其他類成分分析

其他類成分分析演示文稿現(xiàn)在是1頁\一共有46頁\編輯于星期六優(yōu)選其他類成分分析現(xiàn)在是2頁\一共有46頁\編輯于星期六概述中藥的品種繁多，所含的化學(xué)成分更是豐富多彩。隨著人們對客觀世界認(rèn)識的不斷深化，各種先進的分離分析手段的更新，更多的具有活性的化學(xué)成分將被發(fā)現(xiàn)。現(xiàn)在是3頁\一共有46頁\編輯于星期六氨基酸、蛋白質(zhì)分析（自學(xué)）多糖分析有機酸（自學(xué)）環(huán)烯醚萜分析木脂素分析（自學(xué)）萜類及其衍生物分析現(xiàn)在是4頁\一共有46頁\編輯于星期六多糖分析上世紀(jì)60年代以來，人們逐漸發(fā)現(xiàn)多糖有一些獨特的、多方面的生理活性，且無毒性，是比較理想的治療藥物。

昆布素-----動脈粥樣硬化香菇多糖-----抗腫瘤活性銀耳多糖------免疫增強劑黃芪多糖-----抗病毒、抗腫瘤

現(xiàn)在多糖類藥物己引起國內(nèi)外科學(xué)家的重視?，F(xiàn)在是5頁\一共有46頁\編輯于星期六多糖也叫多聚糖，是由10個以上單糖基聚合而成。這類物質(zhì)不僅聚合的單糖數(shù)目多，分子量大。

1、多糖的單糖組成及其摩爾比；

2、多糖中糖苷鍵連接類型；

一、定性方法現(xiàn)在是6頁\一共有46頁\編輯于星期六水解HPLC其它方法TLCGC-MS1、多糖的單糖組成及其摩爾比現(xiàn)在是7頁\一共有46頁\編輯于星期六無論采用哪一種分析方法，首先都需將多糖完全水解。常用的水解方法有稀酸水解和三氟乙酸水解，兩種方法水解方法都可以使多糖水解完全。酸的濃度水解時間水解溫度現(xiàn)在是8頁\一共有46頁\編輯于星期六（1）薄層色譜法應(yīng)用于多糖的單糖組成研究的方法中，薄層色譜法比較簡單，但是靈敏度較低，有些含量低的單糖不易檢測出來，利用此方法可以初步檢測多糖的單糖組成?？捎玫谋由V吸附劑有硅膠、纖維素、硅藻土和氧化鋁。常用的展開系統(tǒng)有丙酮-水（96：4）、正丁醇-乙酸乙酯-異丙醇-乙酸-水-吡啶（7：20：12：7：6：6）、正丁醇-乙酸-水（4：1：5）。顯色劑有1，3-二羥基萘硫酸溶液，或苯胺-鄰苯二甲酸的正丁醇飽和水溶液，100℃烘約10min。

現(xiàn)在是9頁\一共有46頁\編輯于星期六由于糖的紫外吸收較弱，因此在用到高效液相色譜法測定多糖的單糖組成時，紫外檢測器檢測效果不好。選擇合適的檢測器很重要：

（1）示差折光檢測器具有穩(wěn)定、易于操作、樣品不被破壞等特點，但該法受溫度和流動相組成的影響，不能使用梯度洗脫。

（2）u-is檢測器：因為糖只在近紫外區(qū)190nm有吸收，若采用柱前衍生或柱后衍生反應(yīng)，生成具有強紫外吸收的物質(zhì)，可大大提高靈敏度。

（3)ELSD方法可解決上述問題，可與梯度洗脫相容，已有研究者應(yīng)用HPLC-ELSD直接測定二糖海藻糖及D-木糖等單糖，但多糖的含量測定還未見報道（2）高效液相色譜法現(xiàn)在是10頁\一共有46頁\編輯于星期六用高效液相色譜測定單糖的組成，由于各單糖結(jié)構(gòu)相似，峰不易分開，不能達到理想的分離度，這給分析多糖的單糖組成帶來一定困難?？墒褂冒被?/p>

現(xiàn)在是11頁\一共有46頁\編輯于星期六目前，多糖的組成分析多采用氣相色譜法。由于單糖的揮發(fā)性很低，所以在應(yīng)用氣相色譜法對多糖的單糖組成進行分析時，必須首先要進行衍生化處理以增加其揮發(fā)性。常用的衍生化處理方法有硅烷化法和乙?；?。

