動物細胞工程

細胞工程云南大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院林潔主講

第一章

緒論第一節(jié)生物技術(shù)與細胞工程第二節(jié)細胞工程的研究概況第三節(jié)細胞工程的研究內(nèi)容第四節(jié)細胞工程的重要應(yīng)用第五節(jié)課程的教學(xué)安排第六節(jié)教材和參考書目第一節(jié)

生物技術(shù)與細胞工程美國國會科技評議處在1995年將生物技術(shù)(biotechnology)定義為「利用生物體或來自生物體的物質(zhì)去制造或修飾某個產(chǎn)品，改良動、植物或開發(fā)微生物以做為特定之用途?！笲ios=life；Teuchos=tool；Logos=studyoforessenceof.Biotechnology=thestudyoftoolsfromlivingthings.

一、

生物技術(shù)的定義生物技術(shù)（biotechnology）就是指人們以現(xiàn)代生命科學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合其他基礎(chǔ)學(xué)科的科學(xué)原理，采用先進的工程技術(shù)手段，按照預(yù)先的設(shè)計改造生物體或加工生物原料，為人類生產(chǎn)出所需要的產(chǎn)品或達到某種目的技術(shù)原理與過程。有時也稱為生物工程（bioengineering）。改造生物體是指獲得優(yōu)良品質(zhì)的動物、植物和微生物品系。加工的生物原料是指生物的某一部分或生長過程中產(chǎn)生的能利用的物質(zhì)，如淀粉、多糖、纖維素等有機物。生產(chǎn)出所需要的產(chǎn)品包括：糧食、醫(yī)藥、食品、化工原料、能源等。達到某種目的則包括：疾病的預(yù)防、診斷與治療和食品的檢測以及環(huán)境污染的檢測和治理等。生物技術(shù)的不自覺應(yīng)用第一代生物技術(shù)近代生物技術(shù)現(xiàn)代生物技術(shù)

二、生物技術(shù)的發(fā)展歷程生物技術(shù)的不自覺應(yīng)用4000多年前我國人民就會利用谷物釀酒，這是最早的發(fā)酵技術(shù)。公元前221年，周朝后期，就能制作豆腐、醬和醋，并一直沿用至今。當生面團制作完成后，未馬上烘焙，便會進行自發(fā)性的發(fā)酵過程，經(jīng)過烘烤后形成了質(zhì)地較輕、較蓬松且美味的面包。在西方，紅酒的起源地據(jù)信是底格里斯河流域，在某次葡萄果汁受到酵母菌與其他微生物污染后自然發(fā)酵而產(chǎn)生。第一代生物技術(shù)1680年，LeeuwenHoek制成了顯微鏡后，人們知道有微生物的存在。1857年，Pasteur證實酒精發(fā)酵是由活酵母引起的，才逐漸了解到其他不同的發(fā)酵產(chǎn)物也是由不同微生物的作用而形成，并建立了微生物純種培養(yǎng)技術(shù)。為發(fā)酵技術(shù)的發(fā)展提供了理論基礎(chǔ)。19世紀末到20世紀30年代這段時間不少工業(yè)發(fā)酵過程陸續(xù)出現(xiàn)，如：乳酸、酒精、面包酵母、丙酮、檸檬酸、淀粉酶等的生產(chǎn)：至此，以工業(yè)微生物過程生產(chǎn)發(fā)酵產(chǎn)品為代表的真正意義上的生物工程才正式誕生了

“在含有不同糖成分（包括蔗糖、葡萄糖、果糖和麥芽糖）的水溶液中，一種從啤酒酵母制備的無細胞榨出汁能導(dǎo)致二氧化碳和乙醇的形成。發(fā)酵過程的啟動并不需要以活細胞為代表的那樣復(fù)雜的“裝置”，酵母榨出汁中導(dǎo)致發(fā)酵作用發(fā)生的只涉及一種溶解了的物質(zhì)，它無疑是一種蛋白質(zhì)。我們用“釀酶”這個名詞來標示這種蛋白?！?/p>

