酶的化學(xué)修飾

關(guān)于酶的化學(xué)修飾第1頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六一、為什么要對酶進(jìn)行化學(xué)修飾

雖然酶催化化學(xué)反應(yīng)有專一性強(qiáng)、效率高、條件溫和等優(yōu)點(diǎn)，但也有一些嚴(yán)重的缺點(diǎn)，正是這些缺點(diǎn)使得酶的應(yīng)用受到很大的限制，酶的用途還不夠廣泛，大規(guī)模使用酶的工業(yè)生產(chǎn)還很少。第2頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六酶應(yīng)用的缺點(diǎn)a.穩(wěn)定性：酶是由細(xì)胞產(chǎn)生的生物活性大分子，一旦離開細(xì)胞這個特殊的環(huán)境，常常顯得不夠穩(wěn)定，容易變性失活。b.催化反應(yīng)時的條件：一般酶反應(yīng)是在pH基本接近中性，溫度接近室溫的水溶液中進(jìn)行的。但在工業(yè)應(yīng)用上，由于底物和產(chǎn)物帶來的影響，反應(yīng)時的pH常常不在中性范圍內(nèi)。溫度升高有利于提高反應(yīng)速度，但酶失活也加快。當(dāng)?shù)孜锊蝗苡谒畷r，酶難以發(fā)揮作用。第3頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六酶應(yīng)用的缺點(diǎn)c.酶的主要動力學(xué)性質(zhì)不適應(yīng)：米氏常數(shù)(Km)值過大時，反應(yīng)不能在低底物濃度下高速進(jìn)行。由于人體內(nèi)各種代謝物質(zhì)的濃度通常較低，Km值過大的酶用于臨床檢測和治療時，往往不能得到良好的效果。有些底物或產(chǎn)物對酶活性有抑制作用，也會影響酶反應(yīng)的速度。第4頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六酶應(yīng)用的缺點(diǎn)d.臨床應(yīng)用的特殊要求：當(dāng)前臨床應(yīng)用的大多數(shù)酶來自動物、植物和微生物，對人體來說這些酶都是外源蛋白質(zhì)，它們具有抗原性，有可能引起人體的過敏反應(yīng)。這不但影響臨床上的連續(xù)使用，還可能導(dǎo)致生命危險。另外，酶進(jìn)入人體后也常會因一些蛋白酶、抑制劑或抗體的作用而失去活性，特別是當(dāng)酶進(jìn)入人體后不能迅速到達(dá)或集中于病灶時，這種情況尤為明顯。

第5頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六酶改造的兩個水平基因水平：有目的的改變基因中的核苷酸順序，從而改變酶的氨基酸順序，以期獲得化學(xué)結(jié)構(gòu)更為合理的酶蛋白。這是蛋白質(zhì)工程的研究內(nèi)容。蛋白質(zhì)水平：人們用化學(xué)法或酶法對已合成的酶的結(jié)構(gòu)進(jìn)行改造，一方面是切除部分肽鏈和置換某些氨基酸，另一方面是使酶分子中的某些氨基酸殘基與一些化學(xué)試劑反應(yīng)，加上一些特定的基團(tuán)，即酶的化學(xué)修飾。由于后一方面技術(shù)較為簡單，容易見效，所以這方面的工作做得最多。

第6頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六二、酶化學(xué)修飾的基本原理1．提高酶的熱穩(wěn)定性高度有序的天然構(gòu)象是酶表現(xiàn)活性的必要條件，天然構(gòu)象是在酶分子內(nèi)各種次級鍵（氫鍵、離子鍵、范德華力）的作用下維持的。當(dāng)溫度升高時，有些次級鍵遭到了破壞，原先平衡的力失去了平衡，導(dǎo)致分子的構(gòu)象發(fā)生變化，并可能產(chǎn)生一些新的次級鍵，形成有序度降低的新構(gòu)象，使酶變性失活。通過酶與化學(xué)修飾劑的反應(yīng)，有可能使酶的天然構(gòu)象產(chǎn)生“剛性”，不易發(fā)生變化，同時減少分子內(nèi)基團(tuán)的熱振動，從而增強(qiáng)了酶的熱穩(wěn)定性。