（3）氣相色譜法現(xiàn)在是12頁\一共有46頁\編輯于星期六2、多糖中糖苷鍵連接類型；

高碘酸氧化和Smith降解，通過降解產(chǎn)物，可以了解多糖中的糖苷鍵的連接方式。通過紅外光譜，核磁共振譜可以了解糖苷鍵的構(gòu)型（α型或β型）。通過酶解，以特定酶與多糖反應(yīng)，確定糖苷鍵的連接?，F(xiàn)在是13頁\一共有46頁\編輯于星期六定量分析利用組成多糖

的單糖的縮合

反應(yīng)而建立：

比色法直接測定多糖

本身而建立：

高效液相法

氣相色譜法二、定量方法現(xiàn)在是14頁\一共有46頁\編輯于星期六151．苯酚-硫酸法（Molish）測定原理是先用80％乙醇提取其中所含有的單糖、低聚糖及甙類等干擾性成分，再用熱水提取多糖類成分。多糖類在硫酸作用下，先水解成單糖分子，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后和苯酚（或萘酚）縮合，其中已糖縮合物成橙黃色溶液，在490nm波長處有特征吸收；而戊糖及糖醛酸的縮合物在480nm波長處特征吸收；其吸收度與糖含量呈線性關(guān)系。（一）總多糖的定量分析

現(xiàn)在是15頁\一共有46頁\編輯于星期六162．3,5-二硝基水楊酸（DNS）法測定

DNS法原理是利用3,5-二硝基水楊酸在堿性溶液中，與多糖水解產(chǎn)物還原糖共熱后還原成棕紅色的氨基化合物，此氨基化合物在540nm波長處有特征吸收，在一定范圍內(nèi)還原糖的量與反應(yīng)液的顏色強度呈比例關(guān)系。3．蒽酮-硫酸法測定糖類與硫酸發(fā)生脫水反應(yīng)，生成糠醛或衍生物，和與蒽酮-試劑縮合產(chǎn)生顏色，反應(yīng)后溶液呈藍綠色，在620nm波長有最大吸收，吸收度與糖含量呈線性關(guān)系?，F(xiàn)在是16頁\一共有46頁\編輯于星期六17（二）單糖分析方法

多糖組分復(fù)雜，較難直接測定單體多糖的含量?，F(xiàn)常用的分析方法是，先將多糖酸水解，再用氣相色譜法或高效液相色譜法確定其組成（單糖的種類及比例），可以單糖的量推算多糖的量。以往多用氣相色譜法測定單糖含量，但由于單糖不具有揮發(fā)性，一定要制備成相應(yīng)的衍生物后才能測定，操作步驟較為繁瑣?，F(xiàn)今用高效液相色譜法測定糖含量的論文較多見。

分析實例-三七多糖中單糖的含量測定現(xiàn)在是17頁\一共有46頁\編輯于星期六18現(xiàn)在是18頁\一共有46頁\編輯于星期六19一．理化性質(zhì)與常用分析方法

1．環(huán)烯醚萜類成分的分布環(huán)烯醚萜（iridoid）類成分是由二個異戊二烯構(gòu)成的含有10個碳原子的單萜類化合物，其母核都為環(huán)狀，具有烯鍵和醚鍵，常與糖結(jié)合成甙。植物界常見的環(huán)烯醚萜甙主要是環(huán)烯醚萜萄萄糖甙和4-去甲基環(huán)烯醚萜葡萄糖甙。環(huán)烯醚萜甙存在于梔子、雞矢藤、馬錢子、肉蓯蓉等中藥中；而4-去甲基環(huán)烯醚萜甙則是地黃、玄參、車前等中藥的主要成分。裂環(huán)烯醚萜（secoirdoid）類成分是環(huán)烯醚萜的開環(huán)衍生物，這類成分在龍膽科植物中發(fā)現(xiàn)最多，尤其是在龍膽屬和獐芽菜屬植物中存在更為普遍。

環(huán)烯醚萜苷類分析現(xiàn)在是19頁\一共有46頁\編輯于星期六202．理化性質(zhì)

易溶于水、甲醇，可溶于乙醇、丙酮、正丁醇。對酸敏感，成苷后苷鍵易被酸水解斷裂，苷元中C1位的羥基和C2位的氧是—個半縮醛結(jié)構(gòu)，化學(xué)性質(zhì)活潑，易發(fā)生進一步氧化聚合等反應(yīng)，尤其是在酸堿的作用下或有共存酶存在更易變化。玄參、地黃等炮制后變黑就是由于這類成分水解、聚合所致?，F(xiàn)在是20頁\一共有46頁\編輯于星期六213．定性分析

