2023屆復(fù)習(xí) 二輪復(fù)習(xí)　高考命題熱點(diǎn)十 　熒光定量PCR技術(shù) 課件 （36張）

專題九生物技術(shù)與工程專題九生物技術(shù)與工程[高考命題熱點(diǎn)十]熒光定量PCR技術(shù)與PCR技術(shù)相關(guān)的生物學(xué)科素養(yǎng)主要體現(xiàn)角度：1．生命觀念主要體現(xiàn)(1)物質(zhì)與能量觀：PCR擴(kuò)增目的基因需要模板、原料并消耗能量。(2)結(jié)構(gòu)與功能觀：PCR儀、微量移液管、微量離心管等的使用以及注意事項(xiàng)。2．科學(xué)思維主要體現(xiàn)(1)歸納與概括：比較PCR技術(shù)和DNA體內(nèi)復(fù)制的異同。(2)分析與推理：PCR技術(shù)中引物的選取。專題九生物技術(shù)與工程3．科學(xué)探究主要體現(xiàn)(1)實(shí)驗(yàn)操作能力：探究DNA片段的擴(kuò)增及電泳實(shí)驗(yàn)中PCR反應(yīng)體系的配方的配制以及實(shí)驗(yàn)流程中的動(dòng)手操作能力。(2)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象的觀察、分析能力：對(duì)DNA片段的擴(kuò)增及電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果的觀察、分析。4．社會(huì)責(zé)任主要體現(xiàn)PCR擴(kuò)增的用途包括獲取目的基因、對(duì)感染疾病(核酸檢測(cè))的診斷等。專題九生物技術(shù)與工程(經(jīng)典考題)面對(duì)新冠疫情，我國(guó)一直堅(jiān)持嚴(yán)格防控措施，“零容忍”彰顯人民立場(chǎng)制度優(yōu)勢(shì)。堅(jiān)持中高風(fēng)險(xiǎn)地區(qū)的大面積核酸檢測(cè)、適齡人群接種疫苗構(gòu)建免疫屏障是嚴(yán)格防控的主要措施。新冠病毒核酸檢測(cè)常采用RT－PCR檢測(cè)法，技術(shù)流程如下圖，①②③④⑤表示相關(guān)步驟。專題九生物技術(shù)與工程(1)步驟①④需要的酶分別是____________________，若利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的過(guò)程中消耗了126個(gè)引物分子，則該過(guò)程DNA擴(kuò)增了________次。(2)步驟③的目的是____________________________，如果該步驟出現(xiàn)失誤，對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響是____________________________。(3)圖中的基因探針5′末端連接熒光基團(tuán)(R)，3′末端連接淬滅劑(Q)。當(dāng)探針完整時(shí)，R發(fā)出的熒光信號(hào)被Q吸收而不發(fā)熒光。當(dāng)Taq酶遇到探針時(shí)會(huì)使探針?biāo)舛尫懦鲇坞x的R和Q，R發(fā)出的熒光信號(hào)被相應(yīng)儀器檢測(cè)到。在定量PCR擴(kuò)增過(guò)程中，當(dāng)擴(kuò)增DNA遇到探針時(shí)，探針就會(huì)被水解而釋放出游離的R和Q，隨PCR擴(kuò)增次數(shù)的增加，熒光信號(hào)________(填“逐漸增強(qiáng)”“逐漸減弱”或“不變”)。專題九生物技術(shù)與工程(4)新型冠狀病毒抗體檢測(cè)可作為核酸檢測(cè)的補(bǔ)充，抗體檢測(cè)的原理是________。對(duì)某人進(jìn)行檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)，其核酸檢測(cè)為陰性，抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性，原因可能是_______________________________________________________。