酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶培訓(xùn)課件

酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶動(dòng)物細(xì)胞獲得：離心分離技術(shù)、雜交瘤技術(shù)、胰蛋白酶消化處理技術(shù)等培養(yǎng)方式：懸浮培養(yǎng)、貼壁培養(yǎng)和微載體培養(yǎng)等植物細(xì)胞獲得：機(jī)械搗碎、酶解和誘導(dǎo)愈傷組織的方法培養(yǎng)方式：固體培養(yǎng)、液體淺層培養(yǎng)、液體懸浮培養(yǎng)等,在次級(jí)代謝物的生產(chǎn)過(guò)程中通常采用液體懸浮培養(yǎng)。2酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶第一節(jié)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶植物是各種色素、藥物、香精和酶等天然產(chǎn)物的主要來(lái)源：

目前已知的天然化合物超過(guò)30000種,其中80%以上來(lái)自于植物;從植物中得到的最普遍又必不可缺的藥物有17類(lèi),我國(guó)普遍使用的中草藥及其制劑80%以上來(lái)源于植物,美國(guó)每年使用的植物來(lái)源的藥物超過(guò)30億美元;全世界每年使用的植物來(lái)源的芳香化合物的價(jià)值超過(guò)15億美元。3酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶研發(fā)歷史1902年,哈勃蘭德(Haberlandt)首次提出分離植物單細(xì)胞并將其培養(yǎng)成植株的設(shè)想,100年來(lái),隨著培養(yǎng)基的研制和培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展,已經(jīng)從200多種植物中分離出細(xì)胞,不僅可以通過(guò)細(xì)胞的再分化生成完整的植株,而且可以通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng),獲得400多種人們所需的各種物質(zhì)。4酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶20世紀(jì)80年代以后，植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)迅速發(fā)展,已成為生物工程研究開(kāi)發(fā)的新熱點(diǎn)。5酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶主要內(nèi)容1.植物細(xì)胞的特點(diǎn)2.植物細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)3.植物細(xì)胞培養(yǎng)的工藝條件及其控制植物細(xì)胞培養(yǎng)的工藝流程植物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基4.植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶的工藝過(guò)程6酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶一、植物細(xì)胞的特點(diǎn)7酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶植物細(xì)胞結(jié)構(gòu)8酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶動(dòng)物細(xì)胞模式圖9酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶

植物、動(dòng)物、微生物細(xì)胞的特性比較細(xì)胞種類(lèi)植物細(xì)胞微生物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞大小/um200～3001～1010～100倍增時(shí)間/h﹥120.3-6﹥15營(yíng)養(yǎng)要求簡(jiǎn)單簡(jiǎn)單復(fù)雜光照要求大多數(shù)要求不要求不要求對(duì)剪切力敏感大多數(shù)不敏感非常敏感主要產(chǎn)物色素、藥物、香精、酶等醇、有機(jī)酸、氨基酸、抗生素、核苷酸、酶等疫苗、激素、單克隆抗體、多肽藥、酶等10酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶三者之間的差異主要有：植物細(xì)胞>動(dòng)物細(xì)胞>微生物細(xì)胞。動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞的生產(chǎn)周期比微生物長(zhǎng)。植物細(xì)胞和微生物細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)要求較簡(jiǎn)單。植物細(xì)胞的生長(zhǎng)以及次級(jí)代謝物的生產(chǎn)要求一定的光照。植物細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞對(duì)剪切力敏感。植物、微生物和動(dòng)物細(xì)胞的主要目的產(chǎn)物各不相同。11酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶二、植物細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)首先從植物外植體中選育出植物細(xì)胞,再經(jīng)過(guò)篩選、誘變、原生質(zhì)體融合或DNA重組等技術(shù)而獲得優(yōu)良的植物細(xì)胞。然后,在人工控制條件的植物細(xì)胞反應(yīng)器中進(jìn)行植物細(xì)胞培養(yǎng),從而獲得各種所需的產(chǎn)物。12酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶植物細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)各種天然產(chǎn)物,與從植物中提取分離這些物質(zhì)相比,具有如下顯著特點(diǎn)。1.提高產(chǎn)率2.縮短周期

植物細(xì)胞生長(zhǎng)的倍增時(shí)間一般為12～60h,一般生產(chǎn)周期15～30天。3.易于管理,減輕勞動(dòng)強(qiáng)度