第7頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六酶化學(xué)修飾的基本原理2．抗抑制劑酶活性抑制劑是通過直接結(jié)合于酶的活性部位來阻止酶與底物的結(jié)合，或是結(jié)合于酶的其它部位后，影響了酶活性部位將底物轉(zhuǎn)變成產(chǎn)物。因此，阻止抑制劑與酶的結(jié)合是防止酶活性被抑制的關(guān)鍵。酶經(jīng)過化學(xué)修飾交聯(lián)上大分子修飾劑后，大分子修飾劑產(chǎn)生的空間障礙或靜電斥力就可能有效地阻擋抑制劑與酶的結(jié)合，使酶抗抑制劑的能力增強(qiáng)。

第8頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六酶化學(xué)修飾的基本原理3．抗蛋白水解酶

酶分子的基本結(jié)構(gòu)是蛋白質(zhì)，所以易受蛋白酶的攻擊而遭破壞。蛋白酶一般是作用于某些特定氨基酸殘基之間的酰胺鍵，修飾這些氨基酸殘基，可以阻止蛋白酶對這些酰胺鍵的攻擊。另外，交聯(lián)于酶分子上的大分子修飾劑能產(chǎn)生空間障礙，阻止蛋白酶接近攻擊點(diǎn)，起到“遮蓋”敏感鍵的作用。第9頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六酶化學(xué)修飾的基本原理4．降低酶的抗原性酶分子中有些氨基酸殘基組成了抗原決定簇，當(dāng)外源蛋白進(jìn)入人體后就會誘發(fā)產(chǎn)生抗體，抗原抗體反應(yīng)不僅會使酶失活，而且會對人體造成傷害和危險。通過化學(xué)修飾，有些組成抗原決定簇的基團(tuán)與修飾劑形成了共價鍵，破壞了抗原決定簇的結(jié)構(gòu)，使酶分子的抗原性降低甚至消除。大分子修飾劑也有“遮蓋”抗原決定簇和阻止抗原抗體結(jié)合的作用。

第10頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六酶化學(xué)修飾的基本原理5．穩(wěn)定酶的微環(huán)境由于酶分子各基團(tuán)的極性和帶電荷的不同，以及各基團(tuán)間相互作用的結(jié)果，使酶分子的局部形成了一種微環(huán)境。這種微環(huán)境可以是極性的，也可以是非極性的，但都直接影響著酶活性部位氨基酸殘基的電離狀態(tài)，酶微環(huán)境的改變會對酶的催化功能產(chǎn)生直接的影響。酶經(jīng)過化學(xué)修飾后，除能穩(wěn)定酶的構(gòu)象外，還由于大分子修飾劑本身就是多聚電荷體，可在酶分子表面形成一層“緩沖外殼”，在一定程度上保護(hù)酶的微環(huán)境，使酶能在更廣泛的條件下發(fā)揮作用。

第11頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六三、酶化學(xué)修飾方法的設(shè)計(jì)

酶化學(xué)修飾的基本原則都是充分利用修飾劑所具有的各類化學(xué)基團(tuán)的特性，直接或經(jīng)過一定的活化過程后與酶分子上的某種氨基酸殘基產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)。

第12頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六設(shè)計(jì)酶化學(xué)修飾方法時的注意事項(xiàng)a.對修飾劑的要求

在選擇修飾劑時一般要求修飾劑有較大的分子量，良好的生物相容性和水溶性，修飾劑分子表面有較多的反應(yīng)活性基團(tuán)，與氨基酸殘基形成的共價鍵穩(wěn)定，容易鑒定。b.對酶性質(zhì)的了解應(yīng)了解被修飾酶的活性部位情況，活性部位由哪些氨基酸殘基組成。酶的穩(wěn)定條件，酶反應(yīng)的最適條件，有哪些側(cè)鏈基團(tuán)可供修飾，及這些基團(tuán)的化學(xué)性質(zhì)和反應(yīng)活潑性等。第13頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六設(shè)計(jì)酶化學(xué)修飾方法時的注意事項(xiàng)c.修飾反應(yīng)條件的選擇