——愛德華﹒畢希納近代生物技術(shù)1928年英國人弗萊明復(fù)發(fā)現(xiàn)了青霉素。1941年美國和英國開始合作對青霉素的大規(guī)模生產(chǎn)技術(shù)進行研究和開發(fā)，終于在1943年開發(fā)出一條青霉素沉浸培養(yǎng)工藝，采用帶有機械攪拌和通氣的密閉式發(fā)酵罐對青霉菌進行培養(yǎng)并用離心萃取和冷凍干燥把青霉素從發(fā)酵液中提取出來并進行精制，從而使青霉素的產(chǎn)量和質(zhì)量大幅度提高。推動了抗生素產(chǎn)業(yè)的興起和發(fā)展。抗生素生產(chǎn)的經(jīng)驗很快地促進了其他發(fā)酵產(chǎn)品的發(fā)展，最突出的是20世紀50年代氨基酸發(fā)酵工業(yè)及60年代出現(xiàn)的酶制劑工業(yè)。發(fā)酵相關(guān)知識積累至某個水準后，便可大量以工業(yè)發(fā)酵過程制造重要工業(yè)化合物。如今，商用酶制劑、氨基酸、抗生素和維生素等工業(yè)原料和醫(yī)藥制品，均大量以工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)。

現(xiàn)代生物技術(shù)1972年，Berg首先實現(xiàn)了DNA體外重組技術(shù)，DNA重組技術(shù)的建立是現(xiàn)代生物技術(shù)的標志。1944年Avery利用實驗證明了DNA是遺傳信息的攜帶者；1953年美國的沃森和克里克發(fā)現(xiàn)了DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)；1961年Khorana和Nirenberg破譯了遺傳密碼，揭示了DNA編碼的遺傳信息是如何傳遞給蛋白質(zhì)這一秘密；限制性內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)。DNA重組技術(shù)使人們可以按照意愿在試管內(nèi)切割DNA，分離基因并經(jīng)重組后導(dǎo)入其他微生物或細胞，藉以改造生物體，生產(chǎn)新產(chǎn)品。從而帶動了傳統(tǒng)生物技術(shù)的發(fā)展，形成了具有劃時代意義和戰(zhàn)略價值的現(xiàn)代生物技術(shù)。生物學(xué)化學(xué)工程工程學(xué)化學(xué)生物工程生物化學(xué)生物技術(shù)現(xiàn)代生物技術(shù)新興、前沿學(xué)科往往在學(xué)科交叉中產(chǎn)生三、生物技術(shù)的四大支柱生物技術(shù)（生物工程）基因工程細胞工程酶工程發(fā)酵工程蛋白質(zhì)工程細胞工程與各生物技術(shù)細胞工程基因工程蛋白質(zhì)工程產(chǎn)品酶工程生化工程發(fā)酵工程轉(zhuǎn)基因生物反應(yīng)器及分離工程動植物細胞培養(yǎng)酶制劑應(yīng)用或生產(chǎn)細胞工程(cellengineering)細胞工程主要是以細胞為基本單位，在體外條件下進行培養(yǎng)和繁殖；或是應(yīng)用現(xiàn)代細胞生物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的理論與方法，在細胞整體水平或細胞器水平上人為地使細胞的某些生物學(xué)特性按照人們的意愿發(fā)生改變，從而獲得新型生物品種或細胞產(chǎn)品的技術(shù)過程。抗蟲基因轉(zhuǎn)殖細胞重組技術(shù)與無性繁殖第二節(jié)

細胞工程與研究概況19世紀30年代施旺和施萊登創(chuàng)立了細胞學(xué)說。1902年德國植物學(xué)家哈伯蘭德預(yù)言了植物細胞的全能性，被譽為“植物組織培養(yǎng)之父”。1907年美國生物學(xué)家哈里森采用蓋玻片懸滴培養(yǎng)蛙胚神經(jīng)組織獲得成功，開創(chuàng)了動物細胞培養(yǎng)的先河。1923年法國學(xué)者卡勒爾設(shè)計了卡氏瓶，并用于多種動物組織培養(yǎng)獲得成功。1934年荷蘭植物學(xué)家溫特發(fā)現(xiàn)生長素，并證實對植物細胞培養(yǎng)的作用。1937年法國科學(xué)家特里特和諾比考特幾乎同時離體培養(yǎng)了胡蘿卜組織，并使細胞增殖。1951年厄爾利等人開發(fā)了供動物細胞體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。1960年英國科金教授應(yīng)用酶解得方法，首次成功從番茄幼苗的根部制備到大量的原生質(zhì)體。第二節(jié)

