豬繁殖與呼吸綜合癥的檢疫

專題5：豬繁殖與呼吸綜合癥的檢疫1豬繁殖與呼吸綜合癥Porcinereproductiveandrespiratory

syndrome，PRRS一、疾病特點(diǎn)二、檢疫方法三、防制2四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院一、疾病特點(diǎn)又名藍(lán)耳病，是一種危害很大，發(fā)病率很高的一種疾病。我國(guó)在1995~1996年已發(fā)現(xiàn)本病。3四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院一、疾病特點(diǎn)（1）懷孕母豬流產(chǎn)（多為懷孕后期流產(chǎn)）、死胎、木乃伊胎，產(chǎn)弱仔；（2）臨產(chǎn)母豬乳腺發(fā)育不良，產(chǎn)后無乳。4四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院一、疾病特點(diǎn)（3）被感染母豬T↑，精神沉郁，呼吸困難，間情期延長(zhǎng)、返情率很高、不孕。大多數(shù)慢性感染的母豬，其繁殖性能可恢復(fù)到正常水平，但每窩活仔豬數(shù)會(huì)減少，同時(shí)受胎率會(huì)長(zhǎng)期下降10~15%

。一、疾病特點(diǎn)（4）仔豬感染后表現(xiàn)T↑，呼吸困難，肌肉振顫，共濟(jì)失調(diào)，死亡率可達(dá)80%以上。有的病豬在耳、腹側(cè)及外陰部皮膚呈現(xiàn)青紫色或藍(lán)色斑色。5四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院一、疾病特點(diǎn)（5）公豬感染后一般體溫不升高，精子畸形、稀精，授精率低，如50%以下。后備豬、育肥豬對(duì)本病易感性較差，僅出現(xiàn)輕度厭食和呼吸道癥狀。6四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院一、疾病特點(diǎn)（6）PRRS病毒有歐洲型和美洲型兩種主要抗原型，分別以LV和VR-2332為代表株，型間具有明顯的抗原交叉反應(yīng)性。據(jù)現(xiàn)有資料，我國(guó)流行的毒株為美洲型。三、豬繁殖與呼吸綜合癥一、疾病特點(diǎn)二、檢疫方法三、防制8四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院二、檢疫方法A、流產(chǎn)或早產(chǎn)超過8%；B、死產(chǎn)占產(chǎn)仔數(shù)20%；C、仔豬出生后1周內(nèi)死亡率超過26%以上仔豬死亡；三項(xiàng)指標(biāo)中有兩項(xiàng)成立，則可診斷為豬繁殖與呼吸綜合癥。病豬流產(chǎn)的死胎10四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院病豬臥地不起，呼吸困難11四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院仔豬呼吸困難12四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院病豬耳部皮膚嚴(yán)重發(fā)紺，呈藍(lán)耳癥狀13四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院哺乳仔豬，呈現(xiàn)虛弱，無法吸乳，共濟(jì)失調(diào)，耳潮紅或發(fā)紫14四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院間質(zhì)性肺炎15四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院二、檢疫方法PRRS的診斷方法有多種。依據(jù)臨床癥狀和病理變化只可作出初步診斷，確診必須依靠實(shí)驗(yàn)室檢查。目前已建立和應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)有：（一）病毒的分離與鑒定（二）免疫過氧化物酶單層試驗(yàn)（IPMA）（三）間接免疫熒光試驗(yàn)（IFA）（四）間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（間接ELISA）（五）血清中和試驗(yàn)（SN）。參考標(biāo)準(zhǔn)17四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院（一）病毒的分離與鑒定18四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院（一）病毒的分離與鑒定1、樣品：在發(fā)病早期，無菌地采取病豬的血清或腹水。對(duì)病死豬（如流產(chǎn)的死胎）和撲殺豬（如弱胎豬），應(yīng)立即采取肺、扁桃體和脾等組織。2、適宜的細(xì)胞：PAM：豬原代肺泡巨噬細(xì)胞。MARC-145