修飾反應(yīng)一般總是盡可能在酶穩(wěn)定的條件下進(jìn)行，盡量少破壞酶活性功能的必需基團(tuán)，得到高的修飾率和高的酶活回收率。應(yīng)做無修飾劑的對照。因此，選擇反應(yīng)條件時要注意酶與修飾劑分子的比例，反應(yīng)體系的溶劑性質(zhì)、鹽濃度和pH，反應(yīng)溫度和反應(yīng)時間。修飾反應(yīng)的最適條件一般要經(jīng)大量的試驗(yàn)才能確定。

第14頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六四、修飾劑及修飾反應(yīng)1．糖及糖的衍生物

（1）右旋糖酐及右旋糖酐硫酸酯右旋糖酐是由α-葡萄糖通過α-1,6-糖苷鍵形成的高分子多糖，具有較好的水溶性和生物相容性，可用作代血漿。右旋糖酐硫酸酯是右旋糖酐分子中的羥基與硫酸成酯而得。多糖鏈上的雙羥基結(jié)構(gòu)經(jīng)活化后可與酶分子上的自由氨基結(jié)合。雙羥基的活化除溴化氰法外，還有高碘酸氧化法。高碘酸能通過氧化鄰雙羥基結(jié)構(gòu)而將葡萄糖環(huán)打開，形成的高活性醛基與酶分子上的氨基反應(yīng)，使右旋糖酐和酶共價結(jié)合。

第15頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六高碘酸氧化法

由于反應(yīng)產(chǎn)物A不穩(wěn)定，所以用四氫硼鈉還原成穩(wěn)定產(chǎn)物B。用四氫硼鈉還原的反應(yīng)比較激烈，對酶活性影響較大，因此可在酶與右旋糖酐之間加一個手臂來減少酶的失活，如加一個聯(lián)苯胺。第16頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六糖及糖的衍生物（2）糖肽糖肽一般是通過纖維蛋白酶降解人纖維蛋白或蛋白酶降解γ－球蛋白而得。由于糖肽結(jié)構(gòu)上含有氨基，所以經(jīng)活化后能與酶分子上的氨基反應(yīng)而產(chǎn)生共價結(jié)合。第17頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六糖肽修飾方法a.

異氰酸法：糖肽在低溫條件下用2,3-異氰酸甲苯活化，再在堿性條件下與酶交聯(lián)。

第18頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六糖肽修飾方法b.戊二醛法：用雙功能試劑戊二醛將糖肽的氨基活化，然后與酶分子上的氨基反應(yīng)生成修飾酶。

第19頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六糖及糖的衍生物（3）SephadexG-25可用高碘酸氧化法修飾。

第20頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六2．聚乙二醇（PolyethyleneGlycol，PEG）

PEG[HO-CH2-(CH2-O-CH2)n-CH2-OH]和MPEG[CH3-O-CH2-(CH2-O-CH2)n-CH2-OH，單甲氧基聚乙二醇]是線性分子，具有較好的生物相容性。PEG在體內(nèi)不殘留，無毒性和抗原性，它的末端羥基經(jīng)活化后可與酶反應(yīng)，產(chǎn)生交聯(lián)。PEG修飾酶的主要優(yōu)點(diǎn)是能消除酶的抗原性。

第21頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六聚乙二醇修飾方法（1）三氯均嗪法

三氯均嗪環(huán)上的氯原子很活潑。當(dāng)環(huán)上的一個氯原子被取代后，能夠穩(wěn)定其它的碳氯鍵（第一個氯原子在4℃就能反應(yīng)，第二個氯原子在25℃反應(yīng)，第三個氯原子則要到80℃才能反應(yīng)）。三氯均嗪活化PEG形成修飾酶的反應(yīng)如下。第一步反應(yīng)后，通過石油醚抽提或減壓蒸餾得到活化的PEG。

第22頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六聚乙二醇修飾方法（2）琥珀酸酐法常用α,β-二溴代琥珀酸酐作為PEG的活化劑?；罨磻?yīng)在溫和的堿性條件下進(jìn)行，產(chǎn)物與酶分子上的氨基產(chǎn)生交聯(lián)反應(yīng)。也可用α,β-二碘代琥珀酸酐作為活化劑。

