臨床免疫性學(xué)檢驗(yàn)重點(diǎn)、考點(diǎn)總結(jié)

免疫學(xué)檢驗(yàn)1、免疫是機(jī)體識別和排斥抗原性異物的一種生理功能。2、免疫應(yīng)答分為識別階段、活化階段和效應(yīng)階段。3T輔助細(xì)胞及相關(guān)淋巴細(xì)胞的階段。4TB發(fā)生活化、增殖，分化的階段。5、效應(yīng)階段，是漿細(xì)胞分泌特異性抗體，執(zhí)行體液免疫功能。7、免疫系統(tǒng)由免疫器官、免疫細(xì)胞和免疫分子構(gòu)成。8、中樞免疫器官是免疫細(xì)胞發(fā)育為成熟免疫細(xì)胞的場所，它包括骨髓和胸腺。9、成年人和動物所有血細(xì)胞及淋巴細(xì)胞的發(fā)源地是骨髓。10、T細(xì)胞發(fā)育的重要中樞器官是胸腺。11、外周免疫器官及組織包括淋巴結(jié)、脾、黏膜伴隨的淋巴組織。富含血管的最大外周淋巴器官是脾。1213B疫功能的一組球蛋白。1415、所有抗體是球蛋白，但不是所有的球蛋白都是抗體。16、Igg是血清中含量最高的免疫球蛋白，是再次免疫應(yīng)答的主要抗體，也是唯一能通過胎盤的抗體。17、補(bǔ)體的激活途徑有經(jīng)典途徑、替代途徑、MBL途徑。18、正常血清中，含量最高的補(bǔ)體成分是C3、C419物活性常表現(xiàn)為多效性、重疊性、拮抗效應(yīng)和協(xié)同效應(yīng)。20（表位的結(jié)構(gòu)互補(bǔ)性與親和性。21（最小疏水作用力（最強(qiáng)）22定的。23、抗原抗體比例合適時，沉淀物形成快而多，稱為等價帶。24、抗體過量時，稱為前帶；抗原過量，稱為后帶25、單價抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合不出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象。26、85%Nacl溶液或各種緩沖液作為抗原及抗體的稀釋液。28、抗原抗體反應(yīng)一般在pH值為6~9之間進(jìn)行，反應(yīng)溫度為37℃。29、顆粒性抗原包括各種細(xì)胞、細(xì)菌、寄生蟲等。30、半抗原即是在獨(dú)立存在時只具有抗原性而無免疫原性的物質(zhì)。31、半抗原與蛋白質(zhì)載體或高分子聚合物結(jié)合后才有免疫原性。32、常用的蛋白質(zhì)類半抗原載體以牛血白蛋白最常用。33弗氏佐劑（最常用免疫動物）：弗氏不完全佐劑（+液體石蠟苗。34、R（兔）—寬—診斷試劑、H（馬）—窄—免疫治療。35、初次免疫：皮內(nèi)注射；加強(qiáng)免疫/顆粒型抗原，靜脈注射；.寶貴抗原，淋巴結(jié)注射；（第1次、第2次免疫間隔時間為10-20d，第3次為7-10d）。36、IgG類抗體的純化方法有鹽析法、凝膠過濾法、離子交換層析法、親和層析法等。37多點(diǎn)注射法。38（A）胸腺嘧啶核苷（T）稱為HAT培養(yǎng)基。39、凝集反應(yīng)凝集反應(yīng)分為兩個階段，抗原抗體的特異性結(jié)合和出現(xiàn)可見的顆粒凝聚。結(jié)合出現(xiàn)凝集，稱直接凝集反應(yīng)。玻片法凝集法主要用于抗原的定性分析，也用于人類ABO血型的測定。驗(yàn)，輸血時也常用于受體和供體兩者間的交叉配血試驗(yàn)。間接凝集（可溶性抗原）：正向間接（測抗體）；反向間接（測抗原）；間接凝集抑制（抗原、抗體都可測）；協(xié)同凝集（可用于細(xì)菌病毒的直接檢測）間接血凝試驗(yàn)原理是將抗原(或抗體)包被于紅細(xì)胞表面，成為致敏載體，然后與相應(yīng)的抗體(或抗原)結(jié)合，從而使紅細(xì)胞被動的凝聚在一起，出現(xiàn)可見的紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。40、沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)分的第一階段中，抗原抗體發(fā)生特異性結(jié)合，幾秒到幾十秒即可完成，出現(xiàn)肉眼不可見的可溶性小復(fù)合物?？乖^量時，使?jié)岫确炊陆?，光散射亦減少，鉤狀效應(yīng)。