腫瘤學(xué)概論(第2版)PPT課件-第十九章-腫瘤分子靶向治療和基因治療

作者:陸舜單位:上海交通大學(xué)附屬胸科醫(yī)院第十九章

腫瘤分子靶向治療和基因治療第一節(jié)腫瘤分子靶向治療概述第二節(jié)腫瘤分子靶向治療的分類第三節(jié)腫瘤分子靶向治療藥物的臨床應(yīng)用第四節(jié)腫瘤基因治療簡史第五節(jié)腫瘤基因治療要素組成第六節(jié)腫瘤基因治療策略重點(diǎn)難點(diǎn)熟悉了解掌握腫瘤分子靶向治療的定義；腫瘤分子靶向治療的分類腫瘤分子靶向藥物的臨床應(yīng)用策略臨床常用的腫瘤分子靶向藥物腫瘤分子靶向治療概述第一節(jié)腫瘤分子靶向治療是以腫瘤細(xì)胞的標(biāo)志性分子為靶點(diǎn)，研制出有效的阻斷劑，干預(yù)細(xì)胞發(fā)生癌變的環(huán)節(jié)，如通過抑制腫瘤細(xì)胞增殖、干擾細(xì)胞周期、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化、抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡及抑制腫瘤血管生成等途徑達(dá)到治療腫瘤的目的。腫瘤學(xué)概論（第2版）一、腫瘤分子靶向治療的定義腫瘤學(xué)概論（第2版）二、腫瘤分子靶向治療的靶點(diǎn)和治療特點(diǎn)（一）腫瘤分子靶向治療的靶點(diǎn)腫瘤的生長因子受體、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子、細(xì)胞周期蛋白、細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)因子、蛋白水解酶、血管內(nèi)皮生長因子等都可以作為腫瘤治療的分子靶點(diǎn)。（二）腫瘤分子靶向治療的治療特點(diǎn)主要是針對(duì)腫瘤細(xì)胞，而對(duì)正常細(xì)胞影響小。腫瘤分子靶向治療的分類第二節(jié)腫瘤學(xué)概論（第2版）腫瘤分子靶向治療根據(jù)其作用機(jī)制可分為兩大類：一是針對(duì)腫瘤細(xì)胞本身的治療；二是針對(duì)腫瘤生長微環(huán)境的治療。（一）針對(duì)細(xì)胞膜上生長因子受體和細(xì)胞膜分化抗原的靶向治療此類靶向治療藥物多數(shù)為單克隆抗體，單克隆抗體與生長因子受體或抗原的特異性結(jié)合，通過阻斷細(xì)胞增殖信號(hào)，誘導(dǎo)腫瘤免疫應(yīng)答，產(chǎn)生抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ADCC）和補(bǔ)體介導(dǎo)細(xì)胞毒作用（CDC），達(dá)到殺傷腫瘤細(xì)胞的目的。根據(jù)作用的靶分子不同，單克隆抗體可以分為作用于細(xì)胞生長因子受體的單克隆抗體和作用于細(xì)胞膜分化抗原的單克隆抗體兩類。腫瘤學(xué)概論（第2版）一、針對(duì)腫瘤細(xì)胞本身的分子靶向治療（一）針對(duì)細(xì)胞膜上生長因子受體和細(xì)胞膜分化抗原的靶向治療1.作用于細(xì)胞生長因子受體的單克隆抗體單克隆抗體與相應(yīng)生長因子受體結(jié)合后將阻斷細(xì)胞增殖信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，抑制腫瘤細(xì)胞生長，同時(shí)也能通過誘導(dǎo)免疫應(yīng)答殺傷腫瘤細(xì)胞。（1）作用于EGFR家族的單克隆抗體：單克隆抗體與EGFR家族成員結(jié)合后，阻斷了其與配體的結(jié)合，從而阻斷了腫瘤細(xì)胞內(nèi)增殖和生存的主要信號(hào)途徑。