FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件

FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用基因科技（上海）有限公司FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用基因科技（上海）有限公司一、如何正確選擇探針二、如何正確使用探針三、臨床應(yīng)用—胃癌

一、如何正確選擇探針一、如何正確選擇探針一、如何正確選擇探針FISH探針?lè)N類

染色體計(jì)數(shù)探針（CEP)位點(diǎn)特異性標(biāo)識(shí)分子（LSI）端粒探針染色體結(jié)構(gòu)著絲粒短臂長(zhǎng)臂-端粒(TTAGGG)n特定區(qū)域或基因端粒(TTAGGG)nFISH探針?lè)N類染色體計(jì)數(shù)探針（CEP)染色體結(jié)構(gòu)著絲粒短FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件HicksDG,TubbsRR.AssessmentoftheHER2statusinbreastcancerbyfluorescenceinsituhybridization:atechnicalreviewwithinterpretiveguidelines.HumPathol.2005Mar;36(3):250-61.RatioofHER2genetoChromosome17copynumberRatio<2;HER-2geneamplificationnotobservedRatio2;HER-2geneamplificationobservedPathVysionDNAProbesLSIHER-2/neu&CEP17~225.7kbHicksDG,TubbsRR.Assessment探針設(shè)計(jì)檢測(cè)遺傳物質(zhì)的得與失在單個(gè)細(xì)胞核內(nèi)針對(duì)某個(gè)特定靶分子檢測(cè)到多于或少于2個(gè)探針信號(hào)被認(rèn)為異常<<正常異常異常探針設(shè)計(jì)檢測(cè)遺傳物質(zhì)的得與失<<正常異常異常探針設(shè)計(jì)-雙色單融探針（DC/SF）染色體、基因重排檢測(cè)—已知斷點(diǎn)的平衡易位9正常異常BCRABLBCR22探針設(shè)計(jì)-雙色單融探針（DC/SF）染色體、基因重排檢使用指導(dǎo)存在假陽(yáng)性如一個(gè)細(xì)胞中信號(hào)疊加。探針設(shè)計(jì)-雙色單融探針（DC/SF）使用指導(dǎo)探針設(shè)計(jì)-雙色單融探針（DC/SF）探針設(shè)計(jì)-雙色額外信號(hào)探針（ES）很好地克服了雙色單融出現(xiàn)的假陽(yáng)性探針設(shè)計(jì)-雙色額外信號(hào)探針（ES）很好地克服了雙色單融出探針設(shè)計(jì)-雙色雙融探針（DC/DF）探針設(shè)計(jì)-雙色雙融探針（DC/DF）

使用指導(dǎo)

最敏感的探針（假陽(yáng)性<1%）可用來(lái)檢測(cè)微小殘留性疾病不足是對(duì)融合信號(hào)不能區(qū)分使用指導(dǎo)FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件二、如何正確使用探針

二、如何正確使用探針FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件CE認(rèn)證在歐洲，用于臨床診斷的醫(yī)療器械是需要的CE（CONFORMITEEUROPEENNE）認(rèn)證的。近年來(lái)，在歐洲經(jīng)濟(jì)區(qū)（歐洲聯(lián)盟、歐洲自由貿(mào)易協(xié)會(huì)成員國(guó)，瑞士除外）銷售的商品，CE標(biāo)志的使用越來(lái)越多，CE標(biāo)志加貼的商品表示其符合安全、衛(wèi)生、環(huán)保和消費(fèi)者保護(hù)等一系列歐洲指令所要表達(dá)的要求。目前，Abbott（Vysis）大約有336種FISH探針通過(guò)CE認(rèn)證，并且這些探針具有廣泛的文獻(xiàn)支持（在產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中列舉這些出文獻(xiàn)），這些文獻(xiàn)都客觀證明了VysisFISH探針在實(shí)際臨床上的應(yīng)用的成功案例。例如P53探針，Abbott（Vysis）搜集了7篇相關(guān)文獻(xiàn)證明該探針在不同情況下的臨床應(yīng)用的成功案例。再如應(yīng)用于產(chǎn)后診斷的DiGeorge探針，在其說(shuō)明書(shū)里面例舉了8篇相關(guān)文獻(xiàn)能證明Abbott（Vysis）探針成功診斷新生兒中的DiGeorge綜合征的成功案例。CE認(rèn)證AbbottMolecular臨床產(chǎn)品AbbottMolecular臨床產(chǎn)品三、臨床應(yīng)用三、臨床應(yīng)用肺癌

肺癌FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件少突膠質(zhì)瘤

少突膠質(zhì)瘤FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件Vysis1p36/1q25and19q13/19p13FISHProbeKitHunanMDTMeeting26Aug201436CompanyConfidential

?2014Abbott正常缺失Vysis1p36/1q25and19q13/19p1惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤包括:WHOIII級(jí)–間變性星形細(xì)胞瘤，間變性少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤，間變混合性膠質(zhì)細(xì)胞瘤WHOIV級(jí)–多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤是高度惡性的膠質(zhì)瘤，占近15％的原發(fā)性腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤和54%的所有神經(jīng)膠質(zhì)瘤1,2.高度侵襲性,幾乎無(wú)法治愈，患者迅速死亡高度未分化因不可預(yù)知的化學(xué)敏感性，故具有治療挑戰(zhàn)性多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者的預(yù)后非常差32年總生存期:26%4年總生存期:12%37NationalComprehensiveCancerNetwork.Availableat:.CentralBrainTumorRegistryoftheUnitedStates..StuppR,etal.NEnglJMed.2005;352:987-996.惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤包括:37NationalC形態(tài)學(xué)上，小細(xì)胞型膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和間變性少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤都屬中等細(xì)胞密度，形態(tài)單一的膠質(zhì)瘤；細(xì)胞膜清楚，胞質(zhì)透亮；明顯活躍的核分裂、微血管增生或顯著壞死表明腫瘤小細(xì)胞型膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和間變性少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤的鑒別事關(guān)重要因?yàn)檫@兩種腫瘤的臨床表現(xiàn)和治療意義極其不同一些分子特征可用于鑒別小細(xì)胞型膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和間變性少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤：膠質(zhì)母細(xì)胞瘤小細(xì)胞型幾乎普遍缺失10號(hào)染色體短臂60%–70%的小細(xì)胞型膠質(zhì)母細(xì)胞瘤帶有EGFR基因擴(kuò)增相反的，間變性少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤幾乎無(wú)10q缺失和EGFR基因擴(kuò)增。大約60%的間變性少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤帶有1p/19q雜合性缺失.形態(tài)學(xué)上，小細(xì)胞型膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和間變性少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤都屬中等VysisEGFR/CEP7FISHProbeKitHunanMDTMeeting26Aug201439CompanyConfidential

?2014Abbott正常擴(kuò)增VysisEGFR/CEP7FISHProbe10號(hào)染色體短臂缺失10qLoss10號(hào)染色體短臂缺失在源發(fā)和繼發(fā)性多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤里其中一個(gè)重要的特征10號(hào)染色體短臂缺失在間變性星形細(xì)胞瘤和多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤指示不良預(yù)后，生存期較短PTEN基因位于10號(hào)染色體短臂(10q23),其多肽具有對(duì)脂質(zhì)和蛋白質(zhì)的磷酸酶活性，也是其中一個(gè)在10號(hào)染色體短臂缺失與多形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤相關(guān)的候選基因在兒童多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤族群里10號(hào)染色體短臂缺失是唯一于患者不良預(yù)后相關(guān)的記物。EGFR基因擴(kuò)增,1p/19q雜合性缺失和p16基因缺失并不能提示兒童病患的預(yù)后相反，在成人病患里并不提供獨(dú)立的預(yù)后信息HunanMDTMeeting26Aug201440CompanyConfidential

