白細胞檢驗的基本方法專家講座

第十章

白細胞檢驗基本方法

白細胞檢驗的基本方法第1頁第一節(jié)白細胞功效檢驗一、墨汁吞噬試驗

二、白細胞吞噬功效試驗

三、血清溶菌酶活性試驗

四、硝基四氮唑藍還原試驗

五、白細胞趨化性試驗

六、吞噬細胞吞噬功效試驗第一節(jié)白細胞檢驗的基本方法第2頁

一、墨汁吞噬試驗【原理】血液中中性粒細胞及單核細胞對細菌、異物等含有吞噬作用。在一定量肝素抗凝血中，加人一定量墨汁，經(jīng)37℃溫育4小時，涂片染色鏡下觀察吞噬細胞對墨汁吞噬情況，并計算吞噬率及吞噬指數(shù)?！緟⒖贾怠砍墒熘行粤＜毎淌陕?4％±15％，吞噬指數(shù)126±60；成熟單核細胞吞噬率95％±15％，吞噬指數(shù)313±86。下一頁第一節(jié)白細胞檢驗的基本方法第3頁第一節(jié)

【臨床評價】粒細胞吞噬功效僅限于成熟階段，單核細胞幼稚型和成熟型都含有吞噬能力。急性單核細胞白血病M5a為弱陽性，M5b吞噬指數(shù)顯著增高。急性粒細胞白血?。∕2）、急性淋巴細胞白血病和急性早幼粒細胞白血病原始及幼稚細胞多無吞噬能力，吞噬試驗為陰性。急性粒-單核細胞白血病呈陽性反應(yīng)，對判別有一定價值。慢性粒細胞白血病成熟中性粒細胞吞噬能力顯著減低。

上一頁下一頁白細胞檢驗的基本方法第4頁M5骨髓象墨汁吞噬試驗返回第一節(jié)白細胞檢驗的基本方法第5頁二、白細胞吞噬功效試驗【原理】分離白細胞懸液，將待測吞噬細胞與某種可被吞噬而又易于查見計數(shù)顆粒物質(zhì)如葡萄球菌混合，溫育一定時間后，細菌可被中性粒細胞吞噬，可在鏡下觀察中性粒細胞吞噬細菌情況，依據(jù)吞噬率和吞噬指數(shù)即可反應(yīng)吞噬細胞吞噬功效。下一頁第一節(jié)白細胞檢驗的基本方法第6頁【參考值】1.吞噬率（％）=吞噬細菌細胞數(shù)／200個（中性粒細胞）X100％；正常人為628％±114％2.吞噬指數(shù)＝200各中性粒細胞吞噬細胞總數(shù)／200個（中性粒細胞）；正常人為1.06±0.05上一頁下一頁第一節(jié)白細胞檢驗的基本方法第7頁【臨床評價】吞噬細胞分大吞噬細胞和吞噬細胞兩大類。前者包含組織中巨噬細胞和血循環(huán)中大單核細胞，后者主要是中性粒細胞。本試驗可了解中性粒細胞吞噬功效。如吞噬率和吞噬指數(shù)增高，反應(yīng)中性粒細胞吞噬異物功效增強，常見于細菌性感染。對疑有中性粒細胞吞噬功效低下者，有幫助確診價值。上一頁第一節(jié)返回白細胞檢驗的基本方法第8頁三、血清溶菌酶活性試驗【原理】溶菌酶能水解革蘭氏陽性球菌細胞壁乙酰氨基多糖成份，使細胞失去細胞壁而破裂。以對溶菌酶較敏感微球菌懸液為作用底物，依據(jù)微球菌溶解程度來檢測血清或尿中溶菌酶活性。【參考值】血清（5－15）mg／L尿（0－2）mg／L（比濁法）下一頁第一節(jié)白細胞檢驗的基本方法第9頁

