實驗三培養(yǎng)基的配制與滅菌

實驗三培養(yǎng)基的配制與滅菌第一頁，共十頁，編輯于2023年，星期二凝固劑一般是瓊脂(洋菜)，也有用硅膠與明膠。一般來說，培養(yǎng)基包括有水份、碳源、氮源、無機(jī)鹽類以及生長因素等五大類營養(yǎng)成份。此外還得有適宜的pH值，一定的滲透壓（即濃度）以及氧化還原電位等。三、實驗材料：三角瓶、試管、燒杯、分裝器、玻棒、天平、藥匙、pH試紙，搪瓷杯、量筒、紗布、棉花、橡皮筋、牛皮紙、角匙、稱量紙、各種生化試劑等。第二頁，共十頁，編輯于2023年，星期二1、葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基蛋白胨10gNaCl5g葡萄糖10g水1000mL1.6%溴甲酚紫水pH7.4-7.6

將蛋白胨、NaCl、葡萄糖加入水中，加熱調(diào)pH至7.4-7.6，加入1.6%溴甲酚紫水溶液。分裝試管內(nèi)倒置一杜氏小管，塞上硅膠塞，滅菌。2、乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基蛋白胨20g乳糖10g水1000mL1.6%溴甲酚紫水溶液1mLpH7.4-7.6

將蛋白胨、乳糖加入水中，加熱調(diào)pH至7.4-7.6，加入1.6%溴甲酚紫水溶液。分裝試管內(nèi)倒置一杜氏小管，塞上硅膠塞，滅菌。3、M.R.與V.P.試驗培養(yǎng)基蛋白胨5g葡萄糖5gK2HPO45g水1000mL

分裝試管，塞上硅膠塞，滅菌。第三頁，共十頁，編輯于2023年，星期二4、明膠培養(yǎng)基牛肉膏3g蛋白胨10gNaCl5g明膠150g水1000mLpH7.0-7.2

分裝試管，塞上硅膠塞，滅菌。5、硝酸鹽培養(yǎng)基蛋白胨10gNaNO31g水1000mLpH7.6

分裝試管，塞上硅膠塞，滅菌。6、產(chǎn)生H2S試驗的培養(yǎng)基牛肉膏3g酵母浸膏3g蛋白胨10gFeSO40.2gNaCl5g硫代硫酸鈉0.3g瓊脂12g水1000mLpH7.4

分裝試管，塞上硅膠塞，滅菌。第四頁，共十頁，編輯于2023年，星期二7、吲哚試驗培養(yǎng)基牛肉膏5g蛋白胨10gNaCl5g水1000mLpH7.2

分裝試管，塞上硅膠塞，滅菌。8、檸檬酸鹽培養(yǎng)基檸檬酸鈉5gNaCl5gMgSO42gK2HPO41g(NH4)2HPO41g瓊脂20g1%溴百里酚蘭液8mL水1000mLpH6.8

調(diào)pH后，加入1%溴百里酚蘭液，分裝試管，塞上硅膠塞，滅菌。9、淀粉培養(yǎng)基牛肉膏3g蛋白胨5gNaCl5g可溶性淀粉2g瓊脂15g水1000mLpH7.2

分裝三角瓶，塞上硅膠塞，滅菌。第五頁，共十頁，編輯于2023年，星期二四、方法步驟1、培養(yǎng)基的配制：稱藥溶解調(diào)pH加指示劑分裝塞棉花裝入竹簍高壓蒸汽滅菌2、高壓蒸汽滅菌具體操作步驟：1.加入足夠量的水于滅菌鍋中(至水位線)。2.擺入上述包裝好的待滅菌培養(yǎng)基，但不能擺得太擠，以免影響蒸汽通過和滅菌效果。3.加蓋旋緊螺旋，使蒸汽鍋密閉不漏氣(若為手提式應(yīng)對角螺旋均勻旋緊)。第六頁，共十頁，編輯于2023年，星期二4.打開排氣閥，通入熱源，自開始產(chǎn)生蒸汽至蒸汽猛烈的噴出而無空氣時關(guān)緊放氣閥。5.升溫升壓：繼續(xù)加熱，至壓力計讀數(shù)達(dá)0.1Mpa(121.5°)后保持30分鐘。6.到時間后停止加熱，待壓力下降至常壓后，慢慢打開排汽口，然后打開鍋蓋，取出滅菌物。注意在壓力未降至0時，切勿打開鍋蓋，否則突然降壓，會招致玻璃器皿破損或培養(yǎng)基沸騰，沾濕棉塞沖出管外7.取出滅菌物后，若試管應(yīng)在瓊脂未凝固之時將試管擺成斜面。應(yīng)用此法滅菌是否徹底的一個關(guān)鍵是在壓力上升之前必須將鍋內(nèi)的冷空氣完全驅(qū)盡，否則壓力表