封閉抗體專題知識培訓(xùn)課件

封閉抗體專題知識復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的定義及分類

自然流產(chǎn)：是指妊娠過程失敗、胚胎死亡和胚胎及附屬物排出，排出物或胚胎及附屬物不足1000g，孕周不足28周。復(fù)發(fā)性流產(chǎn)（RSA）：俗稱習(xí)慣性流產(chǎn)，是指連續(xù)發(fā)生2次或2次以上自然流產(chǎn)。原發(fā)性復(fù)發(fā)流產(chǎn)：從未有活嬰出生的復(fù)發(fā)性流產(chǎn)。繼發(fā)性復(fù)發(fā)流產(chǎn)：曾有正常分娩的復(fù)發(fā)性流產(chǎn)。復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的分類：根據(jù)病因和發(fā)病機制，復(fù)發(fā)性流產(chǎn)可分為非免疫型和免疫型。2封閉抗體專題知識非免疫類復(fù)發(fā)性流產(chǎn)染色體異常型：指夫妻雙方或一方或胚胎染色體異常所致流產(chǎn)。生殖道解剖異常型：指先天性發(fā)育異?；蚝筇煨宰訉m疾病所致解剖異常所致流產(chǎn)。內(nèi)分泌異常型：指由于內(nèi)分泌功能失調(diào)所致流產(chǎn)。生殖道感染型：指弓形蟲、巨細胞病毒、單純皰疹病毒等感染所致的流產(chǎn)。3封閉抗體專題知識免疫類復(fù)發(fā)性流產(chǎn)自身免疫型：患者體內(nèi)出現(xiàn)各種自身抗體，如抗心磷脂抗體（ACA）、抗核抗體（ANA）、抗甲狀腺抗體（ATA）等。同種免疫型：由于夫婦之間主要組織相容復(fù)合物（MHC），在人類又稱白細胞抗原（HLA）的相容性過大所致，患者與正常生育婦女的免疫狀態(tài)不同，表現(xiàn)在體液免疫的異常及血清中缺乏封閉抗體等方面。免疫性因素造成的流產(chǎn)是復(fù)發(fā)性流產(chǎn)最重要的原因，過去所謂的不明原因流產(chǎn)80%與免疫因素有關(guān)。免疫型流產(chǎn)中又以封閉抗體（APLA）缺乏造成的同種免疫型復(fù)發(fā)性流產(chǎn)發(fā)生率最高。4封閉抗體專題知識如何確診復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的病因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的診斷實際上為排除性診斷，因此，至少要對復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的兩大病因進行系統(tǒng)篩查。5封閉抗體專題知識非免疫因素檢查：雙方染色體檢查：所有的RSA患者夫婦雙方都要進行外周血染色體核型檢查，排除染色體數(shù)量和結(jié)構(gòu)的異常。生殖道解剖結(jié)構(gòu)檢查：B超、輸卵管造影、宮腔鏡、腹腔鏡、磁共振；生殖內(nèi)分泌檢查：性激素6項、子宮內(nèi)膜活檢、甲狀腺功能、空腹血糖、葡萄糖耐量試驗（OGTT）、胰島素拮抗（IR）測定；生殖道感染檢查：衣原體；支原體；淋菌及β-溶血性鏈球菌培養(yǎng)；梅毒血清實驗（RPR）；艾滋病抗體（HIV）； 優(yōu)生5項（TORCH）：巨細胞病毒(CMV-IgM或IgG)、弓形蟲(TOX-IgM或IgG)、風(fēng)疹病毒(RV-IgM或IgG)、單純皰疹病毒I型(HSV-I-IgM或IgG)、單純皰疹病毒II型(HSV-II-IgM或IgG)。6封閉抗體專題知識免疫因素檢查：自身免疫型復(fù)發(fā)性流產(chǎn)： ①抗心磷脂抗體（ACA）：ACA以IgG類最具臨床意義，ACAIgM、IgG檢查2次，每次間隔6周。

②抗核抗體（ANA）、狼瘡抗凝因子（LAC）、β2糖蛋白－Ⅰ（β2GP-Ⅰ）、D-二聚體、凝血4項、補體3、補體4。同種免疫型復(fù)發(fā)性流產(chǎn)： ①封閉抗體（APLA）：陰性結(jié)果表示女方血清中缺乏此APLA，易發(fā)生復(fù)發(fā)性流產(chǎn)。

