微生物實驗室生物安全

微生物實驗室生物安全第1頁/共35頁微生物實驗室（BSL-2）生物安全第2頁/共35頁第一部分：

微生物安全的相關(guān)規(guī)定第3頁/共35頁微生物實驗室相關(guān)規(guī)定《實驗室生物安全通用要求》（GB19489-2008）《病原微生物實驗室生物安全管理條例》WHO實驗室生物安全手冊第4頁/共35頁《實驗室生物安全通用要求》（GB19489-2008）下列術(shù)語和定義適用于本標準氣溶膠aerosols懸浮于氣體介質(zhì)中的粒徑一般為0.001μm～100μm的固態(tài)或液態(tài)微小粒子形成的相對穩(wěn)定的分散體系。

氣鎖airlock具備機械送排風(fēng)系統(tǒng)、整體消毒滅菌條件、化學(xué)噴淋（適用時）和壓力可監(jiān)控的氣密室，其門具有互鎖功能，不能同時處于開啟狀態(tài)。生物安全柜biologicalsafetycabinet，BSC具備氣流控制及高效空氣過濾裝置的操作柜，可有效降低實驗過程中產(chǎn)生的有害氣溶膠對操作者和環(huán)境的危害。緩沖間bufferroom設(shè)置在被污染概率不同的實驗室區(qū)域間的密閉室，需要時，設(shè)置機械通風(fēng)系統(tǒng)，其門具有互鎖功能，不能同時處于開啟狀態(tài)第5頁/共35頁《實驗室生物安全通用要求》（GB19489-2008）下列術(shù)語和定義適用于本標準。

定向氣流特指從污染概率小區(qū)域流向污染概率大區(qū)域的受控制的氣流。高效空氣過濾器（HEPA過濾器）通常以0.3μm微粒為測試物，在規(guī)定的條件下濾除效率高于99.97%的空氣過濾器。實驗室生物安全實驗室的生物安全條件和狀態(tài)不低于容許水平，可避免實驗室人員、來訪人員、社區(qū)及環(huán)境受到不可接受的損害，符合相關(guān)法規(guī)、標準等對實驗室生物安全責(zé)任的要求。實驗室防護區(qū)實驗室的物理分區(qū)，該區(qū)域內(nèi)生物風(fēng)險相對較大，需對實驗室的平面設(shè)計、圍護結(jié)構(gòu)的密閉性、氣流，以及人員進入、個體防護等進行控制的區(qū)域。風(fēng)險評估評估風(fēng)險大小以及確定是否可接受的全過程。第6頁/共35頁實驗室生物安全防護水平分級分級依據(jù)：對所操作生物因子采取的防護措施分為四級：一級防護水平最低，四級防護水平最高。生物安全防護水平為一級的實驗室BSL-1：適用于操作在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物；生物安全防護水平為二級的實驗室BSL-2：適用于操作能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴重危害，傳播風(fēng)險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，并且具備有效治療和預(yù)防措施的微生物；生物安全防護水平為三級的實驗室BSL-3：適用于操作能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物；生物安全防護水平為四級的實驗室BSL-4：適用于操作能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。第7頁/共35頁BSL-2實驗室要求適用時，應(yīng)符合BSL-1的要求。（見GB19489-20086.1）實驗室主入口的門、放置生物安全柜實驗間的門應(yīng)可自動關(guān)閉；實驗室主入口的門應(yīng)有進入控制措施。實驗室工作區(qū)域外應(yīng)有存放備用物品的條件。應(yīng)在實驗室工作區(qū)配備洗眼裝置。配備高壓蒸汽滅菌器或其他適當?shù)南緶缇O(shè)備。應(yīng)在操作病原微生物樣本的實驗間內(nèi)配備生物安全柜。應(yīng)按產(chǎn)品的設(shè)計要求安裝和使用生物安全柜。應(yīng)有可靠的電力供應(yīng)。必要時，重要設(shè)備（如：培養(yǎng)箱、生物安全柜、冰箱等）應(yīng)配置備用電源。第8頁/共35頁病原微生物危害等級分類《病原微生物實驗室生物安全管理條例》《實驗室生物安全通用要求》GB19489-2008WHO《實驗室生物安全手冊》（第三版2004）四類在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物。Ⅰ級（低個體危害，低群體危害）不會導(dǎo)致健康工作者和動物致病的細菌、真菌、病毒和寄生蟲等生物因子。Ⅰ級（無或極低的個體和群體危險）不太可能引起人或動物致病的微生物。三類能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴重危害，傳播風(fēng)險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，并且具備有效治療和預(yù)防措施的微生物。Ⅱ級（中等個體危害，有限群體危害）能引起人或動物發(fā)病，但一般情況下對健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會引起嚴重危害的病原微生物。實驗室感染不導(dǎo)致嚴重疾病，具備有效治療和預(yù)防措施，并且傳播風(fēng)險有限。Ⅱ級（個體危險中等，群體危險低）病原微生物能夠?qū)θ嘶騽游镏虏。珜嶒炇夜ぷ魅藛T、社區(qū)、牲畜或環(huán)境不易導(dǎo)致嚴重危害。實驗室暴露也許會引起嚴重感染，但對感染有有效的預(yù)防和治療措施，并且疾病傳播的危險有限。二類能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。Ⅲ級（高個體危害，低群體危害）能引起人類或動物嚴重疾病，或造成嚴重經(jīng)濟損失，但通常不能因偶爾接觸而在個體間傳播，或能使用抗生素、抗寄生蟲藥物治療的病原微生物。Ⅲ級（個體危險高，群體危險低）病原微生物通常能引起人或者動物的嚴重疾病，但一般不會發(fā)生感染個體向其他個體的傳播，并且對感染由有效的預(yù)防和治療措施。一類能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。Ⅳ級（高個體危害，高群體危害）能引起人或動物非常嚴重疾病，一般不能治愈，容易直接或間接或偶然接觸在人與人，或動物與人，或人與動物，或動物與動物間傳播的病原微生物。Ⅳ級（個體和群體危險均高）病原微生物通常能引起人或動物的嚴重疾病，并且很容易發(fā)生個體之間的直接或間接傳播，對感染一般沒有有效的預(yù)防和治療措施。第9頁/共35頁第二部分：

