腎上腺素自氧化法測大蒜中的SOD酶

腎上腺素自氧化法測大蒜中SOD酶活性一、 實驗原理超氧化物歧化酶（superoxidedismutase,SOD）在生物體內(nèi)廣泛分布，能催化超氧陰離子自由基（02.-）發(fā)生歧化反應(yīng)，從而清除氧自由基，起到防御氧毒，抗輻射，抗衰老等作用。腎上腺素也是多酚衍生物，在堿性條件下會自動氧化，其中涉及到02-?的鏈式反應(yīng)，可被SOD抑制，腎上腺素經(jīng)多步轉(zhuǎn)化為腎上腺素紅。腎上腺素紅有480nm和320nm兩個吸收峰。325nm處的吸收更能靈敏地反映自氧化程度。當(dāng)pH>10.2，線性范圍縮短，pH值越高線性范圍越??；pH<10.2時，吸光度值極小，易帶入誤差。pH10.2維持著良好的線性段，而且斜率適中，可作為實際應(yīng)用中的最儉H。溫度在30r左右，線性關(guān)系較好。隨著腎上腺素濃度的增加，自氧化速率增大，線性范圍增加，當(dāng)腎上腺素濃度為0.4mmol/L使每1min自氧化速率達0.070，提高了靈敏度、減少了誤差。二、 實驗材料、藥品及用具1實驗材料、藥品大蒜的根、莖、葉、pH7.5質(zhì)量濃度0.05mol/L的磷酸鈉緩沖液、丙酮、0.4mmol/L腎上腺素溶液、50mmol/LpH為10.2的Na2CO3-NaHCO3緩沖液內(nèi)含1*10-4M乙二胺四乙酸二鈉、雙蒸水、100mmol/L鹽酸液，內(nèi)含1*10-4M乙二胺四乙酸二鈉2、實驗器具研缽、WFZUV-2100型紫外可見分光光度計、501A型超級數(shù)顯恒溫水浴、PHS-3C精密pH計三、 實驗步驟1、配置溶液：配置pH7.5質(zhì)量濃度0.05mol/L的磷酸鈉緩沖液、50mmol/LpH為10.2的Na2CO3-NaHCO3緩沖液及0.4mmol/L腎上腺素溶液（62:38）；2大蒜SOD粗提液的制備。將新鮮大蒜研碎加入pH7.5質(zhì)量濃度0.05mol/L的磷酸鈉緩沖液于4°。條件下3500轉(zhuǎn)/min離心15min,取上清液，加入-20°C預(yù)冷丙酮，取沉淀物溶于少量重蒸水中，用pH7.5、質(zhì)量濃度25mmol/L的磷酸鈉透析即得酶的粗提液。3將配置好的50mmol/LpH為10.2的Na2CO3-NaHCO3緩沖液放到30C±0.5C水浴中保溫20min；4、按照下表做實驗組合對照組腎上腺素自氧化法加樣表

時間minminminminXinminminminmin10minmn12min13min14min實驗組對照八、、組加樣管號對照組實驗組50mmol/LpH為10.2加樣管號對照組實驗組50mmol/LpH為10.2的Na2CO3-NaHCO3緩沖液內(nèi)含1*10-4M乙二胺四乙酸二鈉8.3ml8.3ml0.4mmol/L腎上腺素溶液內(nèi)含1*10-4M乙二胺四乙酸二鈉0.3ml/雙蒸水0.4ml0.4ml100mmol/L鹽酸液/0.3ml總體積9ml9ml5將配置好的溶液分別放到325nm的分光光度計下測其吸光值，每隔1min記一次吸光值，連續(xù)讀取14分鐘；（試驗中保持溶液溫度在30oC）6、繪制時間一OD曲線圖，并分析結(jié)果四、實驗結(jié)果分析1、大蒜莖部SOD活性測定數(shù)據(jù)統(tǒng)計表時間1min2min3min4min5min6min7min8min9min10min11min12min13min14min實驗

時間minminminminminminminminmin10min11min12min13min14min實驗組對照八、、組參考文獻：【1】葛喜華，超氧化物歧化酶的腎上腺素自氧化紫外測定法，生物化學(xué)與生物物理進展.1992.19(3)：228【2】王雪峰1,沈頌東1,連玉官1,楊龍壽2,陳天2,張錦云2,大蒜超氧化物歧化酶的分離純化及其性質(zhì)的研究，安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2001,29(3):408-409【3】袁勤生，王志友，翁清清，超氧化物歧化酶的活力測定---腎上腺素自氧化法，華東化工學(xué)院【4】顧含真1，袁勤生1，趙健1*,韓瑞貞2，周永祥2,腎上腺素SOD測活性法德改進及影