分析這些成分難度較大，但仍可利用其結(jié)構(gòu)特點和理化性質(zhì)尋找其定性鑒別、含量測定的依據(jù)。如該類成分與氨基酸共同加熱可顯深紅色或藍色；或于其冰醋酸溶液各加少量銅鹽顯藍色；與Shear試劑（濃鹽酸與苯胺1：15混合）反應(yīng)顯不同顏色。薄層定性分析可用硅膠G、硅膠GF254薄層板，或聚酰胺薄膜。顯色劑有硫酸乙醇溶液、茴香醛試液、香草醛硫酸試液、對二甲氧基苯甲醛-硫酸溶液。現(xiàn)在是21頁\一共有46頁\編輯于星期六224．定量分析

（1）分光光度法：利用環(huán)烯醚萜類成分與某些試劑的顯色反應(yīng)，于分光光度計上測定吸收度進行定量分析。如梓醇的薄層-分光光度法測定。（2）薄層掃描法：可用硅膠GF254薄層板，檢測熒光熄滅斑點，如梔子及炮制品中梔子甙含量；也可用硅膠G或聚酰胺薄膜，用顯色或在紫外區(qū)測定，如龍膽中龍膽苦甙、當(dāng)藥苦甙、當(dāng)藥甙的含量測定。（3）高效液相色譜法：對于有紫外吸收的環(huán)烯醚萜類成分可用HPLC法測定，如梔子苷、龍膽苦苷、梓醇等成分的測定?，F(xiàn)在是22頁\一共有46頁\編輯于星期六23二．含環(huán)烯醚萜苷常用中藥分析

（一）地黃中環(huán)烯醚萜甙的分析地黃為玄參料植物地黃RehmanniaglutimosaLibosch的新鮮或干燥塊根，分別稱為“鮮地黃”與“生地黃”，炮制后稱為“熟地黃”。鮮地黃功效為清熱生津、涼血止血；生地黃功效為清熱涼血、養(yǎng)陰生津；熟地黃功效為滋陰補血、益精填髓。含環(huán)烯醚萜甙類成分梓醇（catalpol）、二氫梓醇（dihycrocatalpol）、桃葉珊瑚甙（aucubim）、益母草甙（leonuride）、黃陵香甙（melittoside）、地黃甙（rehmannioside）A、B、C、D等。現(xiàn)在是23頁\一共有46頁\編輯于星期六24現(xiàn)在是24頁\一共有46頁\編輯于星期六25現(xiàn)在是25頁\一共有46頁\編輯于星期六26現(xiàn)在是26頁\一共有46頁\編輯于星期六271.定性分析

（1）薄層色譜法：地黃粉末2g，加甲醇20ml，加熱回流1h，放冷，濾過，濾液回收甲醇至5ml，作為供試品溶液。另取梓醇對照品加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各5μl，點于同一硅膠Ｇ薄層板上，以氯仿-甲醇-水（14：6：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茴香醛試液，105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。現(xiàn)在是27頁\一共有46頁\編輯于星期六28

2.定量分析

（1）高效液相色譜法

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0.1%磷酸溶液（1：99）為流動相；檢測波長為210nm。理論板數(shù)按梓醇峰計算應(yīng)不低于5000。對照品溶液的制備：精密稱取梓醇對照品適量，加流動相制成每1ml含10μl對照品的溶液，即得?，F(xiàn)在是28頁\一共有46頁\編輯于星期六

供試品溶液的制備：取生地黃切成約5mm的小塊，經(jīng)80℃減壓干燥24h后，磨成粗粉約0.4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，加熱回流提取1.5h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液10ml，濃縮至近干，殘渣用流動相溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，并用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。生地黃按干燥品計算，含梓醇（C15H22O10）不得少于0.20%?，F(xiàn)在是29頁\一共有46頁\編輯于星期六30

鮮地黃中梓醇含量為0.774％~4.92％，干地黃中梓醇含量為0.010％~0.726％。其中地道藥材懷地黃中梓醇含量高于其它產(chǎn)地的樣品；鮮地黃含量高干地黃，這是由于加工過程中導(dǎo)致梓醇分解，含量平均下降1/2~2/3，熟地黃含量明顯偏低；不同產(chǎn)地干地黃的梓醇含量相差很多，這與產(chǎn)地、品種及商品貯存有關(guān)，貯藏1年的地黃含量有所下降。