（2）作用于VEGFR的單克隆抗體：單克隆抗體與VEGFR結(jié)合后不僅抑制腫瘤血管新生，同時(shí)還可以抑制腫瘤細(xì)胞增殖，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。（3）作用于IGFR的單克隆抗體：IGF1R單克隆抗體能夠封閉腫瘤細(xì)胞表面過表達(dá)的IGF1R，使其不能與IGF1結(jié)合，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。腫瘤學(xué)概論（第2版）一、針對(duì)腫瘤細(xì)胞本身的分子靶向治療腫瘤學(xué)概論（第2版）（一）針對(duì)細(xì)胞膜上生長因子受體和細(xì)胞膜分化抗原的靶向治療2.針對(duì)細(xì)胞膜分化抗原的單克隆抗體細(xì)胞膜分化抗原是指在細(xì)胞分化、成熟和活化過程中出現(xiàn)的細(xì)胞表面標(biāo)記，通常以分化抗原簇（Clusterofdifferentiation，CD）來代表。白細(xì)胞分化抗原在一些血液系統(tǒng)惡性腫瘤中會(huì)出現(xiàn)高表達(dá)。單克隆抗體與白細(xì)胞分化抗原結(jié)合后通過ADCC和CDC效應(yīng)殺傷腫瘤細(xì)胞。一些分化抗原單克隆抗體與化學(xué)藥物、放射性核素共同構(gòu)成單克隆抗體偶聯(lián)物，使殺傷腫瘤細(xì)胞的活性物質(zhì)特異性地作用于腫瘤細(xì)胞。單克隆抗體與相應(yīng)生長因子受體結(jié)合后將阻斷細(xì)胞增殖信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，抑制腫瘤細(xì)胞生長，同時(shí)也能通過誘導(dǎo)免疫應(yīng)答殺傷腫瘤細(xì)胞。腫瘤學(xué)概論（第2版）一、針對(duì)腫瘤細(xì)胞本身的分子靶向治療腫瘤學(xué)概論（第2版）（二）針對(duì)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的靶向治療腫瘤學(xué)概論（第2版）一、針對(duì)腫瘤細(xì)胞本身的分子靶向治療1.酪氨酸激酶抑制劑酪氨酸激酶抑制劑可以抑制酪氨酸激酶的自身磷酸化及底物的磷酸化，阻斷異常的酪氨酸激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，從而抑制細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。（1）受體型酪氨酸激酶抑制劑：包括單靶點(diǎn)EGFR酪氨酸激酶抑制劑和多靶點(diǎn)酪氨酸激酶抑制劑。它可抑制酪氨酸激酶的自身磷酸化及底物的磷酸化，進(jìn)而阻斷異常的酪氨酸激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。（2）非受體型酪氨酸激酶抑制劑：非受體型酪氨酸激酶包括BCR-ABL酪氨酸激酶和SRC酪氨酸激酶等，抑制劑通過調(diào)節(jié)蛋白的磷酸化水平，激活細(xì)胞增殖和分化信號(hào)通路。（二）針對(duì)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的靶向治療腫瘤學(xué)概論（第2版）一、針對(duì)腫瘤細(xì)胞本身的分子靶向治療2.酪氨酸激酶下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路關(guān)鍵分子抑制劑酪氨酸激酶激活的主要下游信號(hào)傳導(dǎo)通路包括RAS-MAPK信號(hào)通路和PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路等。（1）