細胞工程與研究概況1972年美國的卡爾森等人人工誘導(dǎo)，將來自不同兩種煙草的原生質(zhì)體進行融合，獲得了第一個體細胞雜種植株。1975年Milstein和konler將小鼠骨髓瘤細胞與羊紅血球免疫過的小鼠淋巴細胞融合形成雜種細胞能分泌抗羊紅血球抗體，用于制備單克隆抗體。1977年英國劍橋大學(xué)生物學(xué)家愛德華茲采用胚胎工程技術(shù)成功培育出世界首例試管嬰兒。1981年埃文斯等分別從小鼠早期胚胎中分離培養(yǎng)成功并建立了胚胎干細胞系，為胚胎發(fā)育及胚胎工程等方面的研究奠定了基礎(chǔ)。20世紀80年代以后隨著重組DNA技術(shù)和細胞融合技術(shù)的迅速發(fā)展，動物培養(yǎng)技術(shù)被廣泛用于生產(chǎn)各種特殊的生物制品。1997年英國利用成年動物體細胞首次克隆出綿羊“多利”。2001年英國又宣布成功培育出世界首批轉(zhuǎn)基因克隆豬。2007年山中伸彌等成功把人類皮膚細胞轉(zhuǎn)化成人工萬能干細胞，并成功使這些干細胞轉(zhuǎn)化成為身體器官的一部份。第三節(jié)

細胞工程的研究內(nèi)容根據(jù)研究對象的不同：微生物細胞工程植物細胞工程動物細胞工程根據(jù)研究水平來劃分：組織水平細胞水平細胞器水平基因水平根據(jù)技術(shù)范圍細胞與組織的培養(yǎng)技術(shù)細胞融合技術(shù)胚胎工程細胞重組與克隆技術(shù)轉(zhuǎn)基因技術(shù)染色體工程細胞與組織培養(yǎng)技術(shù)細胞與組織培養(yǎng)技術(shù)就是從動物或植物體內(nèi)取出細胞或組織，在體外模擬體內(nèi)的生理環(huán)境，在無菌、適溫和豐富的營養(yǎng)條件下，使離體細胞或組織生存、生長并維持結(jié)構(gòu)和功能的一門技術(shù)動物細胞與組織培養(yǎng)技術(shù)是動物細胞工程中最重要的組成部分，該技術(shù)是動物細胞工程的基礎(chǔ)。同時，動物細胞體外培養(yǎng)，不受氣候、季節(jié)等因素的限制，可用于制取許多有應(yīng)用價值的細胞產(chǎn)品（單抗、細胞因子、疫苗、酶制劑等等）；此外胚胎干細胞的培養(yǎng)和人工誘導(dǎo)分化具有顯著的潛在價值。細胞融合技術(shù)細胞融合（cellfusion）又稱細胞雜交（cellhybridization）。它是指用人工的方法使兩種或幾種以上的體細胞合并形成一個細胞，不經(jīng)過有性生殖過程而得到雜種細胞的方法，在自然情況下，體內(nèi)或體外培養(yǎng)細胞間所發(fā)生的融合，稱為自然融合。而在體外用人工方法（使用融合誘導(dǎo)因子）促使相同或不同的細胞間發(fā)生融合，稱為人工誘導(dǎo)融合。1975年Milstein和konler將小鼠骨髓瘤細胞與羊紅血球免疫過的小鼠淋巴細胞融合形成雜種細胞能分泌抗羊紅血球抗體，用于制備單克隆抗體。胚胎工程胚胎工程主要是對哺乳動物的胚胎進行某些人為的工程技術(shù)操作獲得人們所需要的成體動物。胚胎工程采用的新技術(shù)包括：胚胎分割技術(shù)、胚胎融合技術(shù)、卵核移植技術(shù)、體外受精技術(shù)、胚胎培養(yǎng)、胚胎移植以及性別鑒定技術(shù)、胚胎冷凍技術(shù)等。優(yōu)良品種的快速繁殖與胚胎保存。試管嬰兒培育技術(shù)。細胞重組與克隆技術(shù)細胞重組技術(shù)就是指從活細胞中分離出細胞器及其組分，然后在體外一定條件下將不同細胞來源的細胞器及其組分進行重組，使其重新裝配成為具有生物活性的細胞或細胞器的一種實驗技術(shù)。細胞的生長過程包含著細胞器的自我裝配，但這是一個活體的自我裝配，而細胞重組則是離體的裝配過程。利用該技術(shù)人們可以人為地使細胞表達新的性狀和產(chǎn)生新的產(chǎn)品?？寺游锏漠a(chǎn)生是細胞重組技術(shù)最令人矚目的應(yīng)用。轉(zhuǎn)基因技術(shù)轉(zhuǎn)基因技術(shù)就是指將外源基因整合到生物體內(nèi)，得到穩(wěn)定表達，并使該基因能穩(wěn)定地遺傳給后代的試驗技術(shù)。是改變物種遺傳性狀、獲得新生物品種和生產(chǎn)新型生物制品的最有效途徑。已在微生物、動植物領(lǐng)域得到迅速發(fā)展。目前，轉(zhuǎn)基因動物及轉(zhuǎn)基因生物反應(yīng)器已經(jīng)在生物醫(yī)藥、異種器官移植和畜牧業(yè)等領(lǐng)域顯示了廣闊的應(yīng)用前景。轉(zhuǎn)基因技術(shù)和細胞重組技術(shù)共同組成了細胞遺傳工程。它們代表了現(xiàn)代細胞工程，甚至是整個生物技術(shù)的前沿領(lǐng)域。染色體工程染色體工程是按照預(yù)先的設(shè)計，添加、消除或替代同種或異種染色體的全部或一部分，從而達到定向改變生物遺傳性狀或選育新品種的目的。他是從染色體水平改變細胞遺傳組成的細胞工程技術(shù)。目前主要應(yīng)用于植物遺傳育種領(lǐng)域。動物染色體工程主要采用對細胞進行微操作的方法（如微細胞轉(zhuǎn)移方法等）來達到轉(zhuǎn)基因的目的。第四節(jié)

