海洋藥物實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)2007

PAGEPAGE7《海洋藥物實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》實(shí)驗(yàn)須知實(shí)驗(yàn)一用離子交換法從海帶中提碘實(shí)驗(yàn)二高效液相色譜法測定黃芩苷的含量實(shí)驗(yàn)須知海洋藥物實(shí)驗(yàn)教學(xué)是海洋藥物課程的重要組成部分，是使學(xué)生進(jìn)一步理論聯(lián)系實(shí)際，掌握從海洋生物中提取、分離和鑒定有效成分的基本操作技能，提高學(xué)生分析和解決問題能力。養(yǎng)成嚴(yán)謹(jǐn)科學(xué)態(tài)度和良好工作作風(fēng)必不可少的教學(xué)環(huán)節(jié)。為此，提出下列實(shí)驗(yàn)須知：1．遵守實(shí)驗(yàn)室制度，維護(hù)實(shí)驗(yàn)室安全，不違章操作，嚴(yán)防爆炸、著火、中毒、觸電、漏水等事故的發(fā)生。若發(fā)生事故應(yīng)立即報(bào)告指導(dǎo)教師。2．實(shí)驗(yàn)前作好預(yù)習(xí)，明確實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，了解實(shí)驗(yàn)的基本原理和方法，安排好當(dāng)天計(jì)劃，爭取準(zhǔn)時結(jié)束。實(shí)驗(yàn)過程應(yīng)養(yǎng)成及時記錄的習(xí)慣。凡是觀察到的現(xiàn)象和結(jié)果及有關(guān)數(shù)據(jù)，應(yīng)立即如實(shí)記錄，實(shí)驗(yàn)完畢后，認(rèn)真總結(jié)，寫好報(bào)告。3．實(shí)驗(yàn)室中保持安靜，不許大聲喧嚷，不許抽煙、不遲到、不隨便離開，實(shí)驗(yàn)臺面應(yīng)保持清潔，使用過的儀器及時清洗干凈，存放在實(shí)驗(yàn)柜內(nèi)，廢棄的固體和濾紙等丟入廢物缸內(nèi)，絕不能丟入水槽、下水道和窗外，以免堵塞和影響環(huán)境衛(wèi)生。4．公用儀器及藥品用完后立即返還原處，破損儀器應(yīng)填寫破損報(bào)告單，注明原因。節(jié)約用水、用電、藥用試劑。嚴(yán)格藥品用量。5．保持實(shí)驗(yàn)室內(nèi)整潔，學(xué)生采取輪流值日，每次實(shí)驗(yàn)完畢，負(fù)責(zé)整理公用儀器，將實(shí)驗(yàn)臺、地面打掃干凈，倒清廢物缸，檢查水、電和門窗是否關(guān)閉。實(shí)驗(yàn)一用離子交換法從海帶中提碘（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠秒x子交換法從海帶中提碘涉及一系列物理化學(xué)過程，有助于學(xué)生理解鹵素單質(zhì)的提取分離，利用海洋資源，并能初步掌握離子交換劑應(yīng)用技術(shù)，了解色譜分離方法。（二）主要儀器及試劑交換吸附裝置，721型分光光度計(jì)，250mL梨型分液漏斗H2O2：直接取A.R純或C.P純試劑10%NaOH：將20克溶解在200mL水中10%NaCl：將50克NaCl溶解在500mL水中10%NaNO2：將20克NaNO2溶解在200mL水中海帶6MH2SO4：在333mL水中邊攪拌邊加入167mL濃硫酸40%NaOH：將40克NaOH溶解在100mL水中（三）實(shí)驗(yàn)原理海帶中所含的碘一般以I－離子狀態(tài)存在。用水浸泡海帶，I－離子及其它可溶性有機(jī)質(zhì)如褐藻糖膠等進(jìn)入浸出液中。若用海帶重量13－15倍的水量浸泡海帶，可使浸出液中I－離子含量達(dá)到0.5～0.55克/升。海帶浸出液中褐藻糖膠的存在妨礙碘的提取，應(yīng)預(yù)先除去。一般采用堿化絮凝法使其生成褐藻酸鈉絮狀沉淀而沉降。由于強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂對多碘離子I3－或I5－離子的交換吸附量（700～800克/升樹脂）遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于對I－離子的吸附量（150～170克/升樹脂），因此常將海帶浸出液中的I－離子部分氧化使生成I3－或I5－離子，再被樹脂交換吸附。一般采用在酸性條件下加入適量氧化劑，如NaClO或H2O2的方法使I－離子氧化并生成多碘離子以利于交換吸附，氧化及交換反應(yīng)方程式如下：2I－＋ClO－＋2H+=I2＋Cl－＋H2O或2I－+2H++H2O2=I2+2H2OI2＋I(xiàn)－=I3－R－Cl＋I(xiàn)3－=R－I3＋Cl－吸附碘達(dá)飽和的樹脂呈黑紅色。先后用氫氧化鈉溶液及氯化鈉溶液處理樹脂，可以將碘洗脫。