?2014AbbottFallonetal.JNeuropatholExpNeurol2004;63:314322.Horbinskietal.BrainPathology2011;21:57–73Nikiforova&Hamilton.ArchPatholLabMed.2011;135:558–56810號(hào)染色體短臂缺失10qLoss10號(hào)染色體短EGFR擴(kuò)增

EGFR基因擴(kuò)增在神經(jīng)膠質(zhì)瘤里只適用于鑒別診斷

。這基因改變不是個(gè)獨(dú)立的預(yù)后標(biāo)記物。EGFR基因擴(kuò)增是與多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤發(fā)病的相關(guān)的主要基因。EGFR

擴(kuò)增基本上是GBM的特殊病癥，微觀標(biāo)簽很容易認(rèn)出，來(lái)自GBM浸潤(rùn)邊緣的組織有時(shí)可以顯示腫瘤的本質(zhì)，即使組織學(xué)標(biāo)準(zhǔn)不足以指定為WHOIV級(jí)。

HunanMDTMeeting26Aug201441CompanyConfidential

?2014AbbottFallonetal.JNeuropatholExpNeurol2004;63:314322.Horbinskietal.BrainPathology2011;21:57–73Nikiforova&Hamilton.ArchPatholLabMed.2011;135:558–568EGFR擴(kuò)增EGFR基因擴(kuò)增在神經(jīng)膠質(zhì)瘤里只適用于鑒別CDKN2A,p16CDKN2A基因是位于9號(hào)染色體長(zhǎng)臂上,9p21,的一個(gè)腫瘤抑制基因CDKN2A純合性缺失可見(jiàn)于11%II級(jí),47%III級(jí),and60%IV級(jí)腫瘤1

CDKN2A基因的純合性缺失被認(rèn)為是一種不良預(yù)后因子。18%原發(fā)性腦膠質(zhì)瘤與43%復(fù)發(fā)性腦膠質(zhì)瘤中p16缺失的發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步證實(shí)了其與腫瘤進(jìn)展的相關(guān)性1HunanMDTMeeting26Aug201442CompanyConfidential

?2014AbbottFallonetal.JNeuropatholExpNeurol2004;63:314322.Horbinskietal.BrainPathology2011;21:57–73Nikiforova&Hamilton.ArchPatholLabMed.2011;135:558–568CDKN2A,p16CDKN2A基因是位于9號(hào)染色體長(zhǎng)新靶向治療?ROS1基因重排陽(yáng)性腫瘤對(duì)克唑替尼crizotinib(賽可瑞XALKORI)有顯著的治療活性ROS1是否成為膠質(zhì)母細(xì)胞瘤里的新的靶向治療的靶點(diǎn)？HunanMDTMeeting26Aug201443CompanyConfidential

?2014Abbott新靶向治療?ROS1基因重排陽(yáng)性腫瘤對(duì)克唑替尼crizo肉瘤

肉瘤肉瘤簡(jiǎn)介骨和軟組織肉瘤是一組罕見(jiàn)且異質(zhì)性的腫瘤。在成人里占所有腫瘤的少于5%，在兒童里卻占大約10%1.按照腫瘤細(xì)胞來(lái)源，這些腫瘤可分為兩大類1,2:原發(fā)于骨骨肉瘤Osteosarcoma(硬骨部分中形成）軟骨肉瘤Chondrosarcoma(軟骨中形成）

尤因氏肉瘤Ewing‘ssarcoma(骨髓組織中形成）原發(fā)于其他的組織，也稱為i軟組織肉瘤纖維肉瘤Fibrosarcomas和惡性纖維組織細(xì)胞瘤

（在纖維組織中形成）

脂肪肉瘤Liposarcomas平滑肌瘤Leiomyomas和橫紋肌肉瘤rhabdomyosarcomas(原發(fā)于肌肉）滑膜肉瘤Synovialsarcoma（在關(guān)節(jié)周圍的組織，通常是膝蓋關(guān)節(jié)周圍的組織中形成）HunanMDTMeeting26Aug201445CompanyConfidential

?2014AbbottOsuna&deAlava.ReviewsonRecentClinicalTrials2009;4:12-26.Antonescu.Histopathology2006;48:13-21.肉瘤簡(jiǎn)介骨和軟組織肉瘤是一組罕見(jiàn)且異質(zhì)性的腫瘤。在成人里占所肉瘤里的遺傳異常肉瘤很難診斷，亞型往往難以區(qū)分。然而準(zhǔn)確診斷對(duì)評(píng)估預(yù)后以及選擇適當(dāng)?shù)寞煼ㄊ种匾?/p>

基于組織切片鏡檢的形態(tài)學(xué)診斷仍是肉瘤診斷的金標(biāo)準(zhǔn)輔助技術(shù)對(duì)于支持形態(tài)學(xué)診斷非常有用，尤其是采用FISH或基于PCR方法的分子檢測(cè)。

所有肉瘤約有1/3具有特定復(fù)發(fā)性染色體易位的特征，從而導(dǎo)致高度特異性基因融合，采用上述分子檢測(cè)方法很容易檢測(cè)。

這些易位往往是唯一的細(xì)胞遺傳學(xué)異?，F(xiàn)象，且最可能具有致病重要性HunanMDTMeeting26Aug201446CompanyConfidential

?2014AbbottAntonescu.Histopathology2006;48:13-21.NCCNClinicalPracticeGuidelinesinOncology.SoftTissueSarcomas,version2.2014.Osuna&deAlava.ReviewsonRecentClinicalTrials2009;4:12-26.肉瘤里的遺傳異常肉瘤很難診斷，亞型往往難以區(qū)分。然而準(zhǔn)確診斷肉瘤的分子診斷以下情況下應(yīng)考慮分子診斷:在免疫組化或超微結(jié)構(gòu)研究結(jié)果未有定論是良性和惡性腫瘤時(shí)的鑒別診斷例如，F(xiàn)US易位檢測(cè)可區(qū)別低級(jí)別纖維粘液樣肉瘤和神經(jīng)束膜瘤或其他良性纖維性或神經(jīng)性細(xì)胞增生惡性類型的鑒別診斷例如，DDIT3易位可用于鑒別兒童里的粘液樣脂肪肉瘤和脂肪母細(xì)胞瘤

驗(yàn)證異常的臨床表現(xiàn)（例如，異常年齡組或腫瘤部位）或非典型的免疫組化結(jié)果例如，具有典型尤因氏肉瘤表型的腫瘤如果發(fā)生在老年人身上，或者如果存在于內(nèi)臟部位或不僅僅在病灶部位表達(dá)，則可能需要分子確認(rèn)HunanMDTMeeting26Aug201447CompanyConfidential

?2014AbbottAntonescu.Histopathology2006;48:13-21.NCCNClinicalPracticeGuidelinesinOncology.SoftTissueSarcomas,version2.2014.Osuna&deAlava.ReviewsonRecentClinicalTrials2009;4:12-26.肉瘤的分子診斷以下情況下應(yīng)考慮分子診斷:HunanMDTHunanMDTMeeting26Aug201448CompanyConfidential