當(dāng)反應(yīng)液中抗體過量時，隨著抗原遞增而增加，至抗原、抗體最適比例處達(dá)最高峰，這就是經(jīng)典的海德堡曲線理論。應(yīng)的溶液、增濁劑。免疫球蛋白定量測定常用的方法有單向瓊脂免疫擴(kuò)散法和免疫比濁法。單向擴(kuò)散試驗(yàn)平板法是將抗體或抗血清混入0.9%瓊脂凝膠內(nèi)。擴(kuò)散試驗(yàn)平板法結(jié)果中，沉淀線靠近抗原孔，提示抗體量大。血清蛋白區(qū)帶電泳技術(shù)是檢測蛋白質(zhì)的經(jīng)典分析方法。M免疫電泳(IP)免疫固定電泳(IFE)技術(shù)是區(qū)帶電泳技術(shù)與特異性抗血清的免疫沉淀反應(yīng)相結(jié)合的一種免疫學(xué)分析方法。蛋白。一般在-4℃37℃時又復(fù)溶解。41 41 12542、熒光免疫技術(shù)熒光效率是指熒光物質(zhì)分子將光能轉(zhuǎn)變成熒光的百分率。常用的熒光素有：異硫氰酸（FITC、最常用）；四乙基羅丹明（RB200）；四甲基異硫氰酸羅丹明（TRITC）；藻紅蛋白（R-RE）時間分辨熒光免疫測定以鑭系元素銪(EU3+)4851:16F/P=1.5為宜用于活2.4為宜。免疫熒光顯微技術(shù)實(shí)驗(yàn)中，直接法操作簡便，特異性高，非特?zé)晒馊旧蛩厣佟ｉg接熒光法可用于檢測抗原和抗體。本法的第一抗體為針對抗原的特異抗體。熒光顯微鏡與普通光學(xué)顯微鏡主要結(jié)構(gòu)基本相同，不同之處在于光源、濾光片、聚光器和鏡頭等。43、酶免技術(shù)HRP是目前在酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中應(yīng)用最為廣泛的標(biāo)記用酶。鄰苯二胺被認(rèn)為是HRP雖為敏感的色原底物之一。TMB已成為目前ELISA中應(yīng)用最廣泛的底物。塑料制品一般用聚苯乙烯固相膜免疫測定中常用的膜為玻璃纖維素膜，尼龍，聚偏氟乙烯(PVDF)膜和硝酸纖維素膜等。其中最常用為硝酸纖維素膜（NC）膜。膜中央呈紅色斑點(diǎn)。滌后，滴加金標(biāo)抗抗體，加洗滌液洗滌后，陽性者即在膜中央呈紅色斑點(diǎn)(膠體金聚集)ELISA是用酶標(biāo)記抗原或抗體作標(biāo)志物，用于檢測液體樣品中可溶性抗原或抗體含量的微量分析技術(shù)。發(fā)生改變的原理。均相酶免疫測定主要用于小分子激素和半抗原的測定。ELISA:①原或抗體;②酶標(biāo)記的抗原或抗體;③酶反應(yīng)的底物。至少兩個抗原決定簇的多價抗原。受競爭抗體的特異性和親和力影響。檢測抗體中的捕獲法，又稱反向間接法。主要用于血清中某種抗體亞型成分(如IgM)的測定，目前最常用的是病原體急性感染診斷中的IgM型抗體。44、化學(xué)發(fā)光技術(shù)吖啶酯：最常用的直接化學(xué)發(fā)光劑；電化學(xué)發(fā)光：三聯(lián)吡釕45、生物素親和素酶標(biāo)鏈霉親和素—生物素方法的特點(diǎn):①敏感性高;②低背景著色;③第一抗體工作濃度低;④操作簡便。46、免疫細(xì)胞分離純淋巴細(xì)胞群的采集主要的方法有:①黏附貼壁法;②吸附柱過濾法;③磁鐵吸引法;④Percoll分離液法。外周單個核細(xì)胞的分離的分層液常用：Ficoll（由上到下為：血漿，單個核細(xì)胞，粒，紅）和Percoll（由上至下：死細(xì)胞，單個核細(xì)胞，淋，紅，粒）T、B細(xì)胞和T細(xì)胞亞群的分離常用的方法有:磁性微球分離法、熒光激活細(xì)胞分離儀分離法。分離細(xì)胞的短期保存技術(shù):10%～20%Hankstc-199、RPMI16404℃保存。分離細(xì)胞的長期保存技術(shù):液氮深低溫(-196℃)環(huán)境保存細(xì)胞，加入二甲亞堿作為保護(hù)劑。活力測定最簡便常用的為臺盼藍(lán)染色法。47、淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志物TCD抗原有:①CD2:TNK細(xì)胞表面，因其能與綿羊紅細(xì)胞結(jié)合，又稱綿羊紅細(xì)胞受體。②CD3:是一種多鏈的糖蛋白，表TTTCR-CD3復(fù)合物的重要組成部分。