不受地理環(huán)境和氣候條件等的影響。4.提高產(chǎn)品質(zhì)量

主要產(chǎn)物的產(chǎn)率較高,雜質(zhì)較少；減少環(huán)境中有害物質(zhì)的污染和微生物、昆蟲(chóng)等的侵蝕；產(chǎn)物易于分離純化。5.其他對(duì)剪切力敏感、生產(chǎn)周期長(zhǎng)等缺點(diǎn)；許多植物細(xì)胞的生長(zhǎng)和代謝需要一定的光照。13酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶三、植物細(xì)胞培養(yǎng)的工藝條件及其控制（一）植物細(xì)胞培養(yǎng)的工藝流程一般為：

外植體-----細(xì)胞的獲取-----細(xì)胞培養(yǎng)-----分離純化-----產(chǎn)物

14酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶1.外植體的選擇與處理外植體：指從植株取出,經(jīng)過(guò)預(yù)處理后,用于植物組織和細(xì)胞培養(yǎng)的植物組織(包括根、莖、葉、芽、花、果實(shí)、種子等)片段或小塊。選擇：首先要選擇無(wú)病蟲(chóng)害、生長(zhǎng)力旺盛、生長(zhǎng)有規(guī)則的植株,如果植物細(xì)胞是用于生產(chǎn)次級(jí)代謝物,則需從產(chǎn)生該次級(jí)代謝物的組織部位中切取一部分組織,經(jīng)過(guò)清洗,除去表面的灰塵污物。操作：將上述外植體切成0.5～1cm左右的片段或小塊,用70%～75%乙醇溶液或者5%次氯酸鈉、10%漂白粉、0.1%升汞溶液等進(jìn)行消毒處理,再用無(wú)菌水充分漂洗,以除去殘留的消毒劑。15酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶2.植物細(xì)胞的獲取直接分離法,愈傷組織誘導(dǎo)法原生質(zhì)體再生法16酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶直接分離法:

植物細(xì)胞可以直接從外植體中分離得到。分為機(jī)械法和酶解法兩種。1）機(jī)械搗碎法分離植物細(xì)胞是先將葉片等外植體輕輕搗碎,然后通過(guò)過(guò)濾和離心分離細(xì)胞。優(yōu)點(diǎn):獲得的植物細(xì)胞沒(méi)有經(jīng)過(guò)酶的作用,不會(huì)受到傷害;不需要經(jīng)過(guò)質(zhì)壁分離,有利于進(jìn)行生理和生化研究。缺陷：由于受到機(jī)械的作用,細(xì)胞結(jié)構(gòu)會(huì)受到一定的傷害,獲得完整的細(xì)胞團(tuán)或細(xì)胞數(shù)量少,其使用不普遍。2）酶解法分離細(xì)胞是利用果膠酶、纖維素酶等處理外植體,分離出具有代謝活性的細(xì)胞。該法不僅能降解中膠層,而且還能軟化細(xì)胞壁。所以用酶解法分離細(xì)胞的時(shí)候,必須對(duì)細(xì)胞給予滲透壓保護(hù),如甘露醇等。17酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶愈傷組織誘導(dǎo)法愈傷組織是一種能迅速增殖的無(wú)特定結(jié)構(gòu)和功能的薄壁細(xì)胞團(tuán)。通過(guò)愈傷組織誘導(dǎo)法獲得植物細(xì)胞的基本過(guò)程:

將選擇好含有一定量的生長(zhǎng)素和分裂素的液體培養(yǎng)基加入0.7%～0.8%的瓊脂,制成半固體的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基。滅菌、冷卻后,將上述外植體植入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,于25℃左右培養(yǎng)一段時(shí)間,即從外植體的切口部位長(zhǎng)出小細(xì)胞團(tuán),此細(xì)胞團(tuán)稱(chēng)之為愈傷組織。一般培養(yǎng)1～3周后,將愈傷組織分散接種于新的半固體培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng),以獲得更多的愈傷組織。18酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶原生質(zhì)體再生法原生質(zhì)體再生法:

