基金申請的策略和技巧

基金申請的策略和技巧第一頁，共六十頁，2022年，8月28日基金申請選題撰寫申請書答辯第二頁，共六十頁，2022年，8月28日撰寫前的準備好心情、好身體邊想邊寫3h/天讀指南、讀通知注意截止期讀標書、讀高手、讀同行讀自己賣點??？選題創(chuàng)新性工作基礎想法變文字一氣呵成“立項依據(jù)”溝通科研科87330567、醫(yī)科處

87333055

第三頁，共六十頁，2022年，8月28日摘要

研究內(nèi)容和意義（限400字）1.基礎：繼續(xù)和深入發(fā)表和未發(fā)表創(chuàng)新2.問題中肯3.預實驗針對“問題”的預實驗結果4.假設思想性、創(chuàng)新性5.方法可靠性第一先進性第二6.目標明確、具體7.意義理論性和應用性第四頁，共六十頁，2022年，8月28日立項依據(jù)1.關鍵!占50%文筆流暢、層次分明、邏輯性強2.要求：充分的理由和意義思想性與摘要呼應3.自己的工作為依據(jù)圖文并茂規(guī)范4.參考文獻時效性自己的文章規(guī)范化5.深入淺出內(nèi)行、外行讀得懂6.人文文化素質(zhì)精神動人的故事第五頁，共六十頁，2022年，8月28日神經(jīng)元凋亡時SP1對BH3-only蛋白Bim的轉錄調(diào)控細胞凋亡時SP1對BH3-only蛋白Bim的轉錄調(diào)控神經(jīng)元凋亡時BH3-only蛋白Bim的轉錄調(diào)控神經(jīng)元凋亡時SP1對BH3-only蛋白Bim的調(diào)控

SP1對BH3-only蛋白Bim的轉錄調(diào)控

SP1對神經(jīng)元凋亡的調(diào)控作用關鍵詞：SP1/Bim/基因調(diào)控/信號轉導/神經(jīng)元凋亡項目名稱第六頁，共六十頁，2022年，8月28日研究內(nèi)容、研究目標與

擬解決的關鍵問題第七頁，共六十頁，2022年，8月28日研究目標

獲得SP1直接調(diào)控bim基因表達的可靠證據(jù)，闡明促凋亡蛋白Bim由SP1轉錄調(diào)控的新機制，為確立SP1作為神經(jīng)退行性疾病治療的新靶點提供更充分的科學依據(jù)。要求：明確、具體解決學術問題神經(jīng)元凋亡時SP1對BH3-only蛋白Bim的轉錄調(diào)控與題目相呼應第八頁，共六十頁，2022年，8月28日

研究內(nèi)容

（緊緊圍繞研究目標）

1.

證明bim啟動子核心區(qū)的SP1結合序列是否介導了bim基因的上調(diào)為了證實bim啟動子核心區(qū)的SP1結合序列是否介導了bim基因的上調(diào)，將其中的SP1結合序列進行點突變，使其不能結合SP1；確定這一突變是否能夠消除bim啟動子的撤鉀反應。

2.

分析SP1是否能夠與bim啟動子核心區(qū)的SP1結合序列結合

應用EMSA(ElectrophoreticMobilityShiftAssay)技術，證實bim啟動子核心區(qū)的SP1結合序列是否能夠與SP1結合；進一步采用CHIP(Chromatinimmunoprecipitation)方法，獲得SP1與bim啟動子核心區(qū)在細胞內(nèi)結合的證據(jù)。

3.

