牛蒡葉中綠原酸的提取分離

牛蒡葉中綠原酸的提取分離及應(yīng)用前景姓名：張守村1目錄綠原酸簡(jiǎn)介綠原酸提取方法綠原酸的主要功用綠原酸的應(yīng)用2345綠原酸化學(xué)結(jié)構(gòu)式6綠原酸簡(jiǎn)介牛蒡的主要有效成分之一為綠原酸。綠原酸是咖啡酸與奎寧酸（1-羥基六氫沒(méi)食子酸）的酯，分子中具有羧基、酯鍵以及多元醇和多酚結(jié)構(gòu)，是一種苯丙素類(lèi)化合物，化學(xué)名為3-O-咖啡?？鼘幩幔Y(jié)構(gòu)式如圖1所示。半水合物為針狀結(jié)晶（水）。110℃變?yōu)闊o(wú)水化合物，熔點(diǎn)208℃，[α]24D-35.2℃（c=2.8）。98%綠原酸，25℃水中溶解度為4%，熱水中溶解度更大；易溶于乙醇及丙酮，極微溶于醋酸乙酯，難溶于三氯甲烷、乙醚、苯等親脂性有機(jī)溶劑。7提取工藝綠原酸的提取工藝正是由于綠原酸良好的藥用價(jià)值以及良好的應(yīng)用前景，國(guó)內(nèi)外已有不少文獻(xiàn)對(duì)金銀花中綠原酸的分析、測(cè)定及提取工藝的研究，但提取方法各不相同。主要流程大致可以分為粗提、分離純化、成品的制備等步驟，其中粗提方法很多。

8提取方法回流提取法：稱(chēng)取原料適量，在一定pH值和溫度下，加入定量的提取溶劑，回流提取，過(guò)濾、濾渣，再用相同的提取溶劑在相同的條件下提取、過(guò)濾，將濾液合并并進(jìn)行真空干燥至粉末。超聲提取法：稱(chēng)取原料適量，在一定pH值和溫度下，加入定量的提取溶劑，超聲波處理，過(guò)濾、濾渣，再用相同的提取溶劑在相同的條件下處理、過(guò)濾，將濾液合并并進(jìn)行真空干燥至粉末。微波提取法：稱(chēng)取原料適量，在一定pH值和溫度下，加入定量的提取溶劑，置微波爐中處理一定的時(shí)間，取出冷卻，再置微波爐中同樣條件處理，如此重復(fù)6次，過(guò)濾，真空干燥至粉末。9提取方法滲漉法提取：稱(chēng)取原料適量，在一定pH值和溫度下，加入定量的提取溶劑，置冰箱冷卻，待結(jié)冰后取出，冰融化后裝入滲漉筒，收集滲漉液真空干燥至粉末。煎煮法提?。悍Q(chēng)取原料適量，加入適量80%工業(yè)乙醇(pH值為2.5)，煎煮一定的時(shí)間，過(guò)濾、濾渣，再用同樣的方法煎煮相同時(shí)間，過(guò)濾，合并濾液真空干燥至粉末。浸提法提?。悍Q(chēng)取原料適量，加入適量80%工業(yè)乙醇(pH值為2.5)，室溫靜置24h，過(guò)濾，濾液真空干燥至粉末。

10綠原酸的分離、純化工藝將提取液過(guò)濾，濃縮，拌入聚酰胺，真空烘干，研磨，過(guò)篩，得粗品，經(jīng)聚酰胺柱層析分離，得產(chǎn)品得率和產(chǎn)品純度(綠原酸含量)。另外可以綠原酸含量為指標(biāo)，分別考察聚酰胺目數(shù)、洗脫劑、物料比、柱徑與柱長(zhǎng)比、流速、洗脫劑用量等影響因素，優(yōu)化出最佳的分離工藝參數(shù)。對(duì)分離后的產(chǎn)品，選用不同的溶劑進(jìn)行重結(jié)晶，從中選出最佳的溶劑進(jìn)行精制，得到綠原酸精品。當(dāng)然，分離純化還有很多方法，比如利用大孔樹(shù)脂也同樣可以純化綠原酸。11綠原酸的含量測(cè)定精確稱(chēng)取原料1.00g，加入30mL95%乙醇溶液，置于索氏提取器中回流提取，55℃回流提取4h，放置冷卻至室溫，過(guò)濾，定容至50mL，搖勻，精確吸取提取液0.1mL，稀釋至4mL，以95%乙醇作對(duì)空白，在紫外分光光度計(jì)331nm處測(cè)定吸光度A值，按綠原酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算其綠原酸的含量。

