腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)（免疫學(xué)檢驗(yàn)課件）

第二十八章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)?zāi)[瘤是危害人類健康最嚴(yán)重的疾病之一。腫瘤的免疫學(xué)檢驗(yàn)即通過(guò)免疫學(xué)方法檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物，實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤的早期篩選、輔助診斷、療效考核、病情監(jiān)測(cè)和預(yù)后判斷等目的。前言第一節(jié)腫瘤標(biāo)志物概述一、腫瘤抗原（tumorantigen）

指在細(xì)胞癌變過(guò)程中出現(xiàn)的新抗原或腫瘤細(xì)胞過(guò)度表達(dá)或異常表達(dá)的抗原物質(zhì)的總稱。（一）根據(jù)腫瘤抗原的特異性分類1.腫瘤特異性抗原（tumorsepificantigen，TSA）指只存在于腫瘤細(xì)胞表面，而不存在于正常相應(yīng)組織或細(xì)胞的大分子物質(zhì)。2.腫瘤相關(guān)抗原（tumorassociatedantigen，TAA）指非腫瘤細(xì)胞特有，在腫瘤細(xì)胞和相應(yīng)的正常細(xì)胞中均存在的抗原物質(zhì)，只是在細(xì)胞癌變時(shí)其含量才會(huì)明顯增加。（二）根據(jù)腫瘤抗原產(chǎn)生的機(jī)制分類1．化學(xué)或物理因素誘發(fā)的腫瘤抗原2．病毒誘發(fā)的腫瘤抗原3．自發(fā)腫瘤抗原4．正常細(xì)胞成分的異常表達(dá)

二、腫瘤標(biāo)志物腫瘤標(biāo)志物（tumormarker，TM）

指在惡性腫瘤發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中，由腫瘤細(xì)胞合成、分泌，或是由機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞反應(yīng)而產(chǎn)生和（或）升高的、可預(yù)示腫瘤存在的一類物質(zhì)，存在于血液、體液、細(xì)胞或組織中。（一）腫瘤標(biāo)志物的定義（二）理想的腫瘤標(biāo)志物（三）影響TM濃度的因素（7個(gè)）第二節(jié)機(jī)體的抗腫瘤免疫效應(yīng)機(jī)制非特異性抗腫瘤免疫特異性抗腫瘤免疫體液免疫----次要細(xì)胞免疫----主要免疫系統(tǒng)可產(chǎn)生抗腫瘤抗原的特異性抗體，但此效應(yīng)并非機(jī)體抗腫瘤的重要機(jī)制。1.補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒作用（CDC）2.抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC)3.抗體的免疫調(diào)理作用4.抗體的封閉作用5.干擾腫瘤細(xì)胞的黏附作用一、抗腫瘤的體液免疫效應(yīng)機(jī)制二、抗腫瘤的細(xì)胞免疫效應(yīng)機(jī)制

（一）T細(xì)胞（二）NK細(xì)胞（三）巨噬細(xì)胞（四）樹(shù)突狀細(xì)胞第三節(jié)腫瘤的免疫逃逸機(jī)制一、腫瘤細(xì)胞有關(guān)方面的因素二、宿主免疫系統(tǒng)有關(guān)的因素第四節(jié)常見(jiàn)的腫瘤標(biāo)志物一、胚胎抗原類腫瘤標(biāo)志物二、糖鏈抗原類腫瘤標(biāo)志物三、酶類腫瘤標(biāo)志物四、激素類腫瘤標(biāo)志物五、蛋白質(zhì)類腫瘤標(biāo)志物六、其他常用的腫瘤標(biāo)志物一、胚胎抗原類腫瘤標(biāo)志物（一）癌胚抗原（carcinoembryonicantigen，CEA）在胚胎期主要存在于胎兒的胃腸管、胰腺和肝臟，出生后組織內(nèi)含量很低。在胃腸道惡性腫瘤，乳腺癌、肺癌及其他惡性腫瘤患者亦可檢出。參考值：健康成人CEA濃度＜2.5μg/L（CLIA）。