從bim的mRNA和蛋白質(zhì)水平，觀察負顯性SP1是否能夠抑制撤鉀誘導的bim基因的上調(diào)

質(zhì)粒轉染CGNs的轉染率只能達到0.1-1.0%，腺病毒的感染率可達70－80%[1]。因此，構建dnSP1的腺病毒載體Ad-dnSP1，感染CGNs才能達到可靠分析bim的mRNA和蛋白質(zhì)表達水平改變的目的。

4.分析SP1誘導Bim這一機制對神經(jīng)元凋亡的調(diào)控作用

確立SP1轉錄激活bim這一機制后，進一步分析這一機制對神經(jīng)元凋亡的調(diào)控作用。

第九頁，共六十頁，2022年，8月28日

擬解決的關鍵問題

獲得SP1直接調(diào)控bim基因表達的可靠依據(jù)。

什么是關鍵問題？

—研究過程中對達到預期目標有重要影響的某些研究內(nèi)容或因素。

—為達到預期目標所必須掌握的關鍵技術或研究手段。撰寫要求：找出關鍵問題，問題清晰，分析透徹，合理的解決方法。第十頁，共六十頁，2022年，8月28日

研究方案項目需求為前提；可靠性第一，先進性第二；參考文獻；突出關鍵技術的描述；不主張使用流程圖，建議開頭：“有關方法、技術路線、試驗手段、關鍵技術綜述如下……”。

第十一頁，共六十頁，2022年，8月28日可行性分析

－從學術思想角度提出

1.工作基礎（學術思想）

2.科研梯隊

3.實驗條件

4.實驗技術

5.交流與合作（國內(nèi)、國外）第十二頁，共六十頁，2022年，8月28日

創(chuàng)新性

對創(chuàng)新的理解：創(chuàng)新性與先進性是有根本區(qū)別的。

原始創(chuàng)新：填補空白或修改傳統(tǒng)的理論；新技術、新方法的發(fā)明創(chuàng)造。

跟蹤創(chuàng)新：

在前人工作基礎上補充、完善現(xiàn)有理論；對原有技術、方法進行修改后產(chǎn)生1＋1＞2的效果。第十三頁，共六十頁，2022年，8月28日本項目的特色與創(chuàng)新之處：申請人首次報道了神經(jīng)元凋亡時促凋亡蛋白Bim上調(diào)是不依賴于JNK/c-Jun通路(LeyuShi,etal,NeurosciLett.2005)一觀察之后，又以可靠的實驗結果證明PI3K/Akt/FKHRL1信號通路也不參與bim的上調(diào)（見立項依據(jù)）。bim上調(diào)的轉錄機制是什么？我們率先對bim啟動子進行了5‘末端序列續(xù)減分析，確立了誘導bim表達的啟動子核心區(qū)，進而發(fā)現(xiàn)一個典型的轉錄因子SP1結合序列位于其中。進一步實驗顯示：神經(jīng)元凋亡時SP1被激活；負顯性SP1突變體和SP1-DNA結合抑制劑mithramycinA可抑制bim的上調(diào)。根據(jù)以上生物信息學分析和實驗觀察，我們首次提出了SP1介導bim上調(diào)這一新的bim轉錄機制：神經(jīng)元凋亡時轉錄因子SP1被激活，激活的SP1與bim啟動子核心區(qū)的SP1結合序列結合，從而轉錄激活bim的表達。本項目擬進一步采用負顯性SP1突變體的腺病毒表達技術以及啟動子點突變、EMSA和CHIP方法，旨在獲得SP1直接調(diào)控bim基因的可靠證據(jù)，為闡明SP1對促凋亡蛋白Bim的調(diào)控作用和機制并進一步確立SP1作為神經(jīng)退行性疾病治療的新靶點提供更充分的科學依據(jù)。

第十四頁，共六十頁，2022年，8月28日研究基礎與工作條件

—突出與項目相關的工作積累研究基礎

已取得的研究工作成績及與本項目有關的研究工作積累(對于自由申請項目，著重填寫申請人近期的主要工作業(yè)績；對于重點項目，請著重填寫本課題組與本項目相關的研究工作積累和近五年的主要研究業(yè)績)工作條件

已具備的實驗條件，尚缺少的實驗條件和擬解決的途徑(包括利用國家重點實驗室和部門開放實驗室的計劃與落實情況)第十五頁，共六十頁，2022年，8月28日研究基礎

在國家自然科學基金(已結題三項、正進行一項)的資助下，近五年有如下工作積累和成績：

1.

