GB/T 19915.6-2005豬源鏈球菌通用熒光PCR檢測方法

ICS07.100.30C53中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T：19915.6—2005豬源鏈球菌通用熒光PCR檢測方法Methodofthereal-timePCRforthedetectionofSireptococcussuis2005-09-27發(fā)布2005-11-01實施中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

GB/T19915.6-2005前本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A是規(guī)范性附錄·附錄B是資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國動物防疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中華人民共和國北京出入境檢驗檢疫局、中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張鶴曉、宋立、高志強、寧宜寶、周琦、喬彩霞、楊承槐、吳丹、谷強本標(biāo)準(zhǔn)系首次發(fā)布的國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T19915.6—2005豬源鏈球菌通用熒光PCR檢測方法1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬源鏈球菌通用熒光PCR檢測方法本標(biāo)準(zhǔn)適用于增菌培養(yǎng)物、疑似病料及生豬執(zhí)子、豬組織樣品中豬源鏈球菌的檢測規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勒誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T19438.1—2004禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測方法縮略語本標(biāo)準(zhǔn)采用下列縮略語：熒光PCR熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)C值每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號量達(dá)到設(shè)定的閩值時所經(jīng)歷的循環(huán)圈數(shù)DNA脫氧核糖核酸TagDNA聚合酶PBS磷酸鹽緩沖生理鹽水原理采用TagMan方法.在比對豬源鏈球菌16SrDNA基因序列的基礎(chǔ)上.設(shè)計針對該基因的特異性引物和特異性的熒光雙標(biāo)記探針進(jìn)行配對。探針5"端標(biāo)記FAM熒光素為報告熒光基團(tuán)(用R表示）3"端標(biāo)記TAMRA熒光素為渾滅熒光基團(tuán)(用Q表示）,它在近距離內(nèi)能吸收5°端熒光基團(tuán)發(fā)出的熒光信號。PCR反應(yīng)進(jìn)入退火階段時,引物和探針同時與目的基因片段結(jié)合，此時探針上R基團(tuán)發(fā)出的熒光信號被Q基團(tuán)所吸收.儀器檢測不到熒光信號;而反應(yīng)進(jìn)行到延伸階段時.Taq酶的5"→3"的外切核酸酶功能將探針降解。這樣探針上的R基團(tuán)游離出來,所發(fā)出的熒光不再為Q所吸收而被檢測儀所接收。隨著PCR反應(yīng)的循環(huán)進(jìn)行,PCR產(chǎn)物與熒光信號的增長呈現(xiàn)對應(yīng)關(guān)系。5豬源鏈球菌通用熒光PCR檢測實驗室的標(biāo)準(zhǔn)化設(shè)置與管理豬源鏈球菌通用熒光PCR檢測實驗室的標(biāo)準(zhǔn)化設(shè)貿(mào)與管理見GB/T19438.1—2004中附錄C。試劑和材料6.1除另有說明.所用試劑均為分析純。6.1.1無水乙醇：-20℃預(yù)冷6.1.275%乙醇;用新開啟的無水乙醇和無DNA酶的滅菌純化水