②細胞免疫型檢查：CD19（B淋巴細胞表面標志）、CD16＋、CD56＋（NK細胞表面標志）、CD3、CD4、CD8（T淋巴細胞分群）。免疫型不孕：抗精子抗體、抗子宮內(nèi)膜抗體、抗卵巢抗體、抗HCG抗體、抗甲狀腺抗體、PCT、體外交叉精子宮頸粘液接觸試驗（SCMCT）。母兒血型不合溶血?。悍蚱迿z查ABO血型、Rh血型。7封閉抗體專題知識2次或2次以上自然流產(chǎn)；2次或2次以上試管嬰兒（VF-ET）失??；控制性超排卵周期，卵泡發(fā)育不良，＜6個卵泡；枯萎卵；內(nèi)膜生長不良、菲薄、三線征不典型；原因不明性不孕；免疫紊亂史，如ANA陽性、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等；不明原因胎兒生長受限（FGR）妊娠、羊水過少妊娠史。哪些人需要做免疫因素檢查8封閉抗體專題知識什么是封閉抗體在正常孕婦的血清中，存在一種抗配偶淋巴細胞的特異性IgG抗體(Antipaternallymphocyteantibody,APLA)，它可抑制淋巴細胞反應(yīng)（MLR），封閉母體淋巴細胞對培養(yǎng)的滋養(yǎng)層的細胞毒作用，防止輔助T細胞識別胎兒抗原的抑制物，并可阻止母親免疫系統(tǒng)對胚胎的攻擊。封閉同種抗原刺激的淋巴細胞產(chǎn)生巨噬細胞移動抑制因子（MIF），故稱其為封閉抗體（blockingantibodies,BA）。9封閉抗體專題知識封閉抗體缺乏為什么會發(fā)生復(fù)發(fā)性流產(chǎn)現(xiàn)代生殖免疫學(xué)認為，妊娠是一個極其復(fù)雜的生理過程。胚胎所攜帶的基因有一半來自母體，另一半來自父體。來自父體的抗原對于母體來說是外來抗原，母親體內(nèi)的免疫系統(tǒng)就會自動去清除它。但是，絕大多數(shù)婦女卻能繼續(xù)正常妊娠至足月，其原因就是因為妊娠以后有免疫耐受機制的存在，其中封閉抗體的產(chǎn)生起了重要的作用。研究認為，孕婦血中的APLA可以表現(xiàn)以下作用：①APLA中和同種異體抗原，而不使胎兒受到排斥；②抗體直接作用于具有免疫能力的細胞如：CTL細胞、NK細胞等；③直接結(jié)合到靶細胞的抗原上，從而降低它們對受體細胞參與的免疫反應(yīng)的敏感性。如果母體缺乏封閉抗體，則導(dǎo)致同種免疫識別保護功能低下，將來自父體的一半當(dāng)作異物排斥，就會導(dǎo)致流產(chǎn)。流產(chǎn)次數(shù)越多的患者，其體內(nèi)封閉抗體缺乏的可能性越大。封閉抗體的產(chǎn)生不足，使得免疫系統(tǒng)容易對胚胎產(chǎn)生免疫攻擊，母體對胎兒產(chǎn)生強烈的排斥現(xiàn)象，妊娠早期可出現(xiàn)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)，妊娠晚期則可出現(xiàn)妊娠高血壓疾病、胎兒宮內(nèi)生長受限，甚至出現(xiàn)胎死宮內(nèi)，最終導(dǎo)致流產(chǎn)。10封閉抗體專題知識封閉抗體缺乏如何治療封閉抗體陰性表示女方體內(nèi)缺乏封閉抗體，容易發(fā)生復(fù)發(fā)性流產(chǎn)，需要使用丈夫或第三方血液中的淋巴細胞給患者皮內(nèi)注射，使之體內(nèi)產(chǎn)生封閉抗體，以保護胚胎不被母體當(dāng)做異物排斥。這種治療稱為淋巴細胞主動免疫治療，簡稱主動免疫治療(LIT)。11封閉抗體專題知識主動免疫療法的作用機制誘導(dǎo)封閉抗體產(chǎn)生；促使Th1/Th2細胞因子平衡向Th2偏移，包括外周血和蛻膜局部；調(diào)節(jié)T淋巴細胞亞群比例，包括CD4/CD8比例、αβT/γδT等；下調(diào)NK細胞活性；糾正共刺激分子CD80、CD86表達異常。12封閉抗體專題知識哪些人需要做淋巴細胞主動免疫治療流產(chǎn)次數(shù)達2次或2次以上，封閉抗體檢測為陰性；夫婦雙方染色體正常；妻子無生殖道解剖異常及其他婦科檢查正常；內(nèi)分泌檢查正常，免疫球蛋白和甲狀腺功能正常；無弓形蟲、巨細胞病毒等感染；自身抗體檢測陰性；夫妻雙方肝、腎功能正常；夫妻雙方同意接受主動免疫療法，簽署知情同意書。13封閉抗體專題知識封閉抗體如何進行檢測

