轉(zhuǎn)基因生物培訓(xùn)資料課件

轉(zhuǎn)基因動物第一頁，共五十六頁。本章內(nèi)容9.1轉(zhuǎn)基因的方法和原理9.2轉(zhuǎn)基因動物9.3轉(zhuǎn)基因植物9.4轉(zhuǎn)基因生物和生物安全性第二頁，共五十六頁。9.1轉(zhuǎn)基因的方法和原理9.11目的基因制備和載體系統(tǒng)9.12幾種有效的轉(zhuǎn)基因方法9.13定點突變和受體系統(tǒng)第三頁，共五十六頁。簡介轉(zhuǎn)基因研究技術(shù)的中心環(huán)節(jié)即為DNA重組技術(shù)，其最終目的是將DNA片段轉(zhuǎn)入為一個生物體，從而使該生物體具有表現(xiàn)某種性狀。轉(zhuǎn)基因通過獲取基因、重組基因和表達基因等過程來實現(xiàn)。轉(zhuǎn)基因打破了物種的界限，使不同種的生物的遺傳物質(zhì)在分子水平上重新組合在一起，并且完全可以按照人的意志或目的，實現(xiàn)對生物體的改造。第四頁，共五十六頁。基本步驟1.分離獲得目的基因；2.在體外進行DNA重組，將外源DNA連接到能自我復(fù)制又帶有選擇標記的載體上；3.將重組DNA轉(zhuǎn)移入受體細胞；4.篩選出含有目的DNA的受體細胞克??；5.將此克隆。第五頁，共五十六頁。9.11目的基因制備和載體系統(tǒng)目的基因來源：基因組DNA分離、化學(xué)合成、PCR擴增、cDNA文庫及DNA文庫中制得。載體：質(zhì)粒、λ噬菌體、柯氏質(zhì)粒、YAC載體等工具酶：限制性內(nèi)切酶、連接酶、DNA聚合酶等第六頁，共五十六頁。PCR反應(yīng)PCR技術(shù)就是在體外通過酶促反應(yīng)或自發(fā)地擴增一段目的基因的技術(shù)。PCR要求反應(yīng)體系具有以下條件：1、要有與被分離的目的基因兩條鏈各一端序列相互補的DNA引物(約20個堿基左右)；2、具有熱穩(wěn)定性的酶如TaqDNA聚合酶；3、4種dNTP；4、作為模板的目的DNA序列。PCR反應(yīng)可擴增出100～5000bp的目的基因。第七頁，共五十六頁。PCR反應(yīng)過程1、變性，即將模板DNA置于95℃的高溫下，使雙鏈DNA的雙鏈解開變成單鏈DNA；2、退火，將反應(yīng)體系的溫度降低至55℃左右，使得一對引物分別與變性后的兩條模板鏈相配對；3、延伸，將反應(yīng)體系溫度調(diào)整到TaqDNA聚合酶作用的最適溫度72℃，然后以目的基因為模板，合成新的DNA鏈。反復(fù)進行約30個循環(huán)左右，即可擴增得到目的DNA序列。第八頁，共五十六頁。利用cDNA法由于真核生物的mRNA具有polyA這一結(jié)構(gòu)特點，可以用結(jié)合長度大約為15bp的短鏈多聚DT的纖維素填充的柱子，根據(jù)堿基配對原則，將其吸附，從真核細胞的總RNA中提取出來，再用能打斷A-T氫鍵的緩沖液洗脫。在mRNA群體中，有高豐度的mRNA，拷貝數(shù)多；也有低豐度的mRNA，但種類多，高豐度的mRNA容易合成cDNA。要保證構(gòu)建的cDNA文庫中要含有目的克隆，可利用瓊脂糖凝膠電泳、非變性蔗糖梯度離心和羥甲基蔗糖剃度離心等分級分離不同長度的mRNA，也可以利用cDNA的大小分級分離。第九頁，共五十六頁。cDNA鏈的合成得到純化的mRNA后，再利用逆轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶I，緩沖液和4種脫氧核糖核苷三磷酸及短的digo（dT）分子作為引物，合成cDNA。這些cDNA是由該種生物的各種mRNA分子逆轉(zhuǎn)錄得到的，因此是混合物，它們可以通過末端連接或是加入銜接物等其它方法克隆進入質(zhì)粒載體，形成cDNA文庫。然后，采用DNA雜交或免疫分析的方法來篩選目的基因第十頁，共五十六頁。