耐膽鹽格蘭陰性菌及車間微生物

一.2015版耐膽鹽革蘭陰性菌變化

1.耐膽鹽革蘭陰性菌簡(jiǎn)介

2.大腸菌群簡(jiǎn)介

3.大腸埃希菌簡(jiǎn)介

4.指標(biāo)的意義二.車間微生物污染的媒介1.空氣；2.水；3.表面；4.人三.過程控制措施

1.原料控制

2.車間環(huán)境監(jiān)控

(1)空氣；(2)水；(3)表面；(4)人

3.取樣

4.培訓(xùn)第一頁，共38頁。一.2015版耐膽鹽革蘭陰性菌變化1.耐膽鹽革蘭陰性簡(jiǎn)介

2.大腸菌群簡(jiǎn)介

3.大腸埃希菌簡(jiǎn)介

4.指標(biāo)的意義第二頁，共38頁。1.耐膽鹽革蘭陰性菌簡(jiǎn)介

2015版中國藥典用耐膽鹽革蘭陰性菌檢查法替代2010版大腸菌群檢查法。耐膽鹽革蘭陰性菌檢查法在檢出率和準(zhǔn)確率上均比大腸菌群檢查法高，檢測(cè)的菌種范圍更廣，實(shí)驗(yàn)結(jié)果易于判斷。定義：耐膽鹽革蘭陰性菌指在膽汁酸中可以存活并繁殖的革蘭陰性菌。第三頁，共38頁。包含分類及來源

腸桿菌科：主要包含大腸菌群，來源于人畜糞便假單胞菌屬：屬于假單胞菌科，存在于土壤、水、空氣中，人體皮膚、腸道和呼吸道均有存在氣單胞菌屬：屬于弧菌科，自然界廣泛存在，可從土壤及人類糞便中分離第四頁，共38頁。結(jié)構(gòu)圖耐膽鹽革蘭氏陰性菌（2015版方法）假單胞菌屬腸桿菌科氣單胞菌屬沙門氏菌大腸菌群（2010版方法）志賀氏菌腸桿菌屬埃希菌屬枸櫞酸菌屬克雷伯菌屬大腸埃希菌（大腸桿菌）第五頁，共38頁。2.大腸菌群簡(jiǎn)介大腸菌群是指在37℃生長(zhǎng)時(shí)能發(fā)酵乳糖，24h內(nèi)產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭陰性、氧化酶陰性、需氧或兼性厭氧的無芽孢桿菌，它不是分類學(xué)上的名稱。第六頁，共38頁。大腸菌群包括

埃希菌屬（為主）腸桿菌屬枸櫞酸菌屬克雷伯菌屬

這些屬的細(xì)菌均來自于人和溫血?jiǎng)游锏哪c道。第七頁，共38頁。

大腸菌群中以埃希氏菌屬為主，本群中典型大腸桿菌以外的菌屬，除直接來自糞便外，也可能來自典型大腸桿菌排出體外7~30天后在環(huán)境中的變異。第八頁，共38頁。大腸菌群的滅菌大腸菌群對(duì)氯很敏感，在含有0.5～1ppm氯量的水中，很快死亡。大腸菌群等革蘭氏陰性無芽孢桿菌對(duì)紫外線最敏感，用15瓦紫外線殺菌燈,距離50cm，照射1分鐘，或距離10cm，照射6秒鐘，幾乎可全部殺死。大腸菌群在60℃，熱死時(shí)間為5～30分鐘，在70℃，熱死時(shí)間為<5分鐘。第九頁，共38頁。3.大腸埃希菌簡(jiǎn)介大腸埃希菌，俗名大腸桿菌（革蘭氏陰性短桿菌），周身鞭毛，能運(yùn)動(dòng)，無芽。是人和動(dòng)物腸道中的正常棲居菌。大腸埃希菌的致病物質(zhì)之一是血漿凝固酶。腸出血性大腸埃希菌O157:H7是導(dǎo)致1996年日本食物中毒暴發(fā)的罪魁禍?zhǔn)祝浅鲅源竽c埃希菌中的致病性血清型，主要侵犯小腸遠(yuǎn)端和結(jié)腸。第十頁，共38頁。大腸桿菌的代時(shí)大腸桿菌在不同溫度下的代時(shí)：

10度

860min

15度

120min

20度

90min

25度

40min

35度

22min第十一頁，共38頁。大腸桿菌的滅菌大腸桿菌生長(zhǎng)溫度范圍7～49.5℃，最適生長(zhǎng)溫度37℃。致病性大腸桿菌在室溫下能生存數(shù)周，在土壤和水中可達(dá)數(shù)月，O157大腸桿菌75℃時(shí)，1min即被殺死，但它耐低溫。第十二頁，共38頁。4.指標(biāo)意義檢出耐膽鹽革蘭陰性，表示樣品受到污染。大腸菌群屬于人或溫血?jiǎng)游锏募S便污染，其中典型大腸桿菌為糞便近期污染，其他菌屬則可能為糞便的陳舊污染?？梢酝茰y(cè)該藥品中存在著腸道致病菌污染的可能性（如沙門氏菌、志賀氏菌等）。第十三頁，共38頁。二.車間微生物污染的媒介1.空氣2.水3.表面4.人第十四頁，共38頁。二.車間微生物污染的媒介

