【黃連中黃連素的檢測方案設計4200字（論文）】

黃連中黃連素的檢測方案設計TOC\o"1-3"\h\u第一章設計背景 11.1黃連素概述 11.2現(xiàn)有的檢測方法概述 11.2.1紫外可見分光光度法 11.2.2高效液相色譜法 11.2.4薄層色譜法 21.2.5毛細管電泳法 21.3高效液相色譜法檢測黃連素的原理及設計思路 21.3.1高效液相色譜法檢測黃連素的原理 21.3.2高效液相色譜法檢測黃連素的設計思路 2第二章檢測方案設計 32.1設計任務 32.2設計規(guī)范 32.3試劑與儀器 32.3.1試劑 32.3.2儀器 32.4溶液制備 42.4.1標準溶液制備 42.4.2樣品溶液制備 42.5測定條件的選擇 4第三章設計方案的方法學驗證 53.1精密度 53.2穩(wěn)定性 63.3重復性 6第四章設計總結 6參考文獻 7致謝 8第一章設計背景1.1黃連素概述黃連為毛茛科植物黃連、三角葉黃連、云連的干燥根及根莖。黃連是一種中藥材，其主要成分為小檗堿、黃連堿、木蘭堿等生物堿。四川省是中國黃連的主要產(chǎn)區(qū)，黃連具有[]，[]瀉火解毒、清熱燥濕的功效，臨床用于治療嘔吐、黃疸、心火上亢所致心煩失眠、目赤腫痛、牙痛、口瘡；可防治胃炎、胃潰瘍、腳濕氣、濕疹。藥理研究表明，黃連對很多種病毒與病菌有著明顯的抑菌作用，但是它是味苦性寒藥物，只有患者出現(xiàn)上述癥狀之后才能夠使用。黃連并不是所有人都能夠使用。黃連屬大苦大寒，長期服用對脾胃不好。老人與小孩、有胃病患者、貧血者，不宜服用黃連。當今市場中，黃連的需求量越來越大，并且黃連的實用領域廣，在我國四川種植了大量的黃連，但由于缺乏有效的推廣和銷售渠道，該地區(qū)種植的黃連每年有大量的滯銷，嚴重影響了農(nóng)民的經(jīng)濟收益和生產(chǎn)積極性。黃連是我國應用很久的中藥材，能給人們帶來豐厚的利益，也深受人們喜愛，并且四川多地區(qū)處于貧困地區(qū)。黃連種植成本低，但是出產(chǎn)率少，造成了供應量小于需求量 。黃連種植積極性沒帶動起來，近幾年黃連價格上升空間大等，不僅可以帶動人民經(jīng)濟的發(fā)展，還可以帶動人們的積極性。黃連有著非常大的研發(fā)潛能，能創(chuàng)造出豐厚的效益，可以創(chuàng)造可觀的經(jīng)濟效益和社會效益。1.2現(xiàn)有的檢測方法概述1.2.1紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法是檢測黃連素的常用方法之一，曾照宏[3]等人采用紫外分光光度法測定鹽酸黃連素片（BH）的含量，以343nm作為測定波長，BH濃度在0～10ug/mL范圍內(nèi)，線性關系良好，r=0.9998（n=6），回歸方程為y=0.063x-0.00048。平均回收率為99.3%。紫外可見分光光度法操作簡單方便，節(jié)約成本，有一定專屬性，應用范圍廣，使用頻率高。1.2.2高效液相色譜法孫艷濤等人[4]采用氨基色譜柱：lnertsilNH25ug4.6×25omm,流動相為乙腈、無水乙醇、2%磷酸溶液、呋喃唑酮和鹽酸小檗堿檢測波長分別為365nm和350nm.苦參堿含量測定采用十八烷基硅烷鍵合硅膠柱PromosilC185um4.6×250mm.流動相為甲醇：磷酸鹽緩沖溶液（7：93）；檢測波長為220nm流速為1.0mL·min-1;柱溫為30℃.實驗結果表明分析時間短、色譜分離良好、分離度和重復性好、呋喃唑酮、鹽酸小檗堿、苦參堿和氧化苦參堿在各自的質量范圍內(nèi)對色譜峰面積呈現(xiàn)良好的線性關系。高效液相色譜法準確、靈敏、重復性好。1.2.3反相高效液相色譜法劉有平[5]等人采用shitn-packCLC-ODS(4.5mm×150mm)色譜柱，以H3PO4(0.01mol/L):MeOH(AR)(65:35)為流動相，流速為1.0mL/min,檢測波長為279nm。結果：線性范圍為3～100ug/mL，回歸系數(shù)為r=0.9999(n=6),測得鹽酸黃連素的回收率為99.4%。1.2.4薄層色譜法盛曉靜都等人[6]采用薄層色譜法對比以不同溶劑提取或溶解所得供試品溶液、對照品溶液及對照藥材溶液的效果.