原生質(zhì)體(protoplast)是除去細(xì)胞壁后得到的微球體。植物原生質(zhì)體的獲得：可從培養(yǎng)的植物單細(xì)胞、愈傷組織和植物的組織、器官中獲得。分離方法：機(jī)械分離法和酶解法兩種,一般都采用酶解法。酶解法：植物細(xì)胞的細(xì)胞壁的基本成分是纖維素、半纖維素和果膠物質(zhì)。為使細(xì)胞壁降解釋放原生質(zhì)體,必須使用能催化纖維素、半纖維素和果膠物質(zhì)水解的酶制劑,最常用的有纖維素酶和果膠酶混合物。在原生質(zhì)體制備過(guò)程中,為了防止原生質(zhì)體被破壞,一般要采用用高滲溶液,以利于完整原生質(zhì)體的釋放。配制高滲溶液的溶質(zhì)稱(chēng)為滲透壓穩(wěn)定劑。常用的滲透壓穩(wěn)定劑有甘露醇、山梨醇、蔗糖、葡萄糖、鹽類(lèi)等。原生質(zhì)體分離后,經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)和適當(dāng)稀釋,在一定條件下進(jìn)行原生質(zhì)體培養(yǎng),使細(xì)胞壁再生,而形成單細(xì)胞懸浮液。細(xì)胞壁再生后得到的植物單細(xì)胞,經(jīng)過(guò)單細(xì)胞培養(yǎng),長(zhǎng)成細(xì)胞團(tuán),再經(jīng)過(guò)繼代培養(yǎng),形成由原生質(zhì)體形成的細(xì)胞系。19酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶3.細(xì)胞懸浮培養(yǎng)

將上述獲得的植物細(xì)胞在無(wú)菌條件下,轉(zhuǎn)入新的液體培養(yǎng)基,在人工控制條件的生物反應(yīng)器中,進(jìn)行細(xì)胞懸浮培養(yǎng),獲得所需的產(chǎn)物。4.分離純化

細(xì)胞培養(yǎng)完成后,分離收集細(xì)胞或者培養(yǎng)液,再采用各種生化技術(shù),從細(xì)胞或者培養(yǎng)液中將各種物質(zhì)分離,得到所需的產(chǎn)物。20酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶水稻的外植體（幼胚）和愈傷組織外植體愈傷組織21酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶（二）植物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基1.培養(yǎng)基特點(diǎn)(1)

植物細(xì)胞的生長(zhǎng)和代謝需要大量的無(wú)機(jī)鹽:P、S、N、K、Na、Ca、Mg等大量元素（102～3×103mg/L）；Mn、Zn、Co、Mo、Cu、B、I等微量元素（10-2～30mg/L）。(2)植物細(xì)胞需要多種維生素和植物生長(zhǎng)激素:如硫胺素、吡哆素、煙酸、肌醇、生長(zhǎng)素、分裂素等。培養(yǎng)液中維生素的濃度一般為0.1～100mg/L(表2-9);而植物生長(zhǎng)激素的濃度一般為0.1～10mg/L,(3)植物細(xì)胞要求的氮源一般為無(wú)機(jī)氮源:即可以同化硝酸鹽和銨鹽。(4)植物細(xì)胞一般以蔗糖為碳源:蔗糖的濃度一般為2%～5%。

22酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶2.幾種常用的植物細(xì)胞培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基（LS和RM培養(yǎng)基）

B5培養(yǎng)基

White培養(yǎng)基

KM-8P培養(yǎng)基應(yīng)用最廣的是MS培養(yǎng)基和LS培養(yǎng)基

MS培養(yǎng)基是1962年由Murashinge和Skoog為煙草細(xì)胞培養(yǎng)而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基。LS、RM培養(yǎng)基是在其基礎(chǔ)上演變而來(lái)的。23酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶3.植物細(xì)胞培養(yǎng)基的配制將各種組分分成大量元素液、微量元素液、維生素溶液和植物激素溶液等幾個(gè)大類(lèi),先配制成10倍或者100倍濃度的母液,放在冰箱保存?zhèn)溆?。在使用時(shí),吸取一定體積的各類(lèi)母液,按照比例混合、稀釋,制備所需的培養(yǎng)基。24酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶(三)溫度的控制植物細(xì)胞培養(yǎng)的溫度一般控制在室溫范圍(25℃左右)。溫度高些,對(duì)植物細(xì)胞的生長(zhǎng)有利,溫度低些,則對(duì)次級(jí)代謝物的積累有利。但是通常不能低于20℃,也不要高于35℃。有些植物細(xì)胞的最適生長(zhǎng)溫度和最適產(chǎn)酶溫度有所不同,要在不同的階段控制不同的溫度。25酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶(四)pH值的控制

