2.你打算做幾組重復?你打算設置對照實驗嗎?22a23a23a(一)對接種操作中污染情況的分析接種3~4d后,在接種操作中被雜菌污染的培養(yǎng)物會表現(xiàn)出被污染的現(xiàn)象。請學生適時統(tǒng)計污染率,分析接種操作是否符合無菌要求。24a(一)對接種操作中污染情況的分析24a(二)是否完成了對植物組織的脫分化和再分化觀察實驗結果,看看是否培養(yǎng)出了愈傷組織,記錄多長時間長出愈傷組織。統(tǒng)計更換培養(yǎng)基后愈傷組織進一步分化成根和芽的比例和時間。25a(二)是否完成了對植物組織的脫分化和再分化25a(三)是否進行了統(tǒng)計、對照與記錄做好統(tǒng)計和對照,填好結果記錄表,培養(yǎng)嚴謹?shù)目茖W態(tài)度。從實驗的第一步開始就要求學生做好實驗記錄,可以讓學生分組配制不同培養(yǎng)基,如誘導愈傷或直接分化叢芽的培養(yǎng)基,然后做不同配方的比較。26a(三)是否進行了統(tǒng)計、對照與記錄26a(四)生根苗的移栽是否合格生根苗移栽技術的關鍵是既要充分清洗根系表面的培養(yǎng)基,又不能傷及根系。一般使用無土栽培的辦法。培養(yǎng)基質要提前消毒,可以向培養(yǎng)基質噴灑質量分數(shù)為5%的高錳酸鉀,并用塑料薄膜覆蓋12h。掀開塑料薄膜后24h才能移栽。新移栽的組培苗要在溫室過渡幾天,等壯苗后再定植大田或進行盆栽。學生可以在課后統(tǒng)計自己移栽的成活率,看看移栽是否合格。27a(四)生根苗的移栽是否合格27a答:植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差,對培養(yǎng)條件的要求較高。用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基同樣適合于某些微生物的生長,如一些細菌、真菌等的生長。而培養(yǎng)物一旦受到微生物的污染,就會導致實驗前功盡棄,因此要進行嚴格的無菌操作。28a答:植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差,對培養(yǎng)條件的答:外植體的生理狀態(tài)是成功進行組織培養(yǎng)的重要條件之一。生長旺盛的嫩枝生理狀況好,容易誘導脫分化和再分化。
29a答:外植體的生理狀態(tài)是成功進行組織培養(yǎng)的重要條件之一。生長旺實驗注意事項
無菌技術是植物組織培養(yǎng)能否獲得成功的關鍵植物組織培養(yǎng)不同于扦插、分根、葉插等常規(guī)無性繁殖。由于植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差,所以對培養(yǎng)條件的要求較高,對無菌操作的要求非常嚴格。如果不小心引起污染,將可能造成培養(yǎng)工作的前功盡棄。無菌技術包括培養(yǎng)基消毒滅菌和植物材料(外植體)的消毒滅菌。對培養(yǎng)材料進行表面滅菌時,一方面要考慮藥劑的消毒效果;另一方面還要考慮植物材料的耐受能力。不同藥劑、不同植物材料,甚至不同器官要區(qū)別對待。妥善處理被污染的培養(yǎng)物
將所有被污染的培養(yǎng)瓶統(tǒng)一放在高壓蒸汽鍋內進行高壓蒸汽滅菌,然后再打開培養(yǎng)瓶,進行清洗。
有毒藥品的用后處理一般應收集后統(tǒng)一交給有關專業(yè)部門處理。30a實驗注意事項無菌技術是植物組織培養(yǎng)能否獲得成功的關鍵妥善處植物組織培養(yǎng)技術的發(fā)展大自然中存在著許多有趣的植物無性生殖現(xiàn)象。例如,馬鈴薯的塊莖能夠發(fā)芽生根,秋海棠的葉片能夠長成新植株。這些現(xiàn)象促發(fā)科學家去思考、解釋。1902年,有一位德國的植物學家大膽地預言:“植物的體細胞在一定條件下,可以如同受精卵一樣,具有潛在的發(fā)育成植株的能力?!?958年,美國科學家斯圖爾德(F.C.Steward)將胡蘿卜韌皮部的一些細胞進行培養(yǎng),由于細胞分化而最終發(fā)育成完整的新植株。這個實驗結果在生物學界引起了很大的震動,它表明已經(jīng)高度分化的植物細胞仍然具有發(fā)育成完整植株的能力。已經(jīng)分化的細胞所具有的這種潛在發(fā)育能力稱作細胞全能性。既然胡蘿卜的單個細胞能發(fā)育為完整植株,小塊的植物組織就更不應該有什么問題。此后很多年,科學家和技術人員將許多植物進行了組織培養(yǎng),并獲得了成功。如今,植物組織培養(yǎng)已不再神秘莫測,而發(fā)展成為常規(guī)技術。31a植物組織培養(yǎng)技術的發(fā)展31a32a1a33a2a34a3a課題目標說明植物組織培養(yǎng)的基本原理,學習植物組織培養(yǎng)的基本技術,進行菊花或其他植物的組織培養(yǎng)。課題重點與難點課題重點:植物組織培養(yǎng)過程中使用的無菌技術。課題難點:植物組織培養(yǎng)過程中使用的無菌技術。35a課題目標4a36a5a37a6a38a7a39a8a40a9a41a10a(一)旁欄思考題1.你能說出各種營養(yǎng)物質的作用嗎?同專題2中微生物培養(yǎng)基的配方相比,MS培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同?