微生物實驗室的安全及風(fēng)險評估第10頁/共35頁

1.微生物實驗室常見安全事故手套損壞、污染及衣物污染感染性物質(zhì)濺灑污染皮膚及粘膜刺傷、切割傷或擦傷潛在危害性氣溶膠的釋放容器破碎及感染性物質(zhì)溢出在臺面、地面和其他表面未裝可封閉離心桶的離心機內(nèi)盛有潛在感染性物質(zhì)的離心管發(fā)生破裂在可封閉的離心桶（安全杯）內(nèi)離心管發(fā)生破裂……第11頁/共35頁2.微生物實驗室風(fēng)險評估當實驗室活動涉及傳染或潛在傳染性生物因子時，應(yīng)進行危害程度評估。危害程度評估應(yīng)至少包括下列內(nèi)容：生物因子的種類（已知的、未知的、基因修飾的或未知傳染性的生物材料）、來源、傳染性、致病性、傳播途徑、在環(huán)境中的穩(wěn)定性、感染劑量、濃度、動物實驗數(shù)據(jù)、預(yù)防和治療。微生物實驗室風(fēng)險評估的核心風(fēng)險鑒定與識別制定降低風(fēng)險的方案殘余風(fēng)險鑒定執(zhí)行和再評估第12頁/共35頁生物實驗室風(fēng)險評估的意義確定生物安全防護水平（實驗室）；確定保藏、運輸、滅活、銷毀的條件；潛在危害分析與意外事故處理程序；個人防護；制定微生物操作程序；健康保障與監(jiān)督程序。第13頁/共35頁3.風(fēng)險評估應(yīng)考慮的因素傳染或疑似傳染媒介的致病性，包括疾病的發(fā)生率和嚴重性潛在的危害性愈大，風(fēng)險越高staphylococcusaureus：BSL-2VirusessuchasEbola,Marburg,andLassafever：BSL-4其它因素的抑制作用(HIV)andhepatitisBvirus：也在BSL-2，HIV因為非空氣傳播HepatitisBvirus:有疫苗傳播途徑遺傳、空氣、食入：新分離出來的媒介很難確定空氣傳播的：引起最大的實驗室內(nèi)傳染；氣溶性越強，風(fēng)險越大媒介的穩(wěn)定性氣溶傳染性，脫水，陽光/UV，化學(xué)脫水性等第14頁/共35頁風(fēng)險評估應(yīng)考慮的因素傳染劑量微生物與宿主的交互作用復(fù)雜：1unit-成百上千units工作人員的免疫力直接影響其對工作中接觸的傳染媒介的抵抗力濃度單位體積內(nèi)微生物的數(shù)量含有微生物的環(huán)境（固體組織、粘度等）和操作（媒介擴增，超聲或離心等）高擴增倍數(shù)的媒介體積越大，風(fēng)險越大起源地理位置（國內(nèi)或國外）宿主起源性質(zhì)（潛在動物源性，伴隨疾病爆發(fā)）第15頁/共35頁風(fēng)險評估應(yīng)考慮的因素動物實驗數(shù)據(jù)在動物中的致病性，傳染性，傳染途徑有效的治療和干預(yù)措施免疫過的工作人員在BSL-3操作BSL-4Juninvirus免疫也可能是被動的（暴露HBV時，使用血清免疫球蛋白）免疫，提供除機械工程控制，正確操作，和使用個人保護措施外的保護措施醫(yī)療監(jiān)督風(fēng)險管理的一部分：雇員健康狀況，血清庫，參與暴露后管理受風(fēng)險威脅的人員的經(jīng)驗和技術(shù)水平實驗員，維修工，清潔工，動物飼養(yǎng)人員第16頁/共35頁其它風(fēng)險因素處理可能被污染的利器：針頭，刀片，碎玻璃，有缺口的金屬手、胳膊或臉上暴露的傷疤、擦傷或刮痕，胳膊或臉可能接觸到、或被噴濺血，血液污染物或病原培養(yǎng)基。第17頁/共35頁第18頁/共35頁第三部分：

