核醫(yī)學(xué)體外放射分析課件

體外放射分析

分類：1、

競爭性：放射免疫分析RIA競爭性蛋白結(jié)合分析CPBA放射受體分析RRA放射酶分析放射微生物分析2、非競爭性：免疫放射分析IRMA一、放射免疫分析RIA原理：P62競爭機(jī)制：Ag(不定量)+Ab（有限量）固定量*Ag免疫結(jié)合反應(yīng)形成免疫復(fù)合物由質(zhì)量作用定律推導(dǎo)的數(shù)學(xué)模型[Q0]1[Q0]B2—B（1+------+--------）+-------==0[P0]K[P0][P0]

[PQ]B==----------×100%P0=Ag+*AgPQ=*Ag—Ab[P0]Q0=Ab的初始含量當(dāng)*Ag為固定量時(shí)，P0為自變量（實(shí)際為Ag）P0與復(fù)合物B呈一定的函數(shù)關(guān)系放免反應(yīng)的定量依據(jù)：

劑量反應(yīng)曲線或叫標(biāo)準(zhǔn)曲線劑量反應(yīng)曲線的含義以已知的標(biāo)準(zhǔn)品為橫坐標(biāo)，以放射性復(fù)合物測定值的某種表達(dá)式做縱坐標(biāo)，繪制劑量---反應(yīng)曲線P64圖4—1P74圖4—13曲線的斜率是關(guān)鍵因素，斜率不同精密度不同（P64圖4—1）

斜率=tgα（代表曲線或直線的傾斜度）

影響斜率的常見因素有以下幾點(diǎn)：1、Ab親和力：K大，斜率也大2、Ag用量：Ag少，斜率大3、Ag的免疫活性：活性強(qiáng)，斜率大4、*Ag的比活度和放化純度：↑→↑5、Ab用量：B=33—50%斜率最大。6、反應(yīng)條件和溫度（見后）RIA方法學(xué)1、操作步驟：P1942、RIA的基本試劑標(biāo)準(zhǔn)抗原基本要求：①標(biāo)準(zhǔn)抗原與待測物免疫性必須一致②必須高純度：不純不能制備抗體，不純標(biāo)記物放化純度達(dá)不到要求③標(biāo)準(zhǔn)抗原的量必須準(zhǔn)確：（用于標(biāo)準(zhǔn)曲線）④具有良好的穩(wěn)定性（能保證較長時(shí)間不改變性能）標(biāo)準(zhǔn)抗原的用途：①制備抗體②制備*Ag③標(biāo)準(zhǔn)曲線抗血清檢查抗血清的指標(biāo)：1、親和常數(shù)KP1922、交叉反應(yīng)率P1933、滴度

標(biāo)記抗原Ag*基本要求：①免疫活性與待測物及標(biāo)準(zhǔn)品一致②適度的比活度：太高、化學(xué)量少、不具競爭性，太低統(tǒng)計(jì)誤差大。③足夠高的放化純度（>95%）免疫活性檢驗(yàn)：復(fù)合物放射性最大結(jié)合百分率（B%）=-----------------------------------×100%參與反應(yīng)標(biāo)記抗原放射性分離方法非特異分離法：吸附法（活性炭）層析電泳法過濾法磁性分離法沉淀法（聚乙二醇，硫酸胺等）RIA加樣方法1、平衡法：三種反應(yīng)物同時(shí)加樣 優(yōu)：簡便易掌握重現(xiàn)性好 競爭反應(yīng)較典型 缺：靈敏度不高2、順序加樣法：Ag+Ab溫育后再加*Ag優(yōu)：標(biāo)準(zhǔn)曲線起始段斜率高、靈敏度高缺：曲線工作波度范圍窄、重現(xiàn)性差3、一天法：（特殊情況下使用）樣品采集與保存應(yīng)注意的幾個(gè)問題

①

用原樣品、新鮮樣品、減少存放、最好不純化、濃縮萃取、減少變異②

盡快做實(shí)驗(yàn)，避免反復(fù)凍融③

盡可能少用添加劑等，抗凝劑也少用。

RIA數(shù)據(jù)處理的數(shù)學(xué)模型（補(bǔ)充概念）后頁

放射免疫法的數(shù)學(xué)模型及處理常用符號及英文縮寫的含意：NSB：非特異結(jié)合B0%：B0管的放射性測量值與加入總放之比。BQC：質(zhì)控探樣品測量值CPMBN：NSB管的樣品測量值CPMF：游離物質(zhì)樣品測量值CPMB：結(jié)合的沉淀物樣品測量值CPMED50：指B/B0為50%時(shí)對應(yīng)劑量值。ED25、ED70指B/B0為25%、70%所對應(yīng)的劑量。3、logistic模型：只能用于平衡反應(yīng)兩點(diǎn)改進(jìn)

a：橫坐標(biāo)不取對數(shù)而用Db：不做NSB，靠計(jì)算機(jī)計(jì)算擬合扣除NSB。a—d模型：Y=------------------+dx1+(------)bc有四個(gè)參數(shù)：a=B0（也稱四參數(shù)logistic模型）c=ED50b=logit—log直線斜率d=NSB4、五參logistic數(shù)模型：a—bY=---------------+dx[1+(----)b]Ec引入了一個(gè)不對稱因子E。E計(jì)算機(jī)能求出。可用于非平衡反應(yīng)系統(tǒng)5、四參數(shù)單位點(diǎn)質(zhì)量作用定律模式：按質(zhì)量作用定律導(dǎo)出的模式優(yōu)點(diǎn)：①質(zhì)量作用定律，穩(wěn)健回歸擬合；②適于平衡和非平衡系統(tǒng)；③個(gè)別壞點(diǎn)對曲線影響小。模型的選擇（擬合優(yōu)度法來選）問題：一組數(shù)據(jù)可用多種模型去處理，如何選用？①