同種免疫型反復(fù)性自然流產(chǎn)患者主動免疫治療前后需要進行封閉抗體檢測，方法為抽取患者外周血2ml，分離血清（7日內(nèi)檢測2-8℃儲存，超過15日后檢測需要-20℃儲存），用ELISA法進行測定，如果APLA陰性，則需要進行淋巴細胞主動免疫治療。14封閉抗體專題知識免疫治療前要做哪些檢查雙方檢查血常規(guī)、ABO及Rh血型；甲肝IgM、丙肝IgM、乙肝二對半；梅毒血清實驗（RPR）、艾滋病抗體（HIV）；供血者檢查無異常方可做免疫治療，檢查結(jié)果3個月有效。16封閉抗體專題知識免疫治療的時機及方法一般主張從妊娠前開始免疫，抽取供血者外周血30ml，肝素抗凝，在無菌條件下淋巴細胞分離液分離淋巴細胞，調(diào)至濃度為2～4×107

/ml，細胞懸液量約3ml，將分離出的淋巴細胞注射到女方的左右上臂皮內(nèi)，共注射6～8個點。注射時間不受月經(jīng)期影響。每隔2～3周一次，4次為1個療程，治療過程中避孕。多采用2療程法，孕前孕后各免疫一療程。第一療程完成后2周復(fù)查封閉抗體，如果復(fù)查結(jié)果封閉抗體轉(zhuǎn)陽或弱陽，鼓勵患者在3個月內(nèi)妊娠，妊娠后仍需維持治療，懷孕5～6周繼續(xù)再進行一個療程主動免疫治療，每2周1次，共4次，妊娠16周后一般不需要加強免疫。轉(zhuǎn)陽性3個月后未妊娠，可每2～3個月鞏固治療一次，或重新治療1個療程。如果復(fù)查結(jié)果封閉抗體仍為陰性，重復(fù)免疫治療一個療程，直至封閉抗體轉(zhuǎn)陽；如果三個療程仍未能轉(zhuǎn)陽，則需要另覓治療方法。部分患者可能在未完成一個療程的時候已經(jīng)懷上，那仍然需要至少完成一個療程的治療。17封閉抗體專題知識主動免疫治療效果預(yù)測和評價指標免疫療法主要使被治療者產(chǎn)生同種免疫反應(yīng)，因而檢測治療過程中的免疫反應(yīng)效果，應(yīng)根據(jù)是否產(chǎn)生封閉抗體來判斷。檢測方法通常有以下幾種：封閉抗體ELISA法測定：封閉抗體陽性則認為效果良好，可以妊娠。封閉抗體仍然陰性，需要進行第二個療程治療。皮膚遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)：皮內(nèi)接種淋巴細胞的部位產(chǎn)生發(fā)紅與硬結(jié)時，可認為已發(fā)生遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)；如不能產(chǎn)生遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，提示接種的淋巴細胞數(shù)量少或活性低下。遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)有縮小傾向者，下次妊娠預(yù)后良好。T細胞及NK細胞活性測定。18封閉抗體專題知識主動免疫治療的安全性主動免疫治療在全球應(yīng)用已有20余年，其主要的副作用為感染性疾?。ㄈ绺窝?、HIV等），輸血反應(yīng)、過敏反應(yīng)、移植抗宿主反應(yīng)等。關(guān)于其對母體免疫功能的影響，到目前為止尚未見有易感染和惡性腫瘤的報道。關(guān)于對子代的影響，林其德、張建平、李大金等經(jīng)過十多年的觀察，未見主動免疫對母體及子代產(chǎn)生明顯副作用。主動免疫的后代在出生體重、體格生長發(fā)育和智力，包括個人-社會、語言、精細動作-適應(yīng)性、大運動4個能區(qū)方面與同齡兒童比較差異無顯著性意義。綜合國內(nèi)外文獻，多數(shù)學(xué)者認為主動免疫療法是較為安全的。19封閉抗體專題知識主動免疫治療的療效主動免疫療法在全球應(yīng)用已多年，療效肯定，但各家報道的療效差異顯著：71％～100％。由于同種免疫型RSA的診斷是建立在排除其他病因基礎(chǔ)上的，因此，對于治療失敗的患者應(yīng)重新進行詳細的病因篩查，尤其要排除胚胎染色體核型異常。20封閉抗體專題知識反復(fù)自然流產(chǎn)患者免疫治療前后封閉抗體的變化及其意義