SCI論文近五年發(fā)表了14篇SCI論文；其中與神經(jīng)元凋亡的信號轉導和基因調(diào)控有關的論文，作為第一作者的有2篇，作為通訊作者的有4篇(見后)，作為共同作者的有8篇。

2.Bim轉錄機制的前期工作我們首次報道了神經(jīng)元凋亡時JNK/c-Jun不參與bim的上調(diào)[1]，隨后，我們又以可靠的證據(jù)揭示了PI3K/Akt/FKHRL1也不介導bim的上調(diào)(未發(fā)表資料)。這些研究工作改變了以往的觀點,也是本項目重要的立項依據(jù)之一。

第十六頁，共六十頁，2022年，8月28日

3.

Bim啟動子核心區(qū)確立

啟動子5‘末端序列續(xù)減分析確立了誘導Bim表達的啟動子核心區(qū)，并發(fā)現(xiàn)一個典型的轉錄因子SP1結合序列位于其中。進一步實驗顯示：神經(jīng)元凋亡時SP1被激活；負顯性SP1突變體和SP1-DNA結合抑制劑均可抑制Bim的上調(diào)。這些實驗資料揭示了SP1介導bim轉錄調(diào)控的新機制，也為本項目申請?zhí)峁┝俗罡镜膶嶒炓罁?jù)。

4.

轉錄因子調(diào)控神經(jīng)元凋亡的工作基礎

另一項轉錄因子MEF2抗神經(jīng)元凋亡的工作也顯示了申請人與本項目相關的較扎實的研究工作積累。本人首次報道(MingtaoLi,etal,JofNeurosci.2001,21:6544-6552)、隨后被他人證實(Shu-ichiOkamoto,etal,PNAS2002,99:3974-3979)，神經(jīng)元凋亡時轉錄因子MEF2A和MEF2D不僅活性降低和失去抗凋亡作用，而且被凋亡殺手caspase剪切，其N-末端產(chǎn)物反而具有促凋亡活性。這一MEF2調(diào)控凋亡機制的發(fā)現(xiàn)，不僅對于我們理解神經(jīng)元存活或凋亡具有重要的意義，而且也為神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和分化的研究開拓了一條嶄新的思路，具有創(chuàng)新性。第十七頁，共六十頁，2022年，8月28日

5.

信號轉導的工作基礎

較早的一項對cAMP/PKA抗神經(jīng)元凋亡機制的研究也反映了本人在神經(jīng)元凋亡信號轉導的研究方面有較厚實的工作積累。申請者首次發(fā)現(xiàn)促凋亡激酶GSK-3

和GSK-3β是PKA的天然底物；闡明cAMP/PKA通過磷酸化并抑制GSK-3β發(fā)揮其促神經(jīng)元存活的作用，此內(nèi)容發(fā)表在《分子細胞生物學》(MingtaoLi,etal,MolCellBiol.2000,20:9356-9363)。

6.JNK/c-Jun通路的工作基礎

我們首次以JNK/c-Jun為直接靶點、用小分子JNK抑制劑(SP600125)治療帕金森病動物，證實JNK是有效的治療靶點。此工作發(fā)表后(NeuroscienceResearch,2004;48:195-202)，得到了國際同行的認可。SCI期刊DrugNewsPerspectives邀請本人撰寫了有關“以JNK為靶點治療帕金森病”的專題綜述“JNKInhibitionasaPotentialStrategyinTreatingParkinson’sDisease”(DrugNewsPerspect.2004;17:646-54)。

第十八頁，共六十頁，2022年，8月28日SCI文章1.LeyuShi

,ShoufangGong,ZhongminYuan

,ChiMa,YanlingLiu,ChuanfuWang

,WenmingLi,RongbiaoPi,ShoujianHuang,RuzhuChen

,YifanHan

,ZixuMao,andMingtaoLi(通訊作者).Activitydeprivation-dependentinductionoftheproapoptoticBH3-onlyproteinBimisindependentofJNK/c-Junactivationduringapoptosisincerebellargranuleneurons.NeurosciLett.2005,375：7－12.2.WenyaWang,ChiMa,ZixuMaoandMingtaoLi.(通訊作者).JNKinhibitionasapotentialstrategyintreatingParkinsons’sdisease.DrugNewsPerspect,2004,17(10):646-54.3.WenyaWang,LeyuShi,YuanbinXie,ChiMa,WenmingLi,XingwenSu,ShoujianHuang,RuzhuChen,ZhenyuZhu,ZixuMao,YifanHanandMingtao