【臨床評價】

l.血清溶菌酶含量增高可見于部分急性髓細胞白血病。①急性單核細胞白血病

②急性粒-單核細胞白血病

③急性粒細胞白血病

2．血清溶菌酶含量減低急性淋巴細胞白血病多數(shù)減低，少數(shù)正常。慢性粒細胞白血病血清溶菌酶含量正常，但急變時下降。上一頁第一節(jié)返回白細胞檢驗的基本方法第10頁四、硝基四氮唑藍還原試驗【原理】硝基四氮唑藍（NBT）是一個染料，其水溶性呈淡黃色。當(dāng)被吞入或摻入中性白細胞后，有產(chǎn)生過氧化物酶作用，可接收葡萄糖中間代謝產(chǎn)物葡萄糖-6-磷酸在已糖磷酸旁路代謝中NADPH氧化脫下氫，而被還原成非水溶性藍黑色甲顆粒，呈點狀或片狀從容在胞漿內(nèi)有酶活性部位，可在顯微鏡下觀察并計數(shù)陽性細胞百分比?！緟⒖贾怠空３扇岁栃约毎麛?shù)在10％以下。若有10％以上中性粒細胞能還原NBT，即為NBT還原試驗陽性；低于10％則為陰性。下一頁第一節(jié)白細胞檢驗的基本方法第11頁【臨床評價】1.用于中性粒細胞吞噬殺菌功效異常過篩判別和輔助診療兒童慢性肉芽腫，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥，髓過氧化物酶缺乏癥和Job綜合征，NBT還原試驗陽性。

上一頁第一節(jié)2.用于細菌感染判別3.器官移植后發(fā)燒判別4.無丙種球蛋白血癥、鐮狀細胞病、惡性營養(yǎng)不良等NBT還原陽性細胞百分比可降低。5．新生兒、小兒成骨不全癥、心肌梗死急性期、淋巴肉瘤、NBT還原陽性細胞百分比可增高。返回白細胞檢驗的基本方法第12頁五、白細胞趨化性試驗【原理】在微孔濾膜一側(cè)放入粒細胞，另一側(cè)放入趨化因子（細菌毒素、補體C3a、淋巴因子等），檢測離體粒細胞潛過濾膜抵達趨化因子這一側(cè)定向移動能力。【參考值】趨化指數(shù)3.0－3.5下一頁第一節(jié)白細胞檢驗的基本方法第13頁

【臨床評價】趨化性是粒細胞抵達炎癥局部所必需。本試驗是觀察粒細胞向感染灶運動能力一項主要檢測方法。趨化功效異常可見于Wiskot-Aldrich綜合征、幼年型牙周炎、糖尿病、燒傷、新生兒、慢性皮膚粘膜白色念珠菌病、高IgE綜合征、先天性魚鱗病、膜糖蛋白（相對分子質(zhì)量11000）缺點癥、肌動蛋白功效不全癥、Chediak-Hisashi綜合征。上一頁第一節(jié)下一頁白細胞檢驗的基本方法第14頁Chediak-Hisashi綜合征血象骨髓象返回第一節(jié)白細胞檢驗的基本方法第15頁六、吞噬細胞吞噬功效試驗【原理】活體巨噬細胞、單核細胞在體內(nèi)外都有吞噬細菌、異物功效，在體外將細胞與異體細胞或細菌混合孵育后，染色觀察其吞噬異體細胞或細菌數(shù)量，可了解其吞噬功效。利用中藥斑螫在人前臂皮膚上發(fā)皰，造成非感染性炎癥，誘使單核細胞游出血管大量聚集于皰液內(nèi)，抽取皰液則成為天然提純吞噬細胞懸液。以雞紅細胞為靶細胞，在體外370C條件下觀察吞噬細胞對雞紅細胞吞噬消化活性，取試管內(nèi)細胞進行涂片染色和鏡檢并計算吞噬百分率和吞噬指數(shù)。

下一頁第一節(jié)白細胞檢驗的基本方法第16頁【參考值】吞噬百分率（62.77±1.38）％吞噬指數(shù)1.058±0.049【臨床評價】l.吞噬細胞吞噬功效低下主要見于各種惡性腫瘤，吞噬率常低于45％，手術(shù)切除好轉(zhuǎn)后能夠上升，故可作為腫瘤病人化療、放療、免疫治療療效參考指標。2.一些免疫功效低下病人，吞噬率降低，可作為預(yù)測感染發(fā)生概率。并觀察療效、判斷預(yù)后指標。上一頁返回第一節(jié)白細胞檢驗的基本方法第17頁第二節(jié)白細胞代謝及其產(chǎn)物檢驗