（中國衛(wèi)生檢驗雜志2007年10月第17卷第10期）

中山大學(xué)附屬第二醫(yī)院免疫治療前后封閉抗體的變化治療前一個療程后二個療程后三個療程后陽性47715188陰性94122638陽性率4.76%75.98%95.96%免疫治療后封閉抗體陽性者與陰性者的妊娠結(jié)局比較治療后抗體例數(shù)妊娠成功再次流產(chǎn)妊娠成功率陽性8938484594.96%陰性178947.06%合計9108565494.07%21封閉抗體專題知識習(xí)慣性流產(chǎn)患者免疫治療前后封閉抗體的變化及其意義

（廣西醫(yī)學(xué)2009年1月第31卷第1期）

廣西婦幼保健院免疫治療前后封閉抗體的變化治療前一個療程后二個療程后三個療程后陽性28519231143陰性1098579348205陽性率2.49%47.27%68.32%81.33%免疫治療后封閉抗體陽性者與陰性者的妊娠結(jié)局比較治療后抗體例數(shù)妊娠成功再次流產(chǎn)妊娠成功率陽性8937802787.35%陰性205853441.46%合計10988656178.78%22封閉抗體專題知識封閉抗體檢測方法一、CDC方法：微量淋巴細胞毒二、FCM方法：流式細胞儀三、ELISA方法：酶聯(lián)免疫法23封閉抗體專題知識CDC方法陰性陽性原理：HLA抗體與淋巴細胞表面的相應(yīng)抗原結(jié)合后激活補體，導(dǎo)致細胞膜損傷，通透性增強，染料進入細胞，細胞死亡。在倒置相差顯微鏡下觀察，著色的細胞為死亡細胞，視野下有較多細胞死亡為陽性。特點：操作繁瑣，檢測活細胞，要求標本新鮮；假陽性，假陰性率高。此方法目前已基本淘汰。24封閉抗體專題知識FCM方法CD3陽性CD8陽性檢測CD分子如CD3、CD4、CD8等特點：儀器昂貴；檢測多個CD,準確性高。25封閉抗體專題知識ELISA方法直接檢測HLA抗體等，操作簡便；結(jié)果方便易讀，尤其適用于大樣本的檢測；無須使用熒光顯微鏡，流式細胞儀等，成本低；結(jié)果不是很準確，假陽性，假陰性率高。26封閉抗體專題知識HLA基因組成一、HLAⅠ類基因經(jīng)典Ⅰ類基因（HLA-Ⅰa）:分為A、B、C，高度的多態(tài)性。非經(jīng)典Ⅰ類基因（HLA-Ⅰb）:分為E、F和G等基因。二、HLAⅡ類基因分為DR、DQ、DP、DNA、DOB和DM六個亞區(qū)。長約1000Kb.三、HLAⅢ類基因人類基因組中密度最大的區(qū)域。位于Ⅰ類和Ⅱ類區(qū)之間，長1000kb.編碼補體有關(guān)的基因：C2、C4A、C4B、Bf、TNFA和TNFB、Hsp70-1、Hsp70-2和Hsp-Hom、CYP21A和CYP21B。27封閉抗體專題知識全國已有三百多家醫(yī)院及檢測機構(gòu)開展封閉抗體檢測中山大學(xué)附屬第二醫(yī)院中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院廣東省婦幼保健院廣州婦女兒童醫(yī)療中心廣東省計劃生育科研所廣州醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院解放軍第四五八醫(yī)院廣州市花都區(qū)人民醫(yī)院廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗中心中山大學(xué)達安臨床檢驗中心廣州華銀醫(yī)學(xué)檢驗中心珠海市婦幼保健院深圳市婦幼保健院深圳中山泌尿外科醫(yī)院粵北人民醫(yī)院惠州市中心人民醫(yī)院東莞東華醫(yī)院東莞市人民醫(yī)院梅州市人民醫(yī)院佛山市中山醫(yī)院廣西婦幼保健院賀州市人民醫(yī)院柳州市人民醫(yī)院柳州市婦幼保健院中南大學(xué)湘雅醫(yī)院郴州市人民醫(yī)院河南省人民醫(yī)院河南中醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