微生物限度檢查操作規(guī)程2015

微生物限度檢查操作規(guī)程.目的建立微生物限度檢查操作規(guī)程，確保檢查結果準確、可靠。.范圍本公司純化水、產品的初始污染菌檢查.職責質量部QC.依據(jù)2015版《中國藥典》通則1105GB/T19973.1-2005/ISO11737-1:1995《醫(yī)療器械的滅菌微生物學方法第1部分：產品上微生物總數(shù)的估計》GB15980—1995《一次性使用醫(yī)療用品衛(wèi)生標準》GB15979—2002《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準》.內容微生物限度檢查環(huán)境微生物限度檢查應在不低于10000級背景下，局部100級的環(huán)境（同等級別的超凈工作臺）下進行。檢驗全過程必須嚴格遵守無菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。對微生物限度檢查實驗室及超凈工作臺環(huán)境進行定期監(jiān)測。培養(yǎng)基、稀釋液、緩沖液胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基：市售干粉培養(yǎng)基沙式葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基：市售干粉培養(yǎng)基R2A培養(yǎng)基：市售干粉培養(yǎng)基PH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液，市售培養(yǎng)基干粉。0.9%無菌氯化鈉溶液。培養(yǎng)基適用性檢查菌種：培養(yǎng)基靈敏度檢查所用的菌株傳代數(shù)不得超過5代（從菌種存中心獲得的干菌種第0代），并采用適宜的菌種保藏技術進行保存，以證試驗菌株的生物學特性。金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]銅綠假單胞菌[CMCC(B)10104]枯草芽抱桿菌[CMCC(B)63501]白色念珠菌[CMCC(F)98001]黑曲霉[CMCC(F)98003]菌液制備：接種金色葡萄球菌、銅綠假胞菌、枯草芽抱桿菌的培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上，30?35℃培養(yǎng)18?24小時；接種白色念珠菌的培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上，20?25℃培養(yǎng)2-3天，上述培養(yǎng)后的新鮮培養(yǎng)物用PH7.0無菌化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌化鈉溶液制成每lml菌數(shù)小于100cfu(菌落形成)的菌懸液。接種黑曲霉的培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂面培養(yǎng)基上，20?25℃培養(yǎng)5?7天，加人3?5ml0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0無菌化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液，將抱子洗脫。然后，采用適宜的方法吸出抱子懸液至無菌試管內，用0.05%(ml/ml^W梨醋80的pH7.0無菌化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液制成每lml抱子數(shù)量小于100cfu的抱子懸液。菌懸液若在室溫下放置，應在2小時內使用；若保存在2?8。。在24h內使用。黑曲霉抱子懸液存在2?8℃,在驗證過的貯存期內用。陰性對照：陰性對照應無菌生長。若陰性對照有菌生長，應進行偏差調查。5.3.4.培養(yǎng)基適用性檢查：接種不大于100cfu的菌液至胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上，胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板置30?35℃,培養(yǎng)不超過3天；沙氏葡萄糖培養(yǎng)基平板置20?25℃,培養(yǎng)不超過5天。每一試驗菌平行做2皿。同時，用相應的對照培養(yǎng)基代替被檢培養(yǎng)基進行上述試驗。被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值應在0.5?2范圍內，且菌落形態(tài)大小應與對照培養(yǎng)基上的一致。R2A培養(yǎng)基適用性檢查同胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基。試驗菌種為銅綠假單胞菌和枯草芽抱桿菌。供試液制備供試品檢查平皿法：平皿法包括傾注法和涂布法。每種培養(yǎng)基至少制備2個平皿。傾注法:取制備的供試液1ml，置直徑90mm的無菌平皿中，注入20?25ml溫度在50?55℃的胰酪大豆胨瓊脂或沙式葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，置規(guī)定溫度下，倒置培養(yǎng)。涂布法：取20?25ml溫度在50?55℃的胰酪大豆胨瓊脂或沙式葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，注入直徑90mm的無菌平皿中，凝固，制成平皿，去制備的供試液少于0.1ml，均勻涂布與平板上，置規(guī)定溫度下，倒置培養(yǎng)。薄膜過濾法：薄膜過濾法所才用的濾膜孔徑應不大于0.45um，直徑一般為50mm。供試品及其溶劑應不影響濾膜材質對微生物的截留。濾器及濾膜使用前應采用適宜的方法滅菌。使用時，應保證濾膜在過濾前后的完整性。水溶性供試液過濾前先將少量的沖洗液過濾以潤濕濾膜。為發(fā)揮濾膜的最大過濾效率，應注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個濾膜表面。供試液經(jīng)薄膜過濾后，若需要沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為100ml?？倹_洗量不超過1000ml，以免濾膜上的微生物受損傷。取相當于1g、1ml或10cm2供試品的供試液，立即過濾，沖洗，沖洗后取出濾膜，若測定需氧菌總數(shù)，轉移濾膜菌面朝上貼于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板上；若測定霉菌和酵母菌總數(shù)，轉移濾膜菌面朝上貼于沙式葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上，置規(guī)定溫度下培養(yǎng)。培養(yǎng)和計數(shù)：除另有規(guī)定外，胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板在30?35℃培養(yǎng)3~5天，沙式葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板在20?25℃培養(yǎng)5-7天，觀察菌落生長情況，點計平板上所有菌落數(shù)，計數(shù)并報告。菌落蔓延生長成片的平板不宜計數(shù)。點計菌落數(shù)后，計算各稀釋級供試液的平均菌落數(shù)，按菌落數(shù)報告規(guī)則報告菌數(shù)。若同稀釋級兩個平板的平均菌落數(shù)不小于15,則兩個平板的菌落數(shù)不能相差1倍或以上。濾膜的培養(yǎng)及計數(shù)同平皿法，每張濾膜上的菌落數(shù)應不超過100cfu。菌數(shù)報告規(guī)則：需氧菌總數(shù)測定宜選取平均菌落數(shù)小于300cfu的稀釋級；霉菌、酵母菌總數(shù)測定宜選取平均菌落數(shù)小于100cfu的稀釋級。取最高的平均菌落數(shù)，計算1g、1ml或10cm2供試品所含的微生物數(shù)，去兩位有效數(shù)字報告。薄膜過濾法的菌數(shù)報告，以相當于1g、1ml或10cm2供試品的菌落數(shù)報告菌數(shù)。若各稀釋級的平板或濾膜上，無菌生長，以＜1報告菌數(shù)，或＜1乘以最大稀釋倍數(shù)的值報告菌數(shù)。純化水微生物限度檢查:按薄膜過濾法檢查，轉移濾膜菌面朝上貼于R2A瓊脂培養(yǎng)基平板，置30?35℃培養(yǎng)不少于5天。計數(shù)，報告。結果判斷：若供試品的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)的檢驗結果均符合該品種項下的規(guī)定，判供試品符合規(guī)定；若有其中一項不符合該品種下的規(guī)定，判供試品不符合規(guī)定。需氧菌總數(shù)是指胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基或R2A瓊脂培養(yǎng)基上生長的總菌落數(shù)（包括真菌菌落數(shù)）；霉菌和酵母菌總數(shù)是指沙式葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長的總菌落數(shù)（包括細菌菌落數(shù)）。若因沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長的細菌使霉菌和酵母菌的計數(shù)結果不符合微生物限度要求，可使用含抗生素的沙式葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基或選擇性培養(yǎng)基進行霉菌和酵母菌總數(shù)測定。選擇性培養(yǎng)基使用前因進行培養(yǎng)基適用性檢查。.相關文件《潔凈區(qū)塵埃粒子監(jiān)測操作規(guī)程》《潔凈區(qū)沉降菌監(jiān)測操作規(guī)程》《實驗室潔凈區(qū)清潔、消毒操作規(guī)程》《潔凈區(qū)環(huán)境監(jiān)測管理規(guī)程》《SPX-150型生化培養(yǎng)箱使用、維護操作規(guī)程》《MJK-150型霉菌培養(yǎng)箱使用、維護操作規(guī)程》《SW-CJ系列潔凈工作臺使用、維護規(guī)程》《陽性菌種管理規(guī)程》.記錄《微生物限度檢查原始記錄》

