動物細胞融合與單克隆抗體(共20張)

動物(dòngwù)細胞融合與單克隆抗體第一頁，共二十一頁。編輯課件動物細胞與植物(zhíwù)細胞的差別：無細胞壁全能性受限制，不能發(fā)育成雜種(zázhǒng)動物動物細胞雜交與植物細胞雜交的不同：不需去除細胞壁不能發(fā)育(fāyù)成新的動物個體第二頁，共二十一頁。編輯課件一、動物(dòngwù)細胞融合（細胞雜交）P521、概念(gàiniàn)：指兩個或多個動物細胞(xìbāo)結(jié)合形成一個細胞(xìbāo)的過程。2、結(jié)果：形成單核的雜交細胞3、原理：細胞膜的流動性4、誘導方式物理法：離心、振動、電激化學法：聚乙二醇（PEG)生物法：滅活的病毒5、動物細胞融合過程(利用滅活仙臺病毒是動物細胞融合所特有的。病毒外殼上的某些糖蛋白可能有促進細胞融合的功能。)

思考討論：為什么細胞融合過程中使用的病毒需要滅活？不滅活行嗎？不滅活的話會感染胞，而不能誘導細胞融合第三頁，共二十一頁。編輯課件

第四頁，共二十一頁。編輯課件不同DNA的兩個(liǎnɡɡè)細胞滅活病毒(bìngdú)誘導細胞融合融合后的細胞進行(jìnxíng)有絲分裂5、動物細胞融合過程第五頁，共二十一頁。編輯課件6、意義：突破了有性雜交方法(fāngfǎ)的局限，使遠緣雜交（種間、屬間、科間、動植物之間）成為可能。7、應用：成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和生物(shēngwù)新品種培育等的重要手段

特別是利用雜交瘤技術(shù)制造單克隆抗體閱讀(yuèdú)課本53頁第六頁，共二十一頁。編輯課件總結(jié)(zǒngjié)：比較植物體細胞雜交和動物細胞融合比較項目植物體細胞雜交動物細胞融合原理融合前處理誘導方法用途細胞膜的流動性、植物(zhíwù)細胞的全能性細胞膜的流動性用纖維素酶、果膠酶去壁用胰蛋白酶使細胞(xìbāo)分散物理、化學方法物理、化學、生物方法獲得部分或完整植株主要用于制備單克隆抗體第七頁，共二十一頁。編輯課件提問？1.抗體是由何種細胞產(chǎn)生(chǎnshēng)的？

效應B細胞（漿細胞）。2.一個Ｂ淋巴細胞(漿細胞)能分泌多種抗體嗎？

每一個Ｂ淋巴細胞只分泌一種特異性抗體。3.簡述獲得抗體的傳統(tǒng)途徑？

抗原動物體抗體抗原不純抗體不純二、單克隆抗體(kàngtǐ)刺激(cìjī)漿細胞第八頁，共二十一頁。編輯課件體外培養(yǎng)淋巴細胞能無限(wúxiàn)增殖嗎?怎樣解決這個問題？4.這種方法獲得的抗體有什么(shénme)缺陷？

產(chǎn)量低，純度低，特異性差第九頁，共二十一頁。編輯課件一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細胞(xìbāo)能無限增殖雜交瘤細胞(xìbāo)動物(dòngwù)細胞培養(yǎng)技術(shù)設(shè)計方案：動物細胞融合技術(shù)單克隆抗體既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量繁殖的細胞第十頁，共二十一頁。編輯課件(1)、原理：雜交瘤細胞具有兩個親本(qīnběn)的特性，即能迅速大量增殖，又能足夠數(shù)量的單一抗體。(2)、過程(guòchéng)第十一頁，共二十一頁。編輯課件效應(xiàoyìng)B淋巴細胞注射(zhùshè)特定抗原蛋白骨髓瘤細胞培養(yǎng)骨髓瘤細胞融合(rónghé)（只考慮兩兩融合）培養(yǎng)液中細胞有幾種類型？融合細胞幾種類型？骨髓瘤細胞---骨髓瘤細胞B淋巴細胞---B淋巴細胞B淋巴細胞---骨髓瘤細胞多種雜交細胞在具有篩選作用的培養(yǎng)基上培養(yǎng)專一抗體檢驗陽性克隆上述雜交細胞分開不同雜交細胞，克隆專一抗體，檢驗陽性細胞單克隆抗體注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)1、單克隆抗體的制備過程第1次篩選目的：得到雜交瘤細胞（多種）。第2次篩選目的：在雜交瘤細胞中篩選出能產(chǎn)生單一抗體的雜交瘤細胞。該細胞繼承雙親細胞的遺傳特性，既能產(chǎn)生專一抗體又能無限增殖。雜交瘤細胞有何特點？特異性強，靈敏度高產(chǎn)生相應的B淋巴細胞第十二頁，共二十一頁。編輯課件2.誘導其融合的方法(fāngfǎ)有哪些？3.融合(rónghé)后培養(yǎng)液中有幾種細胞?4.怎樣(zěnyàng)篩選出雜交瘤細胞，雜交瘤細胞有何優(yōu)點?原因？1.注射抗原的目的是什么?5.為何要進行克隆化培養(yǎng)和專一抗體檢測，多次篩選?6.大量增殖雜交瘤細胞和獲得單抗的方法?產(chǎn)生相應的B淋巴細胞選擇培養(yǎng)基既能在體外無限增殖，也能產(chǎn)生特定的抗體具有雙親細胞的遺傳物質(zhì)培養(yǎng)液中或小鼠腹腔中培養(yǎng)從培養(yǎng)液或小鼠腹水中提取第十三頁，共二十一頁。編輯課件如何(rúhé)進行雜交瘤細胞的抗體檢測及克隆化培養(yǎng)？

