細菌的初步鑒定

細菌的初步鑒定一、啟動條件：1、目地樣：同一取樣原因，取表現(xiàn)性狀相同的任意1—2包進行細菌初步鑒定。如表現(xiàn)性狀不同的，需分別進行鑒定；不同取樣原因，需分別取樣進行鑒定。2、隨機樣：相同時段出現(xiàn)壞包，取表現(xiàn)性狀相同的任意1—2包進行細菌初步鑒定；不同時段出現(xiàn)壞包，需分別進行鑒定。3、壞包產(chǎn)品的包裝無明顯破損。4、由微生物污染引起的壞包：酶類及化學反應用不同的查驗方式。二、樣品處理準備1、酸包：檢測時發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品感官及PH值有明顯變化時，需快速將酸包產(chǎn)品的內容物移入無菌容器內（移入時需用75%的酒精棉對操作員手及開包產(chǎn)品的移出口進行擦試滅菌），并需快速檢測。如不能檢測，需冷藏保存2小時內進行檢測。2、脹包：使用75%酒精棉對樣品外表面擦試消毒后放于超凈臺內待檢。檢測時，以無菌操作在無橫縱封處剪一半圓或三角取樣。三、檢測（劃線，接種培養(yǎng)）：低酸產(chǎn)品：檢測細菌、芽孢、耐熱芽孢，必要時檢測霉菌、酵母菌。高酸產(chǎn)品：檢測細菌、霉菌、酵母菌。1、細菌：采用無菌手續(xù)取1ml樣品接種于培養(yǎng)皿中，使用普通營養(yǎng)瓊脂于36±1°C/48小時條件下培養(yǎng);另采用無菌操作使用接種環(huán)于營養(yǎng)瓊脂上作劃線培養(yǎng)（37C/48h）2、芽抱、耐熱芽抱：以無菌操作取10ml樣品于兩個小試管中，分別在80C和100C的水浴中加熱10min。冷卻后使用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的無菌操作，分別作芽孢（36±1C/72h）和耐熱芽子包（55±1C/72h）的接種與劃線培養(yǎng)。80C10min一殺滅全部未形成孢子的細菌細胞，孢子可存活。100C10min--殺滅部分細菌孢子，耐熱孢子可存活。3、霉菌、酵母菌：采用接種環(huán)以無菌手續(xù)于專用培養(yǎng)基上作劃線培養(yǎng)，另采用1ml吸管以無菌操作，接種1ml樣品于專用培養(yǎng)基中培養(yǎng)。（條件25—28C/5天）四、記錄樣品：名稱、批號、取樣原因、時間、樣品感官、PH值、酸度、氣體形成、包裝密封性、凝塊、分離等。五、初步粗略鑒定：（一一對應）1、菌落形態(tài)記錄：此時計數(shù)不重要，觀察單一菌叢還是混合菌叢。a、大?。?lt;1mm為露滴狀菌落，1-2mm為小菌落，2-4mm為中等小菌落,4-6mm大菌落,>6mm為巨大菌落。艮形狀：圓形、不規(guī)則狀，假根狀等。隆起度：擴展，臺狀、低凸狀、乳頭狀等。菌落邊緣：邊緣整齊、鋸齒狀、毛刷狀等。表面性狀：光滑、褶皺、同心環(huán)狀等。表面光澤：金屬光澤、臘狀等。顏色透明度：透明、半透明、不透明等。H、氣味、濕潤度、顏色等其他。2、鑒別：（1）、初染：選取不同形態(tài)的單一菌落。屬陰性染色，微生物不著色，在黑背景處觀察清晰、閃亮點鑒別：球菌、桿菌。