微生物實驗室安全控制第19頁/共35頁1.微生物實驗室安全控制措施不得在實驗室吃、喝、吸煙、或使用化妝品不得使用嘴吸式移液管或需用嘴操作的吸式儀器穿實驗服、戴手套、適當?shù)难?面部保護；處理傳染性或污染性材料，使用一次性手套。在使用前檢查所有的個人防護衣服和設(shè)備，注意更換受損的或有可能無效的。避免手/眼/臉接觸，離開實驗室前徹底洗手使用75%酒精來清理工作臺和手，以減少交叉污染確定動物過敏原接觸人員名單，促使他們參加健康監(jiān)督第20頁/共35頁微生物實驗室安全控制措施從事轉(zhuǎn)基因工作的人員必須獲得轉(zhuǎn)基因安全委員會的認可，轉(zhuǎn)基因項目必須得到類似批準工作允許的情況下，避免使用活的病原菌，盡量使用危害性最小的成立專門小組，以從事傳染性生物媒介物工作；該小組僅在限制范圍內(nèi)的實驗室內(nèi)工作在訂購任何化學(xué)品之前，確保已經(jīng)建立適當?shù)馁A存、使用和應(yīng)急措施在適當?shù)奈⑸锇踩珯恢羞M行產(chǎn)生氣溶膠的操作盡可能減少使用銳器；迫不得已情況下，必須使用適當?shù)目勾┩溉萜鞯?1頁/共35頁微生物實驗室安全控制措施潔凈操作臺或其它表面可能被污染，在實驗室準備新配的消毒液備用經(jīng)常清理和換水浴鍋里的水；尤其是在被活微生物或培養(yǎng)基污染的時候?qū)⑺械膫魅镜幕蛭廴镜奈⑸飶U棄物放入適當?shù)娜萜髦?，以備滅菌；或者，浸入消毒溶液中。進行焚燒處理的人類或動物廢棄物，必須冷凍貯存在有顏色標識的塑料袋中傳染物或污染物，除非是在密封在有標識的容器中，否則不得從實驗室運到其它區(qū)域免疫性或其它常規(guī)注射應(yīng)當提供，以提高接觸病原菌人員的免疫力第22頁/共35頁2.實驗室應(yīng)急物資儲備急救箱：包括常用的傷口處理藥品和特殊的解毒劑等工具：錘子、（斧子）、扳手、螺絲刀、（繩梯）等適合實驗室使用的滅火器、（滅火毯）房間消毒設(shè)備，如噴霧器和甲醛熏蒸器劃分危險區(qū)域界限的器材和警告標示全套防護服（*連體防護服、手套和頭套—用于涉及第一類和第二類病原微生物的事故）有效防護化學(xué)物質(zhì)和顆粒的全面罩式防毒面具第23頁/共35頁3.微生物實驗室安全事故應(yīng)急措施3.1手套損壞、污染1.手套被污染時應(yīng)立即用消毒劑噴灑手套2.脫下手套，放入黃色垃圾袋內(nèi)（待統(tǒng)一滅菌）3.更換新手套繼續(xù)實驗【注意】在操作高致病性病原微生物時應(yīng)該佩戴雙層手套第24頁/共35頁3.2衣物污染盡快脫掉最外層防護服，并注意防止感染性物質(zhì)進一步擴散將已污染的防護服放入黃色垃圾袋內(nèi)，待高壓滅菌脫掉手套，到污染區(qū)出口處洗手更換防護服和手套必要時對發(fā)生污染及脫防護服的地方進行消毒處理第25頁/共35頁3.3感染性物質(zhì)濺灑污染皮膚及粘膜感染性液體（血液、尿液標本或培養(yǎng)物）外溢到皮膚立即停止工作，脫掉手套用75%的酒精進行皮膚消毒再用大量水沖洗感染性液體濺入眼睛立即停止工作，脫掉手套迅速到緩沖區(qū)用洗眼器沖洗再用生理鹽水沖洗（注意動作輕柔，勿損傷眼睛）兩種情況都應(yīng)做適當?shù)念A(yù)防治療和醫(yī)學(xué)觀察，并報告實驗室安全員進行事故記錄第26頁/共35頁3.4刺傷、切割傷或擦傷應(yīng)急處理保持鎮(zhèn)靜，立即停止實驗，脫掉手套。用清水和肥皂水清洗傷口。盡量擠出傷口處的血液，取出急救箱，用碘酒或75%的酒精擦洗傷口，適當?shù)陌＜皶r就醫(yī)，告知醫(yī)生受傷原因及可能的微生物污染，必要時要進行醫(yī)學(xué)處理。向?qū)嶒炇野踩珕T報告，進行事故記錄。第27頁/共35頁3.5潛在危害性氣溶膠的釋放