結果:以鹽酸-乙醇(1∶100)的混合溶液作為對照藥材提取和對照品溶解的溶劑,可以快速、準確地定性。薄層色譜法準確可靠、實際操作易行。1.2.5毛細管電泳法凌寧生等[7]利用毛細管區(qū)帶電泳對金降糖片進行分離分析，采用HPCE法快速地對金降糖片中3種生物堿進行分析并測定其中鹽酸小檗堿的含量。采用未涂層石英毛細管（50cm×100um），以40mmol/L,磷酸氫二鈉一甲醇（65：35）為緩沖液，254nm為測定波長，進樣壓力0.5Psi，5s,分離電壓14KV，柱溫25℃。結果在12min內(nèi)測定鹽酸小檗堿，鹽酸小檗堿平均含量為1.52%(g/g),在0.01～0.20mg/mL范圍內(nèi)線性關系良好（r=0.9999),平均回收率為100.9%。毛細管電泳法分辨率和靈敏度高、快速、分析耗費低。紫外可見分光光度法操作簡單方便，節(jié)約成本，有一定專屬性，應用范圍廣，使用頻率高。高效液相色譜法準確、靈敏、重復性好。反相高效液相色譜法簡便、準確、可靠、適用于常規(guī)分析。薄層色譜法準確可靠、實際操作易行。毛細管電泳法分辨率和靈敏度高、快速、分析耗費低?；谏厦鎺追N方法我選用高效液相色譜法，因為高效液相色譜法具有分離效能高、分析速度快、靈敏度高、準確、重現(xiàn)性好等優(yōu)點。1.3高效液相色譜法檢測黃連素的原理及設計思路1.3.1高效液相色譜法檢測黃連素的原理利用高效液相色譜儀中的高壓輸液泵將黃連素樣品溶液泵入到色譜柱中，以乙腈-1%HAC（39:61）流動相，黃連素流經(jīng)色譜柱進入檢測系統(tǒng)，確定適宜的檢測波長，進行樣品的定性、定量分析，最后進入數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，依照峰的保留時間，峰寬或者峰面積結合外標法進行黃連素的定量分析即含量測定。1.3.2高效液相色譜法檢測黃連素的設計思路 黃連素在進樣前需要進行一系列預處理：超聲提取、過濾等，選擇合適的溶劑并按照藥典中記載的標準、樣品溶液的配制方法配制本實驗所需的溶液。試驗出測定黃連素含量的最適流動相，吸收波長、柱溫等一些色譜條件并確立相應的色譜條件。再進行方法學驗證（精密度、穩(wěn)定性、重復性）；對本方案是否合理進行相關驗證，隨后即將樣品溶液與標準溶液分別進樣分析，記錄數(shù)據(jù)，在計算出黃連素的含量，最后總結本設計方案[8]。第二章檢測方案設計2.1設計任務查找關于高效液相色譜法檢測黃連素相關資料，了解黃連中黃連素檢測設計規(guī)范與標準以及[9]，制備黃連素對照品以及藥材供試品溶液，用高效液相色譜法測定，然后進行樣品測定并對數(shù)據(jù)進行處理得出含量；測定條件選擇進行分析以及對實驗的穩(wěn)定性、精密度、重復性、進行說明，繪制檢測方案流程圖。2.2設計規(guī)范《中華人民共和國藥典》（2020版）《中華人民共和國藥品管理法》（2015年修訂）《中藥材生產(chǎn)質量規(guī)范》《化學試劑標準大全》GB/T-608-1988《標準溶液及雜質標準溶液的配制》GB-601-2008《實驗室儀器及設備安全規(guī)范》GB／T

32704—20162.3試劑與儀器2.3.1試劑表1主要試劑一覽表試劑名稱規(guī)格生產(chǎn)廠家黃連飲片株洲市千金大藥房黃連素標準品分析純試劑哈爾濱化工化學試劑廠甲醇色譜純試劑天津科密歐化學試劑有限公司乙腈色譜純試劑無錫市亞泰聯(lián)合化工有限公司丙酮分析純試劑山東嘉威化工有限公司十八烷基硅烷鍵合硅分析純試劑天津市大茂化學試劑廠2.3.2儀器儀器名稱型號生產(chǎn)廠家電子分析天平AEY-230沈陽龍騰電子公司高效液相色譜儀1290渦旋混合器XW-80A冷凍離心機TGL16M美國Agilent上海滬西分析儀器廠長沙英泰儀器有限公司表2主要儀器一覽表2.4溶液制備2.4.1標準溶液制備密稱取對照品鹽酸小檗堿16．14mg，置1—100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為標準對照溶液。