臨床應(yīng)用時(shí)，不建議將CEA用于對(duì)健康人群進(jìn)行早期結(jié)直腸癌的篩查。術(shù)前CEA水平可與其他因素一起聯(lián)合用于手術(shù)方案的選擇，對(duì)于CEA水平升高的患者需評(píng)估是否存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，不建議根據(jù)術(shù)前CEA水平選擇患者輔助化療方案。（二）甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP）參考值：健康成人＜20μg/L（CLIA）。AFP在胎兒期分別由卵黃囊和胎肝合成，在胎兒出生后18個(gè)月，AFP濃度下降。正常成人肝細(xì)胞幾乎不產(chǎn)生AFP。當(dāng)肝細(xì)胞或生殖腺胚胎組織等癌變時(shí)AFP大量表達(dá)。AFP主要用于輔助診斷原發(fā)性肝癌及篩查高危人群，也用于肝癌的療效及預(yù)后評(píng)估。持續(xù)一個(gè)月以上AFP﹥500μg/L，并能排除妊娠、活動(dòng)性肝炎、睪丸癌或卵巢畸胎瘤等，意味著存在肝癌。良性肝臟疾病如肝炎、肝硬化AFP也可升高，但95%小于200μg/L。（三）胰胚胎抗原（pancreaticoncofetalantigen，POA）在胚胎期主要存在于胎兒的胃腸管、胰腺和肝臟，出生后組織內(nèi)含量很低。在胃腸道惡性腫瘤，乳腺癌、肺癌及其他惡性腫瘤患者亦可檢出。參考值：健康成人CEA濃度＜2.5μg/L（CLIA）。糖鏈抗原（carbohydrateantigen，CA）是由于細(xì)胞膜糖蛋白中的糖基異常形成的抗原。正常細(xì)胞膜表面有豐富的糖蛋白，正常細(xì)胞惡變時(shí)，糖蛋白發(fā)生變異，形成了與正常細(xì)胞不同的特殊抗原，糖鏈抗原通常存在于腫瘤細(xì)胞的表面或由腫瘤細(xì)胞分泌。二、糖鏈抗原類腫瘤標(biāo)志物CA125存在于胎兒體腔上皮分化而來(lái)的心包膜、腹膜及胸膜等組織。是上皮性卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌的標(biāo)志物，在漿液性子宮內(nèi)膜樣癌、透明細(xì)胞癌、輸卵管癌及未分化卵巢癌患者的亦可明顯升高，但在黏液卵巢癌不表達(dá)。參考區(qū)間成人<7.0μg/L

CLIACA19-9存在于胰腺、膽道、胃、腸、子宮內(nèi)膜、涎腺上皮上的黏蛋白型糖蛋白。正常血清中含量較低，但在多種消化系腫瘤大量表達(dá)。胰腺癌和結(jié)直腸癌的標(biāo)志物。血清CA19-9陽(yáng)性臨界值為37kU/L。85％～95％胰腺癌患者CA19-9為陽(yáng)性。參考區(qū)間成人≤37KU/L

CLIA

CA15-3抗原決定簇是由糖和多肽兩部分組成的糖蛋白類抗原。主要在乳腺癌、肺腺癌、胰腺癌等腺癌細(xì)胞表達(dá)。約30％～50％的乳腺癌患者CA15-3明顯升高，為乳腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)監(jiān)測(cè)的最佳指標(biāo)。參考區(qū)間成人≤25KU/L

CLIACA15-3在乳腺癌治療中的動(dòng)態(tài)變化

三、酶類腫瘤標(biāo)志物細(xì)胞內(nèi)的酶因腫瘤細(xì)胞破壞或改變細(xì)胞膜的通透性，而釋放至血液；腫瘤細(xì)胞代謝異常，使某些酶或同工酶的合成增加；腫瘤組織壓迫和浸潤(rùn)，導(dǎo)致某些酶的排泄受阻，患者血清中的酶活性異常升高。前列腺特異性抗原（prostatespecificantigen，PSA）

PSA是從前列腺組織中分離出的絲氨酸蛋白酶，相對(duì)分子質(zhì)量34KD，僅存在于前列腺上皮細(xì)胞和精液內(nèi)，PSA在正常男性含量＜2.5μg/L（RIA法、ElA法）。

前列腺特異性抗原參考區(qū)間T-PSA≤4.0μg/L

F-PSA≤0.8μg/L

CLIAPSA是目前前列腺癌最理想的TM，用于前列腺癌的篩查、分期及預(yù)后評(píng)估、療效判斷、復(fù)發(fā)監(jiān)測(cè)。目前尚無(wú)足夠充分的依據(jù)推薦采用年齡特異的PSA值參考范圍。神經(jīng)元特異性烯醇化酶神經(jīng)元特異性烯醇化酶（neuronspecificenolase,NSE）