RAS-MAPK信號(hào)通路：涉及藥物作用靶點(diǎn)包括RAS、RAF、MEK、ERK以及核內(nèi)相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子等。（2）

PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路：PI3K活化后可激活下游激酶如AKT等，激活的AKT轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核內(nèi)磷酸化mTOR，活化的mTOR作用于下游底物從而產(chǎn)生生物學(xué)作用，其中mTOR為腫瘤治療的一個(gè)重要靶點(diǎn)。（三）針對(duì)細(xì)胞周期蛋白的靶向治療腫瘤學(xué)概論（第2版）一、針對(duì)腫瘤細(xì)胞本身的分子靶向治療細(xì)胞周期調(diào)控是一個(gè)非常復(fù)雜和精細(xì)的調(diào)節(jié)過程，它與細(xì)胞的分化、生長和死亡有著緊密的關(guān)系。周期素依賴性激酶/周期素（CDK/cyclin）是細(xì)胞周期調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的核心，主導(dǎo)周期的啟動(dòng)、進(jìn)行和結(jié)束。Aurora激酶為細(xì)胞有絲分裂的重要調(diào)節(jié)激酶。以CDK/cyclin和Aurora激酶為靶點(diǎn)的靶向治療是目前的研究重點(diǎn)。（四）針對(duì)細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)因子的靶向治療腫瘤學(xué)概論（第2版）一、針對(duì)腫瘤細(xì)胞本身的分子靶向治療細(xì)胞凋亡是細(xì)胞在一定的生理或病理?xiàng)l件下，遵循自身程序，由基因控制的細(xì)胞自主性死亡方式。細(xì)胞凋亡的相關(guān)調(diào)控基因包括凋亡促進(jìn)基因和凋亡抑制基因兩大類。凋亡促進(jìn)基因包括：P53基因、MYC基因、TRAIL基因等。凋亡抑制基因包括：BCL-2基因、IAP家族、COX-2基因等。以細(xì)胞凋亡相關(guān)調(diào)控基因?yàn)榘悬c(diǎn)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，是目前腫瘤分子靶向治療重要的研究方向。（五）針對(duì)細(xì)胞表觀遺傳學(xué)的靶向治療腫瘤學(xué)概論（第2版）一、針對(duì)腫瘤細(xì)胞本身的分子靶向治療腫瘤細(xì)胞還常常存在表觀遺傳學(xué)異常，包括DNA異常甲基化、組蛋白去乙?；惓＜捌渌碌娜旧|(zhì)結(jié)構(gòu)異常。甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑可以使抑癌基因的功能得到恢復(fù)，即去甲基化，從而達(dá)到治療腫瘤的目的。組蛋白去乙酰化酶抑制劑就是通過逆轉(zhuǎn)組蛋白低乙?；?，恢復(fù)某些抑癌基因的功能而發(fā)揮治療癌癥的作用。腫瘤學(xué)概論（第2版）腫瘤學(xué)概論（第2版）腫瘤在其發(fā)生和發(fā)展過程中所處的內(nèi)環(huán)境即腫瘤微環(huán)境由血管、間質(zhì)細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)和少量免疫細(xì)胞組成，它是腫瘤細(xì)胞生存、增殖的土壤，與腫瘤的增殖及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。而針對(duì)腫瘤生長微環(huán)境的分子靶向治療目前臨床上研究最多的是抗腫瘤血管和新生血管生成的治療。腫瘤學(xué)概論（第2版）二、針對(duì)腫瘤生長微環(huán)境的治療（一）抗VEGF藥物腫瘤學(xué)概論（第2版）二、針對(duì)腫瘤生長微環(huán)境的治療在眾多血管生成因子中，VEGF作用最強(qiáng)，在血管生成過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的調(diào)控作用，VEGF和VEGFR在腫瘤細(xì)胞及腫瘤血管內(nèi)皮中均呈高表達(dá)，是抗腫瘤血管生成最為理想的靶點(diǎn)。