：上皮樣細(xì)胞，來源于猴腎細(xì)胞，（monkey,

kidney）。HS2H細(xì)胞：

從MARC-145中分離更敏感的細(xì)胞

。19四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院（一）病毒的分離與鑒定已建立的某些猴腎細(xì)胞系不能支持所有分離物特別是歐洲型病毒株的良好生長(zhǎng)，因此病毒分離應(yīng)首選PAM細(xì)胞。健康的Marc145細(xì)胞21四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院出現(xiàn)CPE的Marc

145細(xì)胞主要呈現(xiàn)細(xì)胞圓縮、聚集、固縮，最后溶解脫落22四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院（一）病毒的分離與鑒定結(jié)果判斷：不論是否出現(xiàn)CPE，對(duì)所有的孔必須采用免疫過氧化物酶單層試驗(yàn)（IPMA）或間接免疫熒光試驗(yàn)（IFA）進(jìn)行終判。只要對(duì)PRRS病毒陽性血清呈現(xiàn)陽性反應(yīng)，則被認(rèn)定為PRRS病毒分離陽性。23四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院（二）免疫過氧化物酶單層試驗(yàn)（IPMA）24四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院（二）免疫過氧化物酶單層試驗(yàn)（IPMA）1、樣品：采集被檢豬血液分離血清，血清必須新鮮透明不溶血無污染。（二）免疫過氧化物酶單層試驗(yàn)（IPMA）IPMA診斷板加樣示意圖26四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院（二）免疫過氧化物酶單層試驗(yàn)（IPMA）2、取已作20倍稀釋的被檢血清加入IPMA診斷板，每孔50μL，封板并于4℃條件下過夜。（二）免疫過氧化物酶單層試驗(yàn)（IPMA）3、洗滌28四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院（二）免疫過氧化物酶單層試驗(yàn)（IPMA）4、每孔加入工作濃度的兔抗豬過氧化物酶結(jié)合物50μL，封板后放在保溫盒內(nèi)于37℃恒溫箱中感作60min。5、洗滌三次，方法同前。29四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院（二）免疫過氧化物酶單層試驗(yàn)（IPMA）6、每孔加入顯色/底物溶液50μL，封板于室溫（18℃~24℃）下感作30min。7、

棄去板中液體，洗滌1次，方法同前，再用三餾水洗滌2次，最后在吸水低上輕輕拍干，待檢。30四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院有PRRS但無血清無PRRS也無血清（二）免疫過氧化物酶單層試驗(yàn)（IPMA）8、

結(jié)果判定：（1）空白對(duì)照感染細(xì)胞孔（P·V+）和未感染細(xì)胞孔（P·V-）均應(yīng)為陰性反應(yīng)。31四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院有PRRS有陽性血清無PRRS有陽性血清（二）免疫過氧化物酶單層試驗(yàn)（IPMA）8、

結(jié)果判定：（2）標(biāo)準(zhǔn)陽性血清對(duì)照感染細(xì)胞孔（P·V+）應(yīng)呈典型陽性反應(yīng)，未感染細(xì)胞孔（P·V-）應(yīng)為陰性反應(yīng)。有PRRS有陰性血清無PRRS有陰性血清（二）免疫過氧化物酶單層試驗(yàn)（IPMA）8、

結(jié)果判定：（3）標(biāo)準(zhǔn)陰性血清對(duì)照感染細(xì)胞孔（N·V+）和感染細(xì)胞孔（N·V-）均應(yīng)呈陰性反應(yīng)。33四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院無PRRS（二）免疫過氧化物酶單層試驗(yàn)（IPMA）8、

結(jié)果判定：（4）被檢血清未感染細(xì)胞孔（V-）不應(yīng)出現(xiàn)陽性反應(yīng)。34四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院（二）免疫過氧化物酶單層試驗(yàn)（IPMA）8、