一、末端脫氧核苷酰轉(zhuǎn)移酶檢測

（一）酶標免疫細胞化學(xué)顯示法

（二）同位素檢測法

二、N-堿性磷酸酶檢測

三、酸性α-醋酸酯酶檢測第二節(jié)白細胞檢驗的基本方法第18頁【原理】末端脫氧核苷酰轉(zhuǎn)移酶（TdT）是一個DNA聚合酶，它不需要模板指導(dǎo)，就能夠催化細胞脫氧核苷酸，使其轉(zhuǎn)移到低聚核苷酸或多聚核苷酸3’-OH端，合成單鏈DNA。兔抗牛TdT抗體能和人細胞TdT產(chǎn)生交叉反應(yīng)，可采取免疫熒光技術(shù)或酶標免疫細胞化學(xué)技術(shù)，用辣根過氧化物酶-抗酶復(fù)合物在細胞涂片上定位，顯示細胞內(nèi)TdT?！窘Y(jié)果】陽性反應(yīng)為棕黃色顆粒，定位在細胞核上。TdT為早期T淋巴細胞標志，在正常情況下不成熟胸腺淋巴細胞出現(xiàn)陽性反應(yīng)，正常人外周血細胞中極少或無活性。下一頁第二節(jié)白細胞檢驗的基本方法第19頁【臨床評價】95％以上急性淋巴細胞白血病和大約30％慢性粒細胞白血病急淋變患者外用血細胞有顯著TdT活力，病情緩解后陽性率逐步減弱。在急性淋巴細胞白血病中，因為細胞表面標志不一樣,TdT活性也有改變，T-ALL，早B前體-ALL細胞陽性率很高，B-ALL細胞陰性。當(dāng)外周血中此酶活性升高，就預(yù)示著血細胞惡性變。所以TdT測定對急性白血病判別和治療都有一定意義。返回上一頁第二節(jié)白細胞檢驗的基本方法第20頁【原理】以3H或14C標識脫氧核苷三磷酸等dXTP為基質(zhì)，用低聚脫氧核苷（dA）等人工同聚物作為引物，因為酶反應(yīng)與引物重合，使基質(zhì)不溶于三氯醋酸，可用玻璃纖維盤將其吸附，從未被放射性核素標識反應(yīng)基質(zhì)中分離出反應(yīng)生成物，計測放射活性。除去不加引物所測定內(nèi)源性反應(yīng)所引發(fā)活性之后，可測算酶活性。【參考值】正常人骨髓細胞活性為dGTP摻入l×108個細胞量為（0－0.09）mmol／L。下一頁第二節(jié)白細胞檢驗的基本方法第21頁

【臨床評價】1．急性淋巴細胞白血病（B-ALL除外）可檢出較高TdT活性，慢性粒細胞性白血病急性變時，約有1／3病例在原始細胞中能檢出高活性TdT。2．惡性淋巴瘤中，原始淋巴細胞性淋巴瘤淋巴結(jié)細胞中能檢出高TdT活性。3．此酶檢驗在研究造血細胞分化與白血病關(guān)系、白血病細胞起源、白血病治療藥品選擇上都有較主要價值。上一頁第二節(jié)返回白細胞檢驗的基本方法第22頁

