采用離子色譜法對(duì)黃酒中氨基酸的比較省級(jí)科研計(jì)

采用離子色譜法對(duì)黃酒中氨基酸的比較研究諸葛慶，李博斌，劉興泉，鄭云峰（國(guó)家黃酒產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢測(cè)中心紹興312071）摘要：準(zhǔn)確測(cè)定黃酒中的氨基酸對(duì)研究黃酒的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和黃酒風(fēng)味具有重要的意義，本研究采用了陰離子交換色譜法-積分脈沖安培檢測(cè)法測(cè)定了江西、紹興、福建三地黃酒中的氨基酸。分析結(jié)果顯示，紹興黃酒、福建黃酒的氨基酸總量較高，平均含量分別是3946.56mg/L、3726.80mg/L，江西黃酒氨基酸含量為1634.33mg/L，每種黃酒的呈味氨基酸以甜味氨基酸和苦味氨基酸為主，它們占80%左右。關(guān)鍵詞：陰離子交換色譜法；積分脈沖安培檢測(cè)；氨基酸；黃酒黃酒是我國(guó)的民族特產(chǎn)，黃酒是以稻米、黍米、玉米、小米、小麥等糧食為主要原料，經(jīng)蒸煮、糖化、發(fā)酵、壓榨、過(guò)濾、貯存、勾兌等工藝生產(chǎn)的釀造酒。黃酒酒精度低、耗糧較少、富含多種氨基酸、蛋白質(zhì)、維生素和對(duì)人體有益的礦物元素，營(yíng)養(yǎng)豐富[1]。黃酒中含有多種多量的氨基酸，黃酒中的氨基酸主要是曲霉菌的酸性蛋白霉和酸性羧肽酶對(duì)蒸煮后的原料米中的蛋白質(zhì)起作用而產(chǎn)生的，是黃酒中的主要成分之一，不僅是黃酒的營(yíng)養(yǎng)成分，也是黃酒的風(fēng)味物質(zhì)或風(fēng)味的前驅(qū)體，對(duì)黃酒的風(fēng)味起著重要作用[2,3]。氨基酸具有鮮、甜、苦、澀等多種味感，賦予了黃酒豐富的味覺(jué)層次，使黃酒具有鮮美、醇和、濃郁、柔潤(rùn)、協(xié)調(diào)和多滋多味的特征[4]。黃酒中的呈味氨基酸與黃酒的風(fēng)味有著很大的聯(lián)系，因此準(zhǔn)確的對(duì)黃酒中的氨基酸進(jìn)行定性和定量分析是非常有必要的。但是氨基酸種類(lèi)繁多、性質(zhì)接近，氨基酸分析是色譜界公認(rèn)的難題?，F(xiàn)在常用的方法有離子交換色譜法，基于反相色譜分離、柱前衍生、熒光或紫外檢測(cè)的高效液相法，陰離子交換分離直接安培法檢測(cè)的離子色譜法，衍生化氣相色譜法和毛細(xì)管電泳法，這些方法在檢測(cè)氨基酸方面還存在一定的不足。本研究所用的高效陰離子交換色譜-積分脈沖安培檢測(cè)法（HPAEC-IPAD）是一種新的氨基酸分析方法[5]。此方法是基于氨基酸分子中的羧基在強(qiáng)堿性介質(zhì)中可以形成陰離子，而氨基酸分子中的氨基在強(qiáng)堿性介質(zhì)中通過(guò)施加一定的電位，可在貴金屬（金、鉑）電極表面發(fā)生氧化反應(yīng)，從而實(shí)現(xiàn)氨基酸的陰離子交換色譜分離和積分脈沖安培檢測(cè)[6,7,8]。1實(shí)驗(yàn)部分1.1儀器和試劑美國(guó)DionexDX-600型離子色譜儀，配有GS50四元梯度泵，AS40自動(dòng)進(jìn)樣器，AS50色譜柱室，ED50電化學(xué)檢測(cè)器，PeakNet色譜工作站。17種氨基酸混合標(biāo)樣，乙酸鈉（Dionet,USA），氫氧化鈉、疊氮化鈉為分析純。標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：用20mg/L疊氮化鈉水溶液配制成氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。淋洗液：去離子水、0.25mol/LNaOH、1.0mol/LNaAc。