緩解體力疲勞功能評(píng)價(jià)方法

緩解體力疲勞功能

試驗(yàn)項(xiàng)目、試驗(yàn)原則與結(jié)果判定1.實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目1.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)1.1.1動(dòng)物體重1.1.2負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)1.1.3力竭實(shí)驗(yàn)1.2人體試食試驗(yàn)1.2.1臨床癥狀與體征1.2.2跑臺(tái)試驗(yàn)2試驗(yàn)原則2.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)所列指標(biāo)均為必做項(xiàng)目，動(dòng)物負(fù)重游泳和力竭實(shí)驗(yàn)前，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行運(yùn)動(dòng)能力篩選。2.2實(shí)驗(yàn)前必須對(duì)同批受試樣品進(jìn)行違禁藥物的檢測(cè)。2.3運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)與生化指標(biāo)檢測(cè)相結(jié)合。2.4在進(jìn)行人體試食試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)對(duì)受試樣品的食用安全性作進(jìn)一步的觀察。2.5停止給予受試物一天后進(jìn)行效果觀察。3結(jié)果判定3.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性，力竭實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性（特指無顯著不利影響），可判定該受試樣品緩解體力疲勞功能的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性。3.2人體試食試驗(yàn)：（1）試食前后，受試組自身對(duì)照，肌酐、轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶無不利的顯著性改變；（2）跑臺(tái)試驗(yàn)：試食組自身對(duì)照，試食后運(yùn)動(dòng)時(shí)間與試食前相比顯著性增加，首次試食后運(yùn)動(dòng)時(shí)間與試食前相比無顯著性差異。滿足（1）和（2）可判定該受試樣品具有緩解體力疲勞的功能。緩解體力疲勞功能評(píng)價(jià)方法1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)1.1原理在一定時(shí)間給予一定量的受試樣品，通過持續(xù)服用，調(diào)整特定人群機(jī)體狀態(tài)，使其擁有更好的調(diào)節(jié)功能，該功能包括應(yīng)對(duì)潛在需求、使機(jī)體處于良好狀態(tài)，具有更長(zhǎng)時(shí)間作業(yè)能力或在相同作業(yè)時(shí)間不出現(xiàn)更重的疲勞表現(xiàn)。1.2負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)1.2.1儀器與器材游泳箱（大小約80cmx50cmx60cm），電子天平、鉛皮。1.2.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物推薦使用雄性小鼠，6周齡，體重20-24g。1.2.2.2劑量分組與受試樣品給予時(shí)間實(shí)驗(yàn)設(shè)三個(gè)劑量組和一個(gè)陰性對(duì)照組，一個(gè)空白對(duì)照組，一個(gè)單次中劑量受試組。其中以人體推薦量的10倍為其中的一個(gè)劑量組，另設(shè)二個(gè)劑量組，必要時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照組。陰性對(duì)照組灌胃給予安慰劑。受試樣品給予時(shí)間30天，必要時(shí)可延長(zhǎng)至45天。1.2.2.3實(shí)驗(yàn)步驟末次給受試樣品24小時(shí)后，將尾根部負(fù)荷6%體重鉛皮的小鼠置于游泳箱中游泳。水深不少于40cm，水溫30°C±2.0°C，記錄小鼠自游泳開始至力竭時(shí)間，即小鼠負(fù)重游泳時(shí)間。力竭判斷標(biāo)準(zhǔn)為：小鼠沉入水中超過10秒，且放在平面上無法完成翻正反射。1.2.3數(shù)據(jù)處理與結(jié)果判定游泳時(shí)間為計(jì)量資料，采用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值<F0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F值土F0.05,P<0.05，用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。（1）受試樣品組負(fù)重游泳時(shí)間明顯長(zhǎng)于陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組，且差異有顯著性；（2）單次中劑量組與陰性對(duì)照組相比，負(fù)重游泳時(shí)間無顯著差異。