Li.(通訊作者).SP600125,anewJNKinhibitor,protectsdopaminergicneuronsintheMPTPmodelofParkinson’sdisease.NeurosciRes2004；48:195-202

4.YuanbinXie,YanlingLiu,ChiMa,ZhongminYuan,WenyaWang,ZhenyuZhu,,GuoquanGao,XianguoLiu,HengxinYuan,RuzhuChen,ShoujianHuang,XuelanWang,XiaonanZhu,XueminWang,ZixuMao

andMingtaoLi(通訊作者).Indirubin-3′-oximeinhibitsc-JunNH2-terminalkinase:anti-apoptoticeffectincerebellargranuleneurons.NeurosciLett.2004,367:355-359.第十九頁，共六十頁，2022年，8月28日5.RongbiaoPi,WenmingLiNelsonT.K.Lee,HughH.N.Chan,YongmeiPu,LingNgaChan,NikolausJ.Sucher,DoanldC.Chang,MingtaoLiandYifanHan.Minocyclinepreventsglutamate-inducedapoptosisofcerebellargranuleneuronsbydifferentialregulationofp38andAktpathways.JNeurochem.2004,91:1212-1230.WenyaWang,ChiMa,ZixuMaoandMingtaoLi.(通訊作者).JNKinhibitionasapotentialstrategyintreatingParkinsons’sdisease.DrugNewsPerspect,2004,17(10):646-54.6.WenmingLi,RongbiaoPi,HughH.N.Chan,HongjunFu,NelsonT.K.Lee,HingWaiTsang,YongmeiPu,DonaldC.Chang,ChaoyingLi,JialieLuo,KemingXiong,ZhiwangLi,HongXue,PaulR.Carlier,YuanpingPang,KarlW.K.Tsim,MingtaoLiandYifanHan.NoveldimericAChEinhibitorBis(7)-tacrine,butnotDonepezil,preventsglutamate-inducedneuronalapoptosisbyblockingNMDAreceptors.JBiolChem.2005,280(18):18179-88.7.XueminWang,XiaoliTang,MingtaoLi,JohnMarshall,ZixuMao.Regulationofneuroprotectiveactivityofmyocyteenhancerfactor2bycAMP-PKAsignalingpathwayinneuronalsurvival.JBiolChem.2005,280(17):16705-13.8.MarcusWiedmann,XueminWang,X.iaoliTang,MingtaoLi,ZixuMao.PI3K/Akt-dependentregulationofthetranscriptionfactormyocyteenhancerfactor-2ininsulin-likegrowthfactor-1-andmembranedepolarization-mediatedsurvivalofcerebellargranuleneurons.JNeurosciRes.2005200581(2):226-234.第二十頁，共六十頁，2022年，8月28日9.MingtaoLi，XiaominWang，MaryKayMeintzer，TraceyLaessig，MorrisJ.BirnbaumandKimA.Heidenreich.CyclicAMPpromotesneuronalsurvivalbyphosphorylationofglycogensynthasekinase3β.MolCellBiol.2000,20（24）：9356-9363.10.MingtaoLi，DanielA.Linsenman，MelissaP.Allen，MaryKayMeintzer，XiaominWang，TraceyLaessig，MargaretE.Wierman&KimA.Heidenreich.MEF2AandMEF2Dundergophosphorylationandcaspase-mediateddegradationduringapoptosisofratcerebellargranuleneurons.J.Neurosci.2001;21(17):6544-6552.11.DanielA.Linseman,ChristopherM.Bartley,ShoshonaS.Le,TraceyA.Laessig,RonJ.Bouchard,MaryKayMeintzer,MingtaoLiandKimA.Heidenreich

.InactivationoftheMyocyteEnhancerFactor-2RepressorHistoneDeacetylase-5byEndogenousCa2/Calmodulin-dependentKinaseIIPromotesDepolarization-mediatedCerebellarGranuleNeuronSurvival.JBiolChem2003,278:41472–41481.12.Jing-PingYun,Choong-TsekLiew,EngChingChew,Xiao-YuYin,PaulBoSanLai,YamHinFai,H.K.RichardLi,Mei-LinJin,Ming-XiaoDing,MingtaoLi,Han-LiangLin,andWanYeeLau.NuclearMatrixProteinExpressionsinHepatocytesofNormalandCirrhoticRatLiversUnderNormalandRegeneratingConditions.