氫氧化鈉溶液洗脫碘主要是發(fā)生了歧化反應(yīng)，洗脫液中含有I－和IO3－離子：3R－I3＋6NaOH=3R－I＋5NaI＋NaIO3＋3H2O氯化鈉溶液洗脫碘則是發(fā)生了如下的交換反應(yīng)，I－離子進(jìn)入洗脫液中，樹脂同時被再生為氯型：R－I＋NaCl=R－Cl＋NaI往堿性洗脫液中加酸，由于溶液pH值的變化，發(fā)生逆歧化反應(yīng)而析出泥狀粗碘：5NaI＋NaIO3＋3H2SO4=3I2＋3Na2SO4＋3H2O氯化鈉洗脫液經(jīng)酸化后再加氧化劑如NaNO2或KClO3溶液，也能使I－離子氧化生成I2。NaNO2使I－離子氧化生成碘的離子方程式如下：2I－＋2NO2－＋4H+=I2＋2NO＋2H2O通過離心分離即獲得泥狀粗碘。（四）實(shí)驗(yàn)步驟1、浸泡海帶取海帶500克，加13～15倍水量分兩次浸泡，得浸出液6000毫升左右，碘含量為0.5克/升（由實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備室預(yù)先浸泡，可供5～6人實(shí)驗(yàn)用）。2、堿化浸出液除褐藻糖膠即海帶浸出液1000毫升，加入濃度為40%的NaOH溶液，控制pH值為12左右，充分?jǐn)嚢韬蟪吻?。采用傾析法分離出清液。3、氧化游離于上述清液中加入濃度為6mol·L-1的H2SO4溶液，使pH值為1.5～2。往酸化溶液中加入NaClO溶液或H2O2溶液，充分?jǐn)嚢璨⒂^察溶液顏色變化。待溶液由淡黃逐漸變成棕紅色即表明I－離子已轉(zhuǎn)變?yōu)槎嗟怆x子。（用淀粉－KI試紙檢驗(yàn)）。4、交換吸附將強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂（已轉(zhuǎn)為氯型）注入交換柱中（樹脂層高度為12cm），連接交換裝置，待溶液全部通過后，樹脂顏色變?yōu)楹诩t色（用淀粉－KI試紙檢驗(yàn)浸泡液交換前與后碘的形態(tài)）。5、洗脫：分兩步進(jìn)行第一步：取8～10%的NaOH溶液40mL注入交換柱中。在強(qiáng)堿作用下，樹脂顏色逐漸變淺，待樹脂基本褪色后，放出溶液，收集于一小燒杯中為堿性洗脫液。第二步：取10%的NaCl溶液40mL注入上述交換柱中。稍待一會兒，慢慢放出溶液收集于另一小燒瓶中，為氯化鈉洗脫液。6、碘析往堿性洗脫液中滴加H2SO4溶液（6mol·L-1）。如果不攪動溶液，可觀察到局部出現(xiàn)棕色或棕黑色渾濁現(xiàn)象，攪拌后渾濁消失。繼續(xù)滴加H2SO4溶液至洗脫液呈酸性時，棕黃色渾濁不再消失，靜置澄清，燒杯底部會析出一層泥狀粗碘。往氯化鈉洗脫液中滴加H2SO4溶液（6mol·L-1）使之酸化，再滴加10%的NaNO2溶液（在通風(fēng)櫥中進(jìn)行）。待溶液由無色轉(zhuǎn)變?yōu)樽丶t色直至出現(xiàn)棕黑色渾濁，表明已有I2游離析出，靜置澄清。7、離心分離吸出燒杯中上部清液，剩余少量溶液及粗碘沉淀轉(zhuǎn)入離心試管中進(jìn)行離心分離，吸出清液即得粗碘。碘含量不多時，可將步驟6中二種I2析出液置于分液漏斗中分別加CCl4或CHCl3各10mL萃取后在721分光計(jì)上，l=510nm，用1cm比色皿測定透光率。（五）處理與討論1、討論離子交換法從海帶中提碘的基本原理，并指出為什么強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂需要預(yù)先轉(zhuǎn)為氯型。用陽離子樹脂代替行嗎？2、為什么浸泡液的氧化是提碘的最關(guān)鍵步驟？如何控制氧化完全，而又不過氧化。3、用淀粉－KI試紙檢驗(yàn)碘形態(tài)是根據(jù)什么原理。為什么交換吸附前與后碘形態(tài)會有不同。4、堿洗脫與NaCl洗脫在原理上有何差異，為何還要分二步進(jìn)行洗脫。實(shí)驗(yàn)二高效液相色譜法測定黃芩苷的含量（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、理解高效液相色譜法的原理。2、掌握高效液相色譜測定方法及數(shù)據(jù)處理。（二）儀器與試劑1、高效液相色譜儀（紫外檢測器）、超聲波提取器、分析天平、研缽、量筒等。2、甲醇（色譜純）、磷酸（A·R）、雙蒸水、乙醇（A·R）。3、黃芩苷對照品（中國藥品生物制品檢定所）、牛黃解毒片（市售品）。（三）基本原理利用高效液相色譜法分離牛黃解毒片中的黃芩苷，在λmax315nm處進(jìn)行檢測，為了減小實(shí)驗(yàn)條件波動對分析結(jié)果的影響，采用外標(biāo)法定量。（四）操作步驟1、對照品溶液的制備精密稱取在60℃減壓干燥4小時的黃芩苷對照品適量，加甲醇制成1ml中含30μg2、供試品溶液的制備取本品20片（包衣片除去包衣），精密稱定，研細(xì)，混勻，取約1g，精密稱定，加70％乙醇30ml，超聲處理20分鐘，放冷，濾過，濾液置50ml量瓶中，用少量70％乙醇分次洗滌容器和殘?jiān)?，洗液濾入同一量瓶中，加70％乙醇至刻度，搖勻，即得。3、測定方法色譜條件：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇－水－磷酸（45：55：0.2）為流動相，流速1mL/min；紫外檢測器，波長為315nm。測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測量對照品和供試品待測成分的峰面積