化學(xué)藥品雜質(zhì)的控制與案例分析

化學(xué)藥品雜質(zhì)的控制與案例分析第1頁/共83頁雜質(zhì)的定義及分類定義：任何影響藥品純度的物質(zhì)。分類：一、按化學(xué)特性分類：有機(jī)雜質(zhì)、無機(jī)雜質(zhì)、有機(jī)揮發(fā)性物質(zhì)。二、按來源分類：有關(guān)物質(zhì)（反應(yīng)前體、中間體、副產(chǎn)物、降解產(chǎn)物等）、其它雜質(zhì)、外來物質(zhì)。三、按結(jié)構(gòu)分類：其他甾體、其他生物堿、幾何異構(gòu)體、光學(xué)異構(gòu)體和聚合物。第2頁/共83頁藥典中的分類方式1

有機(jī)物質(zhì)有關(guān)物質(zhì)－起始原料－中間體、副產(chǎn)物－降解產(chǎn)物－聚合物－異構(gòu)體多晶型雜質(zhì)殘留溶劑3

有機(jī)揮發(fā)性化合物2無機(jī)雜質(zhì)－無機(jī)鹽陰離子陽離子－重金屬催化劑

－過濾介質(zhì)、活性炭第3頁/共83頁雜質(zhì)的檢測(cè)方法物理常數(shù)測(cè)定法旋光度-檢查具有光學(xué)活性的雜質(zhì)紫外分光光度法雜質(zhì)吸光度-在特定波長(zhǎng)具有紫外吸收的雜質(zhì)容量滴定法游離脂肪酸、過氧化物、還原糖重量法酸中不溶物、水中可溶物比色比濁法游離淀粉、碘化物、鐵鹽、氯化物、硫酸鹽等第4頁/共83頁雜質(zhì)的檢測(cè)方法原子吸收分光光度法：檢查金屬雜質(zhì)毛細(xì)管電泳法：抑肽酶中檢查去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶和去丙氨酸-抑肽酶兩個(gè)特定雜質(zhì)色譜法：液相色譜法，檢查有機(jī)雜質(zhì)的主要方法薄層色譜法，作為液相色譜法的補(bǔ)充氣相色譜法：檢查揮發(fā)性雜質(zhì)熱分析法：檢查不同晶型的雜質(zhì)（影響生物利用度和穩(wěn)定性）拉曼光譜法、紅外光譜法、X-射線粉末衍射生物檢定法、酶聯(lián)免疫試劑盒（抗生素殘留量）

第5頁/共83頁殘留溶劑控制標(biāo)準(zhǔn)起草過程中，應(yīng)針對(duì)所用到的有機(jī)溶劑進(jìn)行檢查建議采用了頂空進(jìn)樣方式和程序升溫梯度洗脫的方法，應(yīng)注意供試品溶液的配制，要求供試品在溶劑中溶解。方法學(xué)試驗(yàn)應(yīng)進(jìn)行回收試驗(yàn)，確認(rèn)是否有基質(zhì)干擾。采用標(biāo)準(zhǔn)加入法，該方法可減少基質(zhì)干擾，提高方法的準(zhǔn)確度。關(guān)于校正相對(duì)保留時(shí)間（RART）的應(yīng)用。第6頁/共83頁殘留溶劑檢測(cè)的常見問題：共出峰干擾