質(zhì)粒載體質(zhì)粒（plasmid）是能自我復(fù)制的雙鏈環(huán)狀DNA分子，它們在細菌中以獨立于染色體外的方式存在，其大小不定，小的不到1kb，大的超過500kb。每個質(zhì)粒都有一段DNA復(fù)制起始位點的序列，它能幫助質(zhì)粒DNA在宿主細胞中復(fù)制。高拷貝數(shù)的質(zhì)粒，在宿主細胞中能達10～100個拷貝；低拷貝數(shù)的質(zhì)粒，在宿主細胞中只有1－4個拷貝。質(zhì)粒要成為克隆載體，就必須進行遺傳改造，使之成為一個具有單一的限制性內(nèi)切酶識別位點、多個選擇性標記、并一般小于15kb且以高拷貝數(shù)存在的克隆載體。其最大可以克隆的DNA片段一般在10kb左右。第十一頁，共五十六頁。質(zhì)粒載體pBR3221.大小為4361bp，含有抗氨芐青霉素和抗四環(huán)素這樣兩個抗生素抗性基因2.在四環(huán)素抗性基因內(nèi)部，還具有BamHI、HindⅢ和SalI三個識別位點。3.PstI識別位點在氨芐青霉素抗性基4.pBR322帶有一個復(fù)制起點，可以保證質(zhì)粒只在大腸桿菌里進行復(fù)制功能。第十二頁，共五十六頁。pUC19質(zhì)粒長2686bp，帶有pBR322的復(fù)制起始位點，一個氨芐青霉素抗性基因和一個大腸桿菌乳糖操縱子β－半乳糖苷酶基因（lacZ’）的調(diào)節(jié)片段，一個調(diào)節(jié)lacZ’基因表達的阻礙蛋白的基因lacI，還有多個單克隆位點。pUC19的篩選將轉(zhuǎn)化細胞涂布到含有氨芐青霉素、IPTG和X－gal的固體培養(yǎng)基上，那些帶有自身環(huán)化質(zhì)粒的細胞由于能夠形成具活性的β－半乳糖苷酶，所以菌落是藍色，如果插入有目的DNA片段，無法形成雜合β－半乳糖苷酶，菌落時白色的。第十三頁，共五十六頁。λ噬菌體λ噬菌體染色體是長約49kb的雙鏈DNA，該DNA的兩個5’末端都是由12個bp組成的單鏈互補粘性末端，當λ噬菌體DNA進入宿主細胞后，這兩個粘性末端互相結(jié)合，在連接酶作用下封閉成環(huán)在λ噬菌體基因組中位于左邊的基因（A-J）編碼噬菌體頭部和尾部的蛋白質(zhì)，中間的基因（J-N）與重組和生長過程有關(guān)，但與裂解生長過程無關(guān)，因此對裂解生長過程來說，中間區(qū)的DNA是非必需的，可以被缺失或置換，因此可以在這個區(qū)域克隆外源DNA，右邊的基因涉及λ基因的表達、調(diào)節(jié)、DNA合成晚期功能調(diào)節(jié)以及宿主細胞裂解等。第十四頁，共五十六頁。λ噬菌體載體分類：插入型載體和置換型載體。插入型載體：具有單一的酶切位點，可供外源DNA的插入。置換型載體：有成對的酶切位點，在兩個酶切位點之間的DNA片段，可被外源DNA片段置換。λ噬菌體載體可以克隆較大DNA片段，最大長度約為24kb，只需將λ噬菌體DNA、尾巴和純化的空的頭，混在一起就可以在體外產(chǎn)生具有侵染性的噬菌體顆粒。第十五頁，共五十六頁?？率腺|(zhì)粒Cosmid柯氏質(zhì)?？煽寺y帶40kb大小的DNA片段，并在大腸桿菌中復(fù)制保存，綜合了質(zhì)粒載體和噬菌體載體二者的優(yōu)點?？率腺|(zhì)粒上帶有多個單克隆位（RE2），兩個cos位點，DNA復(fù)制起始位點和抗生素抗性基因，在兩個cos位點之間還有一個限制性內(nèi)切酶位點（RE1）。第十六頁，共五十六頁。9.12幾種有效的轉(zhuǎn)基因方法基因轉(zhuǎn)移（transgenosis）是借助于物理、化學(xué)或生物的手段將外源基因?qū)胧荏w細胞，并檢查其在該細胞內(nèi)表達情況的一種技術(shù)，是細胞工程中一項重要而應(yīng)用廣泛的技術(shù)。