基因工程復(fù)習(xí)3

一、原核基因的結(jié)構(gòu)二、真核基因的結(jié)構(gòu)（二）基因操作的工具

基因的剪刀—限制性內(nèi)切酶基因的針線—DNA連接酶

基因的運(yùn)輸工具—運(yùn)載體限制性核酸內(nèi)切酶1.特點(diǎn)：特異性，即識(shí)別特定核苷酸序列，在特定的切點(diǎn)(磷酸二酯鍵)切割。2.分布：主要在微生物(細(xì)菌，酵母菌等）。3.結(jié)果：產(chǎn)生黏性末端或平末端4用途：用于提取目的基因和切割運(yùn)載體

被限制酶切開的DNA兩條單鏈的切口，帶有幾個(gè)伸出的核苷酸，他們之間正好互補(bǔ)配對(duì)，這樣的切口叫黏性末端。要想獲得某個(gè)特定性狀的基因必須要用限制酶切幾個(gè)切口？可產(chǎn)生幾個(gè)黏性末端或平末端？要切兩個(gè)切口，產(chǎn)生四個(gè)末端?；虻尼樉€——DNA連接酶（二）基因操作的工具連接的部位：磷酸二酯鍵，不是氫鍵。DNA連接酶的分類：AATTGCCTTAAGDNA連接酶與DNA聚合酶的異同點(diǎn)：相同點(diǎn)：形成磷酸二酯鍵但是：1）DNA聚合酶只能將單個(gè)核苷酸加到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯鍵；而DNA連接酶是在兩個(gè)DNA片段之間形成磷酸二酯鍵2）DNA聚合酶需要以一條DNA鏈為模板；而DNA連接酶不需要模板。運(yùn)載體1.作用：2.條件：3.種類：質(zhì)粒（常用的）、噬菌體的衍生物和動(dòng)植物病毒。將外源基因送入受體細(xì)胞。(1)能夠在宿主細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定地保存。(2)具多個(gè)限制酶切點(diǎn)