JCellBiochem.

2004,91:1269–1279.第二十一頁，共六十頁，2022年，8月28日13.HongweiYang,XiaodongHu,HongmeiZhang,WenjunXin,

MingtaoLi,TongZhang,LijunZhouandXianguoLiu.RolesofCaMKII,PKA,andPKCintheinductionandmainternanceofLTPofC-fiber-evokedfieldpotentialsinratspinaldorsalhorn.JNeurophysiol.2004,91:1122-1133.14.NengweiHu,HongmeiZhang,XiaodongHu,MingtaoLi,TongZhang,LijunZhouandXianguoLiu.ProteinSynthesisInhibitionBlockstheLate-PhaseLTPofC-FiberEvokedFieldPotentialsinRatSpinalDorsalHorn.JNeurophysiol,2003;89:2354-235915.

JuanSun,

MingtaoLi,JiahuaiHanandJunGu.SensitizationofdifferentiatedPC12cellstoapoptosisbypresenilin-2ismediatedbyp38.Biochem.Biophy.Res.Commun.,2001,287:536-541.

16.WeibinCai,JianfangMa,ChaoyangLi,ZhonghanYang,XiaYang,WeiLiu,ZuguoLiu,MingtaoLi,GuoquanGao.Enhancedanti-angiogeniceffectofadeletionmutantofplasminogenkringle5onneovascularization.JCellBiochem.2005Sep15;(inpress).17.MingYANG,Cun-youWAGN,FengZHOU,JingTAO,TaoLIU,Hai-yanWEI,WeiLIU,Ming-taoLi,Xian-songFENG.ProteomicAnalysisintheEarlyProcessofPancreaticRegenerationinthePancreatectomizedRat.ActaPharmacologicaSinica2005(inpress)第二十二頁，共六十頁，2022年，8月28日工作條件

2001年回國，獲得211基金180萬元，組建了一流的分子、細胞生物學實驗室。2002年，作為負責人獲得一期985學科建設經(jīng)費700萬元，籌建了一流的蛋白質(zhì)組學實驗室并正在主持開展蛋白質(zhì)科學的前沿性工作。近三年，培養(yǎng)和匯聚了一支從事分子神經(jīng)生物學和蛋白質(zhì)組學研究的科研隊伍。這些建設性工作為解決細胞信號轉導、基因調(diào)控以及本項目的核心問題奠定了扎實的基礎。項目負責人黎明濤所在單位——中山大學基礎醫(yī)學院藥理教研室是211項目資助學科和國家重點學科。人才濟濟，科研裝備精良。近三年，藥理教研室獲得學科建設資金3000萬元，已購置大型儀器如質(zhì)譜儀、激光共聚焦顯微鏡、超速離心機、流式細胞儀、高效液相和蛋白質(zhì)分離純化系統(tǒng)等。這是申請者視為非?？少F的研究工作環(huán)境。

