第七章基因結(jié)構(gòu)與表達(dá)的基本策略hylogen

第七章基因結(jié)構(gòu)與表達(dá)分析的基本策略StrategyforStructureandExpressionAnalysesofGenes主講人：羅志勇教授11.DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)（Watson

＆Crick,1953）概論TheNobelPrizeinPhysiologyorMedicine19622PresentationSpeechbyProfessorA.Engstr?m

Dr.FrancisCrick,Dr.JamesWatson,Yourdiscoveryofthemolecularstructureofthedeoxyribonucleicacid,thesubstancecarryingtheheredity,isofutmostimportanceforourunderstandingofoneofthemostvitalbiologicalprocesses.Practicallyallthescientificdisciplinesinthelifescienceshavefeltthegreatimpactofyourdiscovery.Theformulationofdoublehelicalstructureofthedeoxyribonucleicacidwiththespecificpairingoftheorganicbases,opensthemostspectacularpossibilitiesfortheunravellingofthedetailsofthecontrolandtransferofgeneticinformation.

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CentralDogma2竿.中沖心冒法猜則傅提饞出（C漂r封i吉c滅k，1趙9泳5稻8）C匪r族i味c浸k射,性1芹9殃1聰6宏-喚2憂0灣0啞44反扣轉(zhuǎn)酬錄亮機(jī)書制雷闡碰明（T業(yè)e柏m詠i餐n1形9帥7棚0）補(bǔ)充的中心法則5中柴心船法凝則勿：代甘表拍了甲大置多閱數(shù)恐生姿物冰遺墻傳頓信談息邊貯關(guān)存般和屈表黎達(dá)欲的墾規(guī)夢(mèng)律維，奠瘦定綢了襯從帶分紛子棕水橋平怪研畫究澆生流命?？迫菍W(xué)濕關(guān)廳鍵積問吐題妥的盒理手論敬基鐵礎(chǔ)吊。63.基因表達(dá)（geneexpression）：

從DNA到蛋白質(zhì)，通過轉(zhuǎn)錄和翻譯，用基因的遺傳信息在細(xì)胞內(nèi)合成有功能意義的各種蛋白質(zhì)。74肌.基擋因效結(jié)濕構(gòu)隔與科表爛達(dá)神分梯析技付術(shù)權(quán)：Northernblot※Real-timeRT–PCR※基因芯片DNA序列分析※Southernblot※FISHDNARNAWesternblot※

蛋白質(zhì)芯片蛋白質(zhì)8講漫授饅內(nèi)互容認(rèn)：(Ⅰ)D共N纏A序代列輸分脊析※(預(yù)Ⅱ策)核疏酸票分娃子愉雜是交※(Ⅴ)聚窯合尚酶惱鏈蹦式減反難應(yīng)※(Ⅲ)基皮因房誠芯導(dǎo)片保和主微窮陣百列(Ⅳ)W監(jiān)e沾s輕t染e飾r或n免象疫勺印嫁跡※9（幸一水）雙相脫代氧紋鏈躺末例端津終燥止岸法※(伍S謙a嗚n仆g鐵e沿r墓,宣1到9孤7膨7象)（賭二議）功化臣學(xué)嫌裂頁解君法(碎M愧a瞞x參a誓m＆G徑i堆l辨b虎e非r媽t咬,張1藥9慚7棚7串)（悄三瀉）D申N鏟A自抽動(dòng)鏟化紡序敵列障分且析一賣、D叔N般A序信列外分局析1脫0D烏N票A測(cè)炸序隙技輩術(shù)之基職礎(chǔ)傘：

●

高分辨率變性聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamidegelelectrophoresis,PAGE）技術(shù)

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PAGE能分離長度為300-500個(gè)堿基,差別僅1個(gè)堿基的單鏈寡核苷酸DNA片段。1清1(棍S抗a惹n飾g勁e樸r,肆U奮KM卸a競x匪a雀m＆G錦i竊l濕b陵e堂r郊t,監(jiān)U喬S蹤蝶A遵)共丑同末分盛享N駁o渴b按e墾l化準(zhǔn)學(xué)漂獎(jiǎng)(咬1耀9找7壇9吼)1慮2(一草）杰雙屋脫軍氧聽鏈泳末余端貿(mào)終或止第法（d那i缸d曉e挽o銳x冒y色c付h山a宅i襖n曬t酸e漏r此m免i臂n勿a曠t渠i轉(zhuǎn)o噴n）以D處N萌A合襯成反奏應(yīng)漢為終基鮮礎(chǔ)扶。(闖S皆a慨n迷g案e戒r譜)1朋3A芳T冶P、d令A(yù)臣T港P和d鬼d轉(zhuǎn)A店T厭P的懇結(jié)劉構(gòu)ATPdATPddATP1漆4

DNA合成反應(yīng)摻入N個(gè)核苷酸摻入N+1個(gè)核苷酸1扒51.雙脫氧末端終止法原理

DNA合成反應(yīng)中，ddNTP不存在3′-OH末端，故不能與下一個(gè)核苷酸的5′-P端形成3′，5′-磷酸二酯鍵，導(dǎo)致DNA新鏈的延伸提前終止于ddNTP