?2014AbbottAntonescu.Histopathology2006;48:13-21.FOXO1EWSR1ALKSS18FUS/DDIT3HunanMDTMeeting48CompanyCon粘液樣腫瘤的鑒別

粘液樣軟組織腫瘤的鑒別診斷通常較困難，原因是有許多腫瘤有重疊的組織學(xué)特征，尤其當(dāng)評(píng)估基于較小的活檢標(biāo)本時(shí)

因這些腫瘤具有復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的潛在差異，故正確分類十分重要，手術(shù)前診斷可能影響手術(shù)和新輔助療法不同的復(fù)發(fā)性遺傳變異與不同的粘液樣腫瘤相關(guān)，即:骨骼外粘液樣軟骨肉瘤和粘液樣脂肪肉瘤中的EWSR1基因重排；

低級(jí)別纖維粘液樣肉瘤和粘液樣脂肪肉瘤中的FUS基因重排；以及粘液樣脂肪肉瘤中的DDIT3(之前稱為CHOP)基因重排，F(xiàn)US作為伙伴基因。

HunanMDTMeeting26Aug201449CompanyConfidential

?2014AbbottDowns-Kellyetal.AmJSurgPathol2008;32:8–13.Wangetal.ModernPathology2008;21:1303–1310.Jainetal.IntJClinExpPathol2010;3(4):416-429.粘液樣腫瘤的鑒別粘液樣軟組織腫瘤的鑒別診斷通常較困難，原粘液樣腫瘤的鑒別FUS-DDIT3重排是粘液樣脂肪肉瘤的高靈敏度和特異性特征。形態(tài)相似的腫瘤里（如，有大量粘液樣變化的分化良好的脂肪肉瘤或粘液樣纖維肉瘤）未有檢測(cè)到FUS-DDIT3重排基因在很少的粘液樣脂肪肉瘤中也可檢測(cè)到另一種易位，t(12;22)(q13;q12)，既是EWSR1-DDIT3重排

多數(shù)骨骼外粘液樣軟骨肉瘤病例攜帶t(9;22)(q31;q12)EWSR1-NR4A3融合基因。其他涉及NR4A3基因的變體之前有人曾鑒定，包括t(9;17)(q31;q12)TAF15-NR4A3融合基因和t(9;15)(q31;q21)TCF12-NR4A3融合基因HunanMDTMeeting26Aug201450CompanyConfidential

?2014AbbottDowns-Kellyetal.AmJSurgPathol2008;32:8–13粘液樣腫瘤的鑒別FUS-DDIT3重排是粘液樣脂肪肉瘤的高VysisEWSR1BreakApartFISHProbeKitHunanMDTMeeting26Aug201451CompanyConfidential

?2014Abbott正常的EWSR1基因EWSR1基因重排VysisEWSR1BreakApartFISHPVysisDDIT3BreakApartFISHProbeKitHunanMDTMeeting26Aug201452CompanyConfidential

?2014Abbott正常的DDIT3基因DDIT3基因重排VysisDDIT3BreakApartFISHPVysisFUSBreakApartFISHProbeKitHunanMDTMeeting26Aug201453CompanyConfidential

?2014Abbott正常的FUS基因

FUS基因重排Downs-Kellyetal.AmJSurgPathol2008;32:8–13VysisFUSBreakApartFISHPro透明細(xì)胞肉瘤與惡性黑色素瘤的鑒別診斷透明細(xì)胞肉瘤是一種罕見(jiàn)而獨(dú)特的腫瘤，好發(fā)于青少年和青年四肢遠(yuǎn)端的肌腱和腱膜中。透明細(xì)胞肉瘤很少發(fā)生在兒童人群，所報(bào)告的病例中只有2%發(fā)生在不到10歲的兒童身上。透明細(xì)胞肉瘤也稱為軟組織黑色素瘤，原因是這種腫瘤顯示的表型特征與惡性黑色素瘤相似，包括存在黑色素，具有黑素體的超微結(jié)構(gòu)以及表達(dá)S-100蛋白質(zhì)和黑色素瘤相關(guān)標(biāo)志物的免疫表型。透明細(xì)胞肉瘤的鑒別診斷包括各種發(fā)生在成人和兒童身上的上皮腫瘤和間質(zhì)腫瘤。鑒別診斷包括原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性黑色素瘤、細(xì)胞型藍(lán)痣、惡性外周神經(jīng)鞘腫瘤（MPNST）、滑膜肉瘤(SS)、纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤(RMS)(尤其是腺泡狀RMS)、平滑肌肉瘤、顆粒細(xì)胞瘤、腺泡狀軟組織肉瘤(ASPS)，等等。多數(shù)透明細(xì)胞肉瘤病例中能檢測(cè)到特定的復(fù)發(fā)性染色體易位t(12;22)(q13;q12)或所產(chǎn)生的22q12上EWSR1基因和12q13上ATF1基因的融合基因。HunanMDTMeeting26Aug201454CompanyConfidential

?2014AbbottJainetal.IntJClinExpPathol2010;3(4):416-429.Pateletal.ModernPathology2005;18:1585–1590.Songetal.PathologyInternational2010;60:608–613.透明細(xì)胞肉瘤與惡性黑色素瘤的鑒別診斷透明細(xì)胞肉瘤是一種罕見(jiàn)而橫紋肌肉瘤的分子診斷橫紋肌肉瘤

是兒童和小于15歲的青少年最常見(jiàn)的軟組織肉瘤通常以肌肉塊形式出現(xiàn)在四肢、鼻竇或腹膜后腔橫紋肌肉瘤不同的組織學(xué)亞型包括腺泡狀（alveolarrhabdomyosarcoma）、胚胎性（embryonalrhabdomyosarcoma）和多形性(pleomorphicrhabdomyosarcoma).胚胎性橫紋肌肉瘤是最常見(jiàn)的橫紋肌肉瘤，占大約70%，最常出現(xiàn)在頭部和頸部區(qū)域以及泌尿生殖道；腺泡狀橫紋肌肉瘤占大約21%，最常出現(xiàn)在四肢胚胎性和腺泡狀橫紋肌肉瘤的臨床表現(xiàn)極其不同。胚胎性腫瘤有較良的預(yù)后一些特異性的遺傳變異可用于鑒別腺泡狀橫紋肌肉瘤，與其與FOXO1基因重排有關(guān)：t(2;13)(q35:q14)PAX3/FOXO1A（~70%ofARMS）t(1;13)(p36;q14)PAX7/FOXO1A（~10%–15%ofARMS）或其他變異HunanMDTMeeting26Aug201455CompanyConfidential

?2014AbbottDowns-Kellyetal.DiagnMolPathol2009;18:138–143.Jainetal.IntJClinExpPathol2010;3(4):416-429.Wexler&Ladanyi.JClinOncol

2010;28:132126-2128.橫紋肌肉瘤的分子診斷橫紋肌肉瘤是兒童和小于15歲的青少年最MolecularDiagnosisofRhabdomysarcomasPAX/FOXO1陽(yáng)性ARMS的患者(ARMSp)預(yù)后明顯更差。(A)總體生存期；(B)無(wú)事件生存期。融合基因陰性ARMS(ARMSn)和胚胎性RMS(ERMS)患者的生存期無(wú)明顯不同ARMSp的轉(zhuǎn)移頻率百分比明顯高于ARMSn或ERMS.HunanMDTMeeting26Aug201456CompanyConfidential