同時(shí)滿足（1）和（2）時(shí)，可判定該實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。1.3力竭實(shí)驗(yàn)儀器與器材全自動(dòng)生化儀，游泳箱，電子天平、鉛皮。1.3.2實(shí)驗(yàn)方法1.3.2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性SD大鼠，體重160-200g。1.3.2.2劑量設(shè)計(jì)和分組大鼠以人體推薦量的5倍為基本劑量。其余同。1.3.2.3實(shí)驗(yàn)步驟末次給受試樣品24小時(shí)后，采用尾部負(fù)重3%體重鉛皮的大鼠置于游泳箱中游泳。水深不少于50cm，水溫31°C±1.0°C，當(dāng)大鼠游至連續(xù)3次沒入水底，每次超過10秒，視為力竭。記錄大鼠自游泳開始至力竭時(shí)間，大鼠腹主動(dòng)脈采血全血，置4C冰箱約3h，血凝固后2000rpm離心、15min，取血清備用，測(cè)定尿素氮、肌酐、轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶活性。1.3.3數(shù)據(jù)處理與結(jié)果判定血液生化數(shù)據(jù)為計(jì)量資料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值＜F0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性;F值＞FO.O5，P＜0.05，用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì);對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。（1）受試樣品組與陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組相比，血清尿素氮、肌酐、轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶活性應(yīng)無顯著性差異；（2）單次中劑量組與陰性對(duì)照組相比，血清尿素氮、肌酐、轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶活性應(yīng)無顯著性差異；同時(shí)滿足（1）和（2）時(shí)，可判定該實(shí)驗(yàn)結(jié)果陰性（特指無顯著不利影響）。1.4注意事項(xiàng)1.4.1每一游泳箱一次放入動(dòng)物不宜太多，每只小鼠占用的水面積大多在300平方厘米以上，每平方米水面同時(shí)不超過6只大鼠游泳，否則互相擠靠，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。1.4.2水溫對(duì)小鼠的游泳時(shí)間有明顯的影響，因此要求各組水溫控制一致，每一批實(shí)驗(yàn)動(dòng)物下水之前都應(yīng)測(cè)量水溫，水溫以30-31C為宜，如果過低可能引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物痙攣，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。1.4.3鉛皮纏繞松緊應(yīng)適宜。1.4.4觀察者應(yīng)在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中使每只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物四肢保持運(yùn)動(dòng)。如果實(shí)驗(yàn)動(dòng)物漂浮在水面四肢不動(dòng)，可用木棒在其附近攪動(dòng)。同時(shí)適時(shí)清除水中雜質(zhì)，以避免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。1.4.5不同批的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物因飼養(yǎng)環(huán)境、季節(jié)等原因的變化體質(zhì)上會(huì)出現(xiàn)差異。因此受試樣品組和對(duì)照組應(yīng)采用同一批動(dòng)物同時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)、力竭實(shí)驗(yàn)前對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行能力篩選。1.5結(jié)果判定負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性，力竭實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性，可判定該受試樣品緩解體力疲勞功能的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性。2人體試食試驗(yàn)2.1受試者的選擇標(biāo)準(zhǔn)2.1.1納入受試者標(biāo)準(zhǔn)：需要較長(zhǎng)時(shí)間持續(xù)中等強(qiáng)度作業(yè)或易于疲勞的自愿受試者人群。