(5)預(yù)防新冠肺炎的有效措施是接種新型冠狀病毒滅活疫苗，滅活的含義是__________________________________________________________________________________________________________________________________。解析：(1)若利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的過(guò)程中消耗了126個(gè)引物分子，且引物分子參與到子代DNA分子中，同時(shí)還有2個(gè)親代DNA分子單鏈也參與到子代DNA分子中，這樣子代DNA單鏈共有126＋2＝128，由于DNA分子有兩條鏈，則子代DNA分子總數(shù)為128÷2＝64＝26，則該過(guò)程DNA擴(kuò)增了6次。(2)步驟③專題九生物技術(shù)與工程是低溫復(fù)性的過(guò)程，其目的是使引物A、引物B、基因探針與病毒cDNA的目的片段相結(jié)合，如果該步驟出現(xiàn)失誤，將導(dǎo)致不能降解探針，進(jìn)而致使存在病毒cDNA，但無(wú)法用儀器檢測(cè)到熒光。(3)圖中的基因探針5′末端連接熒光基團(tuán)(R)，3′末端連接淬滅劑(Q)。當(dāng)探針完整時(shí)，R發(fā)出的熒光信號(hào)Q吸收而不發(fā)熒光。當(dāng)Taq酶遇到探針時(shí)會(huì)使探針?biāo)舛尫懦鲇坞x的R和Q，R發(fā)出的熒光信號(hào)被相應(yīng)儀器檢測(cè)到。在定量PCR擴(kuò)增過(guò)程中，當(dāng)擴(kuò)增DNA遇到探針時(shí)，探針就會(huì)被水解而釋放出游離的R和Q，隨PCR擴(kuò)增次數(shù)的增加，水解的探針越多，則熒光信號(hào)逐漸增強(qiáng)。(4)新冠病毒抗體檢測(cè)可作為核酸檢測(cè)的補(bǔ)充，抗體檢測(cè)利用了抗原和抗體發(fā)生特異性結(jié)合的原理實(shí)現(xiàn)的。對(duì)某人進(jìn)行檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)，其核酸檢測(cè)為陰性，抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性，說(shuō)明此人體內(nèi)沒有病毒，但專題九生物技術(shù)與工程檢測(cè)到了抗體，則說(shuō)明此人曾感染新型冠狀病毒并已康復(fù)(或此人已注射新冠疫苗)。(5)預(yù)防新冠肺炎的有效措施是接種新型冠狀病毒滅活疫苗，滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力，但是并不破壞這些病原體的抗原結(jié)構(gòu)，因而滅活的病毒能起到疫苗的作用，即引起機(jī)體的特異性免疫反應(yīng)，產(chǎn)生抗體和記憶細(xì)胞，但對(duì)機(jī)體沒有侵染能力，從而提高人體的免疫力。答案：(1)逆轉(zhuǎn)錄酶、熱穩(wěn)定DNA聚合酶6

(2)使引物A、引物B、基因探針與病毒cDNA的目的的片段結(jié)合不能降解探針，導(dǎo)致存在病毒cDNA但無(wú)法用儀器檢測(cè)到熒光(3)逐漸增強(qiáng)(4)抗原抗體特異性結(jié)合此人曾感染新型冠狀病毒并已康復(fù)(或此人已注射新冠疫苗)

(5)用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力，但是并不破壞這些病原體的抗原結(jié)構(gòu)專題九生物技術(shù)與工程1．(2022·廣州模擬預(yù)測(cè))目前我國(guó)新型冠狀病毒核酸檢測(cè)的方法是RT-PCR，下圖為RT-PCR(逆轉(zhuǎn)錄熒光PCR技術(shù))的原理：PCR過(guò)程中探針和引物一起與模板結(jié)合，探針兩側(cè)分別帶有熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)(抑制熒光發(fā)出)，當(dāng)酶催化子鏈延伸至探針處時(shí)會(huì)水解探針，導(dǎo)致熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離而發(fā)出熒光(熒光強(qiáng)度與探針?biāo)饬砍烧嚓P(guān))。