細胞直接攝取外源DNA的過程稱為轉(zhuǎn)化（transformation），如果通過噬菌體的釋放和感染將DNA從一個細胞轉(zhuǎn)移到另一個細胞的過程，稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)(transduction第十七頁，共五十六頁?；蜣D(zhuǎn)移的方法1.細胞融合<10－62.微細胞介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移≤10－63.染色體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移<10－6

4.脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移≈2×10－4

5.磷酸鈣沉淀物介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移10－3－10－7

6.顯微注射DNA≈1－10％7.電脈沖介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移10～30％8.激光，超聲波介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移10～50％9.重組RNA病毒感染≈10～100％10.重組DNA病毒感染≈100％第十八頁，共五十六頁。DNA-磷酸鈣沉淀法磷酸鈣沉淀反應(yīng)是將外源DNA轉(zhuǎn)移并整合到細胞株中去的最常用方法，主要用于將基因?qū)雱游锛毎?。由于核酸以磷酸鈣－DNA共沉淀物的形式存在，培養(yǎng)細胞對DNA的吸收會大大提高，細胞通過內(nèi)吞作用，使DNA進入細胞質(zhì)，并轉(zhuǎn)移整合到細胞核內(nèi)的染色體內(nèi)。一般是將DNA與CaCl2溶液混合后，同時加入HEPES緩沖的鹽溶液（HeBS）混合，靜置后形成DNA－磷酸鈣沉淀物，然后用來轉(zhuǎn)染受體細胞。這個過程中，pH值、Ca2＋濃度等都會對轉(zhuǎn)染的效率有所影響。方法簡單，效率較高，可達培養(yǎng)細胞的20％，但缺點是受體細胞有限。第十九頁，共五十六頁。脂質(zhì)體（liposome）介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移脂質(zhì)體是一種內(nèi)部包裝DNA的球狀磷脂雙分層膜結(jié)構(gòu)，能與細胞膜融合將DNA送入細胞的。用脂質(zhì)體介導(dǎo)DNA轉(zhuǎn)染各種不同的類型的真核細胞的方法具有較高的轉(zhuǎn)化效率和可重復(fù)性。脂質(zhì)體制備的基本方法是以一定比例稱取磷脂酰膽堿和磷脂酰絲氨酸，放于氯仿中之后加入待轉(zhuǎn)移的DNA分子制成懸液，經(jīng)超聲化處理后，即形成包含DNA分子的脂質(zhì)體，然后與培養(yǎng)細胞作用2小時左右，就可望實現(xiàn)DNA導(dǎo)入受體細胞。脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染率受脂質(zhì)體的組成及理化性質(zhì)的影響。脂質(zhì)體可以實現(xiàn)體內(nèi)和體外的瞬時穩(wěn)定表達。第二十頁，共五十六頁。顯微注射DNA顯微注射DNA一般是用微吸管加DNA溶液在顯微鏡下準確地插入受體細胞核中，并將DNA注射進去的方法，在動物細胞轉(zhuǎn)移中較常使用?，F(xiàn)在，多利用顯微鏡操作器在相差顯微鏡下進行操作。每個細胞的注射量約為10－11ml，熟練的操作者每10分鐘可注射200個細胞。第二十一頁，共五十六頁。顯微操作儀第二十二頁，共五十六頁。顯微操作儀的使用顯微操作儀使用杠桿操作而移動，它能靠杠桿操作把微吸管的先端在顯微鏡的視野中作平面移動。上下的運動靠設(shè)在顯微操縱儀支柱上的上下微動，粗動調(diào)節(jié)裝置進行。它與顯微鏡牢固地連接起來。右側(cè)的顯微操作儀是裝在顯微鏡本體上，左側(cè)的顯微操作儀是裝在顯微鏡的機械臺上，隨機械臺的移動而移動，一般在進行操作時，先將平皿放置在顯微注射儀上，移動載物臺，把視野移到細胞處，先用緩慢移