【原理】用P-硝基酚磷酸鹽作為細胞堿性磷酸酶總活性檢測基質(zhì)，在反應(yīng)中生成P-硝基酚，測量400nm時吸光密度，借以檢測出細胞A-Pase總活性。另外，可經(jīng)過CASP作為基質(zhì)來測定N-堿性磷酸酶活性。經(jīng)過酶反應(yīng)，生成半胱胺，這是用二硝基苯置換5-硫-硝基酚酸；檢測412nm吸光密度，借以檢測N-APase總活性。在基質(zhì)液中加人用N-丁醇：水（1：3）混合液提取粗酶液，室溫下放置60分鐘，統(tǒng)計酶反應(yīng)，求出酶反應(yīng)速度。普通情況下，N-APaseP-NPP與CASP水解速度之比（VP-NPP／VCASP）在1.1－2.0范圍內(nèi)，平均為1．8。所以，N-APase活性可用VP-NPP-1.8VCASP求出，再從VP-NPP計算N-APase百分率。下一頁第二節(jié)白細胞檢驗的基本方法第23頁【參考值】正常人粒細胞、淋巴細胞中不能檢出N-APase活性?！九R床評價】在AML及CML慢性期、CML急性變原粒細胞中，均不能檢出N-APase。但在ALL和CML急淋變時，原始淋巴細胞能檢出N-APase，且不但在非T-ALL、非B-ALL幼稚細胞，就是在T-ALL及含有B細胞標識物原始細胞中亦可檢出。所以，認為此酶是從未成熟白血病性原始淋巴細胞向T細胞、B細胞分化過程中，未成熟淋巴系統(tǒng)細胞標志酶。另外，在鼻咽癌、喉癌等被認為是病毒感染腫瘤細胞中，以及與EB病毒相關(guān)傳染性單核細胞增多癥、Burkitt淋巴瘤等，均可檢出此酶。上一頁第二節(jié)下一頁白細胞檢驗的基本方法第24頁T細胞白血病血象返回白細胞檢驗的基本方法第25頁【原理】血細胞中酸性α-醋酸酯酶（ANAE），在弱酸性（pH5.8）條件下能將基質(zhì)液中α-醋酸萘酯水解，產(chǎn)生α-萘酚。產(chǎn)生α-萘酯酚再與六偶氮副品紅偶聯(lián)形成不溶性暗紅色偶氮副品紅萘酚沉淀，定位于胞質(zhì)內(nèi)酶活性處，展現(xiàn)單一或散在紅色點塊狀或顆粒狀。上一頁下一頁第二節(jié)白細胞檢驗的基本方法第26頁【結(jié)果】酸性α-醋酸酯酶（ANAE）主要分布在T細胞和單核細胞內(nèi)；粒細胞、B細胞、紅系細胞、巨核細胞和血小板中含量較少。T細胞為ANAE陽性細胞，胞質(zhì)內(nèi)有大小不等、數(shù)量不一紫紅色顆?；虬邏K；B細胞為ANAE陰性細胞，胞質(zhì)呈黃綠色，胞質(zhì)內(nèi)無紅色斑塊；單核細胞為ANAE陽性，其胞質(zhì)內(nèi)有細小紅褐色顆粒斑塊。上一頁下一頁第二節(jié)白細胞檢驗的基本方法第27頁酸性磷酸酶染色上一頁下一頁白細胞檢驗的基本方法第28頁【臨床評價】l.有利于區(qū)分T細胞和B細胞ANAE染色在T細胞胞質(zhì)中展現(xiàn)點狀顆?；虼髩K局限陽性反應(yīng)中細胞大多數(shù)為陰性反應(yīng)，偶見稀疏彌散細小顆粒。2.判別急性白血病類型急性T細胞白血病細胞為點狀或塊狀陽性，局限分布；急性粒細胞白血病細胞ANAE染色大部分呈陰性或弱陽性反應(yīng)，顆粒增多早幼粒白血病細胞陽性反應(yīng)較強，為彌散性分布；急單呈強陽性反應(yīng)，胞質(zhì)為均勻一致彌散樣淡紅色或深紅色，無點狀顆粒。上一頁第二節(jié)返回白細胞檢驗的基本方法第29頁第三節(jié)白細胞動力學(xué)檢驗

一、氚標識脫氧胸苷測定

二、潑尼松刺激試驗

三、腎上腺素激發(fā)試驗

四、二異丙酯氟磷酸鹽標識測定

五、流式細胞儀檢測DNA合成及含量

六、粒細胞抗體檢測第三節(jié)白細胞檢驗的基本方法第30頁（一）熒光免疫法檢測【原理】受檢血清中抗體和粒細胞結(jié)合后，加標識熒光物質(zhì)羊抗人IgG血清，可使粒細胞膜顯示熒光，然后在熒光顯微鏡下觀察陽性比率和熒光強度?！窘Y(jié)果】陽性反應(yīng)表示受檢血清中存在粒細胞抗體?！九R床評價】本法敏感性很好，特異性強，臨床上常作為確診免疫性粒細胞降低癥方法。下一頁第三節(jié)白細胞檢驗的基本方法第31頁（二）化學(xué)發(fā)光法檢測【原理】用化學(xué)發(fā)光技術(shù)測定單個核細胞與抗體被覆粒細胞相互作用產(chǎn)生代謝反應(yīng)，間接測定抗粒細胞抗體?！窘Y(jié)果】用發(fā)光儀測定增強化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，用發(fā)光指數(shù)表示結(jié)果?！九R床評價】本法比間接熒光免疫法更靈敏，可用于確診免疫性粒細胞降低癥。上一頁下一頁第三節(jié)白細胞檢驗的基本方法第32頁（三）流式細胞技術(shù)檢測【原理】采取正常人“O”型抗凝血分離出單核細胞和粒細胞，經(jīng)1％多聚甲醛固定，二者再等量混合制成細胞懸液，加受檢血清孵育，再加結(jié)合異硫氰酸熒光素（FITC）和抗人F（ab）2IgG，采取流式細胞分析儀進行分析來檢測同種反應(yīng)性粒細胞抗體?！窘Y(jié)果】熒光強度與粒細胞抗體量呈線性關(guān)系，依據(jù)熒光強度大小即可得出粒細胞抗體量。【臨床評價】本法不但可對粒細胞抗體作半定量測定，還能夠反抗體類型進行分析，以確定是否存在免疫復(fù)合物。上一頁返回第三節(jié)白細胞檢驗的基本方法第33頁

