沙棘總黃酮抗角叉菜膠誘發(fā)大鼠血栓形成作用的研究

沙棘總黃酮抗角叉菜膠誘發(fā)大鼠血栓形成作用的研究【摘要】目的觀察沙棘總黃酮對角叉菜膠所致大鼠尾靜脈血栓的影響，并分析其作用機制。方法采用后足跖部皮下注射角叉菜膠mL/100g制備SD大鼠尾靜脈血栓模型，觀察24，36，72h大鼠血栓發(fā)生率與黑尾長度。將60只大鼠隨機分為沙棘總黃酮高、中、低劑量組及模型對照組、陽性對照組和正常對照組，每組10只。各實驗組動物均灌胃1次/d。30d后測定各組大鼠凝血酶原時間、活化部分凝血活酶時間、凝血酶時間、125I-血栓素B2(TXB2)、125I-6-keto-前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)水平以及血清一氧化氮含量。結(jié)果沙棘總黃酮能顯著縮短大鼠黑尾長度，增加血漿PGI2/TXA2比值，延長TT，APTT時間，并可升高NO含量。結(jié)論沙棘總黃酮對角叉菜膠所致大鼠炎性血栓形成具有預(yù)防作用，其作用機制可能與提高PGI2和NO水平有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】沙棘總黃酮血栓形成角叉菜膠血栓素B26-keto-前列腺素F1a

Abstract：ObjectiveToobservetheeffectsoftotalflavonesofHippophaerhamnoidesonCarrageenaninducedthrombopoiesesinratsandstudyitsmechanism.venousthrombosisratmodelwasestablishedbyinjectingCarrageenanml/100gsubcutaneousintopawofSDratsandtherateofthromboembolismandthelengthofblackentailwereobservedat24,36and72h.2.60ratsweredividedrandomlyintogroupsofTFH(high、mediumandlowdose),model、asprinandcontrol(n=10).Theyweretreatedintragastricallyonceadayfor30days.PT，APTT，TT，TXB2，6-Keto-PGF1aandNOinserumweremeasured.ResultsTFHcouldsignificantlyshortenthelengthofblackentailandraisetheratioofPGI2/TXA2aswellasprolongTTandAPTTandincreasethecontentofNO.ConclusionTotalflavonesofHippophaerhamnoidescanpreventthrombogenesisinducedbypossiblemechanismmayrelatedtotheincreaseofPGI2andNO.

Keywords：TotalflavonesofHippophaerhamnoides；Thrombogenesis；Carrageenan；TXB2；6-Keto-PGF1a

血栓相關(guān)性疾病嚴重威脅人類健康，由心肌梗塞、腦卒中等血栓栓塞性疾病導(dǎo)致的死亡已占到全球總死亡的51%。血小板在血栓形成中起著重要作用，人們希望應(yīng)用具有抗血小板作用的藥物來防治血栓栓塞性疾病。沙棘總黃酮對心血管系統(tǒng)具有多種藥理作用，能顯著降低實驗性高血脂大鼠血清膽固醇、甘油三酯含量；顯著增加前列環(huán)素(PGＩ2)水平，提高PGＩ2/TXA2(血栓素A2)比值；也能顯著降低血小板內(nèi)CAMＰ含量，抑制血小板聚集反應(yīng)，延長凝血時間［1，2］。本實驗采用大鼠后足跖部皮下注射角叉菜膠建立炎性血栓模型，研究沙棘總黃酮對大鼠體內(nèi)血栓形成的作用，并對其作用機制進行初步探討，同時考察其對凝血系統(tǒng)的影響。

1器材1藥品與試劑

沙棘總黃酮由青?？灯盏律镏破酚邢薰咎峁?0070107。腸溶阿司匹林片，由山西三九同達藥業(yè)有限公司提供，批號H14023223，生理鹽水由寧夏啟元藥業(yè)有限公司提供,批號0511114-2，NO測定試劑盒購自于南京建成生物工程研究所，批號20070423，TXB2測定試劑盒由北京北方生物技術(shù)研究所提供，批號20070420，6-keto-PGF1a測定試劑盒由北京北方生物技術(shù)研究所提供，批號20070400，角叉菜膠為SIGMA公司產(chǎn)品，批號G1023-25G。2儀器

SYSMEXCA-1500全自動血凝分析儀，RFJ-2008PS－免疫計數(shù)器，UV-9100分光光度計，可調(diào)式移液器，800型離心沉淀器，臺式離心機。