（二）抑制細(xì)胞外基質(zhì)降解的藥物腫瘤學(xué)概論（第2版）二、針對(duì)腫瘤生長微環(huán)境的治療基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）能降解細(xì)胞外基質(zhì)，使內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)入腫瘤間質(zhì)，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷徙及腫瘤血管的形成。天然和人工合成的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑能阻斷MMP降解細(xì)胞外基質(zhì)成分，從而抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移和新生血管的生成。（三）直接抑制內(nèi)皮細(xì)胞的藥物腫瘤學(xué)概論（第2版）二、針對(duì)腫瘤生長微環(huán)境的治療新生血管主要有內(nèi)皮細(xì)胞、周細(xì)胞和基底膜構(gòu)成，內(nèi)皮細(xì)胞的激活、遷移和增殖是血管生成的關(guān)鍵步驟。內(nèi)皮抑素是膠原Ⅷ的C末端非膠原區(qū)結(jié)構(gòu)域的184個(gè)氨基酸片段，可抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的增生，從而抑制血管生成。（四）其他抗腫瘤血管生成藥物腫瘤學(xué)概論（第2版）二、針對(duì)腫瘤生長微環(huán)境的治療角鯊胺（squalamine）是從鯊魚肝臟提取的血管抑制劑，可通過選擇性抑制內(nèi)皮細(xì)胞H+-Na+交換發(fā)揮抗血管生成作用；沙利度胺（thalidomide）通過下調(diào)VEGF、抑制COX-2及其下游因子PGE2，從而抑制腫瘤血管生成。腫瘤分子靶向治療藥物的臨床應(yīng)用第三節(jié)（一）分子靶向藥物單獨(dú)應(yīng)用有些分子靶向藥物可單獨(dú)用于治療某些腫瘤。EGFR酪氨酸激酶抑制劑，譬如吉非替尼、厄洛替尼或埃克替尼治療敏感基因突變的晚期非小細(xì)胞肺癌總有效率超過70%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于傳統(tǒng)化療。伊馬替尼治療慢性粒細(xì)胞白血病慢性期患者的完全血液學(xué)緩解率超過90%。腫瘤學(xué)概論（第2版）一、分子靶向藥物臨床應(yīng)用策略（二）分子靶向藥物與化療聯(lián)合應(yīng)用分子靶向藥物與化療聯(lián)用是目前單克隆抗體和抗腫瘤血管生成藥物臨床應(yīng)用的主要方式，如曲妥珠單抗聯(lián)合化療治療乳腺癌，貝伐單抗、西妥昔單抗聯(lián)合化療治療結(jié)直腸癌和非小細(xì)胞肺癌等，都可以提高腫瘤治療的緩解率和延長患者的生存期。腫瘤學(xué)概論（第2版）一、分子靶向藥物臨床應(yīng)用策略（三）分子靶向藥物與放療聯(lián)合應(yīng)用EGFR過度表達(dá)使腫瘤對(duì)放療敏感性下降，應(yīng)用EGFR酪氨酸激酶抑制劑或EGFR單克隆抗體可以使腫瘤細(xì)胞對(duì)放療敏感性增強(qiáng)?？寡苌芍委熆梢愿慕[瘤紊亂的血管網(wǎng)，使之結(jié)構(gòu)、功能趨于正常化，從而改善局部血液循環(huán)，降低腫瘤間質(zhì)壓力，提高局部氧分壓的作用，從而增加腫瘤細(xì)胞對(duì)放療的敏感性?？寡苌伤幬锱c放療聯(lián)合應(yīng)用可增加腫瘤的放療敏感性。腫瘤學(xué)概論（第2版）一、分子靶向藥物臨床應(yīng)用策略（四）分子靶向藥物聯(lián)合應(yīng)用腫瘤的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制復(fù)雜，可能同時(shí)存在多基因、多條轉(zhuǎn)導(dǎo)通路異常。