人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述

人工授精夫精人工授精贈(zèng)精人工授精常規(guī)體外受精-胚胎移植（invitrofertilization-embryotransfer,IVF-ET）常規(guī)體外受精單精子卵胞質(zhì)內(nèi)注射（intracytoplasmicsperminjection,ICSI）射出精睪丸/附睪精植入前遺傳學(xué)診斷（preimplantationgeneticdiagnsosi,PGD）人類輔助生殖技術(shù)本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第1頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分適應(yīng)證男方因素宮頸因素免疫因素女方排卵障礙不明原因性不孕步驟夫精人工授精臨床妊娠率10-15%本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第2頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分促排卵治療誘發(fā)排卵有排卵障礙的情況下以誘發(fā)單個(gè)卵泡或少數(shù)卵泡的發(fā)育為目的超排卵在可控制的范圍內(nèi)誘發(fā)多卵泡發(fā)育和成熟為ART奠定基礎(chǔ)治療的對(duì)象很多本身有正常的排卵功能2010-5-15中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第3頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分IUI中促排卵的作用授精時(shí)間更精確糾正排卵障礙提供更多可用的卵子2010-5-15中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第4頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分適應(yīng)證輸卵管盆腔因素子宮內(nèi)膜異位癥排卵障礙經(jīng)促排卵治療無效嚴(yán)重少弱畸精癥無精癥反復(fù)IUI失敗免疫性不孕常規(guī)體外受精-胚胎移植（invitrofertilization-embryotransfer,IVF-ET）本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第5頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分步驟藥物促排卵經(jīng)陰道穿刺取卵體外授精胚胎培養(yǎng)胚胎移植胚胎冷凍新鮮周期失敗后解凍胚胎移植常規(guī)體外受精-胚胎移植

invitrofertilization-embryotransfer,IVF-ET本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第6頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分GnRH激動(dòng)劑：達(dá)必佳，達(dá)菲林GnRH拮抗劑：加尼瑞克，思則凱Gn：重組FSH：果納芬，普麗康尿源性FSH：麗申寶，福特蒙尿源性FSH和LH：賀美奇，HMG主要藥物本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第7頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分促排卵方案-短效長(zhǎng)方案GnRH-a0.1mgqd月經(jīng)第二十天黃體中期GnRH-a0.05mgqdGn14-21天垂體達(dá)降調(diào)節(jié)標(biāo)準(zhǔn)主導(dǎo)卵泡達(dá)18mm時(shí)注射HCG，36hr后取卵本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第8頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分促排卵方案-長(zhǎng)效長(zhǎng)方案月經(jīng)第二十天黃體中期GnRH-a1.3mg單次注射Gn14-21天垂體達(dá)降調(diào)節(jié)標(biāo)準(zhǔn)主導(dǎo)卵泡達(dá)18mm時(shí)注射HCG，36hr后取卵本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第9頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分促排卵方案-拮抗劑方案Gn主導(dǎo)卵泡達(dá)18mm時(shí)注射HCG，36hr后取卵月經(jīng)第2-3天啟動(dòng)促排5-6天加拮抗劑本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第10頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分ART臨床治療風(fēng)險(xiǎn)

穿刺并發(fā)癥血栓栓塞

妊娠相關(guān)并發(fā)癥

其它風(fēng)險(xiǎn)本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第11頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分經(jīng)陰道穿刺取卵術(shù)并發(fā)癥嚴(yán)重并發(fā)癥（0.5%-1.5%）陰道出血>100ml0.8%盆腔感染0.6%盆腔膿腫卵巢扭轉(zhuǎn)盆腔出血卵巢過度刺激綜合征本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第12頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分取卵術(shù)后卵巢改變非常脆容易撕裂通過測(cè)定Hb和Hct的變化，推測(cè)通常取卵術(shù)后平均出血量232±130mL避免在卵巢內(nèi)橫向擺動(dòng)本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第13頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分卵巢過度刺激綜合征

（ovarianhyperstimulationsyndrome,OHSS）

-促排卵最嚴(yán)重的醫(yī)源性并發(fā)癥

-正常妊娠中罕見

*發(fā)生率:-輕度：

8–23%

-重度：3.5-8%COH-輕中度：7.3%-重度：

4.2%本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第14頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分病理及臨床表現(xiàn)體液外滲毛細(xì)血管通透性增加胸水、腹水、心包積液、全身水腫低血容量血液濃縮高凝狀態(tài)腎灌注減少少尿、無尿電解質(zhì)紊亂血栓形成氮質(zhì)血癥腹脹、惡心、嘔吐咳嗽、氣促本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第15頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分卵巢過度刺激綜合征