為烯醇酶的異構(gòu)體，是一種酸性同工酶，是參與甘油分解的最后一個(gè)酶，存在于神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌組織中。參考區(qū)間成人<16.3μg/L

CLIA

NSE是神經(jīng)母細(xì)胞瘤和小細(xì)胞肺癌的最主要的TM。NSE對(duì)小細(xì)胞肺癌的敏感度為80％，特異性為80％～90％，是目前公認(rèn)的小細(xì)胞肺癌高特異性和高靈敏性的TM。嗜鉻細(xì)胞瘤、胰島細(xì)胞瘤、甲狀腺髓樣癌、黑色素瘤等腫瘤也可使NSE升高。α-L-巖藻糖苷酶α-L-巖藻糖苷酶（α-L-fucosidase，AFU）是溶酶體酸性水解酶，可催化含巖藻糖基的糖蛋白和糖苷的分解代謝，廣泛存在于人體各組織細(xì)胞溶酶體中。參考區(qū)間5U/L~40U/L

比色法

AFU是對(duì)原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌臨床診斷的又一敏感、特異的新TM。血清AFU活力在某些轉(zhuǎn)移性肝癌、肺癌、乳腺癌、卵巢或子宮癌患者間有重疊，在某些非腫瘤性疾病如肝硬化、慢性肝炎、消化道出血等也可輕度升高。AFU和AFP的聯(lián)合檢測(cè)，可提高原發(fā)性肝癌的診斷率至90%以上。

四、激素類腫瘤標(biāo)志物

正常情況下不產(chǎn)生激素的某些組織，在細(xì)胞惡變時(shí)產(chǎn)生并釋放一些肽類激素（異位內(nèi)分泌激素），導(dǎo)致相應(yīng)癥候群的出現(xiàn)。這些內(nèi)分泌激素亦可作為腫瘤相關(guān)標(biāo)志物。人絨毛膜促性腺激素（humanchorionicgonadotrophin，HCG）妊娠期胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌的糖蛋白激素，有α和β二種亞基。α亞基結(jié)構(gòu)與卵泡刺激素（FSH）、黃體酮生成素（LH）和促甲狀腺素（TSH）相似。β亞基則是其特有的，以特殊的免疫試驗(yàn)可測(cè)定HCG的β亞單位。人絨毛膜促性腺激素

參考區(qū)間陰性<5U/L

陽(yáng)性>25U/L

MEIA微粒子酶免疫分析法

β-HCG是公認(rèn)的診斷滋養(yǎng)層細(xì)胞腫瘤敏感性最高的標(biāo)志物。非精原細(xì)胞性睪丸癌70％輕度升高，并往往和AFP同時(shí)升高。部分卵巢癌、膽囊癌、乳腺癌、胃腸道癌、肺癌亦可見(jiàn)β-HCG升高。炎癥、十二指腸潰瘍、肝硬化等良性病變?chǔ)?HCG可輕度異常。

兒茶酚胺類物質(zhì)兒茶酚胺類物質(zhì)（catecholamines，CA）結(jié)構(gòu)中含有兒茶酚的一類物質(zhì)的總稱，包括腎上腺素、去甲腎上腺素、香草扁桃酸（VMA）等。70％神經(jīng)母細(xì)胞瘤VMA升高。約70％肺癌病人ACTH增加。部分胰腺癌、乳腺癌、胃腸道癌癥患者可見(jiàn)大分子量的ACTH增加。

五、蛋白質(zhì)類腫瘤標(biāo)志物大多數(shù)實(shí)體瘤是由上皮細(xì)胞衍生而來(lái)，當(dāng)腫瘤細(xì)胞快速分化、增殖時(shí)，一些在正常組織中不表現(xiàn)的細(xì)胞類型或組分大量出現(xiàn)，如作為細(xì)胞支架的角蛋白，成為腫瘤標(biāo)志物。細(xì)胞角蛋白在正常及惡性的上皮細(xì)胞中起支架作用,有20個(gè)亞型(CK1～CK20)，腫瘤細(xì)胞中富含CK18和CK19。CK19主要分布在單層上皮上，當(dāng)CK19片段被分泌釋放進(jìn)入血液循環(huán)，該可溶性片段即為Cyfra21-l。