分子靶向藥物的聯(lián)合應(yīng)用治療腫瘤是目前重要的研究方向，貝伐單抗聯(lián)合EGFR酪氨酸激酶抑制劑厄洛替尼用于治療晚期非小細(xì)胞肺癌的臨床試驗(yàn)結(jié)果表明，兩者聯(lián)合應(yīng)用顯示出抑制腫瘤生長的協(xié)同效應(yīng)。腫瘤學(xué)概論（第2版）一、分子靶向藥物臨床應(yīng)用策略腫瘤分子靶向藥物還可以根據(jù)藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)分為單克隆抗體和小分子化合物兩類，單克隆抗體類藥物的特點(diǎn)是多數(shù)不能穿透細(xì)胞膜，通過作用于細(xì)胞微環(huán)境或細(xì)胞表面的分子發(fā)揮作用。小分子化合物則可以穿透細(xì)胞膜，通過與細(xì)胞內(nèi)的靶分子結(jié)合發(fā)揮作用。腫瘤學(xué)概論（第2版）二、臨床常用的腫瘤分子靶向藥物（一）單克隆抗體類藥物腫瘤學(xué)概論（第2版）一、臨床常用的腫瘤分子靶向藥物1.西妥昔單抗一種EGFR單克隆抗體，可以治療結(jié)直腸癌、非小細(xì)胞肺癌和頭頸部腫瘤。2.貝伐單抗一種VEGF單克隆抗體，可以治療結(jié)直腸癌、非鱗型非小細(xì)胞肺癌。3.曲妥珠單抗一種HER-2單克隆抗體，可以治療乳腺癌、胃癌和賁門癌。4.利妥昔單抗一種CD20單克隆抗體，可以治療CD20表達(dá)陽性淋巴瘤。腫瘤學(xué)概論（第2版）（二）小分子化合物腫瘤學(xué)概論（第2版）一、臨床常用的腫瘤分子靶向藥物1.表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑（EGFR-TKI）包括吉非替尼、厄羅替尼和?？颂婺幔梢灾委烢GFR基因敏感突變陽性的非小細(xì)胞肺癌。2.索拉非尼一種多靶點(diǎn)酪氨酸激酶抑制劑，可以治療腎細(xì)胞癌和肝細(xì)胞癌。3.舒尼替尼一種多靶點(diǎn)酪氨酸激酶抑制劑，可以治療不能手術(shù)的晚期腎細(xì)胞癌和胃腸道間質(zhì)瘤。4.伊馬替尼一種BCR-ABL酪氨酸激酶的抑制劑，可以治療費(fèi)城染色體陽性的白血病和胃腸道間質(zhì)瘤。5.依維莫司一種mTOR抑制劑，可治療腎細(xì)胞癌和室管膜下巨細(xì)胞性星形細(xì)胞瘤。腫瘤學(xué)概論（第2版）腫瘤基因治療簡史第四節(jié)腫瘤學(xué)概論（第2版）20世紀(jì)50年代20世紀(jì)60年代1990年2000年開始2009年2015年2017年DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)被發(fā)現(xiàn)，疾病研究進(jìn)入基因時(shí)代基因治療里程碑事件——臨床應(yīng)用轉(zhuǎn)基因治療腺苷脫氨酶（ADA）缺陷癥基因治療被《科學(xué)》雜志評(píng)為“十大科學(xué)突破之一”提出基因交換和優(yōu)化設(shè)想腫瘤基因治療起步多項(xiàng)基因治療臨床試驗(yàn)獲得成功首個(gè)CAR-T細(xì)胞療法臨床應(yīng)獲批治療黑色素瘤的溶瘤病毒藥物獲批腫瘤學(xué)概論（第2版）腫瘤基因治療史上的技術(shù)突破初級(jí)技術(shù)體系的建立1.發(fā)現(xiàn)DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)、限制性內(nèi)切酶、DNA連接酶和逆轉(zhuǎn)錄酶2.發(fā)明基因體外擴(kuò)增、基因克隆與重組、載體構(gòu)建和傳遞等技術(shù)分子生物學(xué)和基因工程技術(shù)的突破性進(jìn)步1.基因工程技術(shù)：構(gòu)建多種病毒載體及非病毒載體2.基因編輯技術(shù)：任意修復(fù)基因缺陷3.細(xì)胞工程技術(shù)：體內(nèi)提取細(xì)胞在體外進(jìn)行改造，再輸回體內(nèi)腫瘤學(xué)概論（第2版）針對(duì)單基因的基因治療成功案例1.腺苷脫氨酶（ADA）缺陷所致重癥聯(lián)合免疫缺陷癥2.A型血友病、心衰、罕見失明等疾病