動顯微操縱儀上固定細胞的微吸管，同時使注射器緩慢減壓，吸引目標受精卵并固定之，再用另一側(cè)顯微操縱儀移動微注射針，對準細胞核刺入，導(dǎo)入目的基因，完成顯微注射。第二十三頁，共五十六頁。顯微注射法的優(yōu)點1）轉(zhuǎn)化率高達20％，特別是在沒有合適的DNA載體系統(tǒng)時更有價值；2）對各種受體細胞均適用，從體細胞、淋巴細胞到受精卵；3）對轉(zhuǎn)移物質(zhì)沒有限制，可以是DNA、RNA、蛋白質(zhì)、病毒、代謝物或代謝底物以至細胞器、染色體、細胞核；4）可以控制轉(zhuǎn)移的量和轉(zhuǎn)移物的濃度；5）可選擇受體細胞的核的接受位點，可研究物質(zhì)在細胞內(nèi)的運轉(zhuǎn)，區(qū)隔化和依賴區(qū)隔的修飾；6）受體不用特殊的選擇系統(tǒng)；7）要求的樣品量少，2ml樣品足夠作顯微注射；8）實驗細胞與對照細胞可以化同樣的條件下比較。但也有缺點，如設(shè)備和技術(shù)的要求較高，一次處理細胞數(shù)量不能太多，對細胞有損傷第二十四頁，共五十六頁。基因槍介導(dǎo)的DNA轉(zhuǎn)移基因槍法最早是由美國康奈爾大學(xué)的Sanford最先提出的。它通過高速飛行的金屬顆粒將包被其外的目的基因直接導(dǎo)入到受體細胞內(nèi)，從而實現(xiàn)基因轉(zhuǎn)化的方法。1992年，世界首例轉(zhuǎn)基因小鼠就是通過該法獲得的。第二十五頁，共五十六頁。基因槍轉(zhuǎn)化的原理第二十六頁，共五十六頁。決定基因槍使用成功的因素第一因素是動力系統(tǒng)。根據(jù)動力系統(tǒng)，基因槍分為三大類：一類是以火藥爆炸力作為動力加速微彈；第二類是以電弧放電蒸發(fā)浪作為動力；第三類是以高壓氣體作為動力。第二因素是微彈的制備過程。用的微載體有兩類：一是鎢粉，另一個是金粉，直徑一般為0.6－4μm。常用的將DNA包被到微載體上所用的沉淀試劑有亞精胺、氯化鈣、乙醇、聚乙二醇、異丙醇等。第三個因素是受體材料的選擇。第二十七頁，共五十六頁?；虼虬校╣enetargeting）又稱同源重組技術(shù)，也是轉(zhuǎn)基因技術(shù)的一個組成部分利用轉(zhuǎn)基因的方法，將外源基因序列導(dǎo)入靶細胞后，通過外源基因序列與靶細胞內(nèi)染色體上同源基因序列間的重組，將外源基因定點整合到靶細胞基因組上的某一確定位點，而對某一預(yù)先確定的靶位點進行點突破的一項技術(shù)。9.13定點突變和受體系統(tǒng)第二十八頁，共五十六頁。基因敲除的載體O型載體，又稱序列插入型載體，這類載體與靶基因組同源重組配對，經(jīng)過一次交換，前者插入后者，它發(fā)生單交換而將載體序列插入靶基因內(nèi)，致使染色體DNA部分重復(fù)，可能破壞內(nèi)在正?；蚨l(fā)生突變，也可代替原來缺陷基因，糾正遺傳特征，使靶基因特異失活。Ω型載體，也稱序列取代載體，外來載體DNA和靶細胞染色體DNA同源配對，經(jīng)過兩次交換，前者取代后者，此類載體可與靶序列發(fā)生雙交換，以外源序列取代靶序列，其基因組大小并無改變。第二十九頁，共五十六頁。靶細胞基因敲除的靶細胞既可以是原核細胞，也可以是真核細胞；既可是植物細胞，也可是動物細胞。對于單細胞生物和體細胞具有全能性的植物來所，對靶細胞選擇要求不高，對任一細胞打靶成功都可獲得純系個體。