細(xì)胞角蛋白19參考區(qū)間成人<3.3μg/L

CLIA

血清Cyfra21-1是非小細(xì)胞肺癌最有價(jià)值的腫瘤標(biāo)志物，尤其對(duì)鱗狀細(xì)胞癌的早期診斷、療效判斷及預(yù)后監(jiān)測(cè)有重要意義。Cyfra21-1可用來(lái)診斷肺癌、鱗癌,對(duì)非小細(xì)胞肺癌有較高特異性。Cyfra21-1水平和腫瘤的惡化程度，轉(zhuǎn)移相一致。Cyfra21-l也可用于膀胱癌的輔助診斷。鐵蛋白（Ferritin，F(xiàn)E）由24個(gè)亞基組成，其亞基分成H和L兩類，胎兒組織和癌組織中以H型為主。為非器官特異性標(biāo)志物，存在于各種組織和體液中，病理情況下釋放入血的量增加。

鐵蛋白

男：20～250μg/L女：10～120μg/LRIA、EIA參考區(qū)間腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)方法參考區(qū)間相關(guān)腫瘤糖鏈抗原72-4（CA72-4）CLIA≤6.9KU/L胃癌、黏液性卵巢癌等糖鏈抗原242（CA242）CLIA＜15KU/L胰腺癌、結(jié)腸癌、胃癌等鱗狀細(xì)胞癌抗原（SCCA）CLIA＜1.5μg/L子宮頸鱗癌、頭頸鱗癌、肺鱗癌等鱗狀細(xì)胞癌組織多肽抗原（TPA）CLIA<100U/L膽管癌、膀胱癌、乳腺癌等γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（γ-GT）速率法3U/L~55U/L肝癌、前列腺癌、骨肉瘤等六、其他常用的腫瘤標(biāo)志物第五節(jié)腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)和聯(lián)合應(yīng)用腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)技術(shù)可分為免疫學(xué)、生物化學(xué)、免疫組織化學(xué)、流式細(xì)胞和分子生物學(xué)技術(shù)等。大部分單個(gè)腫瘤標(biāo)志物不能滿足臨床需要，現(xiàn)提倡腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合應(yīng)用。一、腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)技術(shù)免疫學(xué)測(cè)定技術(shù)

免疫學(xué)測(cè)定技術(shù)靈敏度高、特異性好，既可定性又可定量，主要用于血液和體液中TM的測(cè)定。生物化學(xué)測(cè)定技術(shù)（1）生化比色法：AFU、γ-GT等（2）電泳法：酶和同工酶如ALP及其同工酶，LD及其同工酶等血清TM檢測(cè)一般采用免疫學(xué)和生化方法。細(xì)胞內(nèi)TM采用免疫組化和流式細(xì)胞技術(shù)。免疫組化測(cè)定技術(shù)用于組織切片，穿刺細(xì)胞及脫落細(xì)胞的檢查，可確定瘤細(xì)胞的組織類型與分化程度，判斷腫瘤的惡性程度與預(yù)后。流式細(xì)胞測(cè)定技術(shù)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的表面標(biāo)志，對(duì)惡性淋巴瘤及白血病的診斷、分型有重要意義，可為確定臨床治療方案提供依據(jù)。分子生物測(cè)定技術(shù)以DNA重組技術(shù)、基因擴(kuò)增與雜交等手段，分析基因的結(jié)構(gòu)與功能改變，研究腫瘤的診斷和發(fā)病機(jī)制。大部分單個(gè)腫瘤標(biāo)志物敏感性或特異性偏低，不能滿足臨床需要。為提高TM輔助診斷價(jià)值和確定何種TM可作為治療后的隨訪監(jiān)測(cè)指標(biāo)，合理選擇幾項(xiàng)靈敏度、特異性能互補(bǔ)的TM構(gòu)成最佳組合，進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)。在聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，基本原則是選用不同性質(zhì)、互補(bǔ)的、相對(duì)敏感的3～4個(gè)標(biāo)志物組成標(biāo)志群。

