糖鏈結(jié)構(gòu)測(cè)定及糖的提取分離

糖鏈結(jié)構(gòu)測(cè)定及糖的提取分離演示文稿本文檔共18頁(yè)；當(dāng)前第1頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)21點(diǎn)44分優(yōu)選糖鏈結(jié)構(gòu)測(cè)定及糖的提取分離本文檔共18頁(yè)；當(dāng)前第2頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)21點(diǎn)44分

組成苷的苷元和單糖的鑒定將苷用稀酸或酶進(jìn)行水解，使生成苷元和各種單糖

苷元的結(jié)構(gòu)鑒定在有關(guān)章節(jié)中逐一介紹。

組成苷中糖的種類鑒定通常采用PC、TLC等方法對(duì)水解液進(jìn)行鑒定。

糖類的PC常用的展開(kāi)劑大多為含水的溶劑系統(tǒng)，如正丁醇-醋酸-水(4:1:5)，EtOAc-吡啶-水(2:1:2)等，其Rf值與溶劑的含水量有關(guān)。七、糖鏈結(jié)構(gòu)的測(cè)定本文檔共18頁(yè)；當(dāng)前第3頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)21點(diǎn)44分苷中糖的數(shù)目的測(cè)定質(zhì)譜：苷分子量-苷元分子量，求出糖的數(shù)目。核磁：氫譜中端基質(zhì)子信號(hào)數(shù)(5ppm左右)，碳譜中端基碳信號(hào)的數(shù)目(90-112ppm)。七、結(jié)構(gòu)的測(cè)定本文檔共18頁(yè)；當(dāng)前第4頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)21點(diǎn)44分

苷元和糖之間連接位置的確定13C-NMR：苷化位移規(guī)律，將苷和苷元的碳譜相比較。成苷后，α-C約+8ppm,β-C約-4ppm

二維核磁共振譜(如HMQCCOSY及HMBC譜)等技術(shù)廣泛用于確定連糖位置。七、結(jié)構(gòu)的測(cè)定本文檔共18頁(yè)；當(dāng)前第5頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)21點(diǎn)44分糖與糖的連接位置的確定全甲基化物進(jìn)行甲醇解，分析其甲醇解產(chǎn)物。七、糖鏈結(jié)構(gòu)的測(cè)定本文檔共18頁(yè)；當(dāng)前第6頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)21點(diǎn)44分采用的方法通常是將這些甲醚化的單糖進(jìn)行了TLC鑒定，并與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照。近來(lái)亦有用GC-MS聯(lián)用儀對(duì)其進(jìn)行鑒定的報(bào)道。全甲基化甲醇解：七、糖鏈結(jié)構(gòu)的測(cè)定本文檔共18頁(yè)；當(dāng)前第7頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)21點(diǎn)44分

七、糖鏈結(jié)構(gòu)的測(cè)定

如：已知某二糖甲醇解后得到下列產(chǎn)物，請(qǐng)推測(cè)該二糖的結(jié)構(gòu)（連接位置）全甲基化甲醇解本文檔共18頁(yè)；當(dāng)前第8頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)21點(diǎn)44分

甲基化反應(yīng)

(1)Haworth法：用硫酸二甲酯和氫氧化鈉(或碳酸鈉、碳酸鉀)，可使醇羥基甲基化。其缺點(diǎn)是甲基化能力較弱，如果欲進(jìn)行全甲基化反應(yīng)，必須進(jìn)行多次反應(yīng)才能達(dá)到目的，

(2)Purdie法：用碘甲烷和氧化銀為試劑(一般可在丙酮或四氫呋喃中進(jìn)行)，可使醇羥基甲基化，但因氧化銀具有氧化作用，只能用于苷的甲基化．而不能用于還原糖的甲基化。

七、糖鏈結(jié)構(gòu)的測(cè)定本文檔共18頁(yè)；當(dāng)前第9頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)21點(diǎn)44分(3)Kuhn改良法：在二甲基甲酰胺(DMF)溶液中，加入碘甲烷和氧化銀或硫酸二甲酯及氫氧比鋇(或氧化鋇)，在攪拌下進(jìn)行甲基化。本法的缺點(diǎn)是反應(yīng)較緩慢。(4)Hakomari法(箱守法)：二甲基亞砜(DMSO)，氫化鈉，碘甲烷七、糖鏈結(jié)構(gòu)的測(cè)定本文檔共18頁(yè)；當(dāng)前第10頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)21點(diǎn)44分