答:微量元素和大量元素提供植物細胞生活所必需的無機鹽;蔗糖提供碳源,同時能夠維持細胞的滲透壓;甘氨酸、維生素等物質主要是為了滿足離體植物細胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產生的特殊營養(yǎng)需求。微生物培養(yǎng)基以有機營養(yǎng)為主。與微生物的培養(yǎng)不同,MS培養(yǎng)基則需提供大量無機營養(yǎng),無機鹽混合物包括植物生長必須的大量元素和微量元素兩大類。42a(一)旁欄思考題11a43a12a44a13a45a14a46a15a47a16a48a17a49a18a50a19a51a20a52a21a2.你打算做幾組重復?你打算設置對照實驗嗎?答:教師可以安排學生分組,做不同的材料或配方,最后分別匯報成果。但每種材料或配方至少要做一組以上的重復。設置對照實驗可以取用一個經(jīng)過滅菌的裝有培養(yǎng)基的錐形瓶,與接種操作后的錐形瓶一同培養(yǎng),用以說明培養(yǎng)基制作合格,沒有被雜菌污染。53a2.你打算做幾組重復?你打算設置對照實驗嗎?22a54a23a(一)對接種操作中污染情況的分析接種3~4d后,在接種操作中被雜菌污染的培養(yǎng)物會表現(xiàn)出被污染的現(xiàn)象。請學生適時統(tǒng)計污染率,分析接種操作是否符合無菌要求。55a(一)對接種操作中污染情況的分析24a(二)是否完成了對植物組織的脫分化和再分化觀察實驗結果,看看是否培養(yǎng)出了愈傷組織,記錄多長時間長出愈傷組織。統(tǒng)計更換培養(yǎng)基后愈傷組織進一步分化成根和芽的比例和時間。56a(二)是否完成了對植物組織的脫分化和再分化25a(三)是否進行了統(tǒng)計、對照與記錄做好統(tǒng)計和對照,填好結果記錄表,培養(yǎng)嚴謹?shù)目茖W態(tài)度。從實驗的第一步開始就要求學生做好實驗記錄,可以讓學生分組配制不同培養(yǎng)基,如誘導愈傷或直接分化叢芽的培養(yǎng)基,然后做不同配方的比較。57a(三)是否進行了統(tǒng)計、對照與記錄26a(四)生根苗的移栽是否合格生根苗移栽技術的關鍵是既要充分清洗根系表面的培養(yǎng)基,又不能傷及根系。一般使用無土栽培的辦法。培養(yǎng)基質要提前消毒,可以向培養(yǎng)基質噴灑質量分數(shù)為5%的高錳酸鉀,并用塑料薄膜覆蓋12h。掀開塑料薄膜后24h才能移栽。新移栽的組培苗要在溫室過渡幾天,等壯苗后再定植大田或進行盆栽。學生可以在課后統(tǒng)計自己移栽的成活率,看看移栽是否合格。58a(四)生根苗的移栽是否合格27a答:植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差,對培養(yǎng)條件的要求較高。用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基同樣適合于某些微生物的生長,如一些細菌、真菌等的生長。而培養(yǎng)物一旦受到微生物的污染,就會導致實驗前功盡棄,因此要進行嚴格的無菌操作。59a答:植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差,對培養(yǎng)條件的答:外植體的生理狀態(tài)是成功進行組織培養(yǎng)的重要條件之一。生長旺盛的嫩枝生理狀況好,容易誘導脫分化和再分化。
60a答:外植體的生理狀態(tài)是成功進行組織培養(yǎng)的重要條件之一。生長旺實驗注意事項
無菌技術是植物組織培養(yǎng)能否獲得成功的關鍵植物組織培養(yǎng)不同于扦插、分根、葉插等常規(guī)無性繁殖。由于植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差,所以對培養(yǎng)條件的要求較高,對無菌操作的要求非常嚴格。如果不小心引起污染,將可能造成培養(yǎng)工作的前功盡棄。無菌技術包括培養(yǎng)基消毒滅菌和植物材料(外植體)的消毒滅菌。對培養(yǎng)材料進行表面滅菌時,一方面要考慮藥劑的消毒效果;另一方面還要考慮植物材料的耐受能力。不同藥劑、不同植物材料,甚至不同器官要區(qū)別對待。妥善處理被污染的培養(yǎng)物
將所有被污染的培養(yǎng)瓶統(tǒng)一放在高壓蒸汽鍋內進行高壓蒸汽滅菌,然后再打開培養(yǎng)瓶,進行清洗。
有毒藥品的用后處理一般應收集后統(tǒng)一交給有關專業(yè)部門處理。61a實驗注意事項無菌技術是植物組織培養(yǎng)能否獲得成功的關鍵妥善處植物組織培養(yǎng)技術的發(fā)展大自然中存在著許多有趣的植物無性生殖現(xiàn)象。例如,馬鈴薯的塊莖能夠發(fā)芽生根,秋海棠的葉片能夠長成新植株。這些現(xiàn)象促發(fā)科學家去思考、解釋。1902年,有一位德國的植物學家大膽地預言:“植物的體細胞在一定條件下,可以如同受精卵一樣,具有潛在的發(fā)育成植株的能力?!?958年,美國科學家斯圖爾德(F.C.Steward)將胡蘿卜韌皮
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