?2014AbbottWiliamsonetal.JClinOncol2010;28:2151-2158MolecularDiagnosisofRhabdomVysisFOXO1BreakApartFISHProbeKitHunanMDTMeeting26Aug201457CompanyConfidential

?2014Abbott正常的FOXO1基因FOXO1基因重排Downs-Kellyetal.DiagnMolPathol2009;18:138–143.VysisFOXO1BreakApartFISHP炎性肌纖維母細(xì)胞瘤與ALK基因重排炎性肌纖維母細(xì)胞瘤(IMT)是一種獨(dú)特的間質(zhì)瘤，其特征在于梭形細(xì)胞增生與炎性浸潤(rùn)，好發(fā)于兒童和年輕人身上。通常出現(xiàn)在腹部，尤其是腹膜后腔或腸系膜，可能單發(fā)或多發(fā)，很少出現(xiàn)在其他軟組織部位。約50%ofIMT涉及染色體2p23上的ALK基因重排。報(bào)道也曾描述ALK的非整倍性-在無(wú)重排情況下拷貝數(shù)增多。

ALK的始終介入而且可與多個(gè)不同基因發(fā)生重排，意味著ALK組成性激活在IMT形成中的關(guān)鍵作用，以及這種激活中嵌合融合蛋白同源二聚作用機(jī)制的重要性ALK基因重排目前已是靶向治療其中一個(gè)重要的靶點(diǎn)HunanMDTMeeting26Aug201458CompanyConfidential

?2014AbbottButrynskietal.NEnglJMed.2010;363:1727–1733.Fisher.VirchowsArch2010;456:153–166.Jainetal.IntJClinExpPathol2010;3(4):416-429.炎性肌纖維母細(xì)胞瘤與ALK基因重排炎性肌纖維母細(xì)胞瘤(脂肪肉瘤中的MDM2分化良好脂肪肉瘤/非典型性脂肪瘤和去分化型脂肪肉瘤是老年人中最常見(jiàn)的惡性軟組織腫瘤。分化良好脂肪肉瘤/非典型性脂肪瘤和去分化型脂肪肉瘤可能很難與良性脂肪瘤和其他高級(jí)別肉瘤區(qū)分，尤其在缺乏分化良好脂肪肉瘤區(qū)域的穿刺活檢標(biāo)本上脂肪肉瘤內(nèi)常見(jiàn)環(huán)形染色體和巨大標(biāo)記染色體。這些異常的染色體是由12q13-15區(qū)域的擴(kuò)增組成，導(dǎo)致一些基因的擴(kuò)增，包括最顯著的MDM2擴(kuò)增MDM2通過(guò)降解TP53在控制細(xì)胞周期和腫瘤生成中起著重要的作用。HunanMDTMeeting26Aug201459CompanyConfidential

?2014AbbottSirventetal.AmJSurgPathol2007;31:1476–1489.Weaveretal.ModernPathology2008;21:943–949.脂肪肉瘤中的MDM2分化良好脂肪肉瘤/非典型性脂肪瘤和去分

VysisMDM2/CEP12

FISHProbeKitHunanMDTMeeting26Aug201460CompanyConfidential

?2014Abbott正常擴(kuò)增

VysisMDM2/CEP12

FISHProbe脂肪肉瘤中的MDM2HunanMDTMeeting26Aug201461CompanyConfidential

?2014AbbottWeaveretal.ModernPathology2008;21:943–949.脂肪肉瘤中的MDM2HunanMDTMeeting61滑膜肉瘤的分子診斷滑膜肉瘤占了5–14%軟組織肉瘤，通常發(fā)生在年輕人的四肢。

滑膜肉瘤屬于高度侵襲性腫瘤，主要轉(zhuǎn)移到肺部。約90%滑膜肉瘤具有t(X;18)(p11.2;q11.2)的特征，這是因18號(hào)染色體上的SS18基因與X染色體上的SSX基因（SSX1、SSX2或SSX4）發(fā)生融合。

尤因氏肉瘤和低分化小細(xì)胞型滑膜肉瘤是難以鑒別。二者均表達(dá)CD99但缺乏細(xì)胞角蛋白。以EWSR1和SS18基因的分子診斷有助于區(qū)分這兩種腫瘤HunanMDTMeeting26Aug201462CompanyConfidential

?2014AbbottAmaryetal.ModernPathology2007;20:482–496.Jainetal.IntJClinExpPathol2010;3(4):416-429.滑膜肉瘤的分子診斷滑膜肉瘤占了5–14%軟組織肉瘤，通常發(fā)VysisSS18BreakApartFISHProbeKitHunanMDTMeeting26Aug201463CompanyConfidential

?2014Abbott正常的SS18基因SS18基因重排VysisSS18BreakApartFISHPrFISH在淋巴瘤里的臨床應(yīng)用64FISH在淋巴瘤里的臨床應(yīng)用64非霍奇金淋巴瘤(NHL)NHL的病理亞型超過(guò)30種B細(xì)胞來(lái)源占大約90%，其余為T/NK細(xì)胞來(lái)源NHL好發(fā)于淋巴結(jié)、胃腸相關(guān)淋巴組織等，亦可侵及骨髓和外周血大部分NHL都具有特定的遺傳學(xué)異常最新WHO分類明確指出各類亞型相關(guān)遺傳學(xué)異常，并作出說(shuō)明其在診斷、預(yù)后方面的意義HunanMDTMeeting26Aug201465CompanyConfidential

?2014Abbott非霍奇金淋巴瘤(NHL)NHL的病理亞型超過(guò)30種Hun小細(xì)胞B-NHL臨床侵襲性相對(duì)較低，但目前治愈率較低通常包括濾泡性淋巴瘤FL（22%）套細(xì)胞淋巴瘤（6%）B-CLL/SLL（6%）淋巴漿細(xì)胞性淋巴瘤（6%）邊緣區(qū)淋巴瘤(NMZL,MALT,splenic,cutaneous)（5%）HunanMDTMeeting26Aug201466CompanyConfidential

?2014Abbott小細(xì)胞B-NHL臨床侵襲性相對(duì)較低，但目前治愈率較低HunFISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件小細(xì)胞B-NHLHunanMDTMeeting26Aug201468CompanyConfidential

?2014AbbottCLLMCLFL免疫表型CD5(+)CD23(+)CD5(+)CD23(-)CD5(-)CD10(+)Bcl-2(+)Bcl-6(+)遺傳學(xué)異常t(11;14)IGH/CCDN1(-)t(14;18)IGH/BCL2(-)t(11;14)IGH/CCDN1(+)t(14;18)IGH/BCL2(-)t(11;14)IGH/CCDN1(-)t(14;18)IGH/BCL2(+)小細(xì)胞B-NHLHunanMDTMeeting68Co常見(jiàn)淋巴瘤—FLFL占NHL22–35%，僅次于DLBCL80–90%FL患者存在t(14;18)(q32;q21)

IGH/BCL2易位t(14;18)陰性患者通常存在BCL6基因重排(ABR)FLI~III級(jí)，惰性→高侵襲性FISH在FL診斷中應(yīng)用：形態(tài)學(xué)不典型-濾泡結(jié)構(gòu)不清或消失免疫表型不典型-