熱降解干擾

基質(zhì)效應(yīng)的影響

藥品溶解性的影響

溶劑介質(zhì)的影響

第7頁/共83頁共出峰干擾共出峰：在相同的色譜條件下具有相同保留值的組分不一定是同一物質(zhì)。不同的物質(zhì)在某一色譜條件下具有相同保留值的現(xiàn)象，被稱為共出峰現(xiàn)象。不同物質(zhì)在性能（極性或氫鍵形成能力等）不同的色譜柱中具有完全相同保留行為的幾率很小。因此采用不同極性的色譜柱分別測(cè)定，可以排除共出峰的干擾。第8頁/共83頁吡柔比星中正己烷共出峰的排除色譜柱樣品批號(hào)PS-117PS-118PS-119DB-624柱5.449%6.209%4.794%SPB-1柱0.569%0.631%0.579%第9頁/共83頁熱降解干擾如果藥品對(duì)熱不穩(wěn)定，則可能會(huì)在直接進(jìn)樣或頂空加熱過程中發(fā)生熱降解，如果降解產(chǎn)物恰好與待測(cè)的有機(jī)溶劑共出鋒，或恰好就是某種有機(jī)溶劑，則會(huì)導(dǎo)致把降解產(chǎn)物當(dāng)作殘留溶劑檢測(cè)，得出錯(cuò)誤結(jié)果。第10頁/共83頁熱降解原因分子結(jié)構(gòu)中有烷氧基的藥品可能熱解產(chǎn)生相應(yīng)的醇。第11頁/共83頁排除干擾的辦法改變頂空溫度可以確定頂空條件下樣品是否能產(chǎn)生熱降解干擾物。也可以通過測(cè)定已知不含該溶劑的對(duì)照樣品來加以判斷。頂空溫度頭孢西丁鈉頭孢美唑氟氧頭孢利福平70℃21.7815.526.122.7120℃1100.451309.42667.4965.2第12頁/共83頁基質(zhì)效應(yīng)的影響和排出基質(zhì)效應(yīng)－－頂空分析時(shí)，因?qū)φ掌啡芤汉凸┰嚻啡芤旱慕M成不同，使得待測(cè)揮發(fā)性組分在氣液兩相間的分配系數(shù)不同引起的定量誤差。標(biāo)準(zhǔn)加入法可以有效地排除基質(zhì)效應(yīng)的影響；當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)加入法結(jié)果與內(nèi)標(biāo)法結(jié)果系統(tǒng)偏差約10%（通常偏低）時(shí)，可以認(rèn)為方法存在明顯的基質(zhì)效應(yīng)。第13頁/共83頁內(nèi)標(biāo)法與標(biāo)準(zhǔn)加入法測(cè)定結(jié)果的比較藥品名稱批號(hào)或箱號(hào)殘留溶劑內(nèi)標(biāo)法標(biāo)準(zhǔn)加入法頭孢氨芐211848甲醇0.585%0.569%211850甲醇0.445%0.437%211854甲醇0.964%0.972%吡柔比星PS-117正己烷0.569%0.496%PS-118正己烷0.651%0.602%PS-119正己烷0.579%0.509%頭孢哌酮鈉75835031丙酮1.799%1.780%第14頁/共83頁藥品溶解性的影響當(dāng)樣品在溶解介質(zhì)中未溶解時(shí)，測(cè)定結(jié)果通常偏低且精密度差。如待測(cè)溶劑為水溶性不好的溶劑，且選擇水為溶媒時(shí)，可先用少量乙醇或甲醇溶解待測(cè)溶劑后再用水稀釋的方法配制對(duì)照品溶液。第15頁/共83頁藥品溶劑介質(zhì)藥品的溶解性殘留溶劑殘留量（RSD(n=5)）頭孢氨芐水微溶甲醇0.385%（4.4%）0.5mol/LNaOH溶解甲醇0.427%（1.9%）頭孢泊肟酯水不溶丙酮0.0016%（73.0%）DMF溶解丙酮0.0035%（4.1%）第16頁/共83頁供試品溶液的制備對(duì)水溶性藥品，采用水為溶劑；當(dāng)藥品不溶于水，但可溶解于一定濃度的酸或堿溶液中時(shí)，可采用酸或堿溶液作為溶劑；對(duì)于非水溶性藥物，可采用N,N-二甲基甲酰胺（DMF）、DMSO等為溶劑。第17頁/共83頁溶液的配制應(yīng)注意問題：

1、為了避免殘留溶劑揮發(fā)，不可用超聲或加熱方式溶解樣品。如果采用頂空進(jìn)樣，樣品置頂空瓶并封蓋之后可以超聲或加熱溶解樣品。2、大顆粒樣品不可以研磨取樣，只能取原態(tài)樣品（或冷凍粉碎）。

