韓國(guó)檢測(cè)霉菌的方法是Howard霉菌計(jì)數(shù)法

韓國(guó)檢測(cè)霉菌的方法是Howard霉菌計(jì)數(shù)法(HowardMoldCountingAssay)。其方法如下：所需設(shè)備1)高速混合器可調(diào)速的高速混合器，4-8個(gè)尖銳的不銹鋼刃在200ml容量的不銹鋼杯容器的底部附近旋轉(zhuǎn)，使用旋轉(zhuǎn)速度最少0?10,000rpm之間,并用帶有旋轉(zhuǎn)速度儀的高速混合器。Howard霉菌計(jì)數(shù)玻片(HowardMoldCountingSlide)依外壕被圍繞的20X15mm大小的四角的玻璃片。試料點(diǎn)滴平面的兩個(gè)側(cè)面蓋玻片支架比試料點(diǎn)滴平面高出0.1mm的整齊突起。蓋玻片放在支架上面時(shí)，使用試料點(diǎn)滴平面與蓋玻片之間的深度達(dá)到0.1mm的玻片。顯微鏡使用配有4個(gè)黑白接物鏡并以10-400倍的倍率可以觀察的顯微鏡。試劑1)1%氫氧化鈉溶液(NaOH)氧化硅膠液小包制或者2-辛醇(2-octanol)穩(wěn)定液6%果膠溶液)：高速攪拌器里注入475ml、85°C水?dāng)嚢璧耐瑫r(shí)將25g的果膠(pectin)少量的添加并溶解。3．試驗(yàn)操作1)試驗(yàn)溶液的調(diào)配稱(chēng)5g檢樣放入高速混合器。100ml的1%氫氧化鈉溶液分2次添加，第一次添加約30ml在10，000rpm的速度下攪拌5秒，然后用余下的70ml清洗混合器內(nèi)壁上的附著物。把混合器內(nèi)的混合物以10,000rpm的速度攪拌3分鐘后，滴入氧化硅膠液3?4滴除去泡沫，以上的混合物100g與25g的穩(wěn)定液混合作為顯微鏡鏡檢試料。2）試驗(yàn)操作（1）顯微鏡鏡檢試料的操作Howard霉菌計(jì)數(shù)玻片的試料平面上利用滴管點(diǎn)滴試料。在點(diǎn)滴的試料上，大的檢樣片或籽等用微型鑷子取出后，盡量不產(chǎn)生斑點(diǎn)或線(xiàn)條的小心放上蓋玻片，然后在顯微鏡載物臺(tái)上插入霉菌計(jì)數(shù)玻片。（2）霉菌菌絲的診斷在顯微鏡的100?450倍觀察時(shí)，霉菌菌絲有下列外觀特性。細(xì)胞壁的平行分節(jié)形成粒子分枝菌絲的末梢非折射性的外觀（3）陽(yáng)性劃區(qū)判定對(duì)一個(gè)可視劃區(qū)判定陽(yáng)性或者陰性。哪一個(gè)劃區(qū)也不能一次以上的判定陽(yáng)性。為判定一個(gè)劃區(qū)為陽(yáng)性，三根以下的霉菌菌絲的總長(zhǎng)度（合計(jì)長(zhǎng)度）需要超過(guò)可視劃區(qū)直徑的1/6.大部分的陽(yáng)性劃區(qū)判定是包括分枝長(zhǎng)度的一個(gè)菌絲的長(zhǎng)度為依據(jù)，并且要超過(guò)可視劃區(qū)直徑的1/6。下列長(zhǎng)度中只要有一個(gè)超過(guò)可視劃區(qū)直徑的1/6，該可視劃區(qū)判定為陽(yáng)性。?沒(méi)有分枝的一個(gè)菌絲的長(zhǎng)度?分枝的長(zhǎng)度合計(jì)的一個(gè)菌絲的長(zhǎng)度2個(gè)菌絲的長(zhǎng)度合計(jì)的長(zhǎng)度3個(gè)菌絲的長(zhǎng)度合計(jì)的長(zhǎng)度由霉菌塊形成的所有菌絲的總長(zhǎng)度（霉菌塊是作為1個(gè)碎片來(lái)看待并且所有菌絲的總長(zhǎng)度）（4）顯微鏡鏡檢適當(dāng)?shù)恼{(diào)整粗調(diào)螺絲和微調(diào)螺絲，在90~125倍的倍率范圍里，調(diào)準(zhǔn)焦距到可視劃區(qū)內(nèi)的物體能夠清晰可見(jiàn)。在試料平面上設(shè)定25個(gè)圓型的可視劃區(qū)，按號(hào)碼順序判定霉菌菌絲體的各可視劃區(qū)的霉菌菌絲體是陽(yáng)性或者陰性。從1號(hào)可視劃區(qū)到25號(hào)可視劃區(qū)逐一鏡檢，按各可視劃區(qū)分別判定霉菌菌絲體的陽(yáng)性或者陰性。從1號(hào)到25號(hào)劃區(qū)的鏡檢結(jié)束后，從顯微鏡拿出Howard霉菌計(jì)數(shù)玻片清洗干燥。使用同一試驗(yàn)溶液反復(fù)（1）的試驗(yàn)操作，從25號(hào)劃區(qū)起至1號(hào)劃區(qū)逐一實(shí)施鏡檢，對(duì)總共50個(gè)可視劃區(qū)判定