微生物限度檢查原始記錄檢驗編號檢品品名檢品來源批號規(guī)格數(shù)量檢驗日期年月日報告日期年月日檢驗依據(jù)微生物限度檢查操作規(guī)程檢查結果平皿：DR2A瓊脂培養(yǎng)基制備批號： 口胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基制備批號： □沙式葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基制備批號： 稀釋液、沖洗液：口0.1%蛋白胨水溶液 DPH7。氯化鈉-蛋白胨緩沖液口0.9%無菌氯化鈉溶液□其他 配制批號： 材料：微孔濾膜規(guī)格 設備：口乂」乂-150霉菌培養(yǎng)箱（20?25℃） 儀器編號： □SPX-150生化培養(yǎng)箱（30?35℃） 儀器編號： 供試液制備：檢查：取供試液—ml,采用薄膜過濾法，依法檢查。凈化工作臺環(huán)境監(jiān)測 溫度： ℃濕度： % 沉降菌標準（培養(yǎng)溫度：30?35℃）：<1cfu/皿碟號培養(yǎng)時間123結果判斷培養(yǎng)48h菌落數(shù)弋別、^結果\時間需氧菌計數(shù)（cfu/皿）霉菌和酵母菌計數(shù)（cfu/皿）平行1平行2陰性平行1平行2陰性第一天第二天第三天第四天第五天第六天第七天結果注：逐日觀察計數(shù)，陰性無菌生長用“-”表示微生物限度檢查結果： 口符合規(guī)定 口不符合規(guī)定檢驗人/日期： 復核人/日期:

微生物限度檢查原始記錄檢驗編號檢品品名檢品來源批號規(guī)格數(shù)量檢驗日期年月日報告日期年月日檢驗依據(jù)微生物限度檢查操作規(guī)程檢查結果培養(yǎng)基：DR2A瓊脂培養(yǎng)基配制批號： 口胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基配制批號： □沙式葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基配制批號： 稀釋液、沖洗液：口0.1%蛋白胨水溶液DPH7。氯化鈉-蛋白胨緩沖液口0.9%無菌氯化鈉溶液□其他 配制批號： 設備：口乂」乂-150霉菌培養(yǎng)箱（20?25℃） 儀器編號： □SPX-150生化培養(yǎng)箱（30?35℃） 儀器編號： 供試液制備：檢查：取供試液—ml,采用平皿法，依法檢查。凈化工作臺環(huán)境監(jiān)測 溫度： ℃濕度： % 沉降