專題九生物技術(shù)與工程請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)PCR技術(shù)與DNA體內(nèi)復(fù)制過(guò)程相比，兩者的復(fù)制方式都是_____________。RT-PCR過(guò)程中，需先以RNA為模板合成cDNA，故裝置中需添加________酶。除了加酶，解開cDNA雙螺旋的方法還有________。(2)對(duì)新型冠狀病毒進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，探針是一段與______________________相同的核苷酸序列。(3)通過(guò)熒光檢測(cè)到熒光信號(hào)，則可判定該檢測(cè)樣本為______________性(選填“陽(yáng)”“陰”)，在相同PCR循環(huán)次數(shù)條件下，熒光強(qiáng)度與病毒數(shù)量呈__________。(4)為了在沒有條件進(jìn)行核酸檢測(cè)前及早發(fā)現(xiàn)新型冠狀病毒，我國(guó)于2022年3月11日推出新型冠狀病毒抗原檢測(cè)試劑盒作為核酸檢測(cè)的補(bǔ)充措施，該試劑盒的檢測(cè)原理是_______________。試劑盒中的探針應(yīng)采用__________技術(shù)生產(chǎn)。專題九生物技術(shù)與工程解析：(1)由分析可知，PCR技術(shù)與DNA體內(nèi)復(fù)制的復(fù)制方式都是半保留復(fù)制。RT-PCR過(guò)程為逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，需向裝置中添加逆轉(zhuǎn)錄酶，以RNA為模板合成cDNA。DNA體內(nèi)復(fù)制中解開DNA雙螺旋的是利用解旋酶，在PCR中則是利用加熱解開雙螺旋。(2)由圖可知，利用探針對(duì)新型冠狀病毒進(jìn)行檢測(cè)的原理是堿基互補(bǔ)配對(duì)和DNA復(fù)制，當(dāng)存在病毒時(shí)，以病毒的遺傳物質(zhì)RNA逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，探針能與該cDNA通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合，當(dāng)cDNA進(jìn)行復(fù)制時(shí)，會(huì)水解探針，因此探針是一段與目的基因(病毒的基因)中特定核苷酸序列相同的核苷酸序列。(3)若檢測(cè)到熒光信號(hào)，說(shuō)明探針與被檢測(cè)物結(jié)合后被水解，則可判定該檢測(cè)樣本為陽(yáng)性，在相同PCR循環(huán)次數(shù)條件下，病毒數(shù)量越多，復(fù)制時(shí)水解的探針越多，則熒光強(qiáng)度越強(qiáng)，即熒光強(qiáng)度與病毒數(shù)量呈正相關(guān)。(4)分析題意可知，新型冠狀病毒抗原檢測(cè)試劑盒的原理是抗原與抗體的特異性結(jié)合。與傳統(tǒng)方法生產(chǎn)的抗體相比，單克隆抗體具有純度高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，因此試劑盒中的探針應(yīng)采用單克隆抗體技術(shù)生產(chǎn)。專題九生物技術(shù)與工程答案：(1)半保留復(fù)制逆轉(zhuǎn)錄酶加熱(2)目的基因中特定的核苷酸序列(3)陽(yáng)正相關(guān)(4)抗原—抗體的特異性結(jié)合單克隆抗體專題九生物技術(shù)與工程2．(2022·遼寧模擬預(yù)測(cè))“實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR”是新冠疫情防控的一把利刃，通常在1～2h內(nèi)即可得到檢測(cè)結(jié)果。TaqMan探針是實(shí)時(shí)熒光定量RT—PCR技術(shù)中一種常用探針(如圖1)，其5′端連接熒光基團(tuán)(R)，3′端連接淬滅劑(Q)。當(dāng)探針完整時(shí)，R發(fā)出的熒光信號(hào)被Q吸收而不發(fā)熒光。在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，當(dāng)TaqDNA聚合酶遇到探針時(shí)會(huì)使探針?biāo)舛尫懦鲇坞x的R和Q，R發(fā)出的熒光信號(hào)被相應(yīng)儀器檢測(cè)到，熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物數(shù)量完全同步(如圖2)。