第23頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六聚乙二醇修飾方法（3）重氮法重氮化反應(yīng)是將修飾劑上的有關(guān)基團(tuán)轉(zhuǎn)變?yōu)橹氐鶊F(tuán)，然后在弱堿性條件下與酶分子上的酚基、咪唑基等反應(yīng)，生成修飾酶。有多種試劑可用于這個方法，它們都是和PEG末端的羥基結(jié)合后，在酸性條件下用亞硝酸與其游離氨基反應(yīng)，生成重氮基團(tuán)。第24頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六N-羧氨基苯甲酐為修飾劑第25頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六酶修飾程度與抗原性

在多數(shù)情況下，酶的抗原性隨著分子表面的自由氨基被PEG修飾而降低，當(dāng)酶分子上50％以上的自由氨基參與修飾反應(yīng)后，酶就幾乎失去了抗原性。但是酶活性也常常隨著被修飾的自由氨基數(shù)的增加而下降。

第26頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六PEG修飾酶的酶活回收率酶被修飾氨基數(shù)（％）酶活回收率（％）腺苷脫氨酶5928精氨酸酶5365過氧化氫酶4095谷氨酰胺酶7112胰蛋白酶2495苯丙氨酸解氨酶5215尿酸酶5829L-天冬酰胺酶797第27頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六3．合成大分子多聚物

目前用于酶化學(xué)修飾的合成大分子主要是聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚丙烯酸等，這里僅介紹聚乙烯吡咯烷酮（poly[N-vinylpyrrolidone]，PVP）作為修飾劑的反應(yīng)。常用分子量為10000的PVP作為修飾劑，在修飾反應(yīng)時，首先水解打開整個PVP分子的約5％的γ-內(nèi)酰胺環(huán)，生成活化的PVP后與酶反應(yīng)，得到修飾酶。第28頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六PVP修飾法第29頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六4．肝素

肝素是蛋白聚糖中的一種成分，由氨基葡萄糖和兩種糖醛酸（葡萄糖醛酸、艾杜糖醛酸）組成，還含有硫酸酯，平均分子量20000左右。肝素不僅與其它大分子修飾劑一樣，與酶共價交聯(lián)后能增加酶的穩(wěn)定性，同時由于肝素在生物體內(nèi)還具有抗凝血、抗血栓、降血脂等活性，因此，更適于用來修飾溶解血栓酶類以增加療效。修飾反應(yīng)的方法有碳二亞胺法、三氯均嗪法、溴化氰法等。

第30頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六肝素的碳二亞胺法修飾第31頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六5．血漿蛋白質(zhì)

血漿蛋白質(zhì)是血漿中的天然組分，它們與外源蛋白質(zhì)（包括酶）的復(fù)合物在血液中有可能被視為“自體蛋白”而被接受，同時由于血漿蛋白質(zhì)具有較大的分子量，在改進(jìn)酶的性質(zhì)方面效果更明顯。因此，已被認(rèn)為是具有較大優(yōu)越性和發(fā)展前途的修飾劑。其中人血清白蛋白是研究較多的一種酶修飾劑。

第32頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六血漿蛋白質(zhì)修飾法（1）戊二醛法

第33頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六血漿蛋白質(zhì)修飾法（2）活性酯法白蛋白的活性酯修飾法反應(yīng)條件溫和，避免了活潑的雙功能交聯(lián)劑直接與酶接觸所產(chǎn)生的酶失活，減少了副反應(yīng)的發(fā)生。用活性酯法以白蛋白修飾尿激酶，在不用底物保護(hù)酶活性部位的條件下，酶活回收率仍高達(dá)90％以上，結(jié)合率高達(dá)80％以上。白蛋白的琥珀?；瘧?yīng)在堿性條件下進(jìn)行，與對硝基苯酚的反應(yīng)要在偏酸性pH下進(jìn)行。

第34頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六白蛋白活性酯法修飾第35頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六6．琥珀酸酐