微生物特點(diǎn)：

存在范圍廣

生長(zhǎng)速度快

生存能力強(qiáng)第十五頁，共38頁。潔凈室內(nèi)微生物在哪里空氣水表面人員第十六頁，共38頁。1.空氣中的微生物在一般空氣中，微生物達(dá)800~3500cfu/m3，空氣并不是產(chǎn)生污染的介質(zhì)，但它是污染的危險(xiǎn)攜帶者?？諝庵械奈⑸锒鄶?shù)附著在灰塵上，或以芽孢形式懸浮于空氣中，1μm（微米）以下者處于懸浮狀態(tài)，10μm以上者會(huì)逐漸沉下來而形成菌塵。充滿微生物的塵埃和水滴就是通過空氣作為侵襲我們產(chǎn)品的媒介而成為重要的污染源的。第十七頁，共38頁。2.水中的微生物在嚴(yán)重污染的水中可達(dá)107cfu/ml（飲用水要求菌落總數(shù)≤100cfu/ml，大腸桿菌、大腸菌群不得檢出）大腸桿菌經(jīng)水塔或蓄水池儲(chǔ)存后，短期內(nèi)可大量繁殖繁殖在生產(chǎn)過程中，水是用量最大、應(yīng)用最廣泛的輔料之一。微生物在純水中不能生長(zhǎng)，但是水中總會(huì)有一定量的可溶性有機(jī)物和鹽類被微生物利用作為他們的生長(zhǎng)養(yǎng)料。

第十八頁，共38頁。3.表面的微生物空氣中的濕度，使表面包裹上一層水膜，這層薄膜由于靜電吸引而飽含塵埃微粒，表面因塵埃微粒和微生物由空氣傳播的回降而受到污染，一個(gè)表面看起來很干凈，實(shí)際上已被千百萬個(gè)微生物所污染，除非已經(jīng)做了正確的消毒滅菌。第十九頁，共38頁。4.人

————潔凈室中最大的微生物污染源人的頭皮上有140萬cfu/cm2，兩手上約有4~40萬，1g指甲污垢有38億，1g糞便可達(dá)10~1000億。人在代謝過程中會(huì)釋放和分泌污染物。人體表面、衣服能沾染、攜帶污染物。人在潔凈室內(nèi)的各種動(dòng)作也會(huì)產(chǎn)生微粒和微生物。第二十頁，共38頁。人體內(nèi)外微生物的分布1、皮膚：表皮葡萄球菌、白色葡萄球菌、八疊球菌屬細(xì)菌、類白喉棒桿菌、金黃色葡萄球菌等2、口腔：唾液鏈球菌、溶血鏈球菌、乳酸桿菌、流感桿菌、類白喉棒桿菌等3、上呼吸道：包括喉、鼻道和鼻咽。甲型鏈球菌、奈氏球菌、肺炎球菌、流感桿菌、乙型鏈球菌、葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、變形桿菌等。4、下呼吸道：包括氣管、支氣管和肺。健康人的下呼吸道是無菌的。5、胃腸道：大腸埃希氏菌、產(chǎn)氣桿菌、變形桿菌、糞產(chǎn)堿桿菌、糞鏈球菌、梭桿菌屬、螺旋體屬、乳桿菌屬、梭菌屬、擬桿菌屬中的一些種6、泌尿生殖道：常見的有嗜酸乳桿菌、類白喉棒桿菌、葡萄球菌、鏈球菌和大腸桿菌第二十一頁，共38頁。國外實(shí)驗(yàn)資料，可以認(rèn)為人員的發(fā)菌量有以下數(shù)據(jù)可供參考。①潔凈室內(nèi)當(dāng)工作人員穿無菌服時(shí)，靜止時(shí)的發(fā)菌量一般為10～300個(gè)／(min·人)，軀體一般活動(dòng)時(shí)的發(fā)菌量為150～1000個(gè)／(min·人)，快步行走時(shí)的發(fā)菌量為900—2500個(gè)／(min·人)。②咳嗽一次的發(fā)菌量一般為70～700個(gè)／(min·人)，噴嚏一次的發(fā)菌量一般為4000～60000個(gè)／(min·人)。③穿平常衣服時(shí)發(fā)菌量為3300～62000個(gè)／(min·人)。④無口罩發(fā)菌量：有口罩發(fā)菌量為(1：7)～(1：14)。人體的發(fā)菌量第二十二頁，共38頁。三.過程控制措施1.原粉控制2.車間環(huán)境控制（1）空氣（2）水（3）表面（4）人3.取樣4.培訓(xùn)第二十三頁，共38頁。三.過程控制措施由于微生物檢驗(yàn)的特殊性，屬于概率檢出，檢驗(yàn)結(jié)果不復(fù)檢，而丸劑劑型又沒有最終滅菌，所以一定要加強(qiáng)生產(chǎn)過程的控制。第二十四頁，共38頁。1.原粉的控制