CD10(-)，Bcl2(-)樣本量不足（如穿刺等）-無(wú)法觀察到明確的濾泡結(jié)構(gòu)HunanMDTMeeting26Aug201469CompanyConfidential

?2014Abbott常見(jiàn)淋巴瘤—FLFL占NHL22–35%，僅次套細(xì)胞淋巴瘤(MCL)

MCL占NHL~6%50-70%病例伴有t(11;14)(q13;q32)CCND1(CyclinD1)易位t(11;14)(q13;q32)通常涉及cyclinD1(CCND1/PRAD1/BCL1)基因和IGH基因CCND1過(guò)表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞周期調(diào)控紊亂，細(xì)胞過(guò)度增殖傳統(tǒng)細(xì)胞遺傳學(xué)方法只能檢出70-75%t(11;14)(q13;q32)，但FISH方法可檢出率為80-100%t(11;14)(q13;q32)可用于CLL的鑒別診斷–

CLL，t(11;14)陰性HunanMDTMeeting26Aug201470CompanyConfidential

?2014Abbott套細(xì)胞淋巴瘤(MCL)MCL占NHL~6%Hunan案例63歲，男性，多發(fā)淺表淋巴結(jié)腫大形態(tài)學(xué)濾泡結(jié)構(gòu)殘存細(xì)胞形態(tài)均一，染色質(zhì)深染，生發(fā)中心樣免疫表型CD20(+),CD79a(+)CD10(+),Bcl-6(+)

（FL？）CD5(+),CD23(-),CyclinD1(+)（MCL？）HunanMDTMeeting26Aug201471CompanyConfidential

?2014Abbott案例63歲，男性，多發(fā)淺表淋巴結(jié)腫大HunanMDT侵襲性B細(xì)胞淋巴瘤HunanMDTMeeting26Aug201472CompanyConfidential

?2014Abbott臨床表現(xiàn)和病理特征多樣WHO2008分類列出多種亞型Jaffe&Pittaluga.HematologyAmSocHematolEduc

Program.2011;2011:506-14.WHO/NCCN指南相關(guān)的遺傳學(xué)特征：BCL2重排BCL6重排MYC重排侵襲性B細(xì)胞淋巴瘤HunanMDTMeeting72CoFISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL)DLBCL占NHL中30-40%根據(jù)來(lái)源分為GCB、non-GC，包含多種亞型，形態(tài)學(xué)、免疫表型、細(xì)胞遺傳學(xué)及分子特征各有不同最常見(jiàn)遺傳學(xué)異常：t(3q27)BCL6rearrangement：20–40%t(14;18)(q32;q21)IGH/BCL2：10–40%t(8q34;14q32)c-MYC/IGH：5–10%HunanMDTMeeting26Aug201474CompanyConfidential

?2014Abbott彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL)DLBCL占NHL伯基特淋巴瘤(BL)BL占NHL~2.5%需要與DLBCL鑒別診斷，治療方法迥異

遺傳學(xué)改變以c-MYC基因(8q)易位為主：

t(8;14)，c-MYC/IGH，75

-

85%；

t(2;8)(p12;q24)，IGK/MYC，~5%；

t(8;22)(q24;q11)，IGL/MYC，10%；5%-10%DLBCL患者亦可發(fā)生t(8;14)，提示增殖活性,進(jìn)展快HunanMDTMeeting26Aug201475CompanyConfidential

?2014Abbott伯基特淋巴瘤(BL)BL占NHL~2.5%HunaBLvs.DLBCLBLDLBCL免疫表型CD20(+),CD5(-),CD10(+),

Bcl6(-),cyclinD1(-)Bcl-2(-)Ki67:>90%免疫表型CD20(+),CD5(-),CD10(+),Bcl6(+),cyclinD1(-)Bcl-2(-/+)Ki67:30~>95%基因異常MYC(+)BCL2(-)BCL6(-)基因異常MYC(-)BCL2(+)BCL6(+/-)治療方案：CODOX-M/IVAC環(huán)磷酰胺，長(zhǎng)春新堿，阿霉素，甲氨蝶呤異環(huán)磷酰胺，依托泊甙，高劑量阿糖胞苷鞘內(nèi)療法治療方案：R-CHOP環(huán)磷酰胺，阿霉素，長(zhǎng)春新堿，強(qiáng)的松美羅華76BLvs.DLBCLBLDLBCL免疫表型免疫表型基因介于彌漫性大B和伯基特之間的B-NHL并伴有多重易位淋巴瘤（Double-hitLymphoma)WHO2008新分類通常歸入介于DLBCL和BL之間的灰區(qū)淋巴瘤(B-celllymphoma,unclassifiable,withfeaturesintermediatebetweenDLBCLandBL)并有伴多重易位（Double-hitlymphoma)遺傳異常主要包括：MYC/8q24基因重排并且伴有：BCL2/18q21(最常見(jiàn))基因重排和/或BCL6/3q27基因重排偶見(jiàn)t(8;14;18)易位同時(shí)伴有t(14;18)IGH/BCL2和8q34/c-MYC基因重排患者，臨床進(jìn)展非?？欤A(yù)后極差HunanMDTMeeting26Aug201477CompanyConfidential

?2014Abbott介于彌漫性大B和伯基特之間的B-NHL并伴有多重易位淋巴U-DLBCL/BL伴多重易位1972例NHL中篩選出394例DLBCL

伴有異常核型19例發(fā)現(xiàn)同時(shí)伴有t(14;18)和8q24基因易位該組患者總生存期、無(wú)進(jìn)展生存期顯著降低HunanMDTMeeting26Aug201478CompanyConfidential

?2014AbbottNiitsuetal.Leukemia(2009)23,777–783U-DLBCL/BL伴多重易位1972例NHL中篩選出胃癌

胃癌FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件乳腺癌

乳腺癌FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件

謝謝大家！謝謝大家！

FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用基因科技（上海）有限公司FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用基因科技（上海）有限公司一、如何正確選擇探針二、如何正確使用探針三、臨床應(yīng)用—胃癌

一、如何正確選擇探針一、如何正確選擇探針一、如何正確選擇探針FISH探針?lè)N類

染色體計(jì)數(shù)探針（CEP)位點(diǎn)特異性標(biāo)識(shí)分子（LSI）端粒探針染色體結(jié)構(gòu)著絲粒短臂長(zhǎng)臂-端粒(TTAGGG)n特定區(qū)域或基因端粒(TTAGGG)nFISH探針?lè)N類染色體計(jì)數(shù)探針（CEP)染色體結(jié)構(gòu)著絲粒短FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件HicksDG,TubbsRR.AssessmentoftheHER2statusinbreastcancerbyfluorescenceinsituhybridization:atechnicalreviewwithinterpretiveguidelines.HumPathol.2005Mar;36(3):250-61.RatioofHER2genetoChromosome17copynumberRatio<2;HER-2geneamplificationnotobservedRatio2;HER-2geneamplificationobservedPathVysionDNAProbesLSIHER-2/neu&CEP17~225.7kbHicksDG,TubbsRR.Assessment探針設(shè)計(jì)檢測(cè)遺傳物質(zhì)的得與失在單個(gè)細(xì)胞核內(nèi)針對(duì)某個(gè)特定靶分子檢測(cè)到多于或少于2個(gè)探針信號(hào)被認(rèn)為異常<<正常異常異常探針設(shè)計(jì)檢測(cè)遺傳物質(zhì)的得與失<<正常異常異常探針設(shè)計(jì)-雙色單融探針（DC/SF）染色體、基因重排檢測(cè)—已知斷點(diǎn)的平衡易位9正常異常BCRABLBCR22探針設(shè)計(jì)-雙色單融探針（DC/SF）染色體、基因重排檢使用指導(dǎo)存在假陽(yáng)性如一個(gè)細(xì)胞中信號(hào)疊加。探針設(shè)計(jì)-雙色單融探針（DC/SF）使用指導(dǎo)探針設(shè)計(jì)-雙色單融探針（DC/SF）探針設(shè)計(jì)-雙色額外信號(hào)探針（ES）很好地克服了雙色單融出現(xiàn)的假陽(yáng)性探針設(shè)計(jì)-雙色額外信號(hào)探針（ES）很好地克服了雙色單融出探針設(shè)計(jì)-雙色雙融探針（DC/DF）探針設(shè)計(jì)-雙色雙融探針（DC/DF）