腫瘤基因治療的成功案例腫瘤壞死因子基因?qū)肽[瘤浸潤淋巴細(xì)胞（TIL）治療晚期黑色素瘤CD154基因?qū)隑淋巴細(xì)胞治療慢性淋巴細(xì)胞白血病溶瘤痘病毒JX-594治療肝癌溶瘤病毒藥物T-Vec治療黑色素瘤

CAR-T細(xì)胞治療復(fù)發(fā)或難治性急性淋巴細(xì)胞白血病和成人復(fù)發(fā)/難治性大B細(xì)胞淋巴瘤

代表性基因治療成功案例腫瘤學(xué)概論（第2版）腫瘤基因治療注冊的臨床試驗(yàn)已達(dá)數(shù)千項(xiàng)占所有基因治療臨床試驗(yàn)的60%以上是腫瘤治療最具前景領(lǐng)域腫瘤基因治療現(xiàn)狀與發(fā)展腫瘤基因治療要素組成第五節(jié)腫瘤學(xué)概論（第2版）基因治療要素組成概況要素組成載體系統(tǒng)病毒載體腺病毒載體腺相關(guān)病毒載體逆轉(zhuǎn)錄病毒載體慢病毒載體非病毒載體真核細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒陽離子多聚物和脂質(zhì)體納米粒、人工外泌體目的基因直接針對(duì)腫瘤細(xì)胞的基因癌基因抑癌基因自殺基因提高免疫細(xì)胞功能的基因受體細(xì)胞免疫細(xì)胞腫瘤浸潤性淋巴細(xì)胞樹突狀細(xì)胞其他免疫效應(yīng)細(xì)胞腫瘤細(xì)胞干細(xì)胞腫瘤學(xué)概論（第2版）一、載體系統(tǒng)

載體概念：治療基因?qū)肴梭w細(xì)胞內(nèi)的運(yùn)送工具

分類：病毒載體和非病毒載體（一）病毒載體

特點(diǎn)：轉(zhuǎn)移效率和持久性較高用途：通過改造野生型病毒，去除其病原性并保留高轉(zhuǎn)染效率的特性，利

用基因工程方法加入目的基因，再通過生物學(xué)感染的方法導(dǎo)入細(xì)胞

內(nèi)表達(dá)目的基因病毒分類：DNA病毒、RNA病毒和嵌合型病毒腫瘤學(xué)概論（第2版）病毒載體腺病毒載體腺相關(guān)病毒載體逆轉(zhuǎn)錄病毒載體慢病毒載體類型雙鏈DNA病毒

單鏈線狀DNA病毒

RNA病毒

逆轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒屬

優(yōu)點(diǎn)①

感染效率高，宿主細(xì)胞范圍廣；②

致病性低；③

可攜帶目的基因容量大；④穩(wěn)定性好，易于獲得高滴度的病毒顆粒；①

基因組小，易于操作；②

能感染分裂期和非分裂期細(xì)胞；③

生物安全性好；④

高效整合，可持續(xù)穩(wěn)定表達(dá)。

①

能準(zhǔn)確整合于宿主細(xì)胞染色體中，外源目的基因能長期穩(wěn)定表達(dá)；②

宿主細(xì)胞廣泛；③

無毒性作用；④

可附加不同調(diào)控元件提高外源基因的表達(dá)效率。

①

基因容量大；②

目的基因表達(dá)時(shí)間長；③

不易誘發(fā)宿主免疫反應(yīng)。缺點(diǎn)①

不能整合到宿主的染色體上

，表達(dá)時(shí)間短，需重復(fù)給藥；②

病毒載體易被清除，產(chǎn)生過敏反應(yīng)；③

缺乏特異性和靶向性。

①

體外不容易制備高滴度病毒；②

裝載容量有限；③

需輔助病毒參與復(fù)制。

①

只能感染分裂期細(xì)胞；②

無靶向性，可能引起細(xì)胞惡變；③

裝載外源基因能力有限；④

病毒滴度低，不易純化。

①

毒力恢復(fù)問題；②

垂直感染。病毒載體分類和特點(diǎn)腫瘤學(xué)概論（第2版）一、載體系統(tǒng)（二）非病毒載體優(yōu)點(diǎn)：安全性高，易制備缺點(diǎn)：轉(zhuǎn)染效率低，表達(dá)不穩(wěn)定種類：

1.

真核細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒：將外源基因構(gòu)建于真核表達(dá)載體

2.