2方法

分組與給藥方法

SD清潔級健康雄性大鼠g60只，由本院實驗動物中心提供，合格證號SCXR(寧)20070004。自由進食飲水、適應(yīng)性觀察1周后隨機分為６組：正常對照組、模型對照組、陽性對照組、沙棘總黃酮高、中、低劑量組，每組各1０只。沙棘總黃酮用蒸餾水配成濃度分別為50%，25％，%的溶液，阿司匹林用蒸餾水配成濃度為1%的溶液，1次/d灌胃，模型對照組和正常對照組給予等量容積的蒸餾水灌胃，1次/d。連續(xù)灌胃30d。最后1次給藥前兩天開始造模,將角叉菜膠以生理鹽水配成2%濃度，于大鼠后足跖部皮下注射，ml/100g，分別在24，36h，72h后測量大鼠黑尾長度，之后以2%烏拉坦腹腔注射麻醉，心腔取血檢測相應(yīng)指標。

黑尾測定

直尺測量大鼠黑尾長度。

指標測定

嚴格按試劑盒說明書，用放免法測定血漿TXB2和6-keto-PGF1a含量、免疫比濁法測PT，APTT，TT時間，硝酸還原酶法測定血清NO含量。

統(tǒng)計學方法

采用統(tǒng)計學軟件處理，各樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析。

3結(jié)果

沙棘總黃酮對角叉菜膠大鼠血栓形成的影響注射角叉菜膠后，24h各組大鼠尾部均有血栓形成，大部分出現(xiàn)不同程度的淤血和黑尾，且黑尾長度的增長與時間呈相關(guān)性。36h后與模型對照組相比，沙棘總黃酮中劑量組大鼠黑尾長度明顯縮短；72h后與模型對照組相比，沙棘總黃酮中、低劑量組大鼠黑尾長度的增加明顯抑制。結(jié)果見表1。表1沙棘總黃酮對大鼠黑尾形成的影響

沙棘總黃酮對角叉菜膠大鼠血漿TXB2和6-keto-PGF1a含量的影響與正常對照組相比，模型對照組大鼠血漿TXB2含量，TXB2/6-keto-PGF1a比值顯著升高，6-keto-PGF1a含量降低。用藥30d后，與模型對照組相比，大鼠血漿TXB2含量、TXB2/6-keto-PGF1a比值明顯降低，6-keto-PGF1a含量明顯升高。其中陽性對照組最明顯，沙棘總黃酮各劑量組以中、低劑量為最顯著。結(jié)果見表2。表2沙棘總黃酮對大鼠血漿TXB2和6-keto-PGF1a含量的影響

沙棘總黃酮對角叉菜膠大鼠血液PT、APTT、TT的影響與正常對照組相比，模型對照組大鼠血液PT，APTT，TT明顯縮短。用藥30d后，與模型對照組相比，各劑量組大鼠血液APTT，TT明顯延長其中以中劑量組為最顯著，且優(yōu)于陽性對照組。但各劑量組對PT沒有明顯影響。結(jié)果見表3。表3沙棘總黃酮對大鼠PT，APTT，TT的影響

沙棘總黃酮對角叉菜膠大鼠血液NO的影響與正常對照組相比，模型對照組大鼠血液NO的含量顯著下降。用藥30d后，與模型對照組相比，各劑量組大鼠血液NO的含量明顯增高，其中陽性對照組最明顯，沙棘總黃酮各劑量組以中劑量為最顯著。結(jié)果見表4。

4討論

血栓形成常涉及血液、血管、血流等多種因素，為一綜合性病理過程。目前以德國病理學家virchow的三聯(lián)制血栓形成學說即血管壁損傷、血液成分改變、血流異常賈乘.沙棘總黃酮對大鼠血栓形成的研究［J］.中醫(yī)藥學刊,2001,19(9):258.

［2］葛志紅，梁毅，陳運賢，等.沙棘汁對環(huán)磷酰胺所致大鼠血小板減少的影響［J］.中國病理生理雜志，2003，19(5):693.

［3］王振義，徐也魯，王鴻利，等.血栓與止血基礎(chǔ)與臨床［M］.上海：上?？茖W技術(shù)出版社，1988：1.

［4］胡三覺，田巧蓮，顧建文，等.一種新的體內(nèi)血栓形成動物模型［J］.中華血液學雜志，1993，14：541.

［5］紀文巖，吉中強.葛根素對大鼠血管內(nèi)皮損傷后P-選擇素、TXB2、6-酮-PGF1α的影響［J］.中國中醫(yī)急診，2005，14∶254.