請(qǐng)據(jù)圖回答：專題九生物技術(shù)與工程(1)結(jié)合圖1和圖2分析，“熒光RT-PCR技術(shù)”所用的試劑盒中通常都應(yīng)該含有________酶、______酶、TaqMan探針、引物、dNTP、Mg2＋、緩沖劑等。這種分子層面的熒光RT-PCR檢測(cè)具有特異性和靈敏性都很高的特點(diǎn)，主要與試劑盒中的________、________有關(guān)。專題九生物技術(shù)與工程(2)根據(jù)TaqMan探針功能分析，探針中堿基序列的設(shè)計(jì)應(yīng)主要依據(jù)__________________。新型冠狀病毒(2019-nCoV)是冠狀病毒大家庭中的新的一員，其堿基序列與引起SARS的冠狀病毒堿基序列有79.5%的相似性，與流感病毒堿基相似度也較高，因此在設(shè)計(jì)TaqMan探針時(shí)應(yīng)篩選出2019-nCoV特有序列，以避免________(填“假陰性”或“假陽(yáng)性”)的出現(xiàn)。(3)根據(jù)圖1和圖2，TaqDNA聚合酶除了能催化DNA子鏈的延伸，還能__________________________。(4)IgM和IgG均屬于免疫球蛋白家族，是機(jī)體在抗原物質(zhì)刺激下由漿細(xì)胞產(chǎn)生的抗體。IgM/IgG檢測(cè)試劑盒的原理是____________________，通過(guò)檢測(cè)人體內(nèi)相應(yīng)抗體間接證明是否感染。被病毒感染后，機(jī)體會(huì)產(chǎn)生一系列的變化來(lái)抵御這種入侵，其中IgM和IgG的含量會(huì)發(fā)生如圖所示變化。專題九生物技術(shù)與工程通過(guò)對(duì)COVID-19患者研究發(fā)現(xiàn)，病毒侵入人體后，大約需要5～7天產(chǎn)生IgM抗體，IgG抗體在感染后10～15天時(shí)產(chǎn)生。通過(guò)檢測(cè)外周血中IgM和IgG，不僅可以鑒別是否感染，還可以辨別檢測(cè)者是近期感染或者是既往感染。當(dāng)核酸檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，IgM(＋)IgG(－)時(shí)，可判斷檢測(cè)者為____________________________________________________________________________；核酸檢測(cè)結(jié)果為陰性，已治愈的患者檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為______________________________________________________________________________________。專題九生物技術(shù)與工程解析：(1)分析題圖：圖1和圖2所示新冠檢測(cè)基本原理是：將新型冠狀病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄為DNA，通過(guò)采用多重?zé)晒釸T-PCR技術(shù)進(jìn)行鑒定，因此熒光PCR法所用的試劑盒中通常都應(yīng)該含有：逆(反)轉(zhuǎn)錄酶、熱穩(wěn)定性DNA聚合酶(Taq酶)、TaqMan探針、引物、dNTP、Mg2＋、緩沖劑系等；由圖2可知，引物、TaqMan探針能與模板鏈結(jié)合，故試劑盒中的引物和TaqMan探針決定了這種分子層面的熒光RT－PCR檢測(cè)具有特異性和高靈敏性。(2)探針是依據(jù)新型冠狀病毒RNA內(nèi)部的一段序列(新型冠狀病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄形成的DNA的部分序列)設(shè)計(jì)的；新型冠狀病毒(nCoV－2019)堿基序列與引起SARS的冠狀病毒堿基序列有79.5%的相似性，與流感病毒堿基相似度也較高，因此在設(shè)計(jì)TaqMan探針時(shí)應(yīng)篩選出nCoV-2019特有序列，以避免將流感病毒等誤判為新型冠狀病毒專題九生物技術(shù)與工程而出現(xiàn)假陽(yáng)性。