（ovarianhyperstimulationsyndrome,OHSS）臨床表現(xiàn)卵巢體積顯著增大血液濃縮，腹腔積液，胸腔積液少尿電解質(zhì)紊亂血栓形成、ARDS及多器官功能衰竭本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第16頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分OHSS分度分類卵巢大小癥狀輕度5-10cm1級(jí)：腹脹不適2級(jí)：1級(jí)癥狀+惡心、嘔吐及/或腹瀉中度>10cm3級(jí)：2級(jí)癥狀+超聲確定腹水4級(jí)：3級(jí)癥狀+腹水、胸水的臨床表現(xiàn)和呼吸困難重度>12cm5級(jí)：4級(jí)癥狀+血液濃縮，血粘度增加、低血容量，腎灌注減少及少尿本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第17頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分OHSS分度根據(jù)OHSS發(fā)生的時(shí)間，又分為早發(fā)型OHSS和晚發(fā)型OHSS早發(fā)型發(fā)生在HCG后3～7天，其發(fā)生與卵巢對(duì)促性腺激素的反應(yīng)性有關(guān)，并且被外源性HCG激發(fā)晚發(fā)型HCG后12～17天，多伴有多胎妊娠，系內(nèi)源性HCG所致晚發(fā)型OHSS程度往往比早發(fā)型嚴(yán)重本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第18頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分體外授精-胚胎移植的實(shí)驗(yàn)室步驟本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第19頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控體外授精胚胎培養(yǎng)胚胎移植胚胎冷凍胚胎解凍體外授精-胚胎移植的實(shí)驗(yàn)室步驟本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第20頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分A、顯微操作系統(tǒng)B、程序冷凍儀及液氮罐C、CO2濃度測(cè)試儀和溫度測(cè)試儀D、電子天平，超純水儀和滲透壓儀E、冰箱F、空氣凈化設(shè)備G、CO2和N2，混合氣體氣瓶實(shí)驗(yàn)室的儀器和設(shè)備本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第21頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分1、顯微鏡A、相差顯微鏡B、體視鏡C、倒置顯微鏡D、熒光顯微鏡實(shí)驗(yàn)室的儀器和設(shè)備本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第22頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分IVF工作站實(shí)驗(yàn)室的儀器和設(shè)備本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第23頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分CO2培養(yǎng)箱：實(shí)驗(yàn)室的儀器和設(shè)備ThermoK-systemG-185Cook?MINCBenchtopIncubator本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第24頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分1、質(zhì)量控制：溫度：23±3℃濕度：30～60%氣壓：≥10Pa塵埃：百級(jí)（配子操作區(qū)），萬級(jí)（胚胎實(shí)驗(yàn)室），十萬級(jí)（更衣室，取精室）可揮發(fā)有機(jī)物（VOC）：＜0.5ppm振動(dòng)，光照及噪音：胚胎培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制和管理本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第25頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分2、管理：A、按功能和清潔度分區(qū)B、實(shí)驗(yàn)室禁止吃，喝，抽煙以及使用化妝品C、培養(yǎng)箱和溫臺(tái)的監(jiān)測(cè)D、冰箱的監(jiān)測(cè)E、液氮罐的監(jiān)測(cè)胚胎培養(yǎng)環(huán)境的質(zhì)量控制和管理本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第26頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分實(shí)驗(yàn)室禁止使用酒精等可揮發(fā)性有機(jī)物和紫外照射可用蒸餾水擦拭臺(tái)面可用專用洗滌劑擦拭可能會(huì)被污染的臺(tái)面或者區(qū)域可使用吸塵器吸走灰塵培養(yǎng)箱的清潔和消毒實(shí)驗(yàn)室的清潔本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第27頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分1、溫度和濕度：37.0±0.1℃，>90%2、pH：7.1≤