丸劑作為原粉制劑，要注意前處理原料的凈選。土壤中微生物復(fù)雜，動(dòng)物藥易滋生細(xì)菌，要嚴(yán)格按工藝凈選處理。不要把微生物控制都寄托在照射滅菌上。因污染程度、物品擺放及時(shí)間的不同，輻照滅菌效果會(huì)有差異。第二十五頁，共38頁。2.車間環(huán)境監(jiān)控車間監(jiān)控要到位，注意最薄弱點(diǎn)的監(jiān)控，尤其注意無攝像頭的位置死角。對(duì)車間主要污染途徑空氣、水、表面、人進(jìn)行重點(diǎn)關(guān)注。第二十六頁，共38頁。（1）空氣的監(jiān)控對(duì)空氣采取過濾措施車間廠房的密閉性空氣消毒（臭氧等）必須保持緩沖間門的關(guān)閉，不得同時(shí)開啟。第二十七頁，共38頁。純化水的制備、儲(chǔ)存和分配應(yīng)能防止微生物的滋生和污染。儲(chǔ)罐和輸送管道所用材料應(yīng)無毒、耐腐蝕。管道的設(shè)計(jì)和安裝應(yīng)避免死角、盲管。儲(chǔ)罐和管道要規(guī)定清洗、滅菌周期。

純化水清洗后的設(shè)備容器要最后進(jìn)行消毒。（2）水的監(jiān)控第二十八頁，共38頁。（3）表面的監(jiān)控設(shè)備表面地面進(jìn)入控制區(qū)的原、輔料，包材第二十九頁，共38頁。設(shè)備表面

消毒劑濃度合適，針對(duì)特定范圍內(nèi)的細(xì)菌選擇相應(yīng)的消毒劑。消毒劑在三個(gè)月內(nèi)輪換使用，以防細(xì)菌耐藥。紫外燈消毒時(shí)記錄使用時(shí)間，紫外燈的輸出功率隨使用時(shí)間增加而降低。超過平均壽命時(shí)，就達(dá)不到預(yù)期效果，必須更換。第三十頁，共38頁。地面灰塵、微粒具有沉降和粘附的趨勢(shì)，所以同一區(qū)域內(nèi)，地面是微粒相對(duì)集中的地方，也是微生物相對(duì)較多的地方，墻壁也容易粘附灰塵。不能用腳踏在墊板和料桶上。不得跑跳、大聲喧嘩。不靠在墻上或其他物體上。第三十一頁，共38頁。進(jìn)入控制區(qū)的原、輔料，包材物料進(jìn)入潔凈區(qū)，用吸塵器或清潔抹布，將灰塵擦干凈，脫去外包裝。用紫外滅菌燈照射后，按物流走向經(jīng)物流通道進(jìn)入潔凈區(qū)后，將物料存放在相應(yīng)的位置。第三十二頁，共38頁。（4）人的監(jiān)控更鞋、更衣、洗手、手消毒要嚴(yán)格履行規(guī)程；一更更鞋：腳底是最臟的部分。帶發(fā)套：保證發(fā)套完整的包裹頭發(fā)。換工作服：阻斷外界沉降在外套上的灰塵。洗手：洗手一定要用洗手液和充足的流水。二更帶口罩：潔凈區(qū)內(nèi)不能脫下口罩。穿潔凈服：潔凈區(qū)內(nèi)不能解開連體服。手消毒：75%的酒精能殺滅99%的微生物。二次更鞋：潔凈區(qū)工作鞋不能穿出二更的鞋箱外。

第三十三頁，共38頁。發(fā)膠、香粉、耳環(huán)、戒指、項(xiàng)鏈、手鏈等不能帶入潔凈區(qū)；注意衣著、口罩、手套等是否到位；不攜帶個(gè)人物品進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)，不在生產(chǎn)區(qū)內(nèi)吃東西；不能未更換工作服就進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)、潔凈區(qū)；不能走物流通道；潔凈區(qū)衣物與一般生產(chǎn)區(qū)衣物應(yīng)分開分柜存放，不能交叉；避免不必要的走動(dòng)和動(dòng)作，不要頻繁進(jìn)出潔凈室；離開工作場(chǎng)地必須脫掉工作服；要注意隨手關(guān)門；第三十四頁，共38頁。在潔凈室中，人的數(shù)量和活動(dòng)應(yīng)有特別嚴(yán)格的限制。當(dāng)員工沒有按照SOP進(jìn)行工作時(shí)，車間的污染程度將增加。第三十五頁，共38頁。3.取樣操作藥品取樣要嚴(yán)格按照GM