(3)根據(jù)圖1和圖2可知，Taq酶除了能催化DNA子鏈的延伸，還能催化RNA(TaqMan探針)的水解，TaqMan探針?biāo)忉尫懦鲇坞xR供儀器檢測(cè)到。(4)新型冠狀病毒基因編碼多個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白，這些蛋白包括多個(gè)抗原位點(diǎn)，利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，可通過(guò)抗體檢測(cè)抗原的存在，從而直接證明樣本中含有新型冠狀病毒，間接證明機(jī)體感染與否；題干中描述病毒侵入人體后，大約需要5～7天產(chǎn)生IgM抗體，IgM(＋)說(shuō)明感染過(guò)病毒，IgG抗體在感染后10～15天時(shí)產(chǎn)生，IgG(－)說(shuō)明10～15天沒有抗體，檢測(cè)者體為早期感染；核酸檢測(cè)結(jié)果為陰性，已治愈的患者，也就是感染過(guò)，體內(nèi)病毒已被清除，所以應(yīng)為IgM(－)IgG(＋)。專題九生物技術(shù)與工程答案：(1)逆(反)轉(zhuǎn)錄Taq引物TaqMan探針(2)新型冠狀病毒RNA內(nèi)部的一段序列(新型冠狀病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄形成的DNA的部分序列)假陽(yáng)性(3)催化RNA(TaqMan探針)的水解(4)抗原抗體特異性結(jié)合近期感染核酸檢測(cè)結(jié)果為陰性，IgM(－)IgG(＋)專題九生物技術(shù)與工程3．(2022·陜西寶雞二模)近幾年新冠肺炎疫情不僅對(duì)人類的健康和生命安全造成威脅，還嚴(yán)重影響了人們正常的生產(chǎn)生活。新型冠狀病毒(RNA病毒)檢測(cè)主要有“核酸檢測(cè)”“抗原檢測(cè)”和“抗體檢測(cè)”3種。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)研究人員研發(fā)了核酸檢測(cè)試劑盒，通過(guò)PCR技術(shù)可對(duì)采集到的核酸序列進(jìn)行擴(kuò)增。新型冠狀病毒核酸快速檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)原理是：若送檢樣本中存在病毒，則以病毒RNA為模板，在________酶的作用下合成cDNA，反應(yīng)體系中加入dATP、dTTP、dCTP和dGTP的作用是為擴(kuò)增提供___________，再加入互補(bǔ)的熒光探針、__________酶和____________后，cDNA開始擴(kuò)增，當(dāng)子鏈延伸至探針處，會(huì)水解探針釋放出熒光基團(tuán)產(chǎn)生熒光，熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)接收到熒光信號(hào)從而確診。專題九生物技術(shù)與工程(2)2022年3月15日國(guó)家衛(wèi)健委發(fā)布了《新型冠狀病毒診療方案試行第九版》將解除隔離及出院標(biāo)準(zhǔn)的CT值從40降到至35。CT40就是把病毒的核酸循環(huán)復(fù)制40次可檢測(cè)到病毒存在，即為陽(yáng)性。CT值從40降到至35，說(shuō)明定義陽(yáng)性的標(biāo)準(zhǔn)在____________(降低、提高)(3)抗原檢測(cè)是檢測(cè)唾液、鼻腔黏膜或咽喉黏膜中是否存在新型冠狀病毒特有的____________(分子組成)的檢查。(4)我國(guó)采用新型冠狀病毒化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒進(jìn)行抗體檢測(cè)，研究人員利用生產(chǎn)單克隆抗體的技術(shù)，生產(chǎn)出能與新型冠狀病毒結(jié)合的特異性抗體。在單克隆抗體制備過(guò)程中，當(dāng)雜交瘤細(xì)胞在體外條件下大規(guī)模培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，目的是______________________。