12綠原酸的提取工藝對(duì)比提取溶劑的選?。禾崛∪軇┲饕袃煞N，即水和乙醇（工業(yè)乙醇），不同的提取方法可以采用不同的提取溶劑。乙醇的提取效果明顯好于水，但水作為溶劑，雖然提取率相對(duì)較低，但對(duì)環(huán)境無(wú)污染，生產(chǎn)成本相對(duì)較低，工業(yè)生產(chǎn)切實(shí)可行，所以目前仍然是大工業(yè)生產(chǎn)普遍采用的提取方法。提取方法的選?。翰捎孟嗤娜軇⒉煌奶崛》椒▽?duì)綠原酸進(jìn)行提取，提取率最高的方法為超聲波法，其次為煎煮法、微波法、浸提法等。13功用：生物活性綠原酸具有廣泛的生物活性，現(xiàn)代科學(xué)對(duì)綠原酸生物活性的研究已深入到食品、保健、醫(yī)藥和日用化工等多個(gè)領(lǐng)域。綠原酸是一種重要的生物活性物質(zhì)，具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利膽、抗腫瘤、降血壓、降血脂、清除自由基和興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)等作用。

14功用：抗菌、抗病毒綠原酸有較強(qiáng)的抗菌消炎作用，對(duì)桃葉珊瑚苷及其多聚體有明顯的抑菌作用，桃葉珊瑚苷元對(duì)革蘭氏陰性、陽(yáng)性菌都有抑制作用。桃葉珊瑚苷有抑菌、利尿作用，并能促進(jìn)傷口愈合；桃葉珊瑚苷與葡萄糖苷一起預(yù)培養(yǎng)后還會(huì)產(chǎn)生明顯的抗病毒作用，但其本身開(kāi)不具有抗病毒功能。日本愛(ài)知醫(yī)科大學(xué)加齡醫(yī)科學(xué)研究所經(jīng)研究確認(rèn)，從杜仲中提取的堿性物質(zhì)有抗破壞人體免疫系統(tǒng)病毒的功能，這種物質(zhì)有可能用于預(yù)防和治療艾滋病。15功用：抗氧化作用綠原酸是一種有效的酚型抗氧化劑，其抗氧化能力要強(qiáng)于咖啡酸、對(duì)羥苯酸、阿魏酸、丁香酸、丁基羥基茴香醚（BHA）和生育酚。綠原酸之所以有抗氧化作用，是因?yàn)樗幸欢康腞-OH基，能形成具有抗氧化作用的氫自由基，以消除羥基自由基和超氧陰離子等自由基的活性，從而保護(hù)組織免受氧化作用的損害。16功用：清除自由基、抗衰老、抗肌肉骨骼老化綠原酸及其衍生物具有比抗壞血酸、咖啡酸和生育酚（維生素E）更強(qiáng)的自由基清除效果，可有效清除DPPH自由基、羥基自由基和超氧陰離子自由基，還可抑制低密度脂蛋白的氧化。綠原酸對(duì)有效地清除體內(nèi)自由基、維持機(jī)體細(xì)胞正常的結(jié)構(gòu)和功能、防止和延緩腫瘤突變和衰老等現(xiàn)象的發(fā)生具有重要作用。杜仲綠原酸含有一種可促進(jìn)人體的皮膚、骨骼、肌肉中膠蛋白的合成與分解的特殊成分，具有促進(jìn)代謝、防止衰退的功能，可用來(lái)預(yù)防宇航員因太空失重而引起的骨骼和肌肉衰退，同時(shí)發(fā)現(xiàn)杜仲綠原酸無(wú)論在體內(nèi)還是體外，均有明顯抗自由基作用。17功用：抑制突變和抗腫瘤現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)證明杜仲綠原酸有抗癌和抑癌之功效，日本學(xué)者研究了杜仲綠原酸的變異原性抑制作用(antimutagenicity)，發(fā)現(xiàn)該作用與綠原酸等抗變異原性成分有關(guān)，揭示了綠原酸對(duì)腫瘤預(yù)防的重要意義。蔬菜、水果中的多酚類(lèi)如綠原酸、咖啡酸等可通過(guò)抑制活化酶來(lái)抑制致癌物黃曲霉毒素B1和苯并[a]-芘的變異原性；綠原酸還可通過(guò)降低致癌物的利用率及其在肝臟中的運(yùn)輸來(lái)達(dá)到防癌、抗癌的效果。綠原酸對(duì)大腸癌、肝癌和喉癌具有顯著的抑制作用，被認(rèn)為是癌癥的有效化學(xué)防護(hù)劑。18功用：對(duì)心血管保護(hù)作用綠原酸作為一種自由基清除劑及抗氧化劑已被大量的試驗(yàn)證明，綠原酸的這種生物活性，對(duì)心血管系統(tǒng)能產(chǎn)生保護(hù)作用。異綠原酸B對(duì)大鼠具有較強(qiáng)促進(jìn)前異綠原酸B對(duì)大鼠具有較強(qiáng)促進(jìn)前列腺環(huán)素（PGI2）的釋放和抗血小板凝集作用；對(duì)豚鼠肺碎片感應(yīng)的抗體誘導(dǎo)SRS-A釋放抑制率達(dá)62.3%。異綠原酸C也有促進(jìn)PGI2釋放作用。另外，異綠原酸B對(duì)血小板學(xué)栓素的生物合成和氫過(guò)氧化無(wú)誘發(fā)的內(nèi)皮素?fù)p傷有極強(qiáng)的抑制作用。