1.2色譜條件色譜柱：AminoPacPA10陰離子交換柱，包括分析柱（2×250mm）和保護(hù)柱（2×50mm）。召淋洗鼻條件共：采豆用梯菠度洗肚脫，這梯度還淋洗譯條件兇見(jiàn)表征1，剪流速碎：0糟.2料5m許L/散mi鞋n。貝檢測(cè)巡條件亂：積纖分脈械沖安熄培法仁檢測(cè)冤。窗柱溫成：3揉0根℃呼。煉進(jìn)樣碼體積娛：2濫5亮L泥表1找分刪離氨般基酸速的梯初度淋當(dāng)洗程課序每Ti葵me渾(m梅in覽)略Wa秘te匆r摟(%僑)雪0.債25飄職mo瑞l/創(chuàng)L鐘Na巡OH是(%涂)塌1填mo競(jìng)l/刃L能Na墻AC鵝(%澇)效Cu允rv慧e聚0.佩0現(xiàn)93委7店2.炸0櫻90鑰10吊5逮5.陜0夸85劇15獲8霜11頭.0宏64杯36懲8嘩13華.0絮64嚇36軌15余.0爐60筍40斤8江20腳.0滴30綠70環(huán)8量25百.0熄30例70生25晉.1妖27堂70繳3巴8住33予.0食23充70角7誘8倒38脾.0畫(huà)20地70煌10伍8堤45首.0氏10材70地20敬8續(xù)50疊.0黎10鐘30蹦60循8棕60恒.0會(huì)10秧30唯60捎1.嚇3員樣定品前障處理絮樣品閃在分氏析前致用去叨離子辮水稀咸釋5討00璃倍，曠經(jīng)過(guò)互0.幣45裕μ授m的罷濾膜謊過(guò)濾相直接箏進(jìn)樣辨分析選。掙２銜結(jié)果頂與討母論輪2.賞1罵氨基請(qǐng)酸的憐色譜甲分離古實(shí)驗(yàn)蟲(chóng)所測(cè)以定1五7種休氨基閑酸標(biāo)弓樣色抄譜圖惠見(jiàn)圖雄1。丹圖1出氨基艙酸標(biāo)接準(zhǔn)色悅譜圖歡從圖察1中畫(huà)可以依看出稈，1每7種眾氨基榮酸在診選定吊的分垂離條縱件下勢(shì)可以聲達(dá)到稅很好瘋的分繡離。濟(jì)2.以2尊方法亦的檢們出限夢(mèng)、線柱性范時(shí)圍及營(yíng)回收勿率身根據(jù)飼以上戀的分姓離條壁件，破對(duì)氨霧基酸裹的混座合標(biāo)柄樣進(jìn)樸行測(cè)鏈定，推得出浪了該滔方法召的檢絡(luò)出限遭、線疼性范居圍，手同時(shí)點(diǎn)還分秀析了肆各種韻氨基炒酸的店回收造率，梯所得組的數(shù)興據(jù)見(jiàn)互表2灘。餐表2蹄方法粉的檢眨出限天、線議性范發(fā)圍及砍回收斯率欄化合蝕物名困稱(chēng)殖檢出順限志μ貍mo大l/只L便回歸礦方程灘相關(guān)撈系數(shù)會(huì)線性坐范圍贈(zèng)μ定mo疾l/黨L軟加入勢(shì)量護(hù)μ最mo類(lèi)l/箭L損實(shí)測(cè)外值鈔μ部mo掠l/肝L撫回收彼率疊%犧精氨仔酸望0.家00掛95幫1.滾15鴨X-反0.教35備0.鵲99波90沫0.尚2～躲20跡5.絕00懷4.露93汪98詠.6讀賴(lài)氨穗酸狹0.菌05飯89臺(tái)0.搖32莫X+趣0.痕11逃0.寬99萄89青0.衡2～犬20療2.響5煉0允2.情57凱10受2.代8掏丙氨懸酸甲0.這02榴09鎖1.祝01裳X+徑0.潮99膚0.擱99臭76駁0.多2～乏20荷10者.0浴0后9.補(bǔ)69斧96湊.9妹蘇氨攔酸亭0.糟00郵91棄2.煤28把X+租0.勺32猾0.藏99撇92侮0.扇2～集20插2.章5鼠0盛2.加55膀10級(jí)2淺.0雞甘氨嘩酸率0.令02懂12際1.醒10階X+失0.勉01濕0.搏99唇95摧0.想2～磨20鴿5晉.0辣0冒4.牲89到97勸.8辮纈氨秒酸綁0.菠02釋54護(hù)1.愿31掩X+倘0.店65違0.勝99抹85賤0.度2～片20銅4訪.0肥0帝3.丸75襪93稅.芹8愚絲氨疊酸式0.齊00墓78蝴2.詢49標(biāo)X+銀0.描55榴0.穴99趴94幅0.炸2～傅20誼4倦.0具0獎(jiǎng)4.腦03督10海0.削8印脯氨定酸騎0.詞01析62傳1.冰29徹X+就0.欠91洋0.掏99棕82來(lái)0.絕2～垮20禾8獻(xiàn).0脈0耗8.吧09捏10振1.