杜仲提取物的致突變實(shí)驗(yàn)研究

杜仲提取物的致突變實(shí)驗(yàn)研究

摘要】目的研究杜仲提取物的致突變性，為其應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法對實(shí)驗(yàn)小鼠灌服不同劑量的杜仲提取物水溶液，檢測小鼠骨髓微核率、精子畸形率及采用鼠傷寒沙門氏菌回復(fù)突變實(shí)驗(yàn)(Ames實(shí)驗(yàn))進(jìn)行觀察。結(jié)果杜仲提取物水溶液對小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核率無影響；對小鼠精子無畸形誘變作用；對供試菌株無致突變作用。結(jié)論杜仲提取物對受試物未見有明顯的致突變作用。

【關(guān)鍵詞】杜仲微核致突變實(shí)驗(yàn)

杜仲EucommiaulmoidesOliv在我國的應(yīng)用歷史悠久，近幾年我國學(xué)者在杜仲的生物學(xué)、化學(xué)成分、生理生化等方面做了許多研究，董娟娥等［1］報(bào)道了杜仲籽油具有降壓、降血脂及抗腫瘤等作用。唐建軍等［2］報(bào)道：杜仲含有豐富的維生素E和β-胡蘿卜素，有延緩衰老、增強(qiáng)機(jī)體免疫力作用。為更好地開發(fā)利用杜仲，我們在探索張家界產(chǎn)杜仲提取物的亞慢性毒理學(xué)作用［3］的基礎(chǔ)上，對其致突變作用進(jìn)行了研究，旨在為其應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。

1材料1藥品與動(dòng)物杜仲提取物主要成分綠原酸，張家界恒興生物科技公司提供。昆明種小鼠購于湖南中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，批號：990218。注射用環(huán)磷酰胺：上海華聯(lián)制藥有限公司，批號：030504。疊氮鈉：上海試劑一廠，批號：990706。鼠傷寒沙門氏菌株購于中國農(nóng)科院獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。2主要儀器ES-C300A電子天平：湘儀天平儀器廠。組織勻漿器：北京玻璃儀器廠。

2方法與結(jié)果

小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)小鼠60只，體重g，雌雄各半，隨機(jī)分為6組。杜仲提取物稀釋液設(shè)為，，，g/kg4個(gè)劑量組，陰性對照為蒸餾水，兩次灌胃給予受試物。陽性對照為環(huán)磷酰胺40mg/kg體重，兩次腹腔注射間隔24h，第2次給受試物后6h，頸椎脫臼處死動(dòng)物。按國家標(biāo)準(zhǔn)［4］取骨髓制片，每只動(dòng)物計(jì)數(shù)1000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞，微核率以百分率表示。結(jié)果見表1。

表1杜仲提取物對小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核率實(shí)驗(yàn)

與陰性對照組比較，**P＜，△P＞；n=10

由表1可知，實(shí)驗(yàn)組雌、雄小鼠微核發(fā)生率為%～%，陰性對照組為%，陽性對照組為%，實(shí)驗(yàn)組與陰性對照組比較，微核發(fā)生率均無差異顯著性，陽性對照組與陰性對照組比較，差異性顯著。

杜仲提取物對小鼠精子畸形的試驗(yàn)雄性小鼠60只，體重g，隨機(jī)分為6組，實(shí)驗(yàn)組劑量為，，，g/kg體重與陰性對照組，經(jīng)口腔給予。陽性對照組用環(huán)磷酰胺40mg/kg體重腹腔注射。各組1次/d，連續(xù)5d給予受試物。于首次給藥后第35天，頸椎脫臼處死小鼠，按紀(jì)云晶［5］方法制片。每組計(jì)數(shù)2000個(gè)精子，計(jì)算其畸形率。結(jié)果見表2。

表2杜仲提取物對小鼠精子畸形的影響

與陰性對照組比較，**P＜，△P＞；n=10

由表2可知，實(shí)驗(yàn)組小鼠的精子畸形率為%～%，陰性對照組為%，陽性對照組為%，實(shí)驗(yàn)組與陰性對照組比較差異無顯著性，陽性對照組與陰性對照組比較差異極顯著。

Ames試驗(yàn)按Ames標(biāo)準(zhǔn)方法［6］對鼠傷寒沙門氏突變型菌株TA97，TA98，TA100，TA102進(jìn)行增菌培養(yǎng)后進(jìn)行鑒定，所采用的4個(gè)菌株特性均與Ames試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)相符。在加與不加活化物的條件下進(jìn)行平板摻入法試驗(yàn)。杜仲提取物用雙蒸餾水稀釋為500，400，300，200μg/皿4個(gè)劑量組，陽性對照為疊氮鈉10μg/皿，陰性對照為雙蒸餾水100μg/皿，每個(gè)劑量組重復(fù)做2個(gè)平皿，結(jié)果見表3。

表3杜仲提取物對TA平均回變菌落數(shù)的影響

+S9:加S9活化物，-S9:不加S9活化物

表3可知，不同劑量的杜仲提取物，無論加或不加S9活化系統(tǒng)，其回變菌落數(shù)與陰性對照組比較，均無高于自發(fā)回變菌落數(shù)的2倍，而陽性對照組菌落數(shù)均高于陰性對照組的2倍以上。

3討論

不同劑量杜仲提取物對小鼠PCE的試驗(yàn)表明，杜仲提取物稀釋液對小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核率未見明顯影響。說明本品對細(xì)胞染色體無誘變作用。對小鼠精子畸形的影響試驗(yàn)，結(jié)果表明，杜仲提取物稀釋液對小鼠精子畸形發(fā)生率未見明顯影響，說明本品對小鼠精子無畸形誘變作用，戚向陽等［7］用杜仲粉對小鼠精子進(jìn)行的藥理作用研究結(jié)果表明，杜仲粉對小鼠精子不產(chǎn)生畸變作用，其結(jié)果與本研究結(jié)果一致。

采用鼠傷寒沙門氏突變型菌株TA97，TA98，TA100，TA102進(jìn)行回復(fù)突變試驗(yàn)，結(jié)果表明，不同劑量的杜仲提取物，無論加或不加S9活化系統(tǒng)，其回變菌落數(shù)與陰性對照組比較，均無高于自發(fā)回變菌落數(shù)的2倍，而陽性對照組菌落數(shù)均高于陰性對照組的2倍以上，說明杜仲提取物稀釋液對鼠傷寒沙門氏突變型菌株無致突變作用。

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，張家界產(chǎn)杜仲提取物對受試物無致突變作用。

【參考文獻(xiàn)】

［1］董娟娥，馬柏林，張康建，等.杜仲籽油中a-亞麻酸的含量及其生理功能［J］.西北林學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，17：73.

［2］唐建軍，張祿源，何鳴筱，等.杜仲的研究與應(yīng)用進(jìn)展［J］.植物學(xué)通報(bào)，1998，15：48.

［3］劉月鳳，陳建文，龔朋飛，等.杜仲提取物的亞慢性毒理學(xué)研究［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2006，17：2185.

［4］中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)，骨髓微核試驗(yàn)［S］.

［5］紀(jì)云晶.實(shí)用毒理學(xué)手冊［M］.北京：中國環(huán)境