細胞工程的重要應(yīng)用目前，細胞工程已經(jīng)滲透到人類生活的許多領(lǐng)域，取得了許多具有開創(chuàng)性的研究成果，有的已經(jīng)在生產(chǎn)中推廣，收到了明顯的經(jīng)濟和社會效益。隨著細胞工程技術(shù)研究的不斷深入，它的前景和產(chǎn)生的影響將會日益地顯示出來。稀有動植物資源的保存和保護提高農(nóng)作物品質(zhì)新型動植物品種的培育生產(chǎn)生物活性產(chǎn)物、藥品等建立疾病的新型治療方法供醫(yī)學(xué)器官修復(fù)或移植的組織工程轉(zhuǎn)基因動植物的生物反應(yīng)器在能源、環(huán)境保護等領(lǐng)域的應(yīng)用在生命科學(xué)研究各領(lǐng)域中的應(yīng)用稀有動植物資源的保存和保護細胞工程與農(nóng)業(yè)每一植物細胞都有極強的再生能力再生植株紫杉醇NatureBiotechnology溶解細胞壁原生質(zhì)體愈傷組織ScientificAmericanLifeProcessesofPlants植物細胞再生多莉母親的乳腺細胞核代理孕母的無核卵母細胞單性生殖：胚胎的遺傳信息僅來自單一細胞沒有經(jīng)過受精過程復(fù)制生物代母由化石所得

DNA來復(fù)制生物還只是科幻電影牛頓株羅紀公園提高農(nóng)作物品質(zhì)，發(fā)展畜牧業(yè)生產(chǎn)

抗蟲基因轉(zhuǎn)殖植物基因轉(zhuǎn)殖番茄殖入反義基因可防止軟化抑制果肉軟化的酶

(果膠酶pectinase)NatureBiotechnology反義基因新型動植物品種的培育原生質(zhì)體細胞融合J.F.Shepard(1983)Science219:683-688PotatoTomato+Pomato利用細胞工程技術(shù)生產(chǎn)生物活性產(chǎn)物、藥品等細胞工程與醫(yī)藥健康牛頓(1985)no.23p.100NationalGeographic細胞融合融合瘤

單克隆抗體的高度專一性有很多用途單克隆抗體

是對其抗原有極強專一性

的魔彈

(magicbullet)