治1璃異亮朗氨酸盈0.滔04涌59繁0.投58珍X+帆0.產(chǎn)42奔0.元99維97和0.營(yíng)2～寶20魄2.壇5再0巨2.嬸53蔽10余1.謠2練亮氨巴酸采0.浴06考01斑0.送61下X+努0.卷53備0.肆99餓94壤0.略2～管20耐5輪.0巾0絹5.誘13乎10韻2.惱6袋蛋氨殺酸哪0.腎01吉38添2.部07街X+宣0.毯97孔0.耳99窗65焦0.火2～復(fù)20順1隆.0捷0棋0.莫95衡95窗.0侵組氨買(mǎi)酸捷0.寄00豪61洋4.瘋56醫(yī)X+償0.爬43讀0.骨99區(qū)81疫0.震2～辛20策1志.0符0燒0.戒93框93叫.0獄苯丙熔氨酸感0.料01補(bǔ)39拌2.紋81武X-仇0.酸67緣0.榨99粘99墓0.認(rèn)2～孩20劍4蜘.0城0辱3.頂89乞97巨.2洲谷氨脅酸葵0.否25象79母0.抬20留X+潛0.昌05旱0.顫99愿98搏1.減0～腫20坑4界.0拔0任3.笛85嶺96鍬.2遵天冬半氨酸版0.凱06害98辟0.蹦18綢X+劣0.灶61司0.辟99盾91伶0.描2～列20萍5碼.0蝶0蛙4.波73盈94鮮.6盼胱氨箏酸興0.本00躍44砍4.絮29環(huán)X-乖0.謙53肚0.般99危69較0.蹦2～扣20州1.轉(zhuǎn)00僚0.具96品9商6.禾0符酪氨臭酸伴0.赤00座60危1.耗97急X+皆0.例89騰0.謝99沸92暴0.址2～讀20原2.息5釀0趙2.潤(rùn)57泳10狡2.漆8欠由表飲2可認(rèn)知，狹該方升法對(duì)呼17患種氨掩基酸釘?shù)臋z唐測(cè)具恰有較智低的差檢出蝴限、位較寬紀(jì)的線槐性范抓圍和殃較高誕的回賭收率剪，較款高的晴回收湊率也譽(yù)說(shuō)明犯了用肆該方炎法檢鮮測(cè)黃末酒中炸的氨散基酸懲所得街到的潤(rùn)數(shù)據(jù)荷是準(zhǔn)趣確可付靠的墊。蠟2.幕3厚黃酒振中氨漠基酸壽的分煮析妻隨意脆選取辜了江達(dá)西、廈紹興嚇及福纏建三殲個(gè)省昨份的宇各5鋸種黃捷酒樣限品進(jìn)殺行檢金測(cè)，遷以保獅留時(shí)到間定膏性、紛外標(biāo)織法定驢量，原所得畫(huà)到的歐樣品刻圖譜烘見(jiàn)圖盞2，拒分析屯結(jié)果菜見(jiàn)表缸3、商表4抖及表概5。族由譜師圖2銜可見(jiàn)能，在屈以上燥所選糊定的社色譜蒸條件飾下，憑樣品由中的鑒17磨種氨姨基酸肌具有謹(jǐn)良好距的分蒼辨率的和重壇現(xiàn)性釣。波圖2刺黃劃酒中拒氨基扮酸分矩析譜舌圖瞧表3擾江幸西黃怎酒氨球基酸洽分析壁結(jié)果鄰（單文位：尤mg推/l志）膝氨基劃酸奇樣品滲1指樣品卻2戰(zhàn)樣品土3覆樣品帥4旺樣品另5愛(ài)平均陡值穴甜味彼氨基蜜酸蕩甘氨鈴酸G橫ly主92畝.2墓6蘇62存.3鮮3便75陳.3奏3授61毛.1電9業(yè)90芽.4約9執(zhí)76艦.3譯2眾丙氨式酸A溝la濾22款0.嫩37炎16蓄5.恭32遞21跡1.宋21其14牲9.飲96獻(xiàn)44陡4.丑92顫23壇8.焦36概薄脯氨戚酸P勺ro鄭19震7.耀50晝84抱.8嗎3私19規(guī)6.銹16間13缸7.容50她13貿(mào)7.榴40當(dāng)15裝0.條68肯銷(xiāo)絲氨強(qiáng)酸S棕er團(tuán)10味4.祝29駐73壩.0通6窮89截.0鋤0劈19省.2訊6亦90趣.2提1粒75旦.1嶄6習(xí)蘇氨莖酸T崖hr斯71割.8闊0案65軟.2槳2合57熔.0輕4共11摘.9感7從50河.6講7林51燒.3土4奇胱氨狹酸c偵ys筐11徑.5和6我21淹.1趣0深16駱.0旬0狠18滅.3炊8袋6.逼01片14侍.6彎1或蛋氨揭酸M碑et縣31擴(kuò).9蹄8壺41謝.5怠0蛇22厭.5惱6泄7.線73陪45臘.7板8箭29欄.9柱1職∑證72沿9.峰76研51肅3.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