【原理】分離粒細胞并在培養(yǎng)過程中加入PHA或特異性抗原刺激后，進人有絲分裂期，此時加入3H-TdR，可被細胞攝入?yún)⒓覦NA合成，其摻入量與DNA合成量以及增殖細胞數(shù)成正比，用液體閃爍計數(shù)器測定3H-TdR摻入量，即可判定粒細胞增殖水平?！緟⒖贾怠縎I＜2下一頁第三節(jié)白細胞檢驗的基本方法第34頁【臨床評價】在正常情況下，體內(nèi)粒細胞在增殖池（骨髓）、循環(huán)池（血液）及邊緣池（組織）之間處于平衡狀態(tài)，末梢血中成熟粒細胞數(shù)為（2.5－5.5）×109／L。在罹患血液等病理情況下，這種平衡狀態(tài)受到不一樣程度破壞，即可能出現(xiàn)異常。研究白血病細胞動力課時給急性白血病患者連續(xù)靜脈輸人3H-TdR，8－10天后觀察到仍有8％－10％白血病細胞未被標識，這一小部分白血病細胞增殖相當(dāng)遲緩。說明白血病細胞是一群非同時化增殖細胞。上一頁第三節(jié)返回白細胞檢驗的基本方法第35頁【原理】正常時骨髓中粒細胞貯備量大于外周血中10－15倍，潑尼松含有刺激骨髓中性粒細胞由貯備池向外周血釋放功效。假如受檢者骨髓粒細胞貯備池正常，服用潑尼松后經(jīng)過一定時間貯備池大量釋放至血流而使外周血中性粒細胞絕對值顯著增高。反之，則無此作用或作用不顯著?？砷g接測定骨髓粒細胞池粒細胞貯備功效?！緟⒖贾怠糠幒笾行粤＜毎罡呓^對值＞20×109／L（服藥后5小時為中性粒細胞上升到高峰時間）下一頁第三節(jié)白細胞檢驗的基本方法第36頁【臨床評價】潑尼松試驗可反應(yīng)骨髓中性粒細胞貯備池容量。中性粒細胞降低患者，如服用潑尼松后外周血中性粒細胞最高絕對值＞20×109／L，表明患者中性粒細胞貯備池正常，粒細胞降低可能是因為骨髓釋放障礙或其它原因所致。這對于一些骨髓受損引發(fā)粒細胞降低輕微病例有一定參考及診療價值。反之，則反應(yīng)貯備不足。上一頁第三節(jié)返回白細胞檢驗的基本方法第37頁【原理】白細胞（主要是指中性粒細胞）進入血流后，約半數(shù)進入循環(huán)池，半數(shù)粘附于血管壁成為邊緣池組成成份。此部分白細胞在外周血白細胞計數(shù)中不能得到反應(yīng)。注射腎上腺素后血管收縮，粘附于血管壁上白細胞脫落，從邊緣池進入循環(huán)池，致外用血白細胞數(shù)增高，其作用連續(xù)時間為20－30分鐘。分別在注射前和注射后20分鐘取血，計數(shù)中性粒細胞數(shù)。下一頁第三節(jié)白細胞檢驗的基本方法第38頁【參考值】粒細胞上升值普通低于（1.5－2）×109／L【臨床意義】白細胞降低者，注射腎上腺素后，如外周血白細胞能較注射前增加1倍以上或粒細胞上升值超出（1.5－2）×109／L，表示患者白細胞在血管壁粘附增多，提醒病人粒細胞分布異常，即邊緣池粒細胞增多，如無牌大，可考慮為“假性”粒細胞降低。假如增高低于上述值，則應(yīng)進行其它檢驗，深入確定白細胞降低病因。上一頁第三節(jié)返回白細胞檢驗的基本方法第39頁【原理】二異丙酯氟磷酸鹽標識（DF32P）是利用含有放射性磷二異丙酯氟磷酸作為膽堿酯酶抑制劑，與細胞上膽堿酯酶結(jié)合，即使細胞崩解，也不再與其它細胞相結(jié)合。故對測定血液循環(huán)中細胞池大小（poolsize）以及滯留時間均非常方便。用于粒細胞動力學(xué)研究時，一旦采血制成離體標識物后，即作靜脈注射。經(jīng)過一段時間再次采血。分離粒細胞，經(jīng)過追蹤觀察其放射活性改變，可測知外周血中相關(guān)粒細胞地參數(shù)。下一頁第三節(jié)白細胞檢驗的基本方法第40頁【參考值】l.粒細胞總數(shù)測定標識粒細胞半衰期間（T1/2）：4－10小時；血中滯留時間：10－14小時。全血粒細胞池（TBGP）：（35－70）x107/kg循環(huán)粒細胞池（CGP）：（20－30）xl07／kg邊緣粒細胞地（MGP）：（l5－40）x107/kg粒細胞周轉(zhuǎn)率（GTR）：（60－160）x107／（kg·d）上一頁下一頁第三節(jié)白細胞檢驗的基本方法第41頁