第二十三頁，共六十頁，2022年，8月28日申請者簡歷申請者和項目組主要成員

學歷研究工作簡歷近期已發(fā)表與本項目有關的文章目錄獲得學術獎勵情況在本項目中承擔的任務。

第二十四頁，共六十頁，2022年，8月28日

黎明濤(LiMingtao)項目負責人，中山大學基礎醫(yī)學院藥理教研室教授，博士生導師，中山醫(yī)學院蛋白質(zhì)組學實驗室主任。于1984年、1989年和1996年分別獲得醫(yī)學學士、碩士和博士學位。主要研究領域是神經(jīng)元凋亡的信號轉導、基因調(diào)控和蛋白質(zhì)組學。在美國DepartmentofPharmacology,UniversityofColoradoHealthSciencesCenter從事兩年博士后研究（1999-2001），主攻凋亡的信號轉導、基因調(diào)控和蛋白質(zhì)組學。近五年發(fā)表了14篇SCI論文，其中：作為第一作者，在國際核心雜志MolecularandCellularBiology(ImpactFactor,10.03)和JournalofNeuroscience(IF,8.4)發(fā)表了具有創(chuàng)新性的文章；作為通訊作者，最近在NeurosciRes(IF,2.4)和NeurosciLett（IF，2.2）等期刊上發(fā)表了開拓性的文章。近五年（1998－2004）作為第一主持人獲得13項基金，包括：4項國家自然科學基金；5項省自然科學基金；3項市基金；1項教育部基金。發(fā)表的相關論文1.

LeyuShi

,ShoufangGong,ZhongminYuan

,ChiMa,YanlingLiu,ChuanfuWang

,WenmingLi,RongbiaoPi,ShoujianHuang,RuzhuChen

,YifanHan

,ZixuMao,andMingtaoLi(通訊作者).Activitydeprivation-dependentinductionoftheproapoptoticBH3-onlyproteinBimisindependentofJNK/c-Junactivationduringapoptosisincerebellargranuleneurons.NeurosciLett.2005,375:7－12.2.……3.……第二十五頁，共六十頁，2022年，8月28日

皮榮標(PiRongbiao)33歲，博士學位，講師。2002年畢業(yè)于中山大學，獲神經(jīng)藥理學博士。同年赴香港科技大學生物化學系從事博士后研究，現(xiàn)在中山大學藥學院任講師。主要研究興趣涉及神經(jīng)保護藥物的作用及其機制的研究。曾負責或參加包括國家自然科學基金等多項研究。已發(fā)表或待發(fā)表論著近20篇，其中SCI論文5篇。皮博士與本人合作達11年，有共同的研究趣向，作為共同作者發(fā)表多篇SCI論文。他掌握了本項目涉及的大部分實驗方法和技術，尤其在腺病毒載體構建方面積累了經(jīng)驗（見文章）。主要負責腺病毒載體構建等工作。發(fā)表的相關論文

1.RongbiaoPi,WenmingLi,NelsonT.K.Lee,HughH.N.Chan,YongmeiPu,LingNgaChan,NikolausJ.Sucher,DoanldC.Chang,MingtaoLiandYifanHan.Minocyclinepreventsglutamate-inducedapoptosisofcerebellargranuleneuronsbydifferentialregulationofp38andAktpathways.JNeurochem.2004,91:1212-1230.2.……3.……第二十六頁，共六十頁，2022年，8月28日項目組主要成員第二十七頁，共六十頁，2022年，8月28日經(jīng)費申請表第二十八頁，共六十頁，2022年，8月28日申請項目同行評議意見反饋信

黎明濤先生：

您好！您申請的項目經(jīng)專家投票表決，同意資助。關于你的項目的同行評議意見如下：

1.本項目在小腦顆粒細胞撤鉀的離體凋亡模型中，發(fā)現(xiàn)了一種直接調(diào)節(jié)Bim的新轉錄因子SP1，申請人試圖采用腺病毒轉染技術、基因突變以及分子生物學方法進一步論證SP1是直接調(diào)控bim基因的這一假說。立項具有前言性，申請人工作基礎好，并與美國Emory大學、香港大學有長期的合作條件，完全能夠完成本項課題。建議優(yōu)先資助。

2.本項課題的立項依據(jù)較為充分，具有一定的學術創(chuàng)新及科學意義。研究內(nèi)容明確、技術路線清晰、研究方法和方案可行。申請者有較高的學術水平，以及多次主持國家自然科學基金課題的經(jīng)驗。同時，申請者所在單位又有比較好的實驗室及條件。建議給予資助。

3.課題研究具有較好的工作基礎，研究具有較高的學術價值，建議資助。

4.同意資助。理由：該項目立論依據(jù)充分，其重要的意義表現(xiàn)在澄清撤鉀誘導神經(jīng)元凋亡時，Bim上調(diào)的細胞內(nèi)信號轉導機制。申請者有較好的研究基礎和研究能力，項目的內(nèi)容設置合適，重點突出，總體方案合理，技術路線可行，可資助。

5.Thisisanicelywritenproposalwithaclearaimandpracticalapproaches.Further,thegrouphaspublishedresultsrelatedtothecurrentproposal,indicatingtheabilityofthegrouptoperformtheexperiments.