或

巡航飛彈研究

以免疫轉(zhuǎn)印法偵測

特定抗原醫(yī)療

以毒素連接抗體攻擊

病變細胞檢驗

以

ELISA偵測特定

病原體

以單克隆抗體來清除體內(nèi)癌細胞NationalGeographic利用生物反應(yīng)器大規(guī)模培養(yǎng)動物細胞生產(chǎn)具有重要醫(yī)用價值的酶、生長因子、疫苗和單抗等已成為生物醫(yī)藥高技術(shù)產(chǎn)業(yè)的重要部分：目前動物細胞生物反應(yīng)器培養(yǎng)生產(chǎn)的生物制品主要有以下幾類：病毒疫苗（乙肝疫苗、脊髓灰質(zhì)炎疫苗、狂犬疫苗）非抗體免疫調(diào)節(jié)劑（干擾素、白細胞介素、B細胞生長因子、巨噬細胞激活因子等）多肽生長因子（神經(jīng)生長因子、成纖維生長因子、表皮生長因子、血清生長因子等）酶類（組織纖溶酶原激活劑等）激素（紅細胞生成素、促黃體生成素、促濾胞素等）腫瘤特異性抗原（癌胚抗原、甲胎抗原等）單克隆抗體病毒殺蟲劑（桿狀病毒等）1996年至1997年使用哺乳動物細胞系生產(chǎn)的獲得

許可的診斷用重組生物制品（BLA）產(chǎn)品BLA名稱生產(chǎn)商批準日期產(chǎn)品類型細胞系方法培養(yǎng)基人I，II型T淋巴病毒／AbbottHTLV-1/HTLV-2EIATM（用于酶免疫分析）AbbottLaboratories8/15/1997鼠單克隆抗體，鼠／人IgG1慢性感染的人T和B淋巴細胞未公開未公開Capromabpendtide/ProstaScintTM（癌癥造影劑）Cytogen10/28/1996單克隆抗體（mAb）鼠雜交細胞系中空纖維無血清，含牛血清白蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白Nofetumomab/VerlumaTM（癌癥造影劑）DrKarlThomae8/20/1996單克隆抗體（mAb），鼠抗IgG1哺乳動物細胞未公開無血清Imciromabpentetate/MyoscintTM（心臟造影劑）Centocor7/3/1996單克隆抗體（mAb），鼠抗IgG2bFab片段鼠雜交瘤細胞系未公開含血清，含慶大霉素1997年至1998年使用哺乳動物細胞系生產(chǎn)的獲得

許可的疫苗及細胞用重組生物制品（BLA）產(chǎn)品BLA名稱生產(chǎn)商批準日期產(chǎn)品類型細胞系方法培養(yǎng)基Rotavirus疫苗（狂犬病疫苗）WyethLaboratories8/31/1998活病毒疫苗FRh1-2未公開培養(yǎng)基中含胎牛血清，新霉素硫酸鹽和兩性霉素Rabavert用于狂犬病的免疫ChironBehring10/20/1997疫苗未公開未公開未公開甲肝疫苗滅活／VaQTATM（用于預(yù)防甲型肝炎）Merck&Co3/29/1996滅活病毒人MRC－5二倍體細胞貼壁，NCF到Costar培養(yǎng)管，連續(xù)補料培養(yǎng)含血清自體培養(yǎng)軟骨細胞／CarticelSMServicesTM（修復(fù)軟骨性缺陷）Genzymetissue8/22/1997自體同源細胞軟骨細胞組織培養(yǎng)瓶含血清1998年至1999年使用哺乳動物細胞系生產(chǎn)的獲得