但對于動物，普通細胞敲除卻無法得到純系個體，小鼠生殖系嵌合體構(gòu)建技術(shù)的發(fā)展卻提供了理想的胚胎干細胞靶細胞。胚胎干細胞體積大，胞漿少；體外培養(yǎng)時，細胞排列緊密，呈集落形生長，在集落邊緣有時可見有少量的已分化細胞，形態(tài)為扁平上皮細胞樣或梭形成纖維細胞樣。第三十頁，共五十六頁。轉(zhuǎn)入方法構(gòu)建的基因敲除載體，經(jīng)線性化后通常采用電穿孔的方法將DNA引入胚胎干細胞。一般電壓為220～800V，電容從0.3～500μF不等，轉(zhuǎn)染后24小時開始用含200μgG418（或/和其他物質(zhì)）的培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng)，經(jīng)過8～12天未整合外源DNA的胚胎干細胞都已死亡，而整合了外源DNA的胚胎干細胞則長出了顯微鏡下可見到的克隆。該方法的突出優(yōu)點在于其可靠性和重復(fù)性第三十一頁，共五十六頁。正負選擇法第三十二頁，共五十六頁。9.2轉(zhuǎn)基因動物9.21轉(zhuǎn)基因小鼠的制備方法9.22轉(zhuǎn)基因動物的應(yīng)用價值第三十三頁，共五十六頁。9.23轉(zhuǎn)基因小鼠的制備方法1974年，Jaenish和Mintz應(yīng)用顯微注射法，在世界上首次成功地獲得了AV40DNA轉(zhuǎn)基因小鼠。Palmiter等人于1982年將大鼠的生長激素基因?qū)胄∈笫芫训男墼酥校D(zhuǎn)基因動物技術(shù)轟動了整個生命科學(xué)界。第三十四頁，共五十六頁。反轉(zhuǎn)錄病毒法利用反轉(zhuǎn)錄病毒可以轉(zhuǎn)移小片段DNA（≤10kb）缺陷：可能導(dǎo)致產(chǎn)生輔助病毒株第三十五頁，共五十六頁。DNA顯微注射第三十六頁，共五十六頁。利用胚胎干細胞第三十七頁，共五十六頁。篩選和鑒定可以利用正負選擇法或PCR檢測外源DNA是否整合到染色體的正確位點PCR檢測第三十八頁，共五十六頁。9.24轉(zhuǎn)基因動物的應(yīng)用價值1）用于各種人類遺傳疾病的模型以轉(zhuǎn)基因鼠居多，例如在老鼠中轉(zhuǎn)入突變的人β珠蛋白基因，會產(chǎn)生β－地中海型貧血癥。2）轉(zhuǎn)基因動物模型還可以用于人類病毒病的研究。轉(zhuǎn)基因動物模型可將病毒的基因通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)轉(zhuǎn)動實驗鼠體內(nèi)進行研究。人們利用轉(zhuǎn)基因小鼠技術(shù)培育了引入HIV的tat蛋白的轉(zhuǎn)基因鼠模型。第三十九頁，共五十六頁。3）轉(zhuǎn)基因動物作為乳腺生物反應(yīng)器將所需要的目的基因構(gòu)建入載體，加上適當?shù)恼{(diào)控序列，轉(zhuǎn)入動物胚胎細胞，使轉(zhuǎn)基因動物分泌的乳汁中含有所需的藥用蛋白。第四十頁，共五十六頁。生產(chǎn)藥用蛋白1.抗凝血酶Ⅲ：轉(zhuǎn)基因羊中得到，產(chǎn)量為7g/l2.β乳球蛋白：轉(zhuǎn)基因小鼠，0.1－2mg/ml3.紅細胞生成素（EPO）:轉(zhuǎn)基因小鼠乳汁0.5ug/ml4.α1抗胰蛋白酶（AAT）:轉(zhuǎn)基因羊60mg/ml5.因子Ⅸ:轉(zhuǎn)基因羊的乳汁125ug/ml的重組蛋白6.因子Ⅷ：轉(zhuǎn)基因豬1－2.7ug/ml7.單克隆抗體:轉(zhuǎn)基因小鼠中得到8.C蛋白：轉(zhuǎn)基因豬每小時分泌380ug/ml9.生長激素：轉(zhuǎn)大鼠GH基因豬最高，血清中740ng/m第四十一頁，共五十六頁。4）膀胱生物反應(yīng)器：收集產(chǎn)物蛋白比較容易，不會對生物造成傷害，宜用UP－Ⅱ作為啟動子，但由于含量低，成本和乳腺反應(yīng)器差不多。