。1認(rèn)6

末端終止部位DNA單鏈模板引物延伸的新合成鏈摻入ddNTP1枕72退.哪D餓N勿A測(cè)堆序選主暴要仗步穩(wěn)驟●變性聚丙烯酰胺凝膠電泳●單鏈DNA模板的制備

●

DNA模板與測(cè)序引物退火●摻入法標(biāo)記反應(yīng)●延伸-終止反應(yīng)●放射自顯影●閱讀測(cè)序結(jié)果1哄8測(cè)城序疑步碰驟1除92佳0G反兵應(yīng)喊管A反應(yīng)管C反應(yīng)管G反應(yīng)管T反應(yīng)管2杰1G賞A歡T熊C2砌2

與末端終止法不同，化學(xué)降解法是建立在對(duì)原有DNA的化學(xué)降解過程基礎(chǔ)上。

（二）化學(xué)裂解法2彩3

將待測(cè)DNA片段3′或5′端進(jìn)行同位素標(biāo)記，標(biāo)記的DNA片段分成四個(gè)反應(yīng)，分別用不同的化學(xué)試劑處理，造成堿基特異性切割，使DNA片段分別于某一種堿基處斷裂。1.化學(xué)裂解法原理2歌4化貍學(xué)艦降枯解G反吧應(yīng)碑模際式代圖硫酸二甲酯哌啶M臉e嬸tM滅e窄tM籠e忠tM廁e意t2授5（衡三慘）D塔N毛A測(cè)棋序弄自沿動(dòng)尊化膛原滿理采喇用4種因不棕同業(yè)的腫熒賺光沸分剩別飯標(biāo)桂記4種d押d蕉N賭T謙P終壁止柏反套應(yīng)臨產(chǎn)煮物滲，烏替迫代盞放叼射倚性臘同脾位罪素晚標(biāo)幻玉記屬是紐奉實(shí)毒現(xiàn)D碑N興A測(cè)賞序認(rèn)自屢動(dòng)紛化滅的蕩基張礎(chǔ)濫。2亮61騙.驚D名N眼A自濁動(dòng)落測(cè)放序禿步太驟勸：4種搶帶莫有放不醫(yī)同考熒搬光拼染付料捧標(biāo)歪記鞠的惱終堵止蜜物d踐d褲N仰T異P陽sS西a翠n搖g晨e懇r測(cè)孤序婆反愚應(yīng)反遷應(yīng)持產(chǎn)慈物眠毛媽細(xì)柏管籍電收泳謝分踩離2素7熒駱光紅信爹號(hào)克采支集望、奏計(jì)該算黑機(jī)泰分?jǐn)[析桂與D輩N揚(yáng)A自給動(dòng)售排百序。激收光何激喪發(fā)滲不迅同義大趙小D掛N籮A片產(chǎn)段橡上糧的粱熒鮮光泛分相子陳，乳發(fā)貪射躁出楚四休種兔不癥同罵波糖長爹的烘熒釋光2莫82洪.危D匯N戲A自稠動(dòng)滴測(cè)畜序介結(jié)拔果2墨9(皇Ⅱ姻)核細(xì)酸怒分愚子瓣雜礙交N遙u富c進(jìn)l下e尤i宰c鹽A沸c家i剃d暖H奔y超b帖r眾i怠d靜i破z完a錢t法i怪o穩(wěn)n3惕0●細(xì)志胞紡原皮位包雜例交（P指a接r捐d塵u令e適e顯t渴a院l，1宮9澡6廳9豆)●S船o悉u累t捉h皇e鋪r拌n印櫻跡瞧雜擊交※:檢纏測(cè)D線N遭A（S流o少u青t森h(huán)伏e販r幸n代E裙M，1渴9皺7名5）●N奴o漏r范t普h內(nèi)e濤r牲n印辟跡脆雜螞交※:檢刪測(cè)R皺N協(xié)A（S佩t琴a蟲r壤k辮G情R，1熊9擁7個(gè)7）核師酸間分歷子脾雜律交類技演術(shù)貨的歌建伯立3慢1核底酸巷分描子該雜斧交餓原糟理標(biāo)渣記賺的單獅鏈單核挺酸國探斥針與銅待凳檢閣測(cè)似的番靶酒單扛鏈D贊N向A或R錦N扣A局公部棍互竭補(bǔ)氧結(jié)棕合雜形峰成濾雜犁交恥雙痕鏈督。應(yīng)儉用燭：核僵酸晚靶D般N未A或R劣N帝A序妥列彩的劍定培性靈與抹定股量婚分田析仆。3翼23彎3一茶、S邁o丙u莫t跡h釘e白r陷n印娛跡噸雜女交(鼓S功o團(tuán)u億t醉h捎e紹r嚼n給b煎l捉o池t知h墓y砌b楚r毀i具d敗i妨z墨a鑒t否i厭o繞n圾)將等電吊泳幕分遣離治的待是測(cè)D孕N鑄A片李段聚結(jié)告合快到境一暫定敞的間固列相溉支膨持睜物宇上速，貫然孝后霜與撤存巖在合于辛液待相省中尺標(biāo)錢記止的計(jì)核置酸許探弦針武進(jìn)翠行敗雜問交罪的槳過鳴程望。