第18頁/共83頁溶解介質(zhì)的影響當(dāng)藥品在某種溶解介質(zhì)中溶解后，待測(cè)溶劑或內(nèi)標(biāo)可能與藥品產(chǎn)生較強(qiáng)的相互作用，以至采用標(biāo)準(zhǔn)加入法也無法排除對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。第19頁/共83頁頭孢呋辛酯在不同溶劑介質(zhì)中對(duì)

正己烷殘留量測(cè)定的影響批號(hào)DMF1mol/LNaOH水溶液內(nèi)標(biāo)法標(biāo)準(zhǔn)加入法內(nèi)標(biāo)法標(biāo)準(zhǔn)加入法21360170.0023%0.0023%0.081%0.034%21360180.0036%0.0038%0.139%0.067%21360190.0036%0.0040%0.152%0.058%第20頁/共83頁以1mol/LNaOH溶液為溶劑介質(zhì)時(shí)，盡管對(duì)照品溶液與供試品溶液中內(nèi)標(biāo)丁酮的濃度相同，但是其峰面積卻相差一倍；而溶劑介質(zhì)為DMF時(shí)，相同濃度的丁酮內(nèi)標(biāo)在對(duì)照品溶液和供試品溶液中的峰面積幾乎相同。第21頁/共83頁以1mol/LNaOH溶液為溶劑介質(zhì)時(shí)，利用內(nèi)標(biāo)法得到數(shù)據(jù)與標(biāo)準(zhǔn)加入法得到數(shù)據(jù)，計(jì)算對(duì)照品（正己烷）的回收率，發(fā)現(xiàn)對(duì)照品的回收率約為50%，超出方法可接受的范圍（80-120%）。第22頁/共83頁藥物研發(fā)中殘留溶劑研究存在問題：表述不全面或不準(zhǔn)確。對(duì)色譜圖中出現(xiàn)的未知峰未進(jìn)行研究。試驗(yàn)條件未進(jìn)行考察。方法學(xué)驗(yàn)證不全面。第23頁/共83頁

無機(jī)雜質(zhì)的控制無機(jī)鹽來源：來自工藝、原料或降解產(chǎn)物主要控制項(xiàng)目有：氯化物、硫酸鹽、硫化物、氰化物、磷酸鹽、溴化物、碘化物、重金屬等第24頁/共83頁CompanyLogo供試品溶液的配制標(biāo)準(zhǔn)溶液的最佳顯色量限度的確定

無機(jī)雜質(zhì)的控制132第25頁/共83頁無機(jī)雜質(zhì)限度試驗(yàn)計(jì)算方法主要參數(shù)：限度、取樣量（W）、對(duì)照溶液濃度（C）和對(duì)照溶液用量（V）。公式C（g/ml）×V（ml）限度=———————

×100%

W（g）第26頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——要求概述所有品種都應(yīng)進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)的考核對(duì)雜質(zhì)進(jìn)行定性研究，確定結(jié)構(gòu)，從而為實(shí)現(xiàn)對(duì)已知雜質(zhì)和未知雜質(zhì)的區(qū)別控制，同時(shí)也為科學(xué)制訂檢查方法的系統(tǒng)適用性要求提供基礎(chǔ)保障。優(yōu)化方法（增加有效的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求）限度合理第27頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)的來源－起始原料－中間體、副產(chǎn)物－降解產(chǎn)物－聚合物－異構(gòu)體多晶型雜質(zhì)第28頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于分離及檢測(cè)方法ICGCCEPC一般采用色譜法TLCLC（反相、正相、凝膠）第29頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于分離及檢測(cè)方法色譜柱原則：方法驗(yàn)證時(shí)進(jìn)行粗放度試驗(yàn)（三根以上色譜柱），特殊填料應(yīng)在各論中予以注明，強(qiáng)調(diào)“或效能相當(dāng)”。大多為反相高效液相法，采用C18、C8、苯基等鍵合硅膠填料，以C18為最常用；目前C18色譜柱類型也很多，不同基質(zhì)、不同載碳量、不同封端處理方式、不同純度、不同粒徑、孔徑、柱長(zhǎng)等，影響因素較多，方法研究時(shí)應(yīng)注意粗放度考察；第30頁/共83頁色譜柱的差異Minutes515253545Symmetry?C18Alconc.<10ppmTFUSP=1.9AmitriptylineNova-Pak?C18Alconc.=~375ppmTFUSP=6.4低金屬不純物的含量第31頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于分離及檢測(cè)方法色譜柱也有采用分子排阻色譜法，有的采用親水改性硅膠；例：頭孢地嗪鈉有關(guān)物質(zhì)Ⅱ，以球狀蛋白色譜用親水硅膠（分子量適用范圍為1000～10000）為填充劑還有的采用離子色譜法，采用離子色譜填料。例：氯膦酸二鈉及注射劑，采用陰離子交換色譜柱（推薦使用IonPacAS11-HC，或效能相當(dāng)