(在生物安全柜以外)哪些意外情況下可能發(fā)生危害性氣溶膠的釋放？操作中生物安全柜突然停機或轉(zhuǎn)為正壓大量感染性物質(zhì)溢出、濺灑非封閉離心桶的離心機內(nèi)帶有感染性物質(zhì)的離心管發(fā)生破裂第28頁/共35頁3.6潛在危害性氣溶膠釋放的處理

（在生物安全柜以外）所有人員必須立即撤離相關(guān)區(qū)域報告實驗室安全員在1小時內(nèi)任何人不得進入事發(fā)實驗室，以使氣溶膠排出和重粒子沉降；無中央通風(fēng)系統(tǒng)則應(yīng)推遲進入（如24小時）貼出標識以示禁止入內(nèi)過后由專業(yè)人員指導(dǎo)清除污染，如甲醛蒸汽熏蒸，操作時注意防護（暴露人員應(yīng)進行醫(yī)學(xué)觀察，必要時及時就醫(yī)）第29頁/共35頁3.7生物安全柜內(nèi)少量溢出處理處理溢灑物時不要將頭伸入安全柜內(nèi)，也不要將臉直接面對前操作口，而應(yīng)處于前視面板的后方。選擇消毒劑時需要考慮消毒劑對生物安全柜的腐蝕性。（使用含氯制劑后再用清水擦拭）如果溢灑的量不足1mL時，可直接用消毒劑浸濕的紙巾（或其它材料）擦拭。如果溢灑物流入生物安全柜內(nèi)部，則視情況，如需要可對生物安全柜進行熏蒸。第30頁/共35頁3.8生物安全柜內(nèi)大量溢出處理使生物安全柜保持開啟狀態(tài)。在溢灑物上覆蓋浸有消毒劑的吸收材料，作用一定時間以發(fā)揮消毒作用。（必要時，用消毒劑浸泡工作表面以及排水溝和接液槽）消毒后脫下手套。如果防護服已被污染，脫掉污染的防護服后，洗手。穿好新的防護裝