(3)具有某些標(biāo)記基因，便于進(jìn)行篩選。如抗菌素的抗性基因、產(chǎn)物具有

顏色反應(yīng)的基因等。1.以下說法正正確的是（（））A、所有的限限制酶只能能識(shí)別一種種特定的核核苷酸序列列B、質(zhì)粒是是基因工工程中唯唯一的運(yùn)運(yùn)載體C、運(yùn)載體體必須具具備的條條件之一一是：具具有多個(gè)個(gè)限制酶酶切點(diǎn)，，以便與與外源基基因連接接D、DNA連接酶使使黏性末末段的堿堿基之間間形成氫氫鍵C練習(xí)2.不屬于質(zhì)質(zhì)粒被選選為基因因運(yùn)載體體的理由由是A、能復(fù)制制（（））B、有多個(gè)個(gè)限制酶酶切點(diǎn)C、具有標(biāo)標(biāo)記基因因D、它是環(huán)環(huán)狀DNAD練習(xí)3.(多選）有有關(guān)基因因工程的的敘述中中，錯(cuò)誤誤的是（（））A、基因工工程技術(shù)術(shù)能定向向地改造造生物的的遺傳性性狀，培培育生物物新品種種B、重組DNA的形成在在細(xì)胞內(nèi)內(nèi)完成C、目目的的基基因因須須由由運(yùn)運(yùn)載載體體導(dǎo)導(dǎo)入入受受體體細(xì)細(xì)胞胞D、質(zhì)質(zhì)粒粒都都可可作作為為運(yùn)運(yùn)載載體體BD練習(xí)習(xí)5）基基因因工工程程是是在在DNA分子子水水平平上上進(jìn)進(jìn)行行設(shè)設(shè)計(jì)計(jì)施施工工的的。。在在基基因因操操作作的的基基本本步步驟驟中中，，不不進(jìn)進(jìn)行行堿堿基基互互補(bǔ)補(bǔ)配配對(duì)對(duì)的的步步驟驟是是（（））A、人人工工合合成成目目的的基基因因B、目目的的基基因因與與載載體體結(jié)結(jié)合合C、將將目目的的基基因因?qū)?dǎo)入入受受體體細(xì)細(xì)胞胞D、目目的的基基因因的的檢檢測(cè)測(cè)和和表表達(dá)達(dá)C鞏固固練練習(xí)習(xí)基因因操操作作的的基基本本步步驟驟目的的基基因因的的獲獲取取基因因表表達(dá)達(dá)載載體體的的構(gòu)構(gòu)建建將目目的的基基因因?qū)?dǎo)入入受受體體細(xì)細(xì)胞胞目的的基基因因的的檢檢測(cè)測(cè)和和鑒鑒定定獲取取目目的的基基因因的的方方法法：：1從基基因因文文庫庫中中獲獲取?。ǎɑ蛞蚪M組文文庫庫或或CDNA文庫庫））2利用用PCR技術(shù)術(shù)擴(kuò)擴(kuò)增增目目的的基基因因3人工工化化學(xué)學(xué)方方法法合合成成基因因組組文文庫庫從基基因因文文庫庫中中獲獲取取目目的的基基因因：：基因因文文庫庫:將含含有有某某種種生生物物不不同同基基因因的的許許多多DNA片段段,導(dǎo)入入受受體體菌菌的的群群體體中中儲(chǔ)儲(chǔ)存存,各個(gè)個(gè)受受體體菌菌分分別別含含有有這這種種生生物物的的不不同同的的基基因因,稱為基因文文庫(genelibrary)基因組文庫庫:基因文庫中中包含了一一種生物所所有的基因因,這種基因文文庫叫做基基因組文庫庫.部分基因文文庫:基因文庫中中包含了一一種生物的的一部分基基因,這種基因文文庫叫做部部分基因文文庫.1變性（90-95度）2退火（55-60度）3延伸（70-75度）2、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目目的基因①概念：PCR全稱為_______________，是一項(xiàng)在生物____復(fù)制___________的核酸合合成技術(shù)術(shù)③條件：_______________________、_______________、___________、___________.②原理：__________④方式：以以_____方式擴(kuò)增增，即____（n為擴(kuò)增循循環(huán)的次數(shù)數(shù)）⑤結(jié)果：聚合酶鏈鏈?zhǔn)椒磻?yīng)應(yīng)體外特定DNA片段DNA復(fù)制已知基因因的核苷苷酸序列列四種脫氧氧核苷酸酸一對(duì)引物物耐高溫的的DNA聚合酶指數(shù)2n使目的基基因的片片段在短短時(shí)間內(nèi)內(nèi)成百萬萬倍地?cái)U(kuò)擴(kuò)增⑥過程：a、DNA變性（90℃-95℃℃）：雙鏈鏈DNA模板在熱作用用下，_____斷裂，形形成___________b、退火（（復(fù)性55℃-65℃℃）：系統(tǒng)統(tǒng)溫度降降低，引引物物與DNA模板結(jié)合合，形成成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下下，合成與模板板互補(bǔ)的________。氫鍵單鏈DNA雙鏈DNA鏈啟動(dòng)子：位位于基因的的首端的一一段特殊的的DNA片斷，它是是RNA聚合酶識(shí)別別和結(jié)合的的部位，有有了它才能能驅(qū)動(dòng)基因因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得得蛋白質(zhì)終止子：位位于基因的的尾端的一一段特殊的的DNA片斷，能終終止mRNA的轉(zhuǎn)錄標(biāo)記基因：：是為了鑒鑒別受體細(xì)細(xì)胞中是否否含有目的的基因，從從而將有目目的基因的的細(xì)胞篩選選出來1.