）第32頁/共83頁例：離子色譜（氯膦酸二鈉）照離子色譜法試驗(yàn)用陰離子交換色譜柱（推薦使用IonPacAS11-HC，或效能相當(dāng)），柱溫30℃以水為流動(dòng)相A，以0.1mol/L氫氧化鉀溶液為流動(dòng)相B，梯度洗脫，流速為1.2ml/min。檢測(cè)器為電導(dǎo)檢測(cè)器，檢測(cè)方式為抑制電導(dǎo)檢測(cè)。

氯膦酸二鈉原料藥的有關(guān)物質(zhì)與制劑的含量測(cè)定第33頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于分離及檢測(cè)方法流動(dòng)相在保證靈敏度的前提下，一般采用等度洗脫；必要時(shí)可采用梯度洗脫方式（如：多雜質(zhì)組分的分離，等度洗脫分離效果不佳；或雜質(zhì)性質(zhì)相差較大，等度洗脫時(shí)間過長(zhǎng)，損失靈敏度）例：法莫替丁氯化鈉注射液流動(dòng)相以揮發(fā)性流動(dòng)相為好，一般情況下盡量不加離子對(duì)試劑。第34頁/共83頁法莫替丁氯化鈉注射液（有關(guān)物質(zhì)）原國家標(biāo)準(zhǔn)方法等度洗脫結(jié)果：23.6%2010年版方法梯度洗脫結(jié)果：28.3%第35頁/共83頁廠家批號(hào)2010年版原國家標(biāo)準(zhǔn)最大單個(gè)雜質(zhì)%有關(guān)物質(zhì)總量%最大單個(gè)雜質(zhì)%有關(guān)物質(zhì)總量%1060301A1.73.70.81.8060301B1.73.90.92.0060301C1.94.00.91.920604091.76.40.93.00604151.86.80.92.90604161.96.60.82.63060214012.57.70.71.7060214022.58.11.01.7060214032.57.60.91.74200603080110.228.39.023.620060218039.928.28.322.9200602180414.835.59.727.95060721010.62.4060817010.62.6060815010.62.7606030161.74.40.51.506030171.84.60.51.306030181.64.40.71.6第36頁/共83頁液相色譜常用檢測(cè)器光學(xué)檢測(cè)器：紫外、熒光、示差折光、蒸發(fā)光散射（通用型檢測(cè)器）電化學(xué)檢測(cè)器：極譜、庫侖、安培電學(xué)檢測(cè)器：電導(dǎo)、介電常數(shù)質(zhì)譜檢測(cè)器選擇性檢測(cè)器：靈敏度較高第37頁/共83頁2010版藥典二部采用檢測(cè)器情況檢測(cè)器類型品種個(gè)數(shù)紫外檢測(cè)器1333個(gè)蒸發(fā)光散射檢測(cè)器28個(gè)示差檢測(cè)器10個(gè)電導(dǎo)檢測(cè)器5個(gè)第38頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于分離及檢測(cè)方法檢測(cè)器一般采用紫外檢測(cè)器：波長(zhǎng)的選擇更加關(guān)注雜質(zhì)的最大吸收或最佳檢測(cè)參數(shù)，以提高雜質(zhì)的檢測(cè)靈敏度。難以兼顧各雜質(zhì)可選擇多波長(zhǎng)檢測(cè)部分品種采用蒸發(fā)光檢測(cè)器：謹(jǐn)慎選用蒸發(fā)光檢測(cè)器，必要時(shí)對(duì)主要實(shí)驗(yàn)參數(shù)進(jìn)行描述。第39頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)波長(zhǎng)的確定頭孢地嗪通過采用DAD檢測(cè)器在不同檢測(cè)波長(zhǎng)檢測(cè)各種破壞試驗(yàn)的雜質(zhì)變化情況，發(fā)現(xiàn)有的雜質(zhì)在215nm和262nm的紫外吸收不同。