19功用：降壓作用經(jīng)多年臨床試驗(yàn)證實(shí)的，杜仲綠原酸有明顯的降壓作用，而且療效平穩(wěn)，無(wú)毒、無(wú)副作用。美國(guó)威斯康星大學(xué)研究發(fā)現(xiàn)杜仲綠降血壓的有效成分是松酯醇二葡萄糖苷，桃葉珊瑚甙，綠原酸，和杜仲綠原酸多糖類(lèi)。

20功用：其它生物活性由于綠原酸對(duì)透明質(zhì)酸（HAase）及葡萄糖-6-磷酸酶（Gl-6-Pase）有特殊的抑制作用，所以綠原酸對(duì)于創(chuàng)傷的治愈、皮膚健康濕潤(rùn)、潤(rùn)滑關(guān)節(jié)、防止炎癥以及體內(nèi)血糖的平衡調(diào)控等都有一定得療效。綠原酸對(duì)多種疾病和病毒還有較強(qiáng)的抑制和殺滅作用。綠原酸有降血壓、抗菌、抗病毒、消炎、增高白血球、預(yù)防糖尿病、顯著增加胃腸蠕動(dòng)和促進(jìn)胃液分泌等藥理作用，對(duì)急性咽喉炎癥有明顯的療效。研究表明，口服綠原酸能夠顯著的刺激膽汁的分泌，具有利膽保肝的功效；它還可有效抑制H2O2引起的大鼠紅細(xì)胞溶血作用。21應(yīng)用：醫(yī)藥保健衛(wèi)生部《藥品標(biāo)準(zhǔn)》收錄具有清熱解毒、抗菌消炎的中成藥170種，均含有綠原酸且為主要成分。目前，在銀黃制劑、雙黃連制劑等藥品的生產(chǎn)中，已將綠原酸作為質(zhì)量控制的重要指標(biāo)之一。綠原酸等多酚類(lèi)物質(zhì)被稱(chēng)為“第七類(lèi)營(yíng)養(yǎng)素”，被廣泛用于保健行業(yè)，添加了綠原酸的保健藥品具有清熱解毒、養(yǎng)顏潤(rùn)膚、解除煙酒過(guò)多等特點(diǎn)。Microherb從植物中提取的99%綠原酸純品可作為二類(lèi)新藥開(kāi)發(fā)，此外綠原酸還是重要的化學(xué)試劑，在生化分析和化學(xué)工業(yè)中都具有廣泛的應(yīng)用。22應(yīng)用：食品行業(yè)天然的食品抗氧化劑越來(lái)越受到消費(fèi)者的歡迎，從杜仲葉中提取和分離的綠原酸是一種新型高效的酚型抗氧化劑。如在豬油中加入少量綠原酸，可提高豬油的抗氧化穩(wěn)定性，增長(zhǎng)保質(zhì)期。綠原酸具有增香和護(hù)色作用，可用于食品和果品的保鮮。它可在某些食品中取代或部分取代目前常用的人工合成的抗氧化劑。Hirazawa等將綠原酸用于魚(yú)片的保鮮后，發(fā)現(xiàn)其效果要優(yōu)于茶葉提取物和α-生育酚。綠原酸還被用于果汁的保鮮，可有效防止飲料和食品的腐敗變質(zhì)；Wilska等的研究還發(fā)現(xiàn)，綠原酸可大大提高草莓等新鮮果