5）轉(zhuǎn)基因動物血液表達系統(tǒng)：例如：Swanson等人制備了血液中含有人血紅蛋白的轉(zhuǎn)基因豬。6)轉(zhuǎn)基因改良移植器官：利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)改造異種來源器官的遺傳性狀，使之能適應(yīng)人體器官或組織的移植。例如導(dǎo)入補體控制因子基因的轉(zhuǎn)基因豬獲得成功，為培育異體移植的供體豬開辟了道路。第四十二頁，共五十六頁。7）轉(zhuǎn)基因生物獲得更多經(jīng)濟利益轉(zhuǎn)基因牛：改變牛奶成分及提高產(chǎn)奶量轉(zhuǎn)基因羊：改良羊毛生長轉(zhuǎn)基因魚：生長速度提高，以及導(dǎo)入抗凍蛋白基因、珠蛋白基因的魚轉(zhuǎn)基因雞：改良現(xiàn)有品種的遺傳特性，增強雞對于感染的抵抗能力，降低對疾病的易感性，還可以將母雞產(chǎn)生的外源蛋白收集到蛋內(nèi)，以供醫(yī)療和保健之用。第四十三頁，共五十六頁。9.3轉(zhuǎn)基因植物9.31制作轉(zhuǎn)基因植物的基本方法9.32轉(zhuǎn)基因植物與高技術(shù)農(nóng)業(yè)第四十四頁，共五十六頁。9.31制作轉(zhuǎn)基因植物的基本方法土壤農(nóng)桿菌的質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)入植物細胞后，會導(dǎo)致植物產(chǎn)生冠癭瘤，這是由于Ti質(zhì)粒上有一段T－DNA，能轉(zhuǎn)移并整合進入植物基因組中，導(dǎo)致冠癭瘤形成。T－DNA的長度約在12－24kb之間Vir區(qū)的產(chǎn)物對于T－DNA的轉(zhuǎn)移是必須的第四十五頁，共五十六頁。農(nóng)桿菌與植物細胞相互作用的機制

第四十六頁，共五十六頁。Ti質(zhì)粒衍生的克隆轉(zhuǎn)化載體Ti質(zhì)粒衍生的克隆轉(zhuǎn)化載體必須具備以下的結(jié)構(gòu)特點1）具有選擇標記基因2）DNA復(fù)制起始位點3）T－DNA右邊緣序列4）單克隆位點5）vir區(qū)域，利用雙元載體系統(tǒng)和共整合載體系統(tǒng)解決。第四十七頁，共五十六頁。實現(xiàn)vir區(qū)的方法雙元載體共整合載體和農(nóng)桿菌質(zhì)粒重組過程第四十八頁，共五十六頁。土壤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法第四十九頁，共五十六頁。9.32轉(zhuǎn)基因植物與高技術(shù)農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因技術(shù)在綠色革命中起了重要的作用！抗除草劑基因轉(zhuǎn)入農(nóng)作物中，農(nóng)作物游離抗除草劑的作用，而可以選擇性除掉雜草！有抗昆蟲基因的農(nóng)作物可以避免農(nóng)藥的使用有抗病毒的農(nóng)作物可以防止病毒的侵襲！利用轉(zhuǎn)基因可以改善農(nóng)作物的營養(yǎng)價值！轉(zhuǎn)固氮基因農(nóng)作物可以利用分子氮第五十頁，共五十六頁。9.4轉(zhuǎn)基因生物和生物安全性1）基因重組打破了物種間的界限，打亂了自然進化歷程，改變了生態(tài)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)，這對于人類是福是禍？2）轉(zhuǎn)基因生物具有新性狀，其適合度和競爭力增加，是否會導(dǎo)致本來就弱的瀕危生物更快地從地球上消失？3）轉(zhuǎn)基因生物的數(shù)目增加，是否會對生物多