2．單核細胞總數(shù)測定標識單核細胞半衰期：4.5－10.0小時全血單核細胞池（TBMP）：（3．9－12.7）x107／kg循環(huán)單核細胞池（CMP）：（l．0－2．7）x107／kg邊緣單核細胞池（MMp）：（2．4－11.7）×107／k。單核細胞周轉(zhuǎn)率（MTR）：（7．2－33．6）x107／kg【臨床評價】在慢性白血病、真性紅細胞增多癥和骨髓纖維化時，TBGP及GTR顯著增加。粒細胞半壽期顯著延長。急性粒細胞白血病時有輕微延長，而再生障礙性貧血時各指數(shù)測定值均偏低。上一頁第三節(jié)返回白細胞檢驗的基本方法第42頁流式細胞儀（FCM）是對單細胞快速定量分析和分選新技術(shù)。當(dāng)被測細胞被制成單細胞懸液，經(jīng)特異性熒光染料染色后加入樣品管中，在氣體壓力推進下，流經(jīng)100μm孔道時，細胞排成單列，逐一勻速經(jīng)過激光束，被熒光染料染色細胞受到強烈激光照射后發(fā)出熒光，同時產(chǎn)生散射光。熒光被轉(zhuǎn)化為電子信息，在多道脈沖高度分析儀熒光屏上，以一維組方圖或二維點陣圖及數(shù)據(jù)表或三維圖形顯示，計算機快速而準確地將所測數(shù)據(jù)計算出來，結(jié)合多參數(shù)分析，從而實現(xiàn)了細胞定量分析。下一頁第三節(jié)白細胞檢驗的基本方法第43頁（一）DNA合成檢測【原理】與氚-胸腺嘧啶標識法原理一樣，用5-溴脫氧尿嘧啶摻入S期細胞DNA，然后用抗5-BrdU抗原特異性抗體，經(jīng)過免疫熒光技術(shù)，用FCM準確測定DNA合成速率。【結(jié)果】快速提供相關(guān)細胞周期各時相分布動態(tài)參數(shù)，間接了解DNA合成情況。【臨床評價】可直接用于白血病病人體內(nèi)細胞增殖動態(tài)研究，據(jù)此按化療藥品對細胞動力學(xué)干擾理論設(shè)計最正確治療方案，靜止期腫瘤細胞對化療不敏感而增殖期（SG2M）敏感，可將GO期細胞分化誘導(dǎo)進人SG2M期，再給予細胞殺傷藥品，以到達最正確殺傷瘤細胞效果。上一頁下一頁第三節(jié)白細胞檢驗的基本方法第44頁（二）DNA含量檢測【原理】碘化丙啶（ProPidiumiodide，PI）熒光染料可嵌入到雙鏈DNA和RNA堿基對中與之結(jié)合。用PI染DNA后能在指定波長光波激發(fā)下產(chǎn)生紅色熒光，利用FCM可將細胞按不一樣熒光強度即DNA含量分類并繪出DNA直方圖。細胞在增殖周期不一樣階段，其DNA含量是不一樣，從DNA直方圖中能夠得出細胞周期不一樣階段細胞百分數(shù)。上一頁下一頁第三節(jié)白細胞檢驗的基本方法第45頁

