DB44T 1926-2016合成基因 質量要求

分類號案卷號件號2016-12-02發(fā)布2017-03-02實施廣東省質量技術監(jiān)督局I合成基因質量要求260nm處光密度與280nm處光密度的比值。123.2縮略語EB(EthidiumBromide)——溴化乙啶DNA(Deoxyribonucleicacid)——脫氧核糖核酸表1產(chǎn)品質量等級劃分等級優(yōu)符合4.2、4.3、4.4要求不符合4.4要求4.2.1合成的DNA純度要求示為合成的DNA純度要求。表2DNA純度判斷OD/OD?o=1.8～2.0;DzoDzoDNA總量需大于或等于定制需求。合成DNA完整性判斷，采用5.2所規(guī)定的檢測方法進行。根據(jù)產(chǎn)品形式上的差異，需檢測的合成DNA產(chǎn)品應分為兩類，相關要求如下： 合成的DNA片段：要求電泳圖中條帶單一，無其他雜質污染； 包含有合成DNA產(chǎn)品的質粒：要求電泳圖中應存在目標條帶且條帶明亮，參考圖譜參見附錄A。質粒酶切檢驗后的電泳圖譜中，依據(jù)DNAMarker指示判斷，出現(xiàn)與合成的DNA產(chǎn)品大小一致的條帶，可參見附錄A中質粒酶切電泳圖。合成DNA序列與定制序列匹配度應達到100%。5質量檢測試驗方法5.1合成DNA的純度和總量檢測5.1.1合成DNA的純度檢測須符合GB/T19495.3要求，為保證OD260測量值有效性，其測量值范圍應為0.05～1.0。如果不在此范圍，應對合成DNA進行適當?shù)南♂尰驖饪s。365.1.3DNA總量計算方法：按照式(1)計算原溶液中DNA的濃度，按照式(2)計算原溶液中DNA總N—樣品稀釋倍數(shù)；F—轉換因子，在標準厚度為1cm的比色杯中，雙鏈DNA,當ODw=1時，測得的DNA濃度相當于50m—合成的DNA產(chǎn)品原溶液總量，單位微克(μg);c—原溶液的DNA濃度，單位為微克每毫升(μg/ml);v—原溶液體積，單位為毫升(ml)。5.2合成DNA完整性檢測配制相應濃度的凝膠，對合成DNA產(chǎn)品進行瓊脂糖凝膠電泳(參見附錄B),并使用凝膠成像系統(tǒng)對合成DNA產(chǎn)品進行測序分析，得到合成DNA產(chǎn)品的序列信息，并與定制序列進行序列比對，形成質粒DNA或合成的DNA片段應于-20℃貯存，菌液加入甘油(終濃度為15-25%)后應于-80℃貯存。4 58A.1質粒DNA電泳圖譜質粒DNA電泳圖譜(1%瓊脂糖凝膠)見圖A.1:圖A.1質粒DNA電泳圖譜(1%瓊脂糖凝膠)A.2合成的DNA酶切電泳圖譜合成的DNA酶切電泳圖譜(1%瓊脂糖凝膠電泳)見圖A.2:人工合成的DNA2027圖A.2合成的DNA酶切電泳圖譜(1%瓊脂糖凝膠電泳)6人工合成的DNA注：人工合成的DNA長約6.1kb,載體長約2.1kb。(資料性附錄)瓊脂糖凝膠濃度/(%)可分辨的線性DNA大小范圍/(kb)89(資料性附錄)合成的DNA檢測報告可按如下格式進行編制：合成的DNA檢測報告檢測機構：聯(lián)系方式：檢驗人：檢測時間：克隆載體：檢測項目結果測序電泳圖譜中含有單一的合成D