B細(xì)胞活化后轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞，分泌抗體，執(zhí)行體液免疫功能。B細(xì)胞表面膜免疫球蛋白的檢測:SmlgBCD抗原檢測:B細(xì)胞表面存在著、CD19CD20CD22等抗原。NKCD16、CD56CD14樹突狀細(xì)胞是一大類專職抗原遞呈細(xì)胞，主要有兩種來源，即髓系和淋巴系。淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測評價免疫功能的重要指標(biāo)。在評價免疫功能時經(jīng)常采用CD4CD8比值。48、淋巴細(xì)胞功能檢測檢測T細(xì)胞增殖反應(yīng)的方法有:①形態(tài)學(xué)檢查法;②3H-TDR摻入法;③MTT比色法。MTT比色法的敏感性雖不及3H-TDR摻入法，但操作簡便，無放射性污染。T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)：與一定比例的L混合培養(yǎng)，觀察殺傷情況。TPHAT功能。BIg刺激的應(yīng)答能力減弱或缺陷，特異性抗體產(chǎn)生減少或缺如。IgM數(shù)目即為抗體形成細(xì)胞數(shù)。體內(nèi)試驗(yàn)：注入Ag一段時間后檢測Ab物學(xué)功能是介導(dǎo)和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答及炎癥反應(yīng)，其化學(xué)本質(zhì)是蛋白質(zhì)或多肽。促進(jìn)細(xì)胞增殖和抑制細(xì)胞增殖測定法:放射性核素?fù)饺敕?、MTT比色法。49、抗病毒活性測定法主要用于IFN等細(xì)胞因子的檢測。50、流式細(xì)胞儀的工作原理是采用激光作為激發(fā)光源。51、球蛋白IgG、igA、igM、igDIgE5類。IgG是血液和細(xì)胞外液中的主要抗體，也是機(jī)體再次免疫應(yīng)答的主要抗體。IgG4IgG1、igG2、igG3、igG4,正常人體血中含量依次減少，Igg1最多，Igg4最少。IgAlgaIg鏈連接的二聚體和分泌成分組成，是參與黏膜局部免疫的主要抗體。Igm為五聚體，是分子量最大免疫球蛋白，又稱巨球蛋白。IgE是正常人血清中含量最少的免疫球蛋白，IgG最多。M蛋白(MP)是B淋巴細(xì)胞或漿細(xì)胞單克隆異常增殖所產(chǎn)生的一種在氨基酸組成及順序上十分均一的異常單克隆免疫球蛋白。52、補(bǔ)體檢測β球蛋白，Cla、c8y球蛋白，Clsc9α球蛋白。C3含量最高。補(bǔ)體的性質(zhì)不穩(wěn)定，易受各種理化因素的影響，加熱、紫外線照射、機(jī)械振蕩、酸堿和酒精等因素均可破壞補(bǔ)體。經(jīng)典途徑是以抗原抗體復(fù)合物結(jié)合，C1啟動激活的途徑,順序：14235678。MBL途徑是甘露聚糖結(jié)合凝集素(MBL)結(jié)合至細(xì)菌啟動的途徑。C3B因子、D活過程，也稱第二途徑、旁路途徑。補(bǔ)體最主要的活性是溶細(xì)胞作用。50%溶血標(biāo)準(zhǔn)管做CH50實(shí)驗(yàn)時，應(yīng)同時配制50%溶血標(biāo)準(zhǔn)管。嚴(yán)重肝病或營養(yǎng)不良時，可不同程度地引起血清補(bǔ)體水平的下降。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CFT),是將免疫溶血作為指示系統(tǒng)，用以檢測另一反應(yīng)系統(tǒng)中抗原或抗體的傳統(tǒng)方法。53、細(xì)菌性感染性疾病檢測化膿性鏈球菌是致病力最強(qiáng)的一種鏈球菌，能產(chǎn)生多種毒素(鏈球菌溶血素O和S)、M蛋白、脂磷壁酸、鏈激酶和透明質(zhì)酸等致病因子，最常用的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢查是抗鏈球菌溶血素"O"(ASO)檢測。鏈球菌溶血素"O"(ASO)是一種具有溶血活性的蛋白質(zhì)，能溶解人類和一些動物的紅細(xì)胞，具有一定的抗原性，能刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)抗體。