植物細(xì)胞的pH值一般控制在微酸性范圍,即pH5.0～6.0。培養(yǎng)基配制時(shí),pH值一般控制在5.5～5.8范圍,在植物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,一般pH值變化不大。26酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶(六)光照的控制大多數(shù)植物細(xì)胞的生長(zhǎng)以及次級(jí)代謝物的生產(chǎn)要求一定波長(zhǎng)的光的照射,并對(duì)光照強(qiáng)度和光照時(shí)間有一定的要求,而有些植物次級(jí)代謝物的生物合成卻受到光的抑制。在植物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,應(yīng)當(dāng)根據(jù)植物細(xì)胞的特性以及目標(biāo)次級(jí)代謝物的種類(lèi)不同,進(jìn)行光照的調(diào)節(jié)控制28酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶(七)前體的添加前體是指處于目的代謝物代謝途徑上游的物質(zhì)。為了提高植物細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)次級(jí)代謝物的產(chǎn)量,在培養(yǎng)過(guò)程中添加目的代謝物的前體是一種有效的措施。29酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶(八)刺激劑的應(yīng)用刺激劑(elecitor)可以促使植物細(xì)胞中的物質(zhì)代謝朝著某些次級(jí)代謝物生成的方向進(jìn)行,從而強(qiáng)化次級(jí)代謝物的生物合成,提高某些次級(jí)代謝物的產(chǎn)率。所以在植物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中添加適當(dāng)?shù)拇碳┛梢燥@著提高某些次級(jí)代謝物的產(chǎn)量。常用的刺激劑：

微生物細(xì)胞壁碎片和果膠酶、纖維素酶等微生物胞外酶。30酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶四、植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶的工藝過(guò)程

以大蒜細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)超氧化物歧化酶（SOD）為例(1)大蒜愈傷組織的誘導(dǎo)

選取結(jié)實(shí)、飽滿(mǎn)、無(wú)病蟲(chóng)害的大蒜蒜瓣，去除外皮，先用70%乙醇消毒20s，再用0.1%升汞消毒10min，然后無(wú)菌水漂洗3次。在無(wú)菌條件下，切成0.5cm3的小塊，植入含有3mg/L2,4-D和1.2mg/L6-BA的半固體MS培養(yǎng)基中，在25℃，600lux，12h/d光照條件下培養(yǎng)18d，誘導(dǎo)得到愈傷組織，每18天繼代一次。31酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶(2)大蒜懸浮細(xì)胞培養(yǎng)

將上述在半固體MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)18d的愈傷組織，在無(wú)菌條件下轉(zhuǎn)入含有3mg/L2,4-D和1.2mg/L6-BA（芐基腺嘌呤）的液體MS培養(yǎng)基中，加入滅菌的玻璃珠，25℃，600lux，12h/d光照條件下震蕩培養(yǎng)18d，使愈傷組織分散成為小細(xì)胞團(tuán)或單細(xì)胞。然后在無(wú)菌條件下，經(jīng)過(guò)篩網(wǎng)將小細(xì)胞團(tuán)或單細(xì)胞轉(zhuǎn)入含有3mg/L2,4-D和1.2mg/L6-BA的液體MS培養(yǎng)基中，25℃,600lux，12h/d光照條件下震蕩培養(yǎng)18d。32酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶(3)酶的分離純化

細(xì)胞培養(yǎng)完成后，收集細(xì)胞，經(jīng)過(guò)細(xì)胞破碎、提取、分離得到超氧化物歧化酶。超氧化物歧化酶(SOD)