在215nm的吸收與主峰的吸收接近，因此檢測(cè)波長(zhǎng)定在215nm。第40頁/共83頁破壞試驗(yàn)不同波長(zhǎng)的雜質(zhì)變化加速破壞條件(0.5mg/ml樣品溶液)有關(guān)物質(zhì)(%)波長(zhǎng)215nm254nm262nm未破壞單個(gè)0.180.170.17總量0.360.330.30加0.1mol/L鹽酸1ml，放置7小時(shí)，加0.1mol/L氫氧化鈉1ml單個(gè)4.05.24.8總量10.67.46.5加0.1mol/L氫氧化鈉1ml，放置30分鐘，加0.1mol/L鹽酸1ml單個(gè)5.86.56.7總量10.38.48.24000lx光照24小時(shí)單個(gè)1.91.81.6總量4.83.52.9水浴30分鐘單個(gè)12.510.59.3總量37.126.724.1加30%過氧化氫1ml，放置24小時(shí)單個(gè)5.45.55.6總量8.18.08.2第41頁/共83頁頭孢地嗪的紫外吸收?qǐng)D第42頁/共83頁雜質(zhì)之一的紫外吸收?qǐng)D第43頁/共83頁蒸發(fā)光散射檢測(cè)器優(yōu)點(diǎn)適用于沒有特征紫外吸收或紫外吸收很弱的待測(cè)物，使用UV時(shí)靈敏度更低；無需衍生化而直接測(cè)定，避免了衍生帶來的誤差?？梢詰?yīng)用有強(qiáng)紫外吸收的試劑，如氯仿、丙酮等。適用于組分復(fù)雜樣品的分析，可以進(jìn)行梯度洗脫，基線平穩(wěn)。通用型檢測(cè)器，只要待測(cè)物揮發(fā)性低于溶劑，即可適用。對(duì)不同物質(zhì)，ELSD相應(yīng)因子的變化比其它檢測(cè)器要小得多。對(duì)環(huán)境影響不靈敏，室溫下即可操作。沒有溶劑前緣峰，適用于保留時(shí)間短的物質(zhì)的檢測(cè)。與LC-MS的色譜條件一致，可直接進(jìn)行方法轉(zhuǎn)換。第44頁/共83頁蒸發(fā)光散射檢測(cè)器影響ELSD響應(yīng)的因素載氣流速、霧化器設(shè)計(jì)與溫度、流動(dòng)相的組成和流速等影響霧化過程。被分析物的濃度和體積質(zhì)量決定了進(jìn)入光散射池的氣溶膠中的顆粒的直徑。被分析物的折射指數(shù)、光源發(fā)出的光的強(qiáng)度和波長(zhǎng)、光電倍增管的位置等影響散射光強(qiáng)度。光電倍增管的靈敏度和入射光的強(qiáng)度決定了檢測(cè)的效率，反映為實(shí)驗(yàn)者所觀測(cè)的峰面積。第45頁/共83頁蒸發(fā)光散射檢測(cè)器硫酸核糖霉素有關(guān)物質(zhì)色譜圖（蒸發(fā)管溫度：65℃，分流模式）總雜質(zhì)：5.26%第46頁/共83頁蒸發(fā)光散射檢測(cè)器硫酸核糖霉素有關(guān)物質(zhì)色譜圖（蒸發(fā)管溫度：110℃，不分流模式）總雜質(zhì)：4.18%第47頁/共83頁關(guān)于物料平衡的概念百度中的名詞解釋：系指在藥品生產(chǎn)過程中,同批產(chǎn)品的產(chǎn)量和數(shù)量所應(yīng)保持的平衡程度。如有顯著誤差,必須查明原因,確認(rèn)無潛在質(zhì)量事故后,方可按正常事故處理,物料平衡是產(chǎn)品質(zhì)量的檢驗(yàn)性指標(biāo)。在液相檢測(cè)有關(guān)物質(zhì)時(shí)的物料平衡：應(yīng)該是指經(jīng)過各種破壞試驗(yàn)后，主成分峰面積的減少與雜質(zhì)峰面積的增加之間的平衡，以確定檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性。第48頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求：分離度2010年版加強(qiáng)了對(duì)分離度的要求，通過分離度的限制來保證分離的重現(xiàn)性。要求雜質(zhì)和主成分、雜質(zhì)之間的分離度均要得到良好保證。