肥達(dá)反應(yīng)，傷寒沙門菌有菌體（O)抗原、鞭毛(H)抗原和表面(Vi)抗原，三者的抗體均為非保護(hù)性抗體。由于(O)與(H)抗原的抗原性較強(qiáng)故常用于做血清凝集試驗(yàn)(肥達(dá)反應(yīng))輔助臨床診斷。產(chǎn)生凝集時抗體效價≥1:80為陽性，或雙份血清效價呈倍以上增長，結(jié)合流行病學(xué)資料可以作出診斷。高滴度的抗PPD抗體可作為結(jié)核病輔助診斷的手段。曲霉感染以肺部病變最為常見。人輪狀病毒(HRV)是引起嬰幼兒胃腸炎和腹瀉的主要病毒病原體，也是能引起較大兒童及成人腹瀉的主要病原體。白念珠菌是臨床標(biāo)本中最常見的真菌感染。54、病毒感染性疾病檢測甲型肝炎病毒(HAV)是甲型肝炎的病原體，主要經(jīng)糞-口途徑傳播感染。含有前S1的蛋白主要存在于Dame顆粒和管型顆粒上。HDVHBVHBV同時侵入肝內(nèi)才可能造成感染。55、超敏反應(yīng):I型超敏反應(yīng);Ⅱ型超敏反應(yīng)，即細(xì)胞毒型或細(xì)胞溶解型超敏反應(yīng);Ⅲ型超敏反應(yīng)，即免疫復(fù)合物型或血管炎型超敏反應(yīng);IⅣ型超敏反應(yīng)，即遲發(fā)型超敏反應(yīng)。I型超敏反應(yīng)主要由特異性Ig抗體介導(dǎo)產(chǎn)生，IgE+速發(fā)型+速度最快+無補(bǔ)體，肥大、嗜酸、嗜堿。II型超敏反應(yīng)分為全身性與局部性超敏反應(yīng)兩種。全身超敏反應(yīng)又有藥物過敏性休克、血清過敏性休克。局部超敏反應(yīng)又有呼吸道過敏反應(yīng)、消化道過敏反應(yīng)、皮膚過敏反應(yīng)。免疫學(xué)檢查：皮膚試驗(yàn)（挑刺）Ag距離2.5-5.0cm（鹽酸組胺）；2.挑刺試驗(yàn)（安全、假陽性少、敏感度低）參與ⅡIgGIgMgA，細(xì)胞毒/I。常見Ⅱ型超敏反應(yīng)性疾病有:輸血反應(yīng)、新生兒溶血癥等。直接Coombs試驗(yàn)即可直接監(jiān)測紅細(xì)胞表面有無不完全抗體的試驗(yàn)稱為直接Coombs實(shí)驗(yàn)。CoombsCoombsi試驗(yàn)。常見Ⅲ型超敏反應(yīng)性疾病局部免疫復(fù)合物病有兩種反映:Arthus反應(yīng)、類Arthus反應(yīng)。常見疾?。貉宀?、鏈球菌感染后腎小球腎炎、RA、SLE常見Ⅳ型超敏反應(yīng)性疾病:感染性遲發(fā)型超敏反應(yīng)、無補(bǔ)體、無IG、接觸性皮炎、移植排斥反應(yīng)。Ⅳ型超敏反應(yīng)的常見免疫學(xué)檢測是Ⅳ型超敏反應(yīng)皮膚試驗(yàn)。結(jié)核菌素皮試，是檢測Ⅳ型超敏反應(yīng)典型的例子。斑貼試驗(yàn)，主要用于檢測IⅣ型超敏反應(yīng)，尋找接觸性皮炎的變應(yīng)原。56、自身免疫性疾病與自身抗原形成主要相關(guān)的因素如下:隱蔽抗原的釋放、自身成分的改變、共同抗原引發(fā)的交叉反應(yīng)。干燥綜合征(SS):SSA/ROSSBLA抗體通常為陽性。硬皮病:SCJ-70PSS的特異性抗體。目前最常用間接免疫熒光法(IF)ANA篩選試驗(yàn)。ANA:SmSLESLE的血清標(biāo)志抗體。PD（混合型結(jié)締組織病）的診斷標(biāo)準(zhǔn)?？筣o-1抗體最常見于多發(fā)性肌炎(PM),故又稱為PM-1抗體?？筍C1-70抗體幾乎僅在進(jìn)行性系統(tǒng)性硬皮病患者中檢出。類風(fēng)濕因子(RF)是一種抗人或動物Igg分子Fc片段抗原決定簇的抗體，是以變性Igg為靶抗原的自身抗體?？笴CP抗體主要為IgG類抗體。57、免疫增殖性疾病多發(fā)性骨髓瘤可以出現(xiàn)血沉增快，血中檢出M蛋白和不明原因的蛋白尿。巨球蛋白血癥是以分泌lgm的漿細(xì)胞惡性增殖為病理基礎(chǔ)的疾病。k/γk/γ4:1或小于1:1kγM蛋白血癥。M一的免疫球蛋白。58、免疫缺陷性疾病腫瘤+感染性疾病+營養(yǎng)不良+免疫抑制療法是引起繼發(fā)性免疫缺陷病最常見的原因。HV抗原檢測常用ELISA法檢測HIV的核心抗原p24,HIV抗體檢測:HⅣ2~