該試劑盒能快速準(zhǔn)確地檢測(cè)出病例是利用了單克隆抗體的____________________等優(yōu)點(diǎn)。專題九生物技術(shù)與工程解析：(1)以RNA為模板合成cDNA的過(guò)程稱為逆轉(zhuǎn)錄，需要逆轉(zhuǎn)錄酶的參與。反應(yīng)體系中加入的dATP、dTTP、dCTP、dGTP，能夠水解產(chǎn)生四種游離的脫氧核苷酸，同時(shí)釋放出能量，為擴(kuò)增提供原料和能量。PCR的條件有模板DNA、四種脫氧核苷酸、2種引物、Taq酶(耐高溫的DNA聚合酶、熱穩(wěn)定DNA聚合酶)，因此再在PCR擴(kuò)增儀中加入互補(bǔ)的熒光探針、2種引物和Taq酶(耐高溫的DNA聚合酶、熱穩(wěn)定DNA聚合酶)后，開始擴(kuò)增cDNA。(2)根據(jù)題中有關(guān)CT40的定義可知，將解除隔離及出院標(biāo)準(zhǔn)的CT值從40降到至35，說(shuō)明定義陽(yáng)性的標(biāo)準(zhǔn)在降低。(3)新型冠狀病毒由RNA和蛋白質(zhì)組成，其蛋白質(zhì)作為新型冠狀病毒的抗原，因此抗原檢測(cè)是檢測(cè)唾液、鼻腔黏膜或咽喉黏膜中是否存在新型冠狀病毒特有的蛋白質(zhì)的檢查。(4)雜交瘤細(xì)胞(動(dòng)物細(xì)胞)在體外條件下專題九生物技術(shù)與工程擴(kuò)大規(guī)模培養(yǎng)時(shí)，為防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液。與傳統(tǒng)抗體相比，單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)有特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備，該試劑盒能快速準(zhǔn)確地檢測(cè)出病例是利用了單克隆抗體的特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備等優(yōu)點(diǎn)。答案：(1)逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)所需的原料和能量Taq(耐高溫的DNA聚合酶、熱穩(wěn)定DNA聚合酶)引物(2)降低(3)蛋白質(zhì)(4)為防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備專題九生物技術(shù)與工程4．(2022·江蘇模擬預(yù)測(cè))引起新冠肺炎的新型冠狀病毒是一種帶包膜的RNA病毒，包膜表面有與人體細(xì)胞膜表面的ACE2受體結(jié)合的S蛋白。疫苗接種和病毒檢測(cè)是當(dāng)前新冠肺炎疫情防控工作的重要舉措。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：Ⅰ.疫苗的研發(fā)和接種(1)滅活疫苗。工業(yè)生產(chǎn)上利用Vero細(xì)胞能無(wú)限增殖特性培養(yǎng)新型冠狀病毒，可實(shí)現(xiàn)_________________________________________________________________________________________________________的目的。(2)腺病毒載體疫苗。該疫苗主要成分是活的、有復(fù)制缺陷、能表達(dá)S蛋白的重組人5型腺病毒。這種方式生產(chǎn)的疫苗由于重組腺病毒_________________，從而提高了疫苗的安全性。專題九生物技術(shù)與工程(3)重組亞單位疫苗。其技術(shù)線路是：提取新型冠狀病毒RNA→通過(guò)RT酶PCR(反轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))技術(shù)擴(kuò)增篩選RBD蛋白(S蛋白中真正與ACE2結(jié)合的關(guān)鍵部分)基因→構(gòu)建基因表達(dá)載體→導(dǎo)入CHO細(xì)胞并培養(yǎng)→提取并純化RBD蛋白→制成疫苗。利用RT酶PCR技術(shù)，獲取S蛋白基因時(shí)，需加入________________酶；擴(kuò)增RBD蛋白基因時(shí)，應(yīng)選擇的引物為__________________。