院鄭州市婦幼保健院新鄉(xiāng)市婦幼保健院河南省人口和計劃生育科學(xué)技術(shù)研究院開封市醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所山東大學(xué)齊魯醫(yī)院山東省立醫(yī)院山東省中醫(yī)院青島市婦幼保健院濰坊市人民醫(yī)院淄博市婦幼保健院威海婦女兒童醫(yī)療中心泰安市中心醫(yī)院河北省人民醫(yī)院石家莊市第四人民醫(yī)院解放軍第二五五醫(yī)院北京天倫不孕不育醫(yī)院西安交大附屬第一醫(yī)院陜西省婦幼保健院內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院烏海市婦幼保健院佳木斯市婦幼保健院大慶過敏病醫(yī)院沈陽九州醫(yī)院大連建國腫瘤醫(yī)院四川大學(xué)華西二院瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院蘇北人民醫(yī)院徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院海南省人民醫(yī)院溫州市第三人民醫(yī)院貴州省人民醫(yī)院新疆佳音醫(yī)院韶關(guān)市婦幼保健院沈陽202醫(yī)院28封閉抗體專題知識2009年第一屆封閉抗體培訓(xùn)會議在粵召開29封閉抗體專題知識免疫治療知情同意書30封閉抗體專題知識參考文獻[1]習(xí)慣性流產(chǎn)患者免疫治療前后封閉抗體的變化及其意義.李東明,甘騰華,穆小堅,歐珊,許涓涓,辛瑞寧.廣西醫(yī)學(xué),2009,31(1).[2]反復(fù)自然流產(chǎn)患者免疫治療前后封閉抗體的變化及其意義.羅曉紅,張金華,李曉園,王英,侯玲玉,段朝暉.中國衛(wèi)生檢驗雜志,2007(10).[3]淋巴細胞主動免疫治療復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的臨床研究.梁寶珠,譚忠偉,黎彩鵬,李玉萍.中國婦幼保健,2007(25).[4]聯(lián)合主動免疫治療原因不明習(xí)慣性流產(chǎn)療效分析.郝桂琴,李蓉,劉曉平,笪堅,侯震暉,鄭琛琛.生殖醫(yī)學(xué)雜志,2006(6).[5]原因不明習(xí)慣性流產(chǎn)者免疫治療前后APCA的比較.施選性,孫悅玲,紀樹芳.中國優(yōu)生與遺傳雜志,2005(10).[6]反復(fù)自然流產(chǎn)不孕患者的封閉抗體檢測與治療.吳日然，譚志偉，廖月嬋等.醫(yī)藥論壇雜志，2005,26(9):7-9.[7]用丈夫淋巴細胞治療原因不明性習(xí)慣性流產(chǎn)59例分析.楊玉發(fā)，張國清，黃玲惠等。寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2005,27(8):557-558.[8]原因不明性反復(fù)自然流產(chǎn)患者免疫治療結(jié)局的探討.李尚為，黃仲英，馬黔紅等。實用婦產(chǎn)科雜志，2001,17(2):105-106.[9]SzpakowskiA,MalinowskiA,GlowackaE。TheinfluenceofPaternallymphocyteimmunizationonthebalanceofTh1/Th2typereactivityinwomenwithunexplainedrecurrentspontaneousabortion[J].GinekolPol,2000,71(6):586-592.[10]PandeyMK,AgreawalS.InductionofMLR-Bfandprotectionoffetallossacurrentdoubleblindrandomizedtri