（1）采用雜質(zhì)對(duì)照品溴丙胺太林：呫噸酸、呫噸酮、9－羥基溴丙胺太林與溴丙胺太林峰之間的分離度均應(yīng)符合要求；尼莫地平：雜質(zhì)I與主峰分離度應(yīng)大于3.0；枸櫞酸氯米芬有關(guān)物質(zhì)中要求其順反異構(gòu)體的分離度不得低于1.3。第49頁/共83頁呫噸酸9－羥基溴丙胺太林呫噸酮溴丙胺太林例：有關(guān)物質(zhì)（溴丙胺太林）第50頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求：分離度

（2）采用混合對(duì)照品采用純度稍差但雜質(zhì)組分組成與比例相對(duì)穩(wěn)定的原料藥，可以較好地保證分離的重現(xiàn)性。關(guān)鍵在于對(duì)照品的提供。例：氯碘羥喹第51頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制氯碘羥喹系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜圖有關(guān)物質(zhì)（關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求：分離度）第52頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求：分離度

（3）通過化學(xué)處理或其它降解方式產(chǎn)生雜質(zhì)（注意：反應(yīng)條件的優(yōu)化與重現(xiàn)）例1：鹽酸甲氯芬酯—通過水浴加熱，產(chǎn)生水解產(chǎn)物峰，該峰（相對(duì)保留時(shí)間0.6）與主峰分離度應(yīng)大于6.0；例2：戊酸雌二醇—稱取戊酸雌二醇對(duì)照品10mg，在160℃烘箱中加熱2小時(shí)后，用乙腈溶解并稀釋至25ml，搖勻，量取10μl注入液相色譜儀，戊酸雌二醇與降解產(chǎn)物（相對(duì)保留時(shí)間約為0.92）的分離度應(yīng)符合規(guī)定。第53頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制戊酸雌二醇系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜圖（戊酸雌二醇tR=9.466，降解物tR=8.723，分離度Rs=1.5）有關(guān)物質(zhì)（關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求：分離度）第54頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求：分離度

（4）采用其它方法制備系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用樣品（如：采用結(jié)構(gòu)性質(zhì)相近的指標(biāo)性物質(zhì)）例：茶堿，采用茶堿和可可堿配成溶液作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液，要求兩者的分離度大于2.0。第55頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求：分離度