結(jié)果判定：（5）被檢血清標(biāo)本的細(xì)胞漿（可能僅見于部分細(xì)胞）出現(xiàn)彌漫狀或團(tuán)塊狀棕紅色著染者，判讀為免疫過氧化物酶單層試驗(yàn)陽性，記作IPMA（+）。35四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院（二）免疫過氧化物酶單層試驗(yàn)（IPMA）8、

結(jié)果判定：（6）無棕紅色著染者，判讀為免疫過氧化物酶單層試驗(yàn)陰性，記作IPMA（-）。IPMA（+）者表明被檢豬的血清中含有PRRS病毒的抗體。36四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院（三）間接免疫熒光試驗(yàn)（IFA）37四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院（三）間接免疫熒光試驗(yàn)（IFA）與免疫過氧化物酶單層試驗(yàn)（IPMA）類似1、樣品：采集被檢豬血液，分離血清，血清必須新鮮、透明、不溶血、無污染。38四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院（三）間接免疫熒光試驗(yàn)（IFA）IFA診斷板加樣示意圖39四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院（三）間接免疫熒光試驗(yàn)（IFA）2、在編號(hào)對(duì)應(yīng)的孔內(nèi)加入20倍稀釋的被檢血清。40四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院（三）間接免疫熒光試驗(yàn)（IFA）3、棄去板中血清，用PBS液洗板4次，每孔100μL，每次3min，最后在吸水紙上輕輕拍干。4、

每孔加入工作濃度的兔抗豬FITC結(jié)合物50μL，在37℃恒溫箱中感作45min。41四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院（三）間接免疫熒光試驗(yàn)（IFA）5、結(jié)果判定：被檢血清對(duì)照中未感染細(xì)胞孔（C·V-）不應(yīng)出現(xiàn)特異性熒光。被檢血清樣品感染細(xì)胞孔（N·V+）出現(xiàn)特異性胞漿亮綠色熒光判為陽性；否則，判為陰性。42四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院（三）間接免疫熒光試驗(yàn)（IFA）43熒光抗體染色顯微法觀察PRRS病毒感染Marc

145細(xì)胞過程，A指PRRS病毒感染24hr，B和C指PRRS病毒感染后42－46hr，D指PRRS病毒感染后72hr。四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院三、豬繁殖與呼吸綜合癥一、疾病特點(diǎn)二、檢疫方法三、防制44四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院三、防制（1）加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，嚴(yán)格消毒制度，保持飼養(yǎng)用具的清潔、消毒，減少飼養(yǎng)密度，豬盡量做到全進(jìn)全出，改進(jìn)豬舍環(huán)境，改善豬舍通風(fēng)與光照，嚴(yán)格控制嚙動(dòng)物出沒與繁衍，防止豬只與野生動(dòng)物及飛鳥接觸。（2）引種檢疫和隔離（觀察期8周）

。三、防制（3）對(duì)發(fā)病母豬和仔豬使用抗病毒的中西藥制劑、抗生素（防止繼發(fā)感染）療法。（4）對(duì)妊娠母豬可試用下列方劑（抗病毒和預(yù)防早產(chǎn)）：當(dāng)歸50，白術(shù)30，白芍50，黃苓50，大青葉50，板藍(lán)根50，菟絲子50，柴胡50，破故紙40，陳皮50，丹參40，續(xù)斷40，共為末，每頭妊娠母豬每天100g拌料喂服，連喂10天。三、防制（5）免疫接種→有效，目前已有弱毒苗（如美國(guó)的Resp株）和滅活苗。弱毒疫苗效果較好（成年母豬），但安全性差，推薦只用于疫區(qū)（場(chǎng)）

。三、防制參考免疫程序：A、后備母豬分別在配種前2月、1月進(jìn)行2次免疫；B、經(jīng)產(chǎn)母豬在配種前1月免1次；C、育肥豬母源抗體消失前首免，母原抗體消失后二免。D、種公豬和妊娠母豬不能接種。三、防制注意：A、弱毒苗7天