此法反應(yīng)迅速、完全、無(wú)需特殊裝置、可在室溫下連續(xù)反應(yīng)，是目前最常用的全甲基化方法。但因在反應(yīng)中，所用二甲亞砜和NaH均呈強(qiáng)堿性，故分子中有酯鍵的苷類不宜用本法。七、糖鏈結(jié)構(gòu)的測(cè)定本文檔共18頁(yè)；當(dāng)前第11頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)21點(diǎn)44分酶水解轉(zhuǎn)化糖酶--------水解β-果糖苷鍵麥芽糖酶--------水解α-葡萄糖苷鍵杏仁苷酶--------水解β-葡萄糖苷鍵,專屬性較低纖維素酶--------水解β-葡萄糖苷鍵NMR譜法測(cè)定利用端基質(zhì)子的偶合常數(shù)如：5ppm(1H,d,J=7Hz)為下面哪個(gè)結(jié)構(gòu)？七、糖鏈結(jié)構(gòu)的測(cè)定-苷鍵構(gòu)型的確定本文檔共18頁(yè)；當(dāng)前第12頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)21點(diǎn)44分一、提取植物體內(nèi)，苷類常與水解該苷的酶共存。提原生苷：先殺酶。

常用的方法是在中藥中加入CaCO3,或用甲醇、乙醇或沸水提取，同時(shí)提取過(guò)程中要盡量勿與酸或堿接觸，以免苷類分解。提苷原：可利用酶活性

八、糖及苷類的提取和分離本文檔共18頁(yè)；當(dāng)前第13頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)21點(diǎn)44分八、糖及苷類的提取和分離化合物的極性功能基的種類：(-COOH)>(-OH)>(–C=O)>(-COOR)>-O->(-CnHm)極性功能個(gè)數(shù)分子內(nèi)氫鍵降低極性化合物大小

小分子的極性大于大分子的極性常用溶劑極性：水>甲醇>乙醇>丙酮>乙酸乙酯>氯仿>乙醚>己烷H2O>MeOH>EtOH>CH3COCH3>EtOAc>CHCl3>EtOEt>CH3(CH2)4CH3本文檔共18頁(yè)；當(dāng)前第14頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)21點(diǎn)44分流程圖八、苷類的提取和分離本文檔共18頁(yè)；當(dāng)前第15頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)21點(diǎn)44分糖和苷的提取分離藥材水水提液3倍量以上乙醇醇水溶液沉淀（苷）（多糖）本文檔共18頁(yè)；當(dāng)前第16頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)21點(diǎn)44分多糖提取分離

（一）提取

水提得到的粗多糖水溶液，加入95%乙醇使含醇量達(dá)80%，4攝氏度靜置過(guò)夜，多糖析出。減壓抽濾，用95%乙醇洗至溶液無(wú)色。沉淀（多糖）揮干醇。

（二）除蛋白

這是至關(guān)重要的一步，由于蛋白是大分子，它的存在會(huì)干擾多糖的純化。一般選用sevage法萃取或離心，多糖濃度為1mg/ml,氯仿-正丁醇比例通常在3:1-5:1之間，變性的蛋白質(zhì)一般在兩相交界處產(chǎn)生一條白色的帶。

（三）檢測(cè)

除蛋白前后用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)280nm（蛋白質(zhì)）和260nm（核酸）下的吸收值，多糖濃度為0.4mg/ml對(duì)照驗(yàn)證除蛋白的效果。本文檔共18頁(yè)；當(dāng)前第17頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)21點(diǎn)44分(四)離子交換纖維素(DEAE-纖維素)進(jìn)行初步分離一般選用DE-52型離子交換纖維素（二乙氨基乙基纖維素52）

<1>柱的預(yù)處理

加蒸餾水浸泡過(guò)夜，期間換幾次水，每次除去細(xì)小顆粒，用0.5mol/LHCl溶液浸泡1~2h,蒸餾水漂洗至中性；再用0.5mol/LNaOH溶液浸泡1~2h,蒸餾水漂洗至中性。

<2>洗脫

樣品濃度在20mg/ml左右。先用水洗脫，再用Na