PCR的產(chǎn)物可通過(guò)電泳鑒定，設(shè)置如下：1號(hào)泳道為標(biāo)準(zhǔn)(Marker)，2號(hào)泳道是以________________________為材料做的陽(yáng)性對(duì)照組，3號(hào)泳道為實(shí)驗(yàn)組。圖3中3號(hào)泳道出現(xiàn)雜帶，原因一般有___________(至少答出2點(diǎn))?；虮磉_(dá)載體構(gòu)建中為提高目的基因和運(yùn)載體的正確連接效率，研究人員應(yīng)在圖1中選擇的限制酶是_______________________________。專題九生物技術(shù)與工程Ⅱ.新型冠狀病毒的檢測(cè)(4)核酸檢測(cè)圖4是我國(guó)自主設(shè)計(jì)的新冠病毒核酸檢測(cè)平臺(tái)示意圖，圖5為RT-PCR(實(shí)時(shí)熒光逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))示意圖。當(dāng)探針完整時(shí)，熒光基團(tuán)(R)發(fā)出的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)(Q)吸收而不發(fā)熒光；當(dāng)Taq酶遇到探針時(shí)會(huì)使探針?biāo)舛尫懦鲇坞x的R和Q，R發(fā)出的熒光信號(hào)被相應(yīng)儀器檢測(cè)到，熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物數(shù)量完全同步。專題九生物技術(shù)與工程①加入自動(dòng)化PCR體系配置中的引物和探針的設(shè)計(jì)依據(jù)是______________。引物和探針與模板結(jié)合發(fā)生在PCR循環(huán)中的________階段。專題九生物技術(shù)與工程②利用熒光定量PCR儀可監(jiān)測(cè)待測(cè)樣液中病毒的核酸數(shù)量。若每斷裂一個(gè)TaqMan探針，設(shè)置R發(fā)出的熒光信號(hào)的值為1，若經(jīng)n次的PCR擴(kuò)增，實(shí)時(shí)熒光信號(hào)強(qiáng)度________(填“增強(qiáng)”“減弱”或“不變”)，說(shuō)明樣液中病毒的核酸數(shù)量為0；若熒光信號(hào)強(qiáng)度值為a(2n－1)，推測(cè)樣液中病毒的核酸數(shù)量為________。(5)抗原和抗體檢測(cè)為了及早發(fā)現(xiàn)新型冠狀病毒的感染者，新型冠狀病毒抗原檢測(cè)試劑盒及抗體檢測(cè)試劑盒作為核酸檢測(cè)的有效補(bǔ)充措施。這兩種試劑盒的檢測(cè)原理為________。對(duì)于已注射過(guò)滅活疫苗的人員，應(yīng)選擇________(填字母)檢測(cè)。a．核酸檢測(cè)b．抗原檢測(cè)c．抗體檢測(cè)專題九生物技術(shù)與工程解析：(1)vero細(xì)胞是指非洲綠猴腎細(xì)胞，可用于檢查大腸桿菌毒素，作為培養(yǎng)病毒的細(xì)胞宿主和真核寄生蟲的宿主細(xì)胞。之所以選擇vero細(xì)胞生產(chǎn)病毒，是因?yàn)樗菀着囵B(yǎng)，傳播穩(wěn)定，可以無(wú)限分裂，所以vero細(xì)胞用于生產(chǎn)許多疫苗。新冠疫苗vero細(xì)胞的原理是將培養(yǎng)擴(kuò)增的活病毒，滅活后經(jīng)過(guò)一系列純化技術(shù)，然后制備疫苗。滅活的主要特點(diǎn)是免疫反應(yīng)強(qiáng)，安全性和穩(wěn)定性好，運(yùn)輸方便。因此工業(yè)生產(chǎn)上利用vero細(xì)胞能無(wú)限增殖特性培養(yǎng)新型冠狀病毒，可實(shí)現(xiàn)獲得大量新型冠狀病毒，降低生產(chǎn)成本。(2)重組腺病毒載體疫苗，是利用基因工程技術(shù)，把致病病毒A的關(guān)鍵基因片段植入到改造后的無(wú)害病毒B里，重組成疫苗。這個(gè)疫苗和無(wú)害病毒B一樣不致病，卻擁有病毒A的長(zhǎng)相，能使免疫系統(tǒng)認(rèn)識(shí)病毒A，并產(chǎn)生免疫記憶，從而阻斷病毒A的入侵。在疫苗專題九生物技術(shù)與工程研發(fā)中，改造后的腺病毒不能在體內(nèi)復(fù)制，也