微生物檢測基礎(chǔ)

微生物檢測基礎(chǔ)

蒲公英論壇：http:///forum.php1/7/20231一．什么是微生物？

微生物是指廣泛分布于自然界中的一群肉眼看不到的微小生物，具有單細胞或簡單的多細胞結(jié)構(gòu)，或沒有細胞結(jié)構(gòu)的一群最低等的生物。

整個微生物家族的主要成員有：病毒、細菌、霉菌、酵母、藍細菌、螺旋體、立克次氏體、衣原體、支原體、放線菌、微細藻類、原生動物。1/7/20232病毒

沒有細胞結(jié)構(gòu)的專性寄生的大分子生物。如流感病毒、肝炎病毒（人體病毒），雞瘟病毒、口蹄疫病毒（動物病毒），煙草花葉病毒、番茄叢矮病毒（植物病毒），噬菌體（細菌和放線菌病毒）等。

1/7/20233霉菌

真核生物，單細胞或多細胞絲狀真菌可用低倍或高倍鏡觀察其形態(tài)。如釀制小曲酒的根霉、制豆腐乳的毛霉、生產(chǎn)葡萄糖的曲霉菌、生產(chǎn)青霉素的青霉等。

1/7/20234單細胞，介于細菌與病毒之間的一類原始而小型的原核微生物。

支原體、衣原體、立克次氏體1/7/202351/7/202361/7/202371/7/20238四．實驗室微生物的培養(yǎng)

1/7/20239實驗室中微生物生長（培養(yǎng)）在液體或固體培養(yǎng)基中。細菌生長的培養(yǎng)基應(yīng)含所有生長的基本需求：水分、碳源、氮源、無機鹽及生長因子等營養(yǎng)物質(zhì)。細菌生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)1/7/202310生長培養(yǎng)基

實驗室中細菌通常生長（培養(yǎng)，cultured）在搖瓶、瓶子或稱作發(fā)酵罐的大培養(yǎng)容器液體培養(yǎng)基中或在圓的、通常為塑料、滅菌碟子培養(yǎng)皿的固體培養(yǎng)基中。

將微生物引種在這些培養(yǎng)基上稱為接種（inoculation）。1/7/202311培養(yǎng)基的性質(zhì)取決于微生物的天然環(huán)境和微生物生長的營養(yǎng)要求。分離大量微生物用液體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基用于個別細菌的分離和保存。

1/7/202312常用血液作培養(yǎng)基的附加成分分離人類病原菌，由于它提供許多難養(yǎng)的人類病原菌生長的基本營養(yǎng)，如鏈球菌。特殊的選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基經(jīng)常用于分離特定的微生物類群，尤其在醫(yī)院的實驗室中。

1/7/202313選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基設(shè)計這些培養(yǎng)基是為選擇特定類群的微生物或鑒別兩種菌種時用。選擇培養(yǎng)基含有抑制非目的細菌生長的成分，鑒別培養(yǎng)基是添加某種營養(yǎng)物或／和化學(xué)物質(zhì)，促進所要的微生物生長，使在鑒別培養(yǎng)基平板上兩種不同的微生物的菌落可以區(qū)分開來。

1/7/202314生長的環(huán)境條件

溫度

氧濃度PH

水活度1/7/202315溫度

嗜冷微生物適合于－10℃生活的細菌，最適生長溫度在20℃左右。嗜溫微生物生長溫度在15～45℃之間，最適生長溫度在37℃左右的細菌。嗜熱微生物生長溫度在30～75℃之間，最適生長溫度在55℃，在100℃以上溫度生長，稱為嗜高熱微生物。1/7/202316氧濃度

根據(jù)細菌對氧要求的不同分為好氧菌，厭氧菌，包括專性厭氧菌、兼性厭氧菌、嚴格厭氧菌和耐氧菌微好氧在正常大氣氧濃度20﹪情況下就受到損傷，只能在更低的氧濃度下才能存活。

1/7/202317pH值

嗜堿菌（alkaliphiles）：生長在高pH（8.5～11.5）的微生物。嗜酸菌（acidophiles）：生長在低pH（0～5.5）中的微生物。1/7/202318水活度像所有生物一樣，微生物對周圍環(huán)境的滲透壓是敏感的。低滲透壓時，水將聚集于細胞內(nèi)，高滲透壓時水逸出。