使用指導(dǎo)

最敏感的探針（假陽(yáng)性<1%）可用來(lái)檢測(cè)微小殘留性疾病不足是對(duì)融合信號(hào)不能區(qū)分使用指導(dǎo)FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件二、如何正確使用探針

二、如何正確使用探針FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件CE認(rèn)證在歐洲，用于臨床診斷的醫(yī)療器械是需要的CE（CONFORMITEEUROPEENNE）認(rèn)證的。近年來(lái)，在歐洲經(jīng)濟(jì)區(qū)（歐洲聯(lián)盟、歐洲自由貿(mào)易協(xié)會(huì)成員國(guó)，瑞士除外）銷售的商品，CE標(biāo)志的使用越來(lái)越多，CE標(biāo)志加貼的商品表示其符合安全、衛(wèi)生、環(huán)保和消費(fèi)者保護(hù)等一系列歐洲指令所要表達(dá)的要求。目前，Abbott（Vysis）大約有336種FISH探針通過(guò)CE認(rèn)證，并且這些探針具有廣泛的文獻(xiàn)支持（在產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中列舉這些出文獻(xiàn)），這些文獻(xiàn)都客觀證明了VysisFISH探針在實(shí)際臨床上的應(yīng)用的成功案例。例如P53探針，Abbott（Vysis）搜集了7篇相關(guān)文獻(xiàn)證明該探針在不同情況下的臨床應(yīng)用的成功案例。再如應(yīng)用于產(chǎn)后診斷的DiGeorge探針，在其說(shuō)明書(shū)里面例舉了8篇相關(guān)文獻(xiàn)能證明Abbott（Vysis）探針成功診斷新生兒中的DiGeorge綜合征的成功案例。CE認(rèn)證AbbottMolecular臨床產(chǎn)品AbbottMolecular臨床產(chǎn)品三、臨床應(yīng)用三、臨床應(yīng)用肺癌

肺癌FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件少突膠質(zhì)瘤

少突膠質(zhì)瘤FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用課件Vysis1p36/1q25and19q13/19p13FISHProbeKitHunanMDTMeeting26Aug2014139CompanyConfidential

?2014Abbott正常缺失Vysis1p36/1q25and19q13/19p1惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤包括:WHOIII級(jí)–間變性星形細(xì)胞瘤，間變性少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤，間變混合性膠質(zhì)細(xì)胞瘤WHOIV級(jí)–多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤是高度惡性的膠質(zhì)瘤，占近15％的原發(fā)性腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤和54%的所有神經(jīng)膠質(zhì)瘤1,2.高度侵襲性,幾乎無(wú)法治愈，患者迅速死亡高度未分化因不可預(yù)知的化學(xué)敏感性，故具有治療挑戰(zhàn)性多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者的預(yù)后非常差32年總生存期:26%4年總生存期:12%140NationalComprehensiveCancerNetwork.Availableat:.CentralBrainTumorRegistryoftheUnitedStates..StuppR,etal.NEnglJMed.2005;352:987-996.惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤包括:37NationalC形態(tài)學(xué)上，小細(xì)胞型膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和間變性少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤都屬中等細(xì)胞密度，形態(tài)單一的膠質(zhì)瘤；細(xì)胞膜清楚，胞質(zhì)透亮；明顯活躍的核分裂、微血管增生或顯著壞死表明腫瘤小細(xì)胞型膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和間變性少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤的鑒別事關(guān)重要因?yàn)檫@兩種腫瘤的臨床表現(xiàn)和治療意義極其不同一些分子特征可用于鑒別小細(xì)胞型膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和間變性少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤：膠質(zhì)母細(xì)胞瘤小細(xì)胞型幾乎普遍缺失10號(hào)染色體短臂60%–70%的小細(xì)胞型膠質(zhì)母細(xì)胞瘤帶有EGFR基因擴(kuò)增相反的，間變性少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤幾乎無(wú)10q缺失和EGFR基因擴(kuò)增。大約60%的間變性少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤帶有1p/19q雜合性缺失.形態(tài)學(xué)上，小細(xì)胞型膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和間變性少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤都屬中等VysisEGFR/CEP7FISHProbeKitHunanMDTMeeting26Aug2014142CompanyConfidential

?2014Abbott正常擴(kuò)增VysisEGFR/CEP7FISHProbe10號(hào)染色體短臂缺失10qLoss10號(hào)染色體短臂缺失在源發(fā)和繼發(fā)性多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤里其中一個(gè)重要的特征10號(hào)染色體短臂缺失在間變性星形細(xì)胞瘤和多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤指示不良預(yù)后，生存期較短PTEN基因位于10號(hào)染色體短臂(10q23),其多肽具有對(duì)脂質(zhì)和蛋白質(zhì)的磷酸酶活性，也是其中一個(gè)在10號(hào)染色體短臂缺失與多形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤相關(guān)的候選基因在兒童多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤族群里10號(hào)染色體短臂缺失是唯一于患者不良預(yù)后相關(guān)的記物。EGFR基因擴(kuò)增,1p/19q雜合性缺失和p16基因缺失并不能提示兒童病患的預(yù)后相反，在成人病患里并不提供獨(dú)立的預(yù)后信息HunanMDTMeeting26Aug2014143CompanyConfidential

?2014AbbottFallonetal.JNeuropatholExpNeurol2004;63:314322.Horbinskietal.BrainPathology2011;21:57–73Nikiforova&Hamilton.ArchPatholLabMed.2011;135:558–56810號(hào)染色體短臂缺失10qLoss10號(hào)染色體短EGFR擴(kuò)增

EGFR基因擴(kuò)增在神經(jīng)膠質(zhì)瘤里只適用于鑒別診斷

。這基因改變不是個(gè)獨(dú)立的預(yù)后標(biāo)記物。EGFR基因擴(kuò)增是與多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤發(fā)病的相關(guān)的主要基因。EGFR

擴(kuò)增基本上是GBM的特殊病癥，微觀標(biāo)簽很容易認(rèn)出，來(lái)自GBM浸潤(rùn)邊緣的組織有時(shí)可以顯示腫瘤的本質(zhì)，即使組織學(xué)標(biāo)準(zhǔn)不足以指定為WHOIV級(jí)。