陽離子多聚物和脂質(zhì)體：優(yōu)點(diǎn)：攜帶的基因不受DNA大小限制、無生物源性、體外穩(wěn)定性好、體內(nèi)可生物降解缺點(diǎn)：轉(zhuǎn)染效率低，表達(dá)短暫

3.

納米粒：具有靶向性，安全性好，可通過血腦屏障，不被核酸酶降解腫瘤學(xué)概論（第2版）二、目的基因（一）直接針對(duì)腫瘤細(xì)胞的基因1.癌基因通過基因封閉抑制癌基因（如K-RAS、MYC）功能，能抑制腫瘤生長方法：RNA干擾，反義核苷酸技術(shù)，核酶技術(shù)2.抑癌基因?qū)⒁吧鸵职┗颍ㄈ鏣P53、p16、p21、p27及RB1）導(dǎo)入腫瘤細(xì)胞，補(bǔ)償和代替突變或缺失的抑癌基因，重建其功能，抑制腫瘤細(xì)胞異常生長腫瘤學(xué)概論（第2版）二、目的基因（一）直接針對(duì)腫瘤細(xì)胞的基因3.自殺基因作用機(jī)制：將細(xì)菌、病毒和真菌中特有的藥物敏感基因?qū)肽[瘤細(xì)胞，在腫瘤細(xì)胞內(nèi)將無毒性的藥物前體轉(zhuǎn)換成毒性藥物，靶向殺傷腫瘤細(xì)胞通過血管或者細(xì)胞間隙，將代謝的毒性產(chǎn)物從導(dǎo)入自殺基因的腫瘤細(xì)胞中擴(kuò)散到鄰近的腫瘤細(xì)胞，引發(fā)旁觀者效應(yīng)，殺死其周邊的腫瘤細(xì)胞常用自殺基因系統(tǒng)：單純皰疹細(xì)胞I型胸苷激酶/丙氧鳥苷（HSV1-tk/GCV）系統(tǒng)帶狀皰疹病毒胸腺嘧啶激酶/阿糖甲氧基嘌呤（VZVtk/Ara2M）系統(tǒng)

胞嘧啶脫氨酶/5氟胞嘧啶（CD/5-FC）系統(tǒng)硝基還原酶/CB1954（NTR/CB1954）系統(tǒng)腫瘤學(xué)概論（第2版）二、目的基因（二）提高免疫細(xì)胞功能的基因1.

目的基因種類MHC/HLA共刺激分子腫瘤抗原細(xì)胞因子的相應(yīng)基因2.

用法上述基因?qū)朊庖呒?xì)胞、干細(xì)胞、纖維細(xì)胞等易于體內(nèi)移植的細(xì)胞后可在體內(nèi)長期大量表達(dá)，增強(qiáng)機(jī)體對(duì)腫瘤的免疫反應(yīng)，治療腫瘤腫瘤學(xué)概論（第2版）三、受體細(xì)胞優(yōu)點(diǎn)1.來源容易2.易在體外培養(yǎng)和擴(kuò)增3.易于被基因轉(zhuǎn)染并高效表達(dá)4.易于體內(nèi)移植或回輸，所攜帶的目的基因能在體內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)5.生存壽命較長

種類1.免疫細(xì)胞2.腫瘤細(xì)胞3.干細(xì)胞腫瘤學(xué)概論（第2版）三、受體細(xì)胞（一）免疫細(xì)胞1.腫瘤浸潤性淋巴細(xì)胞

對(duì)自體癌細(xì)胞有高度特異性殺傷能力2.樹突狀細(xì)胞（DC）在體外擴(kuò)增DC細(xì)胞，將細(xì)胞因子或腫瘤抗原基因?qū)隓C細(xì)胞，制備疫苗后回輸至患者體內(nèi)。3.其它抗原特異性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞及細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞

。腫瘤學(xué)概論（第2版）三、受體細(xì)胞（二）腫瘤細(xì)胞將核酶、小干擾RNA或反義核酸導(dǎo)入腫瘤細(xì)胞，抑制癌基因的表達(dá)；將野生型正常基因作為治療基因?qū)肽[瘤細(xì)胞，糾正抑癌基因的功能缺陷。將腫瘤抗原或相關(guān)抗原、MHC抗原、細(xì)胞因子受體等基因轉(zhuǎn)入腫瘤細(xì)胞，用射線照射，使其失去腫瘤性，制備腫瘤疫苗，激活機(jī)體的免疫殺傷作用。（三）干細(xì)胞種類：造血干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMMSC）。BMMSC特點(diǎn)：來源充足、易制備、安全性好，極具應(yīng)用前景。腫瘤學(xué)概論（第2版）四、基因治療常用技術(shù)（一）基因轉(zhuǎn)移技術(shù)概念：將目的基因轉(zhuǎn)移到人體的受體細(xì)胞內(nèi)，從而使受體獲得對(duì)抗疾病能力的一種技術(shù)。需要借助于載體。分類：1.體外轉(zhuǎn)移將插入目的基因的載體在體外轉(zhuǎn)移入自體或異體來源的受體細(xì)胞中，再將這些經(jīng)過修飾的受體細(xì)胞回輸入受體體內(nèi)，讓外源基因在受體體內(nèi)表達(dá)以激活腫瘤免疫反應(yīng)或直接靶向腫瘤細(xì)胞。優(yōu)點(diǎn)：安全，效果易控制缺點(diǎn)：技術(shù)復(fù)雜，可能發(fā)生遺傳性病變，或者回輸后不能長期生存2.體內(nèi)轉(zhuǎn)移優(yōu)點(diǎn)：安全性高，操作簡單、經(jīng)濟(jì)、易推廣，完整保留抗原性，尤其適用于免疫基因治療缺點(diǎn)：難以接近靶組織，轉(zhuǎn)移效率低，注入的DNA整合不完全，療效時(shí)間短腫瘤學(xué)概論（第2版）（二）基因編輯技術(shù)CRISPR/Cas9系統(tǒng)——迄今為止最強(qiáng)大的基因編輯技術(shù)

特點(diǎn)1.在有引導(dǎo)RNA（gRNA）的存在下，能方便準(zhǔn)確地切割DNA，對(duì)單個(gè)或多個(gè)基因進(jìn)行添加、消除、關(guān)閉或啟動(dòng)等基因編輯。

2.既可以在體外細(xì)胞進(jìn)行，也可以將基因編輯工具遞送到體內(nèi)進(jìn)行原位基因組編輯，并且使基因表達(dá)更具生理相關(guān)性。

意義：劃時(shí)代的基因編輯技術(shù)，顯著降低了基因編輯的工作量及成本，將對(duì)基因治療起到不可估量的推動(dòng)作用。

四、基因治療常用技術(shù)腫瘤學(xué)概論（第2版）（三）細(xì)胞工程技術(shù)CAR-T細(xì)胞免疫基因治療——最成功的細(xì)胞工程技術(shù)概念：CAR是指工程化的嵌合抗原受體（chimericantigenreceptor,CAR），由一個(gè)來自免疫球蛋白分子或T細(xì)胞受體的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，和介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)域融合，能夠激活和增強(qiáng)T細(xì)胞的腫瘤抗原識(shí)別能力和特異性殺傷功能。方法：從患者體內(nèi)分離T細(xì)胞，在體外將CARs傳送到T細(xì)胞中，產(chǎn)生抗原特異性T細(xì)胞，經(jīng)由體外擴(kuò)增后再次注入患者體內(nèi)，以達(dá)到消滅癌細(xì)胞的效果。

四、基因治療常用技術(shù)腫瘤基因治療策略第六節(jié)腫瘤學(xué)概論（第2版）一、免疫基因治療（一）靶向免疫細(xì)胞的基因治療CAR-T治療：2017年美國批準(zhǔn)用于治療難治性急性淋巴性白血病（ALL）和彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤（DLBCL），我國十幾項(xiàng)CAR-T臨床試驗(yàn)正在接受CFDA審批；基于CRISPR技術(shù)的臨床試驗(yàn)也已經(jīng)起步。（二）基因疫苗DC疫苗：已獲F