第二十九頁，共六十頁，2022年，8月28日獲得資助的決定因素工作基礎好學術創(chuàng)新性及學術價值立項依據(jù)充分研究內(nèi)容明確技術路線清晰重點突出、方案合理國際合作第三十頁，共六十頁，2022年，8月28日祝大家新年快樂！

在新的一年獲得更多基金！第三十一頁，共六十頁，2022年，8月28日基金答辯充滿自信、激情儀表和體語特點：專家心理？按提前結束做準備！準備充分幻燈小道具口頭表達準確性、情感性、可信性和簡明性開門見山、突出主題做什么？為什么？怎樣做？突出特色和創(chuàng)新第三十二頁，共六十頁，2022年，8月28日帕金森病治療的新靶點及靛玉紅衍生物的研究與開發(fā)黎明濤中山大學基礎醫(yī)學院第三十三頁，共六十頁，2022年，8月28日立論依據(jù)現(xiàn)狀：

1.發(fā)病情況：世界性；中國>100萬；美國100萬

2.病理特征：黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元凋亡紋狀體多巴胺含量

3.治療現(xiàn)狀：左旋多巴—對癥治療：療效不理想、安全性受到質(zhì)疑第三十四頁，共六十頁，2022年，8月28日以JNK為新靶點治療PD2002年省重點項目（15萬元）資助

MLK

↓

JNK

SP600125

↓c-Jun

↓凋亡

第三十五頁，共六十頁，2022年，8月28日以JNK為靶治療PD1.保護多巴胺能神經(jīng)元2.改善行為學指標3.提高黑質(zhì)多巴胺濃度第三十六頁，共六十頁，2022年，8月28日第三十七頁，共六十頁，2022年，8月28日第三十八頁，共六十頁，2022年，8月28日

結題情況1.四篇SCI文章，通訊作者2.人才培養(yǎng)：1名博士2名碩士第三十九頁，共六十頁，2022年，8月28日以JNK/CDK5/GSK3β為靶治療PD

JNKNeurosciRes2004,48:195-202DrugNewsPerspect.200417(10):646-54GSK3βMingtaoLi,etal,unpublisheddata

CDK5PNASUSA2003,100(23):13650-5第四十頁，共六十頁，2022年，8月28日抑制JNK/CDK5/GSK3β的方案

1.三種抑制劑聯(lián)合

2.一種抑制劑，“一石三鳥”

第四十一頁，共六十頁，2022年，8月28日

Indirubin-3'-oxime（靛玉紅衍生物）是CDK5、GSK-3β的抑制劑

NatCellBiol.19991(1):60-7JBiolChem.2001,5;276(1):251-60第四十二頁，共六十頁，2022年，8月28日靛玉紅直接抑制JNK活性第四十三頁，共六十頁，2022年，8月28日靛玉紅直接抑制JNK,保護神經(jīng)元第四十四頁，共六十頁，2022年，8月28日Indirubin-3'-oximeinhibitedMPP+-inducedapoptosisincultureddopaminerbicneurons.(a)control,(redforTH-positiveneurons),(b)10μMMPP+decreasedTH-positivecellsandreducedcytoplasmicvolume;indirubin-3'-oxime3μM(c)and5μM(d)rescuedTH-positivecells