（5）采用相對(duì)保留時(shí)間定位（如果無法長(zhǎng)期獲得該雜質(zhì)對(duì)照品時(shí)）應(yīng)特別注意色譜條件的耐用性考察如能在標(biāo)準(zhǔn)中列出主成分的保留時(shí)間、色譜柱尺寸，可增強(qiáng)此法的可操作性。在梯度洗脫的色譜系統(tǒng)中為保證方法的重現(xiàn)性，應(yīng)對(duì)主峰的出峰時(shí)間進(jìn)行規(guī)定。例：己酮可可堿通過梯度洗脫，在系統(tǒng)適用性試驗(yàn)中不僅規(guī)定相關(guān)雜質(zhì)的分離度，同時(shí)規(guī)定己酮可可堿的出峰時(shí)間為12分鐘。第56頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求：拖尾因子對(duì)于在色譜系統(tǒng)中峰形非對(duì)稱的色譜峰規(guī)定該色譜峰的拖尾因子是很有意義的，以保證色譜峰不會(huì)因拖尾嚴(yán)重，而導(dǎo)致雜質(zhì)峰包裹在主峰中未被檢出。例：馬來酸依那普利的色譜條件中，除規(guī)定相關(guān)雜質(zhì)的分離度外，同時(shí)規(guī)定依那普利峰的拖尾因子不得過2.0。

第57頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求：靈敏度試驗(yàn)通過配制靈敏度試驗(yàn)溶液（主成分濃度一般與報(bào)告限一致），并規(guī)定靈敏度試驗(yàn)溶液中主成分的信噪比，可以更好地保證方法的重現(xiàn)性、靈敏度和測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。例：紫杉醇—對(duì)照溶液（2）（相當(dāng)于0.1%）主成份峰的信噪比應(yīng)不小于10。第58頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求：報(bào)告限通過規(guī)定小于對(duì)照溶液主峰面積的一定量的色譜峰可忽略不計(jì)，可保證積分參數(shù)設(shè)置的合理性和一致性。例：甘露醇—供試品溶液的色譜圖中，任何小于對(duì)照溶液主峰面積的0.05倍的峰可忽略不計(jì)。例：十一酸睪酮—供試品溶液色譜圖中，任何小于對(duì)照溶液主峰面積0.02倍的色譜峰可忽略不計(jì)。第59頁/共83頁ICH新原料藥中的雜質(zhì)指導(dǎo)原則

ICH規(guī)定的雜質(zhì)報(bào)告限<鑒定限<論證限

第60頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于定量方法（1）雜質(zhì)對(duì)照品外標(biāo)法：采用雜質(zhì)對(duì)照品，按外標(biāo)法計(jì)算，應(yīng)注意該雜質(zhì)線性范圍的考察。（注意：如引入了定量雜質(zhì)對(duì)照品，則該雜質(zhì)對(duì)照品的質(zhì)量應(yīng)滿足定量要求。）例：熒光素鈉—間苯二酚（雜質(zhì)Ⅰ）、鄰苯二甲酸（雜質(zhì)Ⅱ）例：對(duì)氨基水楊酸鈉—間氨基酚例：地塞米松—倍他米松第61頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于定量方法（2）加校正因子的自身對(duì)照法：若僅在實(shí)驗(yàn)過程中可提供相應(yīng)質(zhì)量和數(shù)量的雜質(zhì)對(duì)照品，而長(zhǎng)期提供符合要求的雜質(zhì)對(duì)照品難度較大，則考察該雜質(zhì)相對(duì)于主成分的校正因子。（用于測(cè)定校正因子的雜質(zhì)對(duì)照品應(yīng)按定量對(duì)照品的要求進(jìn)行標(biāo)化），采用加校正因子（超出0.9-1.1）的主成分自身對(duì)照法進(jìn)行檢查。

第62頁/共83頁相關(guān)術(shù)語的定義響應(yīng)因子（K）：當(dāng)檢測(cè)器輸出的信號(hào)與被測(cè)物質(zhì)的濃度呈線性響應(yīng)時(shí)，檢測(cè)器輸出的信號(hào)（A）與被測(cè)物質(zhì)的濃度（C）的比值即為響應(yīng)因子。

