GB/T 17999.9-2008SPF雞微生物學監(jiān)測第9部分：SPF雞試管凝集試驗

犐犆犛１１．２２０

犅４１

中華人民共和國國家標準

犌犅／犜１７９９９．９—２００８

代替ＧＢ／Ｔ１７９９９．８—１９９９

犛犘犉雞微生物學監(jiān)測

第９部分：犛犘犉雞試管凝集試驗

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２００８１２３１發(fā)布２００９０５０１實施

中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局

發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

書

犌犅／犜１７９９９．９—２００８

前言

ＧＢ／Ｔ１７９９９《ＳＰＦ雞微生物學監(jiān)測》分為１０個部分：

———第１部分：ＳＰＦ雞微生物學監(jiān)測總則；

———第２部分：ＳＰＦ雞紅細胞凝集抑制試驗；

———第３部分：ＳＰＦ雞血清中和試驗；

———第４部分：ＳＰＦ雞血清平板凝集試驗；

———第５部分：ＳＰＦ雞瓊脂擴散試驗；

———第６部分：ＳＰＦ雞酶聯(lián)免疫吸附試驗；

———第７部分：ＳＰＦ雞胚敏感試驗；

———第８部分：ＳＰＦ雞雞白痢沙門氏菌檢驗；

———第９部分：ＳＰＦ雞試管凝集試驗；

———第１０部分：ＳＰＦ雞間接免疫熒光試驗。

本部分為ＧＢ／Ｔ１７９９９的第９部分。

本部分代替ＧＢ／Ｔ１７９９９．８—１９９９《ＳＰＦ雞試管凝集試驗》。

本部分與ＧＢ／Ｔ１７９９９．８—１９９９相比主要變化如下：

———增加了附錄Ａ“試劑的配制”；

———修改了凝集試驗結果的判定；

———刪除了雞傷寒沙門氏菌檢測內容；

———在范圍中進一步明確了本部分使用的情況。

本部分的附錄Ａ為規(guī)范性附錄。

本部分由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。

本部分由全國動物防疫標準化技術委員會（ＳＡＣ／ＴＣ１８１）歸口。

本部分起草單位：中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所、中國動物衛(wèi)生與流行病學中心、濟南斯帕法

斯家禽有限公司。

本部分主要起草人：曲連東、姜騫、韓凌霞、邵衛(wèi)星、朱果、單忠芳、劉家森、司昌德、郭東春、于海波、

孟慶文。

本部分所代替標準的歷次版本發(fā)布情況為：

———ＧＢ／Ｔ１７９９９．８—１９９９。

Ⅰ

書

犌犅／犜１７９９９．９—２００８

犛犘犉雞微生物學監(jiān)測

第９部分：犛犘犉雞試管凝集試驗

１范圍

ＧＢ／Ｔ１７９９９的本部分規(guī)定了試管凝集試驗的技術要求。

本部分適用于對ＳＰＦ雞進行雞白痢沙門氏菌血清抗體檢測。

用血清平板凝集試驗進行雞白痢沙門氏菌的抗體檢測，結果難以判斷時，可采用本部分進行復檢。

２原理

細菌性抗原與相應的抗體結合后，在適量電解質參與下，經(jīng)過一段時間出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象，

結果判定以凝集價表示。

３試劑和器材

３．１試劑

雞白痢抗原（含菌１０９ＣＦＵ），標準陽性、陰性血清，被檢血清，０．５％石炭酸生理鹽水（配制方法見

附錄Ａ）。

３．２器材

試管（口徑８ｍｍ～１０ｍｍ）。

４操作程序

４．１取５支試管，第１管加石炭酸生理鹽水１．８ｍＬ，其余各管加１ｍＬ，第１管加被檢血清０．２ｍＬ，與

石炭酸生理鹽水混勻（１∶１０稀釋），?。保恚桃浦恋冢补?，連續(xù)倍比稀釋至第４管，從第４管吸出１ｍＬ

棄去，各管血清最后稀釋度依次為１∶２０，１∶４０，１∶８０，１∶１６０，１∶３２０。

４．２每管加入抗原液１ｍＬ。

４．３抗原對照：在試管中加抗原液１ｍＬ，加０．５％石炭酸生理鹽水１ｍＬ。

４．４陽性血清對照：將陽性血清稀釋至工作濃度（按說明使用）。在試管中加抗原液１ｍＬ，加稀釋的陽

性血清１ｍＬ。

４．５陰性血清對照：同陽性血清稀釋度使用。

４．６試管振蕩后，置３７℃溫箱中孵育，２４ｈ后移入４℃～８℃冰箱過夜。

４．７結果觀察：抗原對照結果與陰性血清對照，均呈“－”，陽性血清對照呈不同程度凝集，表明試驗成立。

凝集結果判定見表１。凝集效價以呈現(xiàn)“＋＋”凝集試管的血清最高稀釋倍數(shù)作為該血清的凝集效價。

表１凝集試驗結果判定

類別試管所見結果判定

１出現(xiàn)大的凝集塊，上層液體完全透明＋＋＋＋

２出現(xiàn)明顯凝集塊，上層液透明度達７５％＋＋＋陽性

３出現(xiàn)可見的凝集顆粒，上層液透明度達５０％＋＋

４出現(xiàn)輕微可見的凝集