二、腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合應(yīng)用腫瘤類型首選標(biāo)志物其他標(biāo)志物肺癌NSE,CYFRA21-1CEA,Scc,ACTH,CT乳腺癌CA15-3CEA,CA549,HCG,Ferritin,PR,ER胃癌CA72-4CA19-9,CA50,CEA肝癌AFPAFU,GGT,CEA結(jié)腸癌CEACA19-9,CA125,CA50,CA72-4胰腺癌CA19-9CEA,CA242,CA50卵巢癌CA125CEA,HCG,CA72-4,AFP子宮頸癌SccACEA,CA125,TPA前列腺癌PSA,fPSAPAP,ALP,CEA,TPA骨髓瘤β2-M、本周蛋白常見(jiàn)腫瘤的標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物是指在惡性腫瘤發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中，由腫瘤細(xì)胞合成、分泌或是由機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞反應(yīng)而產(chǎn)生的明顯異常的預(yù)示腫瘤存在的一類物質(zhì)，存在于血液、體液、細(xì)胞或組織中。臨床常用的腫瘤標(biāo)志物主要包括胚胎性抗原腫瘤標(biāo)志物、糖類抗原腫瘤標(biāo)志物、激素腫瘤標(biāo)志物、酶類腫瘤標(biāo)志物和蛋白類腫瘤標(biāo)志物等。小結(jié)習(xí)題1.關(guān)于抗CCP，正確的是

A.抗角蛋白抗體B.抗核周因子抗體C.類風(fēng)濕因子

D．抗類風(fēng)濕—33抗體E．抗環(huán)瓜氨酸肽抗體2.不屬于腫瘤標(biāo)志物的是

A．AFPB．CEAC．CRPD．PSAE．CAl253．上皮性卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌的腫瘤標(biāo)志物是

A．CAl25B．CAl99C．CAl5-3D．NSEE．PSA4．乳腺癌時(shí)升高明顯的是A．CAl25B．CAl99C．CAl5-3D．NSEE．PSA5．胰腺、結(jié)腸、直腸癌的腫瘤標(biāo)志物是A．CAl25B．CA50C．CAl5-3D．NSEE．PSA6．作為前列腺癌的輔助診斷項(xiàng)目是A．CAl25B．CAl99C．CAl5-3D．NSEE．PSA7．小細(xì)胞肺癌的腫瘤標(biāo)志物是A．CAl25B．CAl99C．CAl5-3D．NSEE．PSA8.在下列疾病的診斷中，甲胎蛋白可作為其最靈敏、最特異指標(biāo)的是

A.胃癌.B．肝癌

C.卵巢癌

D．直腸癌E．甲狀腺腫瘤9.檢測(cè)漿膜腔積液何種腫瘤標(biāo)志物，有助于胰腺癌診斷

A.癌胚抗原B．甲胎蛋白C．CAl99D．CAl25E．CA72410.下列關(guān)于腫瘤標(biāo)志物敘述錯(cuò)誤的是

A.由腫瘤細(xì)胞合成的特異性物質(zhì)

B．可以是腫瘤細(xì)胞釋放的物質(zhì)

C.不同的腫瘤可有相同的腫瘤標(biāo)志物出現(xiàn)

D．不包括宿主細(xì)胞對(duì)癌類反應(yīng)性的物質(zhì)

E.惡性腫瘤發(fā)生時(shí)，腫瘤標(biāo)志物含量明顯高出良性腫瘤11．關(guān)于AFP不正確的是

A.是胚胎時(shí)期的重要血清成分B.由胚胎細(xì)胞產(chǎn)生

C.原發(fā)性肝細(xì)胞癌者均升高

D．妊娠、急慢性肝炎等有一過(guò)性升高

E．消化道腫瘤有部分升高12．關(guān)于CEA，不正確的是

A.可作為成人結(jié)腸癌輔助診斷的重要指標(biāo)

B.有助于療效評(píng)價(jià)和預(yù)后監(jiān)測(cè)

C.可作為結(jié)腸癌的特異診斷指標(biāo)

D．可作為胰腺癌、乳腺癌診斷的參考指標(biāo)

E．可采用ELISA法定量檢測(cè)13．關(guān)于腫瘤標(biāo)志物免疫測(cè)定的臨床意義不正確的是

A.早期普查B.輔助腫瘤的診斷C.腫瘤的確定診斷

D.監(jiān)測(cè)治療效果E．判斷預(yù)后14．關(guān)于腫瘤免疫學(xué)檢驗(yàn)的目的不正確的是

A.早期篩選B．確定診斷C.療效考核

D．病情監(jiān)測(cè)15.有關(guān)癌胚抗原(CE