pHi≤7.2，7.2≤pHe≤7.43、氣體：CO2和O24、滲透壓：270～290mOsm/kg胚胎培養(yǎng)系統(tǒng)本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第28頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分培養(yǎng)基的基本組成水：99%無機(jī)鹽：維持培養(yǎng)基的滲透壓和酸堿度碳水化合物：提供胚胎發(fā)育的能量氨基酸：促進(jìn)胚胎體內(nèi)外發(fā)育維生素：調(diào)控細(xì)胞代謝激素和生長(zhǎng)因子：促進(jìn)胚胎發(fā)育大分子物質(zhì)：維持膠體滲透壓，中和毒素抗氧化劑：減少氧自由基對(duì)胚胎的損傷螯合劑：螯合重金屬離子抗生素：防止污染胚胎培養(yǎng)系統(tǒng)本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第29頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分培養(yǎng)液配制和平衡胚胎培養(yǎng)系統(tǒng)本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第30頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第31頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分單氣培養(yǎng)：CO2(5-6%)，O2(21%)和N2(74%)三氣培養(yǎng)：CO2(5-6%)，O2(5%)和N2(90%)優(yōu)勢(shì)：更接近生理狀態(tài)（2-8%O2）單氣培養(yǎng)和三氣培養(yǎng)本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第32頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分1、精子的形態(tài)結(jié)構(gòu)精子和卵子精子形態(tài)精子變態(tài)示意圖本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第33頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分2、卵子的形態(tài)結(jié)構(gòu)卵母細(xì)胞顆粒細(xì)胞復(fù)合體GV期MI期MII期本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第34頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分異常卵母細(xì)胞本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第35頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分1、常規(guī)體外授精體外授精精卵混合精卵結(jié)合本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第36頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分2、卵胞質(zhì)內(nèi)單精子注射（ICSI）本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第37頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分人胚胎體外發(fā)育本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第38頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分異常受精單原核多原核三原核無原核本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第39頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分胚胎發(fā)育階段：卵裂球的數(shù)目胚胎形態(tài)學(xué)評(píng)分：胚胎的碎片評(píng)分：卵裂期評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)8-1-18-2-18-2-3本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第40頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分1期：囊胚腔小于胚胎體積的一半2期：囊胚腔大于胚胎體積的一半3期：完全囊胚，囊胚腔與胚胎體積相等囊胚的發(fā)育階段1期2期3期本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第41頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分4期5期6期4期：擴(kuò)張囊胚，囊胚腔大于胚胎，透明帶變薄5期：孵化囊胚，胚胎部分孵出6期：完全孵化囊胚本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第42頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分胚胎移植數(shù)目：35歲以下第一周期：2個(gè)35歲以上或者第二周期以上：3個(gè)單胚胎移植：胚胎移植本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第43頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分胚胎移植管裝載胚胎移植管空氣空氣胚胎培養(yǎng)基本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第44頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分1、精子冷凍：2、卵子冷凍：3、胚胎冷凍：4、生殖組織冷凍：配子和胚胎的冷凍及復(fù)蘇本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第45頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分程序化冷凍（慢速冷凍）玻璃化冷凍（快速冷凍）冷凍方法本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第46頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分Slowcooling-0.3°C/min慢速冷凍法將胚胎放入含有一定濃度的冷凍保護(hù)劑處理后，慢速降溫（0.2~3℃/min）,在這個(gè)過程中，隨著細(xì)胞外溫度的逐漸降低和細(xì)胞外冰晶的形成，細(xì)胞以一種平衡的方式逐步脫水。直到溫度降至-150℃，至于液氮保存。本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第47頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分Vitrification

-50.000°C/min1sec.玻璃化冷凍法采用更高濃度的冷凍保護(hù)劑處理細(xì)胞，快速降溫，使細(xì)胞內(nèi)外的液體均達(dá)到玻璃化狀態(tài)本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第48頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分玻璃化冷凍過程（兩步平衡法）在不同濃度的冷凍液中進(jìn)行平衡ESVS本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第49頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分2.裝管3.投入液氮，在液氮罐中保存。本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第50頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分冷凍前置入冷凍液后0min置入冷凍液后4min置入冷凍液后8min本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第51頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分囊胚冷凍前人工皺縮皺縮前皺縮后本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第52頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分控制性超排卵B超監(jiān)測(cè)下取卵體外受精和胚胎培養(yǎng)胚胎活檢對(duì)活檢的細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)選擇胚胎移植入宮腔植入前遺傳學(xué)診斷(PGD)本文檔共57頁(yè)；當(dāng)前第53頁(yè)；編輯于星期一\23點(diǎn)40分常染色體隱性遺傳病β-thalassaemiaCysticfibrosisSpinalmuscularatrophySicklecelldisease常染色體顯性遺傳病Huntington’sdiseaseMyotonicdystrophyCharcot-Marie-Toothdisease