從大腸桿菌得到的L-天冬酰胺酶由四個亞基組成，當(dāng)用琥珀酸酐在堿性條件下修飾酶的賴氨酸殘基時，不同的反應(yīng)條件得到了不同的結(jié)果。當(dāng)酶分子中15～25％的賴氨酸被修飾后，酶活性有所提高，當(dāng)40％的賴氨酸被修飾后，酶仍保留了全部活性，因此可以認(rèn)為這部分基團(tuán)與酶活性關(guān)系不大。隨著修飾程度的增加，大量帶正電荷的氨基被帶負(fù)電荷的羧基側(cè)鏈取代后，所產(chǎn)生的靜電斥力就可能導(dǎo)致酶亞基的解離和分子內(nèi)部的氨基被修飾，從而使酶活性降低。

第36頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六L-天冬酰胺酶琥珀?；揎棾潭扰c酶活性的關(guān)系琥珀酸酐／LYS0.250.501.02.03.04.06.08.0琥珀?；疞YS／總LYS0.150.220.400.500.570.650.820.93酶活性／對照酶活性1.161.251.000.720.600.500.100第37頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六7．金屬離子置換

把酶分子中的金屬離子換成另一種金屬離子，使酶的功能和特性發(fā)生改變的修飾方法稱為金屬離子置換修飾。通過金屬離子置換修飾，可以了解各種金屬離子在酶催化過程中的作用，有利于闡明酶的催化作用機(jī)制，并有可能提高酶活性，增強(qiáng)酶的穩(wěn)定性，甚至改變酶的某些動力學(xué)性質(zhì)。

第38頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六金屬離子置換

有些酶分子中含有金屬離子，而且往往是酶活性中心的組成部分，例如α－淀粉酶中的Ca2+、谷氨酸脫氫酶中的Zn2+、過氧化氫酶中的Fe2+、超氧化物歧化酶中的Cu2+、Zn2+等。若從酶分子中除去其所含的金屬離子，酶往往會喪失其催化活性。如果重新加入原有的金屬離子，酶的催化活性可以恢復(fù)或部分恢復(fù)。若用另一種金屬離子進(jìn)行置換，則可使酶呈現(xiàn)出不同的特性，有的可以使酶活性降低甚至喪失，有的卻可以使酶活性提高或增加酶的穩(wěn)定性。

第39頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六金屬離子置換的方法

金屬離子的置換修飾只適用于那些在分子結(jié)構(gòu)中本來含有金屬離子的酶。用于金屬離子置換修飾的金屬離子，一般都是二價金屬離子。例如，Ca2+、Mg2+、Zn2+、Mn2+、Co2+、Cu2+、Fe2+等。在離子置換修飾時，先在經(jīng)過分離純化的酶液中加入一定量的金屬螯合劑，如EDTA，使酶分子中的金屬離子與EDTA形成螯合物，通過透析、超濾、凝膠層析等方法，將EDTA－金屬離子螯合物從酶液中除去。然后將另一種金屬離子加到酶液中，酶蛋白與新加入的金屬離子結(jié)合，就得到經(jīng)過金屬離子置換的酶。

第40頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六五、修飾酶的性質(zhì)特征1．提高酶活性

有些酶通過金屬離子置換后顯著地提高了酶活性。如α－淀粉酶分子中大多數(shù)含有鈣離子，有些含有鎂離子和鋅離子，所以一般的α－淀粉酶是雜離子型的。如果將雜離子都置換成鈣離子，則可以提高酶活性3倍以上，并顯著增強(qiáng)酶的穩(wěn)定性。所以在α－淀粉酶的發(fā)酵生產(chǎn)、保存及應(yīng)用過程中，添加一定量的鈣離子，有利于提高和穩(wěn)定α－淀粉酶的活性。再如，將鋅型蛋白酶中的鋅離子除去，置換成鈣離子，其酶活性可以提高20～30%。第41頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六修飾酶的性質(zhì)特征2．提高穩(wěn)定性