HunanMDTMeeting26Aug2014144CompanyConfidential

?2014AbbottFallonetal.JNeuropatholExpNeurol2004;63:314322.Horbinskietal.BrainPathology2011;21:57–73Nikiforova&Hamilton.ArchPatholLabMed.2011;135:558–568EGFR擴(kuò)增EGFR基因擴(kuò)增在神經(jīng)膠質(zhì)瘤里只適用于鑒別CDKN2A,p16CDKN2A基因是位于9號(hào)染色體長(zhǎng)臂上,9p21,的一個(gè)腫瘤抑制基因CDKN2A純合性缺失可見(jiàn)于11%II級(jí),47%III級(jí),and60%IV級(jí)腫瘤1

CDKN2A基因的純合性缺失被認(rèn)為是一種不良預(yù)后因子。18%原發(fā)性腦膠質(zhì)瘤與43%復(fù)發(fā)性腦膠質(zhì)瘤中p16缺失的發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步證實(shí)了其與腫瘤進(jìn)展的相關(guān)性1HunanMDTMeeting26Aug2014145CompanyConfidential

?2014AbbottFallonetal.JNeuropatholExpNeurol2004;63:314322.Horbinskietal.BrainPathology2011;21:57–73Nikiforova&Hamilton.ArchPatholLabMed.2011;135:558–568CDKN2A,p16CDKN2A基因是位于9號(hào)染色體長(zhǎng)新靶向治療?ROS1基因重排陽(yáng)性腫瘤對(duì)克唑替尼crizotinib(賽可瑞XALKORI)有顯著的治療活性ROS1是否成為膠質(zhì)母細(xì)胞瘤里的新的靶向治療的靶點(diǎn)？HunanMDTMeeting26Aug2014146CompanyConfidential

?2014Abbott新靶向治療?ROS1基因重排陽(yáng)性腫瘤對(duì)克唑替尼crizo肉瘤

肉瘤肉瘤簡(jiǎn)介骨和軟組織肉瘤是一組罕見(jiàn)且異質(zhì)性的腫瘤。在成人里占所有腫瘤的少于5%，在兒童里卻占大約10%1.按照腫瘤細(xì)胞來(lái)源，這些腫瘤可分為兩大類1,2:原發(fā)于骨骨肉瘤Osteosarcoma(硬骨部分中形成）軟骨肉瘤Chondrosarcoma(軟骨中形成）

尤因氏肉瘤Ewing‘ssarcoma(骨髓組織中形成）原發(fā)于其他的組織，也稱為i軟組織肉瘤纖維肉瘤Fibrosarcomas和惡性纖維組織細(xì)胞瘤

（在纖維組織中形成）

脂肪肉瘤Liposarcomas平滑肌瘤Leiomyomas和橫紋肌肉瘤rhabdomyosarcomas(原發(fā)于肌肉）滑膜肉瘤Synovialsarcoma（在關(guān)節(jié)周圍的組織，通常是膝蓋關(guān)節(jié)周圍的組織中形成）HunanMDTMeeting26Aug2014148CompanyConfidential

?2014AbbottOsuna&deAlava.ReviewsonRecentClinicalTrials2009;4:12-26.Antonescu.Histopathology2006;48:13-21.肉瘤簡(jiǎn)介骨和軟組織肉瘤是一組罕見(jiàn)且異質(zhì)性的腫瘤。在成人里占所肉瘤里的遺傳異常肉瘤很難診斷，亞型往往難以區(qū)分。然而準(zhǔn)確診斷對(duì)評(píng)估預(yù)后以及選擇適當(dāng)?shù)寞煼ㄊ种匾?/p>

基于組織切片鏡檢的形態(tài)學(xué)診斷仍是肉瘤診斷的金標(biāo)準(zhǔn)輔助技術(shù)對(duì)于支持形態(tài)學(xué)診斷非常有用，尤其是采用FISH或基于PCR方法的分子檢測(cè)。

所有肉瘤約有1/3具有特定復(fù)發(fā)性染色體易位的特征，從而導(dǎo)致高度特異性基因融合，采用上述分子檢測(cè)方法很容易檢測(cè)。

這些易位往往是唯一的細(xì)胞遺傳學(xué)異?，F(xiàn)象，且最可能具有致病重要性HunanMDTMeeting26Aug2014149CompanyConfidential

?2014AbbottAntonescu.Histopathology2006;48:13-21.NCCNClinicalPracticeGuidelinesinOncology.SoftTissueSarcomas,version2.2014.Osuna&deAlava.ReviewsonRecentClinicalTrials2009;4:12-26.肉瘤里的遺傳異常肉瘤很難診斷，亞型往往難以區(qū)分。然而準(zhǔn)確診斷肉瘤的分子診斷以下情況下應(yīng)考慮分子診斷:在免疫組化或超微結(jié)構(gòu)研究結(jié)果未有定論是良性和惡性腫瘤時(shí)的鑒別診斷例如，F(xiàn)US易位檢測(cè)可區(qū)別低級(jí)別纖維粘液樣肉瘤和神經(jīng)束膜瘤或其他良性纖維性或神經(jīng)性細(xì)胞增生惡性類型的鑒別診斷例如，DDIT3易位可用于鑒別兒童里的粘液樣脂肪肉瘤和脂肪母細(xì)胞瘤

驗(yàn)證異常的臨床表現(xiàn)（例如，異常年齡組或腫瘤部位）或非典型的免疫組化結(jié)果例如，具有典型尤因氏肉瘤表型的腫瘤如果發(fā)生在老年人身上，或者如果存在于內(nèi)臟部位或不僅僅在病灶部位表達(dá)，則可能需要分子確認(rèn)HunanMDTMeeting26Aug2014150CompanyConfidential

?2014AbbottAntonescu.Histopathology2006;48:13-21.NCCNClinicalPracticeGuidelinesinOncology.SoftTissueSarcomas,version2.2014.Osuna&deAlava.ReviewsonRecentClinicalTrials2009;4:12-26.肉瘤的分子診斷以下情況下應(yīng)考慮分子診斷:HunanMDTHunanMDTMeeting26Aug2014151CompanyConfidential

?2014AbbottAntonescu.Histopathology2006;48:13-21.FOXO1EWSR1ALKSS18FUS/DDIT3HunanMDTMeeting48CompanyCon粘液樣腫瘤的鑒別

粘液樣軟組織腫瘤的鑒別診斷通常較困難，原因是有許多腫瘤有重疊的組織學(xué)特征，尤其當(dāng)評(píng)估基于較小的活檢標(biāo)本時(shí)

因這些腫瘤具有復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的潛在差異，故正確分類十分重要，手術(shù)前診斷可能影響手術(shù)和新輔助療法不同的復(fù)發(fā)性遺傳變異與不同的粘液樣腫瘤相關(guān)，即:骨骼外粘液樣軟骨肉瘤和粘液樣脂肪肉瘤中的EWSR1基因重排；

