第七章微生物的研究方法1

第七章微生物的研究方法滅菌配制培養(yǎng)基純種分離鑒定菌種保藏、復(fù)壯菌落形態(tài)菌體形態(tài)生理生化實(shí)驗(yàn)第一節(jié)配制培養(yǎng)基和純種分離

一、培養(yǎng)基

按照培養(yǎng)基制成的形式，可分為（1）液體培養(yǎng)基：增殖、鑒定微生物（2）固體培養(yǎng)基兩種：分離、保藏菌種及鑒定微生物

a平板培養(yǎng)基：分離、鑒定微生物

b斜面培養(yǎng)基：培養(yǎng)、保藏菌種另：常用的凝固劑是瓊脂(洋菜)，當(dāng)加入1.5％－3％時(shí)就形成固體，而加入0.5％－0.8％時(shí)，則成半固體。

培養(yǎng)、分離微生物常用的培養(yǎng)基二、純種分離工具接種針、接種環(huán)、接種鉤、玻璃涂棒、移液槍方法平板涂布法傾注平板法平板劃線法第二節(jié)滅菌

一、概念消毒：指只殺死一部分微生物，主要是病原微生物

滅菌：指殺死一切微生物，包括芽孢和孢子物理法化學(xué)法熱滅菌紫外線和射線15w紫外燈過(guò)濾干熱濕熱灼燒烘烤消毒劑75%乙醇、甲醛、乳酸、石炭酸、石灰水、福爾馬林、新潔爾滅、龍膽紫等防腐劑有機(jī)汞、有機(jī)錫、酚類等160℃2h/170℃1.5h121℃15-30min適用范圍最廣高壓常壓巴氏消毒間歇滅菌二、方法干燥熱空氣滅菌注意事項(xiàng)(1)滅菌的玻璃器皿切不可有水，有水的玻璃器皿在干熱滅菌中容易炸裂。(2)滅菌物品不能堆得太滿、太緊，以免影響溫度均勻上升。(3)滅菌物品不能直接放在電烘箱底板上，以防止包裝紙或棉花被烤焦。(4)滅菌溫度恒定在160～170℃為宜。溫度超過(guò)180℃，棉花、報(bào)紙會(huì)燒焦甚至燃燒。(5)降溫時(shí)，需待溫度自然降至60℃以下才能打開(kāi)箱門(mén)取出物品，以免因溫度過(guò)高而驟然降溫導(dǎo)致玻璃器皿炸裂。(6)培養(yǎng)基、橡膠制品、塑料制品等不能使用干熱滅菌。濕熱滅菌注意事項(xiàng)(1)每次使用前，應(yīng)檢查滅菌鍋內(nèi)有足夠水量，使水位過(guò)電熱管。(3)擺放滅菌物品時(shí)，嚴(yán)禁堵塞安全閥的出氣孔，必須留出空位保證其暢通放汽。(4)每次開(kāi)鍋前，一定要檢查確認(rèn)鍋內(nèi)無(wú)壓力！壓力指示表必須指示為0！(5)如果使用儀器的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)有超溫及超壓等異?，F(xiàn)象，請(qǐng)斷開(kāi)電源，開(kāi)關(guān)處于OFF位置，并將插頭從電源處拔下，待機(jī)器壓力降下來(lái)為零時(shí)，再打開(kāi)鍋蓋進(jìn)行檢查。(6)滅菌液體時(shí)，應(yīng)將液體灌裝在硬質(zhì)的耐熱玻璃瓶中，以不超過(guò)3/4體積為好，瓶口選用棉花紗塞，切勿使用未打孔的橡膠或軟木塞。(7)使用間歇法或持續(xù)法滅菌時(shí)必須在滅菌物里外都達(dá)到100℃后，開(kāi)始計(jì)算滅菌時(shí)間

在相同溫度下，濕熱滅菌比干熱滅菌效果好的原因：①熱蒸汽對(duì)細(xì)胞成分的破壞作用更強(qiáng)。水分子的存在有助于破壞維持蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)的氫鍵和其他相互作用弱鍵，更易使蛋白質(zhì)變性。蛋白質(zhì)含水量與其凝固溫度成反比；②熱蒸汽比熱空氣穿透力強(qiáng)，能更加有效地殺滅微生物；③蒸汽存在潛熱，當(dāng)氣體轉(zhuǎn)變?yōu)橐后w時(shí)可放出大量熱量，故可迅速提高滅菌物體的溫度。

在微生物實(shí)驗(yàn)室中所采取的預(yù)防雜菌污染的一切操作措施，主要包括創(chuàng)造無(wú)菌環(huán)境、使用無(wú)菌器材和遵循無(wú)菌操作規(guī)范。無(wú)菌環(huán)境：酒精燈、超凈工作臺(tái)、無(wú)菌室無(wú)菌器材：無(wú)菌操作規(guī)范：三、無(wú)菌操作第三節(jié)微生物的觀察一、菌落形態(tài)大小

極?。ǎ?mm）;?。?-2mm）；中等（2-4mm）；大（4mm）表面光滑、皺褶、粗糙、同心環(huán)龜裂邊緣整齊、波狀、齒狀、卷毛狀、輪紋狀、木耳狀、缺刻狀隆起扁平、略高、微凹、半球、瘤狀突起多丘陵?duì)铑伾?/p>

光澤閃光、不閃光、金屬光澤透明不透明、半透明、透明質(zhì)地油脂、膜、粘稠狀、脆形狀圓形、放射狀、假根狀、絲狀伸展蔓延、分枝狀一、菌體形態(tài)（鏡檢）1、工具顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡：明視野、暗視野、相差、熒光電子顯微鏡：幾十萬(wàn)倍至一百萬(wàn)倍掃描電鏡透射電鏡二、染色觀察

活菌壓滴懸滴美蘭染色

方法正染單染色法不能鑒別復(fù)染色法可鑒別革染、抗酸性染色負(fù)染莢膜其它二、測(cè)大小測(cè)微尺目鏡測(cè)微尺鏡臺(tái)測(cè)微尺步聚：裝入目鏡臺(tái)測(cè)微尺夾于載物臺(tái)調(diào)好光線、焦距、晴晰看到刻度移到臺(tái)微尺、轉(zhuǎn)目微尺，使兩者刻度第一條線重合，向左找出另外重合線記錄兩尺重疊格數(shù)，公式計(jì)算第三節(jié)保藏與復(fù)壯

目的不致死亡、絕種、不污染雜菌、保優(yōu)良性狀原理代謝處于不活躍、生長(zhǎng)繁殖受抑制

低溫干燥缺氧一、保藏斜面礦物油純種制曲砂土