許多修飾劑分子上有多個活性反應(yīng)基團(tuán)，因此可與酶形成多點(diǎn)交聯(lián)，固定酶的構(gòu)象，增強(qiáng)酶的熱穩(wěn)定性。PEG修飾酶在熱穩(wěn)定性上沒有明顯的提高，可能是因?yàn)镻EG和酶是單點(diǎn)交聯(lián)，難以產(chǎn)生固定酶分子構(gòu)象的效應(yīng)。有些酶分子中的金屬離子被置換以后，穩(wěn)定性顯著增強(qiáng)。如鐵型超氧化物歧化酶（Fe-SOD）分子中的鐵離子被置換成錳離子后，其對過氧化氫的穩(wěn)定性顯著增強(qiáng)，對疊氮化鈉的敏感性顯著降低。

第42頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六天然酶和修飾酶熱穩(wěn)定性的比較

酶修飾劑

天然酶

修飾酶

溫度／時間

殘留酶活(%)

溫度／時間

殘留酶活(%)L-天冬酰胺酶聚丙氨酸50℃/7min5050℃/22min50L-天冬酰胺酶

聚乳糖60℃/10min

19

60℃/10min

63

L-天冬酰胺酶人血清白蛋白37℃/4h5037℃/40h50尿酸酶人血清白蛋白37℃/48h5037℃/48h95α-葡萄糖苷酶

人血清白蛋白55℃/3min5055℃/60min50α－淀粉酶右旋糖酐65℃/2.5min5065℃/63min50β－淀粉酶右旋糖酐60℃/5min5060℃/175min50過氧化氫酶右旋糖酐50℃/10min4050℃/10min90溶菌酶右旋糖酐100℃/30min20100℃/30min99α-糜蛋白酶右旋糖酐37℃/6h037℃/6h70β-葡萄糖苷酶

右旋糖酐60℃/40min4160℃/40min82糜蛋白酶

肝素

37℃/6h037℃/24h80第43頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六修飾酶的性質(zhì)特征3．抗各類失活因子

酶

修飾劑抗蛋白水解酶抗抑制劑抗失活劑過氧化氫酶右旋糖酐抗胰蛋白酶

核糖核酸酶右旋糖酐抗蛋白酶

溶菌酶右旋糖酐抗糜蛋白酶

抗SDS胰蛋白酶右旋糖酐抗自身水解抗大豆抑制劑抗尿素β-葡萄糖苷酶右旋糖酐

抗SDS胰蛋白酶PEG

抗大豆抑制劑

過氧化氫酶PEG抗胰酶、糜酶

L-天冬酰胺酶聚丙氨酸抗胰酶、糜酶

L-天冬酰胺酶聚乳糖抗枯草桿菌蛋白酶

胰蛋白酶PVP

抗大豆蛋白酶抑制劑

尿激酶白蛋白抗胃蛋白酶抗胎盤抑制劑尿酸酶白蛋白抗胰酶α-葡萄糖苷酶白蛋白抗胰酶

第44頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六修飾酶的性質(zhì)特征4．減弱和消除抗原性有些修飾劑在消除酶抗原性上并無作用。如PVP修飾酶在重復(fù)用于體內(nèi)后，會誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗體使酶失活。糖類物質(zhì)也不容易消除酶的抗原性，這類修飾酶在體內(nèi)仍可誘發(fā)過敏反應(yīng)。PEG和人血清白蛋白在消除酶的抗原性上效果明顯。

第45頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六乙酸酐和MPEG1修飾L-天冬酰胺酶的抗原性項(xiàng)目天然酶乙酰修飾酶MPEG1（5000）修飾酶（Ⅰ）MPEG1（5000）修飾酶（Ⅱ）-NH

2修飾率029.1±0.7156.0±0.9071.7±0.65酶活性10015.1±0.4025.0±0.3017.2±0.43抗原-抗體結(jié)合能力10080.2±2.3068.5±2.4126.6±1.51第46頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六修飾酶的性質(zhì)特征5．延長體內(nèi)半壽期許多酶經(jīng)過化學(xué)修飾后，由于增強(qiáng)了抗蛋白水解酶、抗抑制劑和抗失活因子的能力以及熱穩(wěn)定性提高，體內(nèi)半壽期都比天然酶延長，這對提高藥用酶的療效具有很重要的意義。

第47頁，共53頁，2023年，2月20日，星期六修飾酶的性質(zhì)特征6．對組織的分布能力（1）α-葡萄糖苷酶