2.1.2排除受試者標(biāo)準(zhǔn)：2.1.2.1年齡在20歲以下或45歲以上男性，年齡在20歲以下或55歲以上女性與妊娠或哺乳期婦女，過敏體質(zhì)與對(duì)本樣品過敏者。已知患有心、血管、肺臟（如哮喘等）和（或）代疾病（如糖尿病等），精神病患者；心血管、肺臟和（或）代疾病的癥狀或體征。經(jīng)常用藥、嗜酒吸煙或戒煙不足6個(gè)月，血漿膽固醇〉200mg/dl4周參加過其它實(shí)驗(yàn)。2.1.2.4正在服用其它營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑、治療藥物或接受其它治療者。2.1.2.5未按規(guī)定服用樣品，無法判斷功效，或資料不全等影響功效或安全性判斷者。2.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)與分組要求：采用自身對(duì)照設(shè)計(jì)。受試者不少于50例。2.3受試樣品的劑量和使用方法：受試者在試食觀察期間，按推薦服用方法、服用量服用受試產(chǎn)品，連續(xù)給予受試樣品30天，必要時(shí)可延長(zhǎng)至45天。2.4觀察指標(biāo)2.4.1安全性指標(biāo)一般狀況包括精神、睡眠、飲食、大小便等2.4.1.2試食前后進(jìn)行血、尿、便常規(guī)檢查（肌酐、轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶）2.4.1.3肝、腎功能檢查心、電圖2.4.2功效性指標(biāo)一般情況詳細(xì)詢問病史，了解受試者飲食情況、活動(dòng)量。觀察主要癥狀：頭痛、眩暈、心悸、耳鳴、失眠、煩躁、腰膝酸軟等。2.4.2.3跑臺(tái)試驗(yàn)（1）試食前測(cè)試在跑步機(jī)上0坡度，以8km/小時(shí)速度進(jìn)行跑步運(yùn)動(dòng)，對(duì)心、率進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。從55%最大心、率開始計(jì)時(shí)，連續(xù)運(yùn)動(dòng)60分鐘以上，且心率達(dá)到69%最大心、率時(shí)為止，為試食前運(yùn)動(dòng)時(shí)間，并于運(yùn)動(dòng)后采血。其中最大心、率=220-年齡。（2）試食中測(cè)試第二次試食2小時(shí)后，在跑步機(jī)上0坡度，以8km/小時(shí)速度進(jìn)行跑步運(yùn)動(dòng)，對(duì)心、率進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。從55%最大心、率開始計(jì)時(shí)，連續(xù)運(yùn)動(dòng)60分鐘以上，且心率達(dá)到69%最大心、率時(shí)為止，為首次試食運(yùn)動(dòng)時(shí)間。其中最大心率=220-年齡。（2）試食后測(cè)試試食結(jié)束24小時(shí)，在跑步機(jī)上0坡度，以8km/小時(shí)速度進(jìn)行跑步運(yùn)動(dòng)，對(duì)心、率進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。從55%最大心、率開始計(jì)時(shí)，連續(xù)運(yùn)動(dòng)60分鐘以上，且心率達(dá)到69%最大心、率時(shí)為止，為試食后運(yùn)動(dòng)時(shí)間，并于運(yùn)動(dòng)后采血。其中最大心率=220-年齡。2.5注意事項(xiàng)跑臺(tái)試驗(yàn)中三次測(cè)試為測(cè)試當(dāng)日同一時(shí)間，以避免時(shí)間周期對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)長(zhǎng)產(chǎn)生的影響；跑臺(tái)試驗(yàn)中試食前測(cè)試60分鐘以即超過69%最大心、率者不可納入受試者人群；跑臺(tái)試驗(yàn)中試食后測(cè)試前，先對(duì)受試者進(jìn)行安全性觀察和一般性觀察，若受試者不符合測(cè)試條件，該受試者不進(jìn)行試食后測(cè)試。2.6數(shù)據(jù)處理和結(jié)果判定測(cè)得數(shù)據(jù)為計(jì)量資料，可用t檢驗(yàn)進(jìn)行分析。凡自身對(duì)照資料可以采用配對(duì)t檢驗(yàn)，兩組均數(shù)比較采用成組t檢驗(yàn)，后者需進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，對(duì)非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)方差齊后，用轉(zhuǎn)換的數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)；若轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)仍不能滿足正態(tài)方差齊要求，改用t’檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn)；但變異系數(shù)太大（如CV>50%）的資料應(yīng)用秩和檢驗(yàn)。結(jié)果判定（1）試食前后，受試組自身對(duì)照，肌酐、轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶無不利的顯著性改變；（2）跑臺(tái)試驗(yàn)：試食組自身對(duì)照，試食后