融合后的細胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后，能存活的細胞就是雜交瘤細胞。但這些雜交瘤細胞并非都是能分泌所需抗體的細胞，通常用“有限稀釋法”來選擇。將雜交瘤細胞稀釋，用多孔細胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，使每孔細胞不超過一個，通過培養(yǎng)讓其增殖。然后檢測各孔上清液中細胞分泌的抗體。那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔。陽性孔中的細胞還不能保證是來自單個細胞，挑選(tiāoxuǎn)陽性孔的細胞繼續(xù)進行有限稀釋，一般需進行3～4次，直至確信每個孔中增殖的細胞為單克隆細胞。該過程即為雜交瘤細胞的克隆化培養(yǎng)。第十四頁，共二十一頁。編輯課件(2)、過程(guòchéng)B淋巴細胞骨髓瘤細胞(xìbāo)誘導(yòudǎo)融合B-B細胞B-瘤細胞瘤-瘤細胞選擇培養(yǎng)基第一次篩選雜交瘤細胞（B-瘤細胞）克隆化培養(yǎng)專一抗體檢測第二次篩選相應雜交瘤細胞體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)增殖單克隆抗體第十五頁，共二十一頁。編輯課件(3).單克隆抗體(kàngtǐ)的應用：單克隆抗體(kàngtǐ)的優(yōu)點：特異性強、靈敏度高、產(chǎn)量大

①作為診斷試劑：準確識別各種抗原物質(zhì)，并與特異性結(jié)合優(yōu)點：準確、高效(ɡāoxiào)、簡易、快速②用于運載藥物：制成“生物導彈”治療疾?。褐饕糜诎┌Y治療既不損傷正常細胞，又減少了用藥劑量。第十六頁，共二十一頁。編輯課件總結(jié)(zǒngjié)一種(yīzhǒnɡ)誘導細胞融合的新方法一種(yīzhǒnɡ)新細胞滅活病毒雜交瘤細胞一個優(yōu)勢單克隆抗體特異性強、靈敏度高的優(yōu)勢第十七頁，共二十一頁。編輯課件1、科學家用小鼠骨髓瘤細胞(xìbāo)與某種細胞(xìbāo)融合，得到雜交細胞(xìbāo)，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細胞(xìbāo)融合的是（）A.經(jīng)過免疫的B淋巴細胞B.沒經(jīng)過免疫的T淋巴細胞

C.經(jīng)過免疫的T淋巴細胞D.沒經(jīng)過免疫的Ｂ淋巴細胞A鞏固(gǒnggù)練習第十八頁，共二十一頁。編輯課件2..動物細胞融合的目的中最重要的是----------------（）A.克服遠緣雜交不親和B.制備單克隆抗體C.培育新品種D.生產(chǎn)雜種細胞3.動物細胞融合與植物體細胞雜交的比較中，正確的是（）誘導融合的方法完全相同B.所用的技術(shù)手段基本相同C.所采用的原理(yuánlǐ)完全相同D.都能形成雜種細胞BD第十九頁，共二十一頁。編輯課件4.單克隆抗體制備過程中培育的雜交細胞是------（）A.由小鼠能產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞與肝細胞融合B.由小鼠一個B淋巴細胞誘導(yòudǎo)融合而成C.由小鼠一個B淋巴細胞與肌瘤細胞誘導融合而成D.由小鼠一個B淋巴細胞與骨髓瘤細胞誘導融合而成D第二十頁，共二十一頁。編輯課件內(nèi)容(nèiróng)總結(jié)動物細胞融合與。動物細胞雜交與植物細胞雜交的不同：。物理法：離心、振動、