【結(jié)果】l.細胞DNA含量V1細胞中DNA含量多少用DNA指數(shù)（DI）來表示。依據(jù)DI值來判斷細胞DNA倍體方法是：以正常同源組織細胞作為樣品2CDNA含量細胞內(nèi)參標準。DNA倍體判斷標準為DI＝0.1±2CV。二倍體：DI＝1.0±2CV（直方圖上僅1個G0／G1峰）。非整倍體（aneuplid，AN）：DI值＜0.91，＞1.10。DNA指數(shù)（DI）計算公式:上一頁下一頁樣品G0／G1期DNA量平均數(shù)÷標準二倍體DNA量平均數(shù)第三節(jié)白細胞檢驗的基本方法第46頁2.細胞周期各時相細胞比率包含：G0／G1期、5期和G2M期，計算各時相細胞百分比。其中S期細胞百分比也叫SPF（S-Phaseraction）。

細胞增殖指數(shù)（proliferousindex，PI）（％）＝上一頁下一頁SPF（%）＝［S（G0／G1＋S＋G2M）］x100％［（S＋G2M）÷（G0／G1．＋S＋G2M）］x100％第三節(jié)白細胞檢驗的基本方法第47頁【臨床評價】1.DNA非整倍體細胞是腫瘤特異性標志，從FCMDNA圖形分析，可得知血細胞和骨髓細胞DNA相對含量，從而了解白血病細胞信體水平及增殖活動。2.以縱坐標表示細胞數(shù)，橫坐標表示DNA相對含量，可繪出DNA不一樣含量血細胞分布曲線，得到G期、S期和G2＋M期細胞百分比，尤其對白血病病人血細胞動力學(xué)了解更為主要。急性白血病患者在來經(jīng)治療時其骨髓細胞（大多數(shù)為白血病細胞）S％（S期細胞DNA百分含量）顯著低于正常骨髓。上一頁下一頁第三節(jié)白細胞檢驗的基本方法第48頁

3.用流式細胞儀對白血病化療后監(jiān)測藥效是當(dāng)前較為靈敏方法，對比化療后細胞內(nèi)DNA含量表化，可快速得出是否敏感結(jié)論，從而指導(dǎo)臨床對初治或復(fù)發(fā)白血病病人選取和及時更換化療方案。4.白血病病人外周血白血病細胞多處于G0或G1期。S期細胞百分率（S％）高者對慣用周期特異性藥品較為敏感，患者完全緩解率高，但輕易復(fù)發(fā)。S％低者對化療不敏感，但一旦緩解，不易復(fù)發(fā)。依據(jù)增殖期細胞對周期特異藥品比靜止期細胞為敏感，應(yīng)用G-CSF來復(fù)蘇G0期白血病細胞，有利于提升化療效果。上一頁第三節(jié)返回白細胞檢驗的基本方法第49頁第四節(jié)白細胞免疫標識檢測

一、熒光顯微鏡計數(shù)檢測

二、流式細胞儀計數(shù)檢測

三、堿性磷酸酶-抗堿性磷酸酶橋聯(lián)酶標法檢測

四、生物素-親合素酶標法檢測第四節(jié)白細胞檢驗的基本方法第50頁

【原理】將抗體標識上熒光素制成熒光抗體，在一定條件下與細胞表面分化抗原簇相互作用，洗去游離熒光抗體后，結(jié)合于細胞表面熒光素在一定波長激發(fā)光照射下，發(fā)出一定波長熒光，借此用熒光顯微鏡就可檢測到與熒光抗體特異結(jié)合表面標志。以鼠抗羊IgG作陰性對照，標本中有顯著熒光現(xiàn)象就證實有對應(yīng)抗原存在，借此對標本中抗原作判定和定位。依據(jù)標識物和反應(yīng)程序不一樣分為：直接熒光法，間接熒光法和雙標識法，

下一頁第四節(jié)白細胞檢驗的基本方法第51頁【結(jié)果】觀察標本特異性熒光強度普通用＋號表示，－表示無熒光；±為極弱可疑熒光；＋為熒光較弱但清楚可見；2＋為熒光明亮；3＋－4＋為熒光閃亮