低級(jí)別纖維粘液樣肉瘤和粘液樣脂肪肉瘤中的FUS基因重排；以及粘液樣脂肪肉瘤中的DDIT3(之前稱為CHOP)基因重排，F(xiàn)US作為伙伴基因。

HunanMDTMeeting26Aug2014152CompanyConfidential

?2014AbbottDowns-Kellyetal.AmJSurgPathol2008;32:8–13.Wangetal.ModernPathology2008;21:1303–1310.Jainetal.IntJClinExpPathol2010;3(4):416-429.粘液樣腫瘤的鑒別粘液樣軟組織腫瘤的鑒別診斷通常較困難，原粘液樣腫瘤的鑒別FUS-DDIT3重排是粘液樣脂肪肉瘤的高靈敏度和特異性特征。形態(tài)相似的腫瘤里（如，有大量粘液樣變化的分化良好的脂肪肉瘤或粘液樣纖維肉瘤）未有檢測(cè)到FUS-DDIT3重排基因在很少的粘液樣脂肪肉瘤中也可檢測(cè)到另一種易位，t(12;22)(q13;q12)，既是EWSR1-DDIT3重排

多數(shù)骨骼外粘液樣軟骨肉瘤病例攜帶t(9;22)(q31;q12)EWSR1-NR4A3融合基因。其他涉及NR4A3基因的變體之前有人曾鑒定，包括t(9;17)(q31;q12)TAF15-NR4A3融合基因和t(9;15)(q31;q21)TCF12-NR4A3融合基因HunanMDTMeeting26Aug2014153CompanyConfidential

?2014AbbottDowns-Kellyetal.AmJSurgPathol2008;32:8–13粘液樣腫瘤的鑒別FUS-DDIT3重排是粘液樣脂肪肉瘤的高VysisEWSR1BreakApartFISHProbeKitHunanMDTMeeting26Aug2014154CompanyConfidential

?2014Abbott正常的EWSR1基因EWSR1基因重排VysisEWSR1BreakApartFISHPVysisDDIT3BreakApartFISHProbeKitHunanMDTMeeting26Aug2014155CompanyConfidential

?2014Abbott正常的DDIT3基因DDIT3基因重排VysisDDIT3BreakApartFISHPVysisFUSBreakApartFISHProbeKitHunanMDTMeeting26Aug2014156CompanyConfidential

?2014Abbott正常的FUS基因

FUS基因重排Downs-Kellyetal.AmJSurgPathol2008;32:8–13VysisFUSBreakApartFISHPro透明細(xì)胞肉瘤與惡性黑色素瘤的鑒別診斷透明細(xì)胞肉瘤是一種罕見(jiàn)而獨(dú)特的腫瘤，好發(fā)于青少年和青年四肢遠(yuǎn)端的肌腱和腱膜中。透明細(xì)胞肉瘤很少發(fā)生在兒童人群，所報(bào)告的病例中只有2%發(fā)生在不到10歲的兒童身上。透明細(xì)胞肉瘤也稱為軟組織黑色素瘤，原因是這種腫瘤顯示的表型特征與惡性黑色素瘤相似，包括存在黑色素，具有黑素體的超微結(jié)構(gòu)以及表達(dá)S-100蛋白質(zhì)和黑色素瘤相關(guān)標(biāo)志物的免疫表型。透明細(xì)胞肉瘤的鑒別診斷包括各種發(fā)生在成人和兒童身上的上皮腫瘤和間質(zhì)腫瘤。鑒別診斷包括原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性黑色素瘤、細(xì)胞型藍(lán)痣、惡性外周神經(jīng)鞘腫瘤（MPNST）、滑膜肉瘤(SS)、纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤(RMS)(尤其是腺泡狀RMS)、平滑肌肉瘤、顆粒細(xì)胞瘤、腺泡狀軟組織肉瘤(ASPS)，等等。多數(shù)透明細(xì)胞肉瘤病例中能檢測(cè)到特定的復(fù)發(fā)性染色體易位t(12;22)(q13;q12)或所產(chǎn)生的22q12上EWSR1基因和12q13上ATF1基因的融合基因。HunanMDTMeeting26Aug2014157CompanyConfidential

?2014AbbottJainetal.IntJClinExpPathol2010;3(4):416-429.Pateletal.ModernPathology2005;18:1585–1590.Songetal.PathologyInternational2010;60:608–613.透明細(xì)胞肉瘤與惡性黑色素瘤的鑒別診斷透明細(xì)胞肉瘤是一種罕見(jiàn)而橫紋肌肉瘤的分子診斷橫紋肌肉瘤

是兒童和小于15歲的青少年最常見(jiàn)的軟組織肉瘤通常以肌肉塊形式出現(xiàn)在四肢、鼻竇或腹膜后腔橫紋肌肉瘤不同的組織學(xué)亞型包括腺泡狀（alveolarrhabdomyosarcoma）、胚胎性（embryonalrhabdomyosarcoma）和多形性(pleomorphicrhabdomyosarcoma).胚胎性橫紋肌肉瘤是最常見(jiàn)的橫紋肌肉瘤，占大約70%，最常出現(xiàn)在頭部和頸部區(qū)域以及泌尿生殖道；腺泡狀橫紋肌肉瘤占大約21%，最常出現(xiàn)在四肢胚胎性和腺泡狀橫紋肌肉瘤的臨床表現(xiàn)極其不同。胚胎性腫瘤有較良的預(yù)后一些特異性的遺傳變異可用于鑒別腺泡狀橫紋肌肉瘤，與其與FOXO1基因重排有關(guān)：t(2;13)(q35:q14)PAX3/FOXO1A（~70%ofARMS）t(1;13)(p36;q14)PAX7/FOXO1A（~10%–15%ofARMS）或其他變異HunanMDTMeeting26Aug2014158CompanyConfidential

?2014AbbottDowns-Kellyetal.DiagnMolPathol2009;18:138–143.Jainetal.IntJClinExpPathol2010;3(4):416-429.Wexler&Ladanyi.JClinOncol

2010;28:132126-2128.橫紋肌肉瘤的分子診斷橫紋肌肉瘤是兒童和小于15歲的青少年最MolecularDiagnosisofRhabdomysarcomasPAX/FOXO1陽(yáng)性ARMS的患者(ARMSp)預(yù)后明顯更差。(A)總體生存期；(B)無(wú)事件生存期。融合基因陰性ARMS(ARMSn)和胚胎性RMS(ERMS)患者的生存期無(wú)明顯不同ARMSp的轉(zhuǎn)移頻率百分比明顯高于ARMSn或ERMS.HunanMDTMeeting26Aug2014159CompanyConfidential

?2014AbbottWiliamsonetal.JClinOncol2010;28:2151-2158MolecularDiagnosisofRhabdomVysisFOXO1BreakApartFISHProbeKitHunanMDTMeeting26Aug2014160CompanyConfidential

?2014Abbott正常的FOXO1基因FOXO1基因重排Downs-Kellyetal.DiagnMolPathol2009;18:138–143.VysisFOXO1BreakApartFISHP炎性肌纖維母細(xì)胞瘤與ALK基因重排炎性肌纖維母細(xì)胞瘤(IMT)是一種獨(dú)特的間質(zhì)瘤，其特征在于梭形細(xì)胞增生與炎性浸潤(rùn)，好發(fā)于兒童和年輕人身上。通常出現(xiàn)在腹部，尤其是腹膜后腔或腸系膜，可能單發(fā)或多發(fā)，很少出現(xiàn)在其他軟組織部位。約50%ofIMT涉及染色體2p23上的ALK基因重排。報(bào)道也曾描述ALK的非整倍性-在無(wú)重排情況下拷貝數(shù)增多。

ALK的始終介入而且可與多個(gè)不同基因發(fā)生重排，意味著ALK組成性激活在I