許可的治療用重組生物制品（BLA）產(chǎn)品BLA名稱生產(chǎn)商批準日期產(chǎn)品類型細胞系方法培養(yǎng)基－n1干擾素lymphoblastoid/WellferonTM（治療慢性丙型肝炎）eFoundationLiminted,3/25/1999內(nèi)源糖蛋白人淋巴細胞未公開未公開血凝因子VIIa（重組）／NovoSevenTM（用于治療A型和B型血友?。㎞ovoNordiskA/S3/25/1999重組糖蛋白BHK未公開含新生牛血清Etanercept/EnbrelTM（治療風濕性關(guān)節(jié)炎）Immunex11／2／1998IgG1與TNF受體融合CHO攪拌釜式反應(yīng)器，懸浮未公開Trastuzmmab/HerceptinTM（治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌）Genentech9/25/1998單克隆抗體（mAb)帶有鼠CDRs的人源化IgG1CHO攪拌釜式反應(yīng)器，懸浮無血清，含慶大霉素Infliximab/RemicadeTM（治療局部性回腸炎）Centocor8/24/1998單克隆抗體（mAb),鼠／人嵌合抗體IgG1鼠雜交瘤細胞系重組NSO攪拌釜反應(yīng)器，懸浮，灌流培養(yǎng)（旋轉(zhuǎn)過濾器）無血清，含蛋白水解物，牛轉(zhuǎn)鐵蛋白，胰島素，血清白蛋白和ExcyteTM1996年至1998年使用哺乳動物細胞系生產(chǎn)的獲得

許可的治療用重組生物制品（BLA）產(chǎn)品BLA名稱生產(chǎn)商批準日期產(chǎn)品類型細胞系方法培養(yǎng)基Palivizumab/SynagisTM（預(yù)防呼吸性融合細胞病毒）Medimmune6/19/1998單克隆抗體（mAb）鼠雜交瘤細胞系重組NSO攪拌釜反應(yīng)器，懸浮，補料培養(yǎng)無血清Basiliximab／SimulecTM（預(yù)防急性器官排斥反應(yīng)）NovartisPharmacerticals5/12/1998單克隆抗體（mAb),鼠／人IgG1鼠雜交瘤細胞系重組NSO攪拌反應(yīng)器，懸浮，灌流培養(yǎng)無血清Daclizumab/ZenapaxTM（預(yù)防急性器官排斥反應(yīng)）Hoffman-La-Roche12/10/1997單克隆抗體（mAb),鼠／人IgG1SP2/0未公開未公開Rituximab/RituxanTM（治療B細胞非Hodgkin淋巴瘤?。㊣DEC-Pharmacertical/Genentech11/26/1997單克隆抗體（mAb),鼠／人IgG1CHO攪拌釜反應(yīng)器，懸浮含慶大霉素血凝因子IX（重組）／BenefixTM（控制B型血友病人的出血發(fā)生率）GeneticsInstitute2/11/1997重組糖蛋白CHO攪拌釜反應(yīng)器，懸浮，批式補料培養(yǎng)無血清，含重組胰島素干擾素－1a／AvonexTM（用于多發(fā)性硬化的治療）Biogen5/17/1996重組糖蛋白CHO攪拌反應(yīng)器，懸浮未公開2000年使用哺乳動物細胞系生產(chǎn)的獲得

許可的診斷用重組生物制品（BLA）產(chǎn)品BLA名稱生產(chǎn)商批準日期產(chǎn)品類型細胞系方法培養(yǎng)基IDMicroTypingSystem（Anti-A）MicroTypingSystem，Inc09/21/2000鼠單克隆抗體BIRMA-1細胞系未公開未公開IDMicroTypingSystem（Anti-B）MicroTypingSystem，Inc09/21/2000鼠單克隆抗體LB-2細胞系未公開未公開IDMicroTypingSystem（Anti-AandAnti-B）MicroTypingSystem，Inc09/21/2000鼠單克隆抗體ES－15＆細胞系未公開未公開IDMicroTypingSystem（Anti-D）MicroTypingSystem，Inc09/21/2000人單克隆抗體MS201細胞系未公開未公開2000年至2002年使用哺乳動物細胞系生產(chǎn)的獲得

許可的生物制品（BLA）產(chǎn)品BLA名稱生產(chǎn)商批準日期產(chǎn)品類型細胞系方法培養(yǎng)基Rebif（降低回歸熱性硬結(jié)病人臨床病情惡化）Serono3/7/2002干擾素－1aCHOAranesp（治療慢性腎衰相關(guān)的貧血）Amege9/17/2001TWINRIX（甲肝滅活和重組乙肝疫苗）SMITHKLINEBeechamBiologicals5/11/2001MRC-5生產(chǎn)甲肝疫苗，酵母生產(chǎn)乙肝疫苗Campath（治療B細胞慢性淋巴細胞白血病）MillenniumandILEXPartnersLP5/7/2001CHO懸浮培養(yǎng)含neomycinTenecteplase/TNKaseTM（降低急性心肌梗塞死亡率）Gen