：

是催化超氧負(fù)離子進(jìn)行氧化還原反應(yīng)的氧化還原酶,具有抗輻射、抗氧化、抗衰老的功效。SOD可以從動(dòng)物、植物和微生物細(xì)胞中提取分離得到。33酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶第二節(jié)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是在20世紀(jì)50年代,伊爾勒(Earle)等人開(kāi)始進(jìn)行病毒疫苗細(xì)胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)上,于20世紀(jì)60年代迅速發(fā)展起來(lái)的技術(shù)。1967年開(kāi)發(fā)的適合動(dòng)物細(xì)胞貼壁培養(yǎng)的微載體技術(shù),1975年發(fā)明的雜交瘤技術(shù),有力地推動(dòng)了動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展。已經(jīng)在疫苗、激素、多肽藥物、單克隆抗體、酶、皮膚等人體組織、器官等功能性蛋白質(zhì)的生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用,工業(yè)化生產(chǎn)達(dá)到20000L甚至更大的規(guī)模,已經(jīng)成為生物工程研究開(kāi)發(fā)的重要領(lǐng)域。34酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶1.動(dòng)物細(xì)胞的特性(1)在于沒(méi)有細(xì)胞壁(2)動(dòng)物細(xì)胞的體積比微生物細(xì)胞大幾千倍,稍小于植物細(xì)胞的體積。(3)大部分動(dòng)物細(xì)胞在肌體內(nèi)相互粘連以集群形式存在,在細(xì)胞培養(yǎng)中大部分細(xì)胞具有群體效應(yīng)、錨地依賴(lài)性、接觸抑制性以及功能全能性。(4)動(dòng)物細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)要求較復(fù)雜,必須供給各種氨基酸、維生素、激素和生長(zhǎng)因子等。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基中一般需要加進(jìn)5%～10%的血清。35酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶

2.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)主要用于各種功能蛋白質(zhì)的生產(chǎn)。細(xì)胞生長(zhǎng)速度慢。（需添加抗生素）細(xì)胞體積大，無(wú)細(xì)胞壁保護(hù)，對(duì)剪切力敏感。反應(yīng)過(guò)程成本高，產(chǎn)品價(jià)格貴。大多數(shù)細(xì)胞具有錨地依賴(lài)性，宜貼壁培養(yǎng)；部分細(xì)胞可采用懸浮培養(yǎng)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基成分較復(fù)雜,一般要添加血清或其代用品,產(chǎn)物的分離純化過(guò)程較繁雜,成本較高。原代細(xì)胞一般繁殖50代。36酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶3.培養(yǎng)方法

(1)懸浮培養(yǎng)來(lái)自血液、淋巴組織的細(xì)胞,腫瘤細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞(2)貼壁培養(yǎng)存在于淋巴組織以外的組織、器官中的細(xì)胞（成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞等）；采用滾瓶培養(yǎng)系統(tǒng)、微載體系統(tǒng)。(3)固定化細(xì)胞培養(yǎng)（錨地依賴(lài)性和非錨地依賴(lài)性細(xì)胞；吸附法和包埋法）37酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶4.培養(yǎng)基的組成與配置

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基的組分較為復(fù)雜,包括氨基酸、維生素、無(wú)機(jī)鹽、葡萄糖、激素、生長(zhǎng)因子等。

首先配制各類(lèi)母液,如100倍濃度氨基酸母液、1000倍濃度維生素母液、100倍濃度葡萄糖母液(溶解于平衡鹽溶液)等;在使用前,分別吸取一定體積的母液,混勻得到混合母液,膜過(guò)濾除菌后,冷凍備用;使用時(shí),取一定體積的混合母液,用無(wú)菌的平衡鹽溶液稀釋至所需濃度。38酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶

5.培養(yǎng)條件的影響與控制（1）溫度：一般控制在36.5℃，波動(dòng)范圍0.25℃.（2）pH值：一般控制在pH7.0-7.6的微堿性范圍內(nèi)（最優(yōu)pH7.4）。

調(diào)節(jié)pH值,通常采用CO2

和NaHCO3

溶液；維持pH值的穩(wěn)定,通常在培養(yǎng)液中加入緩沖系統(tǒng)；常用酚紅監(jiān)控pH值（藍(lán)紅色為pH7.6,紅色為pH7.4,橙色為pH7.0,黃色為pH6.5）。（3）滲透壓:應(yīng)與細(xì)胞內(nèi)滲透壓相同。（4）溶解氧：根據(jù)情況隨時(shí)調(diào)節(jié)。39酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶6.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶的工藝過(guò)程

通過(guò)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)獲得的酶主要有膠原酶、纖溶酶原活化劑、尿激酶等。現(xiàn)以人黑色素瘤細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)組織纖溶酶原活化劑為例,說(shuō)明動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶的工藝過(guò)程及其控制。40酶工程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶工藝過(guò)程：1.人黑色素瘤細(xì)胞培養(yǎng)基（Eagle培養(yǎng)基