現(xiàn)在是30頁\一共有46頁\編輯于星期六31（二）龍膽中裂環(huán)烯醚萜甙的分析

龍膽為龍膽科植物條葉龍膽CentianamanshueicaKitag.、龍膽G．scabraBge、三花龍膽G．trifloraPall．或堅龍膽G．regescensFranch．的根或根莖，前3種習(xí)稱“龍膽”，后一種習(xí)稱“堅龍膽”。具清熱燥濕、瀉肝膽火之功效。龍膽中含有多種裂環(huán)烯醚萜甙類成分，如龍膽苦甙（gentiopicroside）、當(dāng)藥甙（sweroside）、當(dāng)藥苦甙（swertiamarim）、苦龍膽酯甙（gmarogentim）等，另含龍膽三糖、龍膽堿等。現(xiàn)在是31頁\一共有46頁\編輯于星期六32gentiopicrosideswertiamarim

現(xiàn)在是32頁\一共有46頁\編輯于星期六33現(xiàn)在是33頁\一共有46頁\編輯于星期六34現(xiàn)在是34頁\一共有46頁\編輯于星期六351.定性分析

（1）薄層色譜法取龍膽粉末0.5g，加甲醇5ml，浸漬4~5h，濾過，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液。另取龍膽苦苷對照品，加甲醇制成每1ml含2mg溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254薄層板上，以醋酸乙酯-甲醇-水（20：2：1）為展開劑，二次展開，取出，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點?，F(xiàn)在是35頁\一共有46頁\編輯于星期六36（2）顯微化學(xué)①取龍膽粉末行微量升華，鏡檢可見帶綠黃色的針晶、柱狀晶體及其它形狀的聚合晶體。②升華的結(jié)晶加硫酸和硝酸各1滴，到出現(xiàn)氣泡時加熱，開始產(chǎn)生油滴，接著為橙黃色球晶狀固體或細(xì)小的單晶或簇晶生成。

（3）化學(xué)法：

取龍膽粉末約1g，加甲醇10m1。冷浸過夜，濾過，濾液濃縮到2m1，加酸酸化，加碘化鉍鉀試劑有桔紅色沉淀（檢查生物堿）?，F(xiàn)在是36頁\一共有46頁\編輯于星期六372.定量分析

（1）高效液相色譜法

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水（3：7）為流動相；檢測波長為270nm。理論板數(shù)按龍膽苦苷峰計算應(yīng)不低于3000。內(nèi)標(biāo)溶液的制備：精密稱取咖啡因適量，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得?，F(xiàn)在是37頁\一共有46頁\編輯于星期六測定法：精密稱取龍膽苦苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液。精密量取該溶液和內(nèi)標(biāo)溶液各5ml，搖勻，取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取龍膽中粉約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇110ml，放置12h，時時振搖，精密量取上清液2ml，置10ml量瓶中，精密加內(nèi)標(biāo)溶液2ml，加甲醇至刻度，搖勻，取10μl注入液相色譜儀，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計算，即得。本品含龍膽苦苷（C16H20O9）不得少于1.0%。現(xiàn)在是38頁\一共有46頁\編輯于星期六39

一．理化性質(zhì)與常用分析方法1．萜類及其衍生物的分布及理化性質(zhì)2．常用分析方法（1）定性分析萜類化合物的鑒別可用理化顯色反應(yīng)和薄層色譜法。理化顯色反應(yīng)常用的試劑同揮發(fā)油分析。萜類及其衍生物分析現(xiàn)在是39頁\一共有46頁\編輯于星期六40（2）定量分析

薄層色譜法和氣相色譜法均可用于萜類化合物的定量分析。但薄層色譜法測定時選擇專屬性的顯色劑較為困難；氣相色譜法要注意分離度和對照品問題。萜類含氧化合物或內(nèi)酯類成分的熔點要高于其它揮發(fā)油類，對照品穩(wěn)定性較好；加之結(jié)構(gòu)中多有雙鍵或共軛體系，使的采用高效液相色譜法對其進行定量分析成為可能。故近年來這方面的報道頗多，《中國藥典》2005版藥典對白芍、赤芍、木香、穿心蓮、銀杏葉（萜內(nèi)酯成分）均采用高效液相色譜法控制質(zhì)量?，F(xiàn)在是40頁\一共有46頁\編輯于星期六41二.含萜類及其衍生物常用中藥分析

（一）白芍中單萜苷分析白芍為毛茛科植物芍藥Paeonialactiflora