線性擬合用最小二乘法，選殘差平方和最小的模型。②

非線性擬合用百分比偏差DEV%DEV%=（X’—X）/X100% DEV%<10%即可使用。誤差分類系統(tǒng)誤差：原因是確定因素如試劑變性，稱量不準(zhǔn)，批號不同。隨機(jī)誤差：原因?qū)倥既唬y以確定，測量結(jié)果忽高忽低呈雙向圍某數(shù)值波動。過失誤差：過失造成的誤差，結(jié)果失真無規(guī)律性可查。質(zhì)控目的：找出誤差原因、采取必要措施，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信性。質(zhì)控分類實(shí)驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控實(shí)驗(yàn)室間質(zhì)控常用的質(zhì)控指標(biāo)：靈敏度、特異性、精密度、偏差、準(zhǔn)確度、穩(wěn)定性、臨床有效性。1、靈敏度：10個(gè)B0管均值減去2SD后在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的劑量值。2、特異性：用交叉反應(yīng)率來表示3、精密度：同一樣品多份測量結(jié)果變異的大小。SD可用SD或CV=-------×100%X4、偏差：偏離真值的程度測定值—真值 偏差b=--------------------×100%真值5、準(zhǔn)確度：測量值與真值的符合程度，也叫回收率 回收管測量值—對照管測量值回收率=-----------------------------------------×100%回收管內(nèi)加入的已知量反應(yīng)準(zhǔn)確度評價(jià)指標(biāo) 在空白樣品中加入已知劑量的待測物得測定值—空白值樣品回收率=-----------------------×100%已知值

回收率應(yīng)在90~110%之間

6、穩(wěn)定性：指批間重復(fù)性。對曲線穩(wěn)定性考核的常用指標(biāo)有：ED25、ED50、ED75、B0%、NSB%等。 不同批實(shí)驗(yàn)中這些值應(yīng)大體接近。7、臨床有效性：陽性率與臨床診斷的符合率。與正常值的確定有關(guān)。上述幾種指標(biāo)間的關(guān)系；靶圖。 若某點(diǎn)的CV%大于10%應(yīng)做為壞點(diǎn)剔除。反應(yīng)精密度的幾個(gè)指標(biāo)（1、2、3）：1、平均批變異系數(shù)（ABCV）：指一批實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的CV平均值：∑SDABCV%=------------------------------×100%∑X2、反應(yīng)誤差關(guān)系（RER）：指一批實(shí)驗(yàn)各復(fù)管的SD與其X之間的函數(shù)關(guān)系。SD為CPM的誤差。它是反應(yīng)實(shí)驗(yàn)復(fù)管平行性好壞的綜合指標(biāo)，不是劑量的誤差。RER的計(jì)算公式見P85，4—23RER≤0.04優(yōu)秀0.12<RER>0.04<0良好RER>0.12差3、健全性試驗(yàn)：指用標(biāo)準(zhǔn)品繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線與用不同釋稀度病人樣品繪制的曲線應(yīng)平行。 影響健全性的因素：a.標(biāo)準(zhǔn)品與待測物性質(zhì)不同b.反應(yīng)系統(tǒng)有干擾反應(yīng)c.待測物在標(biāo)準(zhǔn)品確定的環(huán)境中不適宜。4、youden圖：在多批實(shí)驗(yàn)中每一實(shí)驗(yàn)測量的首部和尾部放置二個(gè)相同濃度的質(zhì)控樣品，將其測量值求X±SD。在直角坐標(biāo)中，做圖如下： QC—H首 QC—MQC—L QC首 首樣品 2SDABD尾樣品QC尾 A區(qū)：準(zhǔn)確區(qū) B區(qū)：正偏差區(qū) C區(qū)：負(fù)偏差區(qū) D區(qū)：不精密區(qū)意義：一種簡便，直觀、有效地評價(jià)精密度和偏倚的方法。5、Cusum圖：把每批實(shí)驗(yàn)的QC測定值與靶值相減后做圖。評價(jià)：1）小斜線連續(xù)上升或下降提示有正、負(fù)偏差2）小斜線的斜率反映偏差的大小3）斜線兩端點(diǎn)落差的絕對值超出QC的3SD說明有偏差出現(xiàn)，超出5SD說明有明顯偏差，數(shù)據(jù)不可靠。反映穩(wěn)定性的評價(jià)指標(biāo)可有Cusum圖、質(zhì)控圖等。 質(zhì)控圖（Shewart作用法）或Levey—Jennings：可選多