2.4.2樣品溶液制備黃連，研細，取細粉，精密稱取1g置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25IIll，精密稱重，超聲(100W，40kHz)20rain，密閉，放置1h后繼續(xù)超聲(100W，40kHz)30min，放置至室溫，補足減失的重量，搖勻，離心，取上清液，經(jīng)微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得黃連樣品溶液。2.5色譜條件色譜柱：DiamonsilTMCl8(250mmx4．6mm，5um)；流動相為二元梯度系統(tǒng)，其中溶劑A為乙腈，梯度洗脫程序見表1；流速：1．0ml·min～；檢測波長：238nm；柱溫：30qc；進樣量：10ul。表1梯度洗脫程序時間(min)流動相A(%)0-101010-15.510-+11.515.5~2011.520~20.511.5-+2420.5~50242.5.2標準曲線用移液管分別準確移取1mg/mL黃連素的標準溶液0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL放置于100mL容量瓶中，加甲醇溶液稀釋至刻度線，搖勻；最終得到溶液。2.6線性關系分析分別精密量取上述對照品溶液5.0，5．0，5.0，3.0，5.0m1分別置10，25，50，50，100ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制得混合對照品系列濃度溶液，依次精密吸取上述溶液各lul，按“2.1”項下色譜條件進行測定，以色譜峰面積(Y)對濃度(X，ul，m-1“)作線性回歸，結果見表2。結果表明，這黃連素成分峰面積與濃度均呈良好的線性關系。

第三章設計方案的方法驗證3.1精密度實驗取對照品溶液在上述色譜條件下重復進樣6次，記錄色譜圖，計算得鹽酸小檗堿的峰面積RSD為0．5％(n=6)，表明儀器精密度良好。表2回歸方程和線性范圍組分回歸方程r線性范圍鹽酸小檗堿Y=3.58*104X-4.68*1040.99987.92`79.23.2穩(wěn)定性實驗取同一供試品溶液，在室溫下避光密封放置0，2，4，8，12h后分別測定峰面積，計算得鹽酸小檗堿峰面積的RSD為0．6％(n=5)，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。3.3重復性試驗取同一批號供試品6份(批號：202101003)，按供試品溶液的制備方法制備，在規(guī)定色譜條件進樣，測定峰面積，分別計算各成分含量及RSD。結果得鹽酸小檗堿的平均含量為1．58mg·g-1，RSD為00．6％(n=6)，表明方法重復性較好。3.4樣品含量確定取3批黃連樣品，制備溶液，按“2．1”項下色譜條件進樣分析，用外標法計算4個組分含量，結果見表3。表3樣品含量測定結果(mg.g-1,n=3)批號鹽酸小檗堿2021010031.582021050121.572021060011.6

第四章設計討論4.1檢測波長的確定取鹽酸小檗堿對照品，用甲醇溶解，在UV-240分光光度計，200～400am處掃描，最大吸收229nm，故選擇229rim為測定波長。4.2流動相的選擇由于本試驗采用梯度洗脫方法，分別考察了甲醇一水、乙腈一水、這2流動相體系，并參照有關文獻進行優(yōu)化，最終選擇了峰形與分離效果均較好的乙腈溶液系統(tǒng)。采用較為先進的高效液相色譜法,方法簡便、可靠,重現(xiàn)性好。本方法的最低檢測限量足以達到該制劑的含量測定要求,可為生產(chǎn)廠家及醫(yī)院實驗室進行黃連的質量控制及臨床療效的探討提供實驗方法。參考文獻[1]蓋曉紅,劉素香,任濤,劉毅,田成旺.黃連的化學成分及藥理作用研究進展[J].中草藥,2018,49(20):4919-4927.[2]董青青，章怡祎，叢億蕾，陳偉.黃連解毒湯治療膿毒癥的網(wǎng)絡藥理學研究[J].世界中醫(yī)藥，（）:1-15.[3]曾照宏,戴敏,鄭青山,丁學庭.紫外分光光度法測定鹽酸黃連素片的含量[J].皖南醫(yī)學院學報,1997(01):98-99.[4]孫艷濤,孫鑫,邱笑陽,逯洋,蘇斌.HPLC法測定呋喃苦參黃連素片[J].吉林師范大學學報(自然科學版),2018,v.39;No.142(01):91-96.DOI:10.16