K=A/C校正因子(F):響應(yīng)因子的比值

F=K1/K2第63頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于定量方法

（3）不加校正因子的主成分自身對(duì)照法：大多數(shù)品種采用了這種方法對(duì)雜質(zhì)進(jìn)行控制。

（4）峰面積歸一化法：2010版化學(xué)藥品中很少使用，在保證0.1%或0.05%、甚至更低含量的雜質(zhì)能被檢出的情況下，主成分濃度就會(huì)很高，如采用該法應(yīng)考慮最小組分和最大組分的檢測(cè)響應(yīng)是否在主成分的線性范圍內(nèi)。謹(jǐn)慎使用。例1：大豆油（供注射用）—脂肪酸組成例2：甘油—二甘醇、乙二醇與其他雜質(zhì)第64頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——?dú)庀嗌V法填充柱改毛細(xì)管柱，等溫洗脫改程序升溫，增加了系統(tǒng)適用性要求例1：壬苯醇醚（游離環(huán)氧乙烷）—分離度例2：甘油（二甘醇、乙二醇與其他雜質(zhì)）—分離度、重復(fù)進(jìn)樣精密度第65頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——薄層色譜法優(yōu)化方法，分離度試驗(yàn)和靈敏度試驗(yàn)例1：司坦唑醇—與美雄諾龍分離度例2：蘇氨酸（其他氨基酸）

供試品溶液（10mg/ml)對(duì)照溶液(0.05mg/ml)靈敏度測(cè)試溶液(0.02mg/ml)

混合對(duì)照品溶液（蘇氨酸和脯氨酸）—分離度規(guī)定：靈敏度測(cè)試溶液應(yīng)顯一個(gè)明顯斑點(diǎn)，混合對(duì)照品溶液中應(yīng)顯兩個(gè)清晰分離的斑點(diǎn)，供試品溶液除主斑點(diǎn)外所顯雜質(zhì)斑點(diǎn)的個(gè)數(shù)不得超過1個(gè)，其顏色與對(duì)照溶液的主斑點(diǎn)比較，不得更深（0.5%）。第66頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于限度理論上講，應(yīng)該根據(jù)雜質(zhì)的毒性、用藥量等多種因素綜合考慮，但由于缺乏對(duì)雜質(zhì)的基礎(chǔ)性研究，故一般國內(nèi)產(chǎn)品質(zhì)量能達(dá)到歐美要求的，基本上與其保持一致。另結(jié)合樣品穩(wěn)定性考察情況綜合制定。

第67頁/共83頁原料藥有關(guān)物質(zhì)的分析方法方法學(xué)要求：1）專屬性：a、已知雜質(zhì)：可采用在供試品中加入雜質(zhì)對(duì)照品的方式。

b、未知雜質(zhì)：用含有雜質(zhì)的樣品進(jìn)行測(cè)定，如粗品和母液。采用破壞方式檢測(cè)，如強(qiáng)光、酸、堿、高溫、高濕或氧化反應(yīng)等方式。必要時(shí)用二極管陣列或質(zhì)譜檢測(cè)，進(jìn)行純度檢查。第68頁/共83頁原料藥有關(guān)物質(zhì)的分析方法2）檢測(cè)限和定量限：目視法和信噪比法。信噪比法：檢測(cè)限的信噪比應(yīng)大于3：1。定量限的信噪比應(yīng)大于10：1。3）線性范圍：一定要涵蓋全部測(cè)定濃度，特別是面積歸一化法。第69頁/共83頁原料藥有關(guān)物質(zhì)的分析方法4）準(zhǔn)確性和重復(fù)性試驗(yàn)：針對(duì)已知雜質(zhì)，采用雜質(zhì)對(duì)照品法。5）耐用性：應(yīng)考察因素：被測(cè)溶液的穩(wěn)定性、樣品提取次數(shù)、時(shí)間、流動(dòng)相的組成和pH值、色譜柱、柱溫和流速等。第70頁/共83頁原料藥有關(guān)物質(zhì)的分析方法建立方法應(yīng)采用幾種不同的分離方法或不同測(cè)試條件，以便對(duì)比結(jié)果，選擇較佳的方法。應(yīng)考慮方法普遍適用性，所使用的儀器和試劑易于獲得