G-菌易扭曲變形，造成鑒別困難方法：滴一滴苯胺黑（2%水溶液）或結品紫染液于載玻片上，用接種環(huán)挑取少量菌于涂液的載玻片處，完全涂勻。待自然干燥后，滴香柏油，使用顯微鏡的油鏡觀察。（2）、G染色a、球菌：對于球菌，不一致需要G染色，因為G-球菌不會成為液體食品中的腐敗菌，可直接進行h2o2酶實驗。鑒別h2o2酶陽性、陰性球菌。B、桿菌：需進行G染色，鑒別G-或G+，有無芽孢形成。1、G染色固定的目的：①防止菌落被水沖掉②殺死細菌，固定菌落結構。②改變細菌對染液的通透性。2、媒染：增強染液與菌體間的作用力。3、脫色：測知燃料與被染物之間結合的牢固程度，具有鑒別細菌的作用。G+C壁主要由肽聚糖組成；著色能力強。G-C壁主要由磷脂、脂多糖組成；著色能力弱。脫色時間控制：時間長：G+fG-時間短：G-fG+4、復染：使已脫色的菌體重新染上與前染液顏色成明顯對比的顏色。（3）、H2O2酶試驗：是一個裂解H2O2，產(chǎn)生02的過程。鑒別H2O2酶試驗陰性或陽性的G+桿菌。方法：滴一滴10%的h2o2溶液于載玻片上，使用接種環(huán)挑取少量與菌落形態(tài)、初染、G染色均對應的菌落，于涂有H2O2的載玻片，完全涂開觀察。結果：有氣體生成fH2O2酶陽性；無氣體生成fH2O2酶陰性。4、氧化酶試驗：鑒別氧化酶試驗陽性、陰性的G-桿菌。方法：取一試紙條，使用接種環(huán)挑取少量相對應的菌落涂于試紙條有藥品的一端，觀察。結果：不變色f氧化酶陰性變色f氧化酶陽性壞包分析：壞包率=加工殘留+再污染加工殘留的微生物生長繁殖相對緩慢，1-2小時/代再污染的微生物生長繁殖相對快些，1-10分鐘/代1、混合感染、菌叢：空氣、水、包裝不嚴密表明產(chǎn)品的再污染（產(chǎn)品在通過殺菌機中的保溫管以后，通常是在溫度低于100°C的區(qū)域）密封圈損壞殺菌機的冷卻部分泄漏（再生和終末冷卻器）、不嚴密的包裝等主要原因。2、純污染：相對較少主要是清洗和預滅菌不充分。A、由細菌孢子引起的污染常見原因：殺菌不充分、產(chǎn)品中有特殊物質、在80C以上的溫度條件下再污染、包裝材料的消毒、在無菌灌裝機中的無菌空氣系統(tǒng)。B、由耐熱細菌孢子引起的污染常見原因：產(chǎn)品殺菌（超高溫處理）、工廠消毒、包裝材料消毒、空氣殺菌、灌裝機的殺菌、清洗不徹底（耐熱芽孢在設備上蓄積）

壞包微生物鑒定記錄樣品名稱樣品批號壞包類型取樣編號（原因、時間）壞包PH值壞包酸度壞包包裝完整性壞包樣品感官詳細描述：檢驗員：微生物培養(yǎng)菌落描述：不同形態(tài)菌分別描述（指劃線上生長的菌落）細菌總數(shù)芽孢總數(shù)耐熱芽孢其它菌培養(yǎng)空白試驗：菌落描述：1#2#3#空白試驗：菌落描述：1#2#3#空白試驗：菌落描述：1#2#3#空白試驗：菌落描述：1#2#3#微生物培養(yǎng)菌落鑒別：不同形態(tài)菌分別鑒別（指劃線上生長的菌落）初染實驗結果細菌總數(shù)芽孢總數(shù)耐熱芽孢其它菌培養(yǎng)空白試驗：1#2#3#空白試驗：1#2#3#空白試驗：1#2#3#空白試驗：1#2#3#蘭染結及胞態(tài)述革氏色果細形描細菌總數(shù)芽孢總數(shù)耐熱牙孢其它菌培養(yǎng)空白試驗：1#2#3#空