將目的基基因?qū)肴胫参锛?xì)細(xì)胞農(nóng)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化法3、將目的的基因?qū)?dǎo)入微生生物細(xì)胞胞用Ca2+處理細(xì)胞胞感感受態(tài)細(xì)細(xì)胞表表達(dá)達(dá)載體與與感受態(tài)態(tài)細(xì)胞混混合感感受態(tài)態(tài)細(xì)胞吸吸收DNA分子四環(huán)素抗性基因氨芐青霉素抗性基因(四)目的基因因的檢測(cè)測(cè)與鑒定定檢測(cè)—鑒定——①檢測(cè)轉(zhuǎn)基基因生物物染色體體上是否否插入了了目目的基因因②檢測(cè)目的的基因是是否轉(zhuǎn)錄錄出了mRNA③檢測(cè)目的的基因是是否翻譯譯成蛋白白質(zhì)抗蟲鑒定定、抗病病鑒定、、活性鑒鑒定等方法：方法：方法：DNA分子雜交交DNA分子雜交交抗原抗體體雜交DNA分子雜交交示意圖圖將兩種生生物的DNA分子的單單鏈放在在一起，，如果這這兩個(gè)單單鏈具有有互補(bǔ)的的堿基序序列，那那么，互互補(bǔ)的堿堿基序列列就會(huì)結(jié)結(jié)合在一一起，形形成雜合合雙鏈區(qū)區(qū)；在沒沒有互補(bǔ)補(bǔ)堿基序序列的部部位，仍仍然是兩兩條游離離的單鏈鏈?；蛱教结槪海河梅欧派湫孕酝晃凰貥?biāo)標(biāo)記的的含目目的基基因的的DNA片段如果有有雜交帶帶出現(xiàn)，，說明明被檢檢測(cè)物物含有有與目目的基基因可可以堿堿基配對(duì)對(duì)的序序列9、靜靜夜夜四四無無鄰鄰，，荒荒居居舊舊業(yè)業(yè)貧貧。。。。12月月-2212月月-22Friday,December23,202210、雨雨中中黃黃葉葉樹樹，，燈燈下下白白頭頭人人。。。。05:56:2905:56:2905:5612/23/20225:56:29AM11、以以我我獨(dú)獨(dú)沈沈久久，，愧愧君君相相見見頻頻。。。。12月月-2205:56:2905:56Dec-2223-Dec-2212、故人人江海海別，，幾度度隔山山川。。。05:56:2905:56:2905:56Friday,December23,202213、乍見見翻疑疑夢(mèng)，，相悲悲各問問年。。。12月月-2212月月-2205:56:2905:56:29December23,202214、他鄉(xiāng)鄉(xiāng)生白白發(fā)，，舊國國見青青山。。。23十十二二月20225:56:29上上午05:56:2912月月-2215、比不了了得就不不比，得得不到的的就不要要。。。十二月225:56上午午12月-2205:56December23,202216、行動(dòng)出出成果，，工作出出財(cái)富。。。2022/12/235:56:2905:56:2923December202217、做前，，能夠環(huán)環(huán)視四周周；做時(shí)時(shí)，你只只能或者者最好沿沿著以腳腳為起點(diǎn)點(diǎn)的射線線向前。。。5:56:29上午午5:56上午午05:56:2912月-229、沒有有失敗敗，只只有暫暫時(shí)停停止成成功??！。12月月-2212月月-22Friday,December23,202210、很多多事情情努力力了未未必有有結(jié)果果，但但是不不努力力卻什什么改改變也也沒有有。。。05:56:2905:56:2905:5612/23/20225:56:29AM11、成功功就是是日復(fù)復(fù)一日日那一一點(diǎn)點(diǎn)點(diǎn)小小小努力力的積積累。。。12月月-2205:56:2905:56Dec-2223-Dec-2212、世間成事事，不求其其絕對(duì)圓滿滿，留一份份不足，可可得無限完完美。。05:56:2905:56:2905:56Friday,December23,202213、不知香香積寺，，數(shù)里入入云峰。。。12月-2212月-2205:56:2905:56:29December23,202214、意志堅(jiān)強(qiáng)強(qiáng)的人能把把世界放在在手中像泥泥塊一樣任任意揉捏。。23十二二月20225:56:29上上午05:56:2912月-2215、楚塞三湘湘接，荊門門九派通。。。。十二月225:56上上午12月-2205:56December23,202216、少年十五五二十時(shí)，，步行奪得得胡馬騎。。。2022/12/235:56:2905:56:2923December202217、空山新雨后后，天氣晚來來秋。。5:56:29上午5:56上上午05:56:2912月-229、楊柳散散和風(fēng)，，青山澹澹吾慮。。。12月-2212月-22Friday,December23,202210、閱讀一一切好書書如同和和過去最最杰出的的人談話話。05:56:2905:56:2905:5612/23/20225:56:29AM11、越是沒有本本領(lǐng)的就越加加自命不凡。。12月-2205:56:2905:56Dec-2223-Dec-2212、越是無無能的人人，越喜喜歡挑剔剔別人的的錯(cuò)兒。。05:56:2905:56:29