第四十五頁，共六十頁，2022年，8月28日Indirubin-3'-oximepreventedlossofdopamineneuronsafterMPTPadministration.(a)vehicletreated(control);(b)MPTPtreated;MPTPalongwithIndirubin-3'-oxime5mg/kg(c);10mg/kg(d)and30mg/kg(e).NoteIndirubin-3'-oximerescuedthedopaminergicneuronslossinadose-dependentmanner(c-e).第四十六頁，共六十頁，2022年，8月28日研究目標以JNK/CDK5/GSK3β為明確靶點，以靛玉紅衍生物為抑制劑,研發(fā)出一類毒性小、特異性高、作用強的治療PD的新藥物第四十七頁，共六十頁，2022年，8月28日研究內(nèi)容1.篩選對JNK具有特異性抑制作用的靛玉紅衍生物(11個）2.篩選對黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元凋亡具有保護性干預作用的靛玉紅衍生物（8個）3.篩選對PD具有治療作用的衍生物（4個）4.藥理、毒理研究第四十八頁，共六十頁，2022年，8月28日研究基礎1.首次證實JNK是治療PD的有效靶點2.證實GSK-3β是治療PD的靶點之一3.發(fā)現(xiàn)靛玉紅衍生物能夠抑制JNK，對PD具有治療作用4.15篇相關SCI文章第四十九頁，共六十頁，2022年，8月28日發(fā)表文章補充WiedmannM,WangX,TangX,HanM,LiM,MaoZ.JNeurosciRes.2005Jun1[Epubaheadofprint]WangX,TangX,LiM,MarshallJ,MaoZ.JBiolChem.2005,280(17):16705-13.LiW,PiR,ChanHH,FuH,LeeNT,TsangHW,PuY,ChangDC,LiC,LuoJ,XiongK,LiZ,XueH,CarlierPR,PangY,TsimKW,LiM,HanY.JBiolChem.2005,280(18):18179-88.第五十頁，共六十頁，2022年，8月28日創(chuàng)新點

1.首次證實JNK是治療PD的有效靶點

2.證實GSK-3β是治療PD的靶點之一

3.發(fā)現(xiàn)靛玉紅能夠抑制JNK，對PD具有治療作用

4.JNK/CDK5/GSK-3β為靶治療PD5.用一種化合物抑制JNK/CDK5/GSK-3β

第五十一頁，共六十頁，2022年，8月28日我們對完成此項目充滿信心！謝謝！第五十二頁，共六十頁，2022年，8月28日Fig.6MithramycinA,aSP1-DNAbindinginhibitor,attenuatesbimupreguationbyactivitydeprivationinCGNs.(A)

MithramycinAattenuatestheupregulationofBimELinducedbyactivitydeprivationinadosedependentmanner.CGNswereplacedin25Kor5KmediaintheabsenceorpresenceofmithramycinAattheindicatedconcentrationsfor6h.BimELexpressionwasassessedbyWesternblotasdescribedinFig.1(A).Resultsshownarerepresentativeoffourseparateexperiments.(B)MithramycinAinhibitstheincreaseinbimmRNAlevelinadose-dependentmanner.Neuronsweretreatedasdescribedin(A),bimandactinmRNAsweredeterminedbyRT-PCR,Resultsshownarerepresentativeoffiveseparateexperiments.(C)MithramycinAsuppressestheactivationofbimpromoterinducedbyactivitydeprivation.Neuronswereco-transfectedwithbim-LucandpEF-RLfor8hr.LuciferaseactivitiesweremeasuredasdescribedinFig.2,Theexperimentswererepeatedthreetimeswithduplicatesforeachtreatment.Thedatarepresent±S.E.M.ofthreeexperiments.第五十三頁，共六十頁，2022年，8月28日參考文獻1.LeyuShi

,ShoufangGong,ZhongminYuan

,ChiMa,YanlingLiu,ChuanfuWang

,WenmingLi,RongbiaoPi,ShoujianHuang,RuzhuChen

,YifanHan

,ZixuMao,andMingtaoLi.Activitydeprivation-dependentinductionoftheproapoptoticBH3-onlyproteinBimisindependentofJNK/c-Junactivationduringapoptosisincerebellargranuleneurons.NeurosciLett.2005,375：7－12.2.WenyaWang,LeyuShi,YuanbinXie,ChiMa,WenmingLi,XingwenSu,ShoujianHuang,RuzhuChen,ZhenyuZhu,ZixuMao,YifanHanandMingtao

Li.SP600125,anewJNKinhibitor,protectsdopaminergicneuronsintheMP