1/7/2023193．微生物生長的測定方法

微生物的生長可用原生質(zhì)的增加、細胞數(shù)目的增加或以代謝活動情況作指標。根據(jù)細胞的干重或某一化學(xué)成分如總氮含量數(shù)量很少，以至誤差很大。最常采用的微生物生長的方法是統(tǒng)計群休數(shù)目。

1/7/202320(1)活菌計數(shù)法

有時一個菌落并非絕對地都是由一個單細胞所長成的，往往兩個或兩個以上相連結(jié)的細胞只長成一個單菌落；有些細胞比其它細胞較早地分裂，分裂的速度也快，于是它就首先出現(xiàn)可見的菌落，而其它的細胞較遲才出現(xiàn)菌落，所以，必須培養(yǎng)足夠長的時間，才能使所有的菌落增至足以肉眼看見的大小，一般至少需要24-48小時，有些生長較緩慢的微生物甚至需要幾天至一星期；此外，要控制培養(yǎng)皿內(nèi)出現(xiàn)的菌落數(shù)不宜過多。1/7/202321（2）計算器法將待檢菌液充分混勻，注入改良紐氏血球計數(shù)板，計數(shù)一定量的菌液中所含菌數(shù)，計算出每毫升所含菌數(shù)。1/7/202322（3）比濁法

據(jù)細菌懸浮液的透光量間接測定細菌的數(shù)量。細菌懸浮液的濃度在一定范圍內(nèi)與光的穿透量成反比，與光密度成正比。對于絲狀真菌的生長率，可以根據(jù)菌絲的生長長度或菌絲增加的重量。

1/7/202323六．微生物生長的控制

使工作者免受他們所研究的微生物傷害和所研究的微生物培養(yǎng)物不受環(huán)境中其他微生物污染的方法稱作無菌（滅菌）技術(shù)。

1/7/2023241．滅菌方法

1/7/202325

方法

有效性

應(yīng)用

濕熱滅菌法

煮沸/蒸氣處理

殺死多數(shù)細菌、真菌的營養(yǎng)細胞和病毒——對芽孢無效

碟子、盆，對熱抗性的器具

高壓滅菌器15磅/英寸2121℃殺死所有的營養(yǎng)細菌和芽孢，滅菌時間長短取決于大存在的微生物數(shù)量

培養(yǎng)基、溶液、器具，任何經(jīng)受熱和壓力的物品

巴斯德消毒法71.7℃15秒液體熱處理但不能殺滅所有細菌。風味改變最少

牛奶、果汁等

1/7/202326方法

有效性

應(yīng)用

間隙滅菌法

三次用90～100℃煮沸10分鐘處理，每次處理間隔24小時第一天殺死營養(yǎng)細胞，在間隔期間任何孢芽萌發(fā)下一次加熱處理時再殺死

不能被高壓滅菌的培養(yǎng)基，但對熱有相對的抗性

干熱滅菌法

灼燒法熱空氣滅菌法

熾熱直接加熱200℃（160～170℃――譯者注）2小時，破壞細胞和芽孢接種環(huán)玻璃器具

1/7/202327方法

有效性

應(yīng)用

過濾除菌濾器――孔徑大小0.22～0.45μm

不能除去病毒

不能加熱處理的液體

輻射

UV線――非電離

不能很好穿透材料

物體表面和空氣滅菌

γ射線――電離穿透能力好

藥物、塑料制品

1/7/202328八．微生物的分離

1/7/202329細菌的純培養(yǎng)

實驗室中通常需要細菌的純培養(yǎng)，即所有的細胞都來自同一個最初的細菌。采用劃線平板法和傾注平板法接種細菌到瓊脂平板以獲得彼此分離的單個細菌細胞。經(jīng)合適溫度培養(yǎng)后，每一個細菌形成一個肉眼可見的菌落，含有相當于109個細菌細胞。

1/7/202330

劃線劃線燒接種環(huán)

燒接種環(huán)滅菌通過本生煤氣燈培養(yǎng)后的單個

菌落

燒接種環(huán)劃線

劃線分離細菌培養(yǎng)物為單菌落的示意圖

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轉(zhuǎn)移1ml轉(zhuǎn)移1ml轉(zhuǎn)移1ml加1ml菌液計數(shù)

10-110-210-310-40.1ml涂布平板計數(shù)