3游4PaperTowelsSouthernBlotting1t近i恐s阻s仰u磁eS思D恭SP社r汁o賀t造KP蜜h江e坡n屋o片lC父h給l薦o串r崗oE膛T熔O汽HS吩p是i站n3女5AgaroseGelElectrophoresis_+33非6二繪、N繁o腐r吸t頓h劇e兔r鑒n印尚跡藏雜掙交(搬N阻o挽r謠t欠h厘e(cuò)比r宿n鞠b勾l匙o(hù)鏡t套h丹y矩b具r熱i愧d置i水z充a榨t在i疤o突n冠)指挺將R僅N頃A變岡性輸及測(cè)電蘿泳章分音離超后嘆，編并講轉(zhuǎn)好移碗到術(shù)固劈燕相旗支夫持宣物甘上敏，天用典雜液交渾反紋應(yīng)扮來洞鑒假定質(zhì)其釘中特晴定m吼R領(lǐng)N海A分轉(zhuǎn)子橡的夫含喝量曲及介其沒大躺小魂。3澡7R茫N撓A瓊滿脂輔糖脅凝指膠陶電枯泳3kb0.4kbNt36382604623N描o漆r級(jí)t稍h協(xié)e邁r紐奉n珠b懇l兼o襪t崇h企y既b屑r廁i耕d摟i冶z此a保t基i觸o論n28S18S應(yīng)門用青舉誤例3狀8GAPDH0d2d4d6d8dN誰o秤r賣t踏h墳e泡r流n子b株l郊o(jì)冶t雜鬼交仆分右析m校R筆N道A的訪表達(dá)靶m研R忽N壇A3還9三南、策其桿他惰雜求交檢技為術(shù)(一)斑精點(diǎn)府雜以交(勞d鈔o盆t適b但l榜o攏t泥h績y眨b昨r仇i喇d呀i擱z筐a較t畜i隊(duì)o趁n）:將R都N務(wù)A或D話N敘A變購性殲后波直逆接須點(diǎn)仍樣傻于數(shù)硝遠(yuǎn)酸荒纖過維撕素蔑膜愧或躁尼總龍?zhí)O膜響上箱，用促于千基塞因侵組襪中度特例定加基繡因妻及煮其項(xiàng)表惜達(dá)曲的懼定佛性隔及責(zé)定爭量態(tài)研醫(yī)究業(yè)?！瘛瘛瘛瘛瘛?臨0（容二民）準(zhǔn)原東位晝雜冬交（i她n杯s薯i多t嘉uh脖y根b朝r掛i講d鏟i鉤z努a苦t介i鐮o漸n）用嬸標(biāo)警記時(shí)的撐核繼酸上探崇針匹與競組壓織遭切竹片優(yōu)或掌細(xì)亦胞作中哄的圈待碧測(cè)蛇核調(diào)酸徐互壞補(bǔ)斃序駛列夫雜吊交縫，魂可姓對(duì)玻核饑酸煩進(jìn)軋行厭定芳性技、計(jì)定舍位滴和婦相飯對(duì)歪定男量坐分?jǐn)z析么。4蕩1（燒三鋼）識(shí)液疤相均雜遷交(歌s怖o錦l桿u史t皂i認(rèn)o貿(mào)n藏h衡y頭b貧r坊i專d艦i員z曬a龍t顧i閃o耽n尤)1．編核攝酸犬酶S佳1保蜂護(hù)紫分巧析孟法(所n剛u臭c旱l芝e繼a讀s弦e飾S中1鍛p竹r回o句t輩e虧c罩t疊i屯o今n姐a士s稱s先a督y(tǒng)）單勁鏈D照N乒A探丸針商與護(hù)待勞測(cè)R虛N吳A形昏成D妙N惰A陸/抗R用N化A雜旱交胡雙娛鏈付，其加合入華核忍酸頭酶S寫1專畝一淡性爽地所降逗解你未落形味成鏡雜劇交尖體境的D粱N序A或R首N叢A單坦鏈稈，D找N紅A平/飽R罷N尋A雜搞交培雙曲鏈缸則帳受促到章保讓護(hù)坑而旺不源被喘降即解微。4股22．R棒N和A酶撥保愉護(hù)懲分削析墻法（R飽N峰a養(yǎng)s過e盟p遍r寒o搶t祝e然c隊(duì)t虧i綁o堵n贊a禍s雄s探a獲y，R肝P鬼A）4霜3R翼P似A基賄本豬程鉛序拉：●待摔測(cè)R駁N厭A的巖分每離●體授外輝轉(zhuǎn)誰錄廚標(biāo)忘記R暗N次A探膝針●待瓜測(cè)R薪N慨A與悠探加針R除N挑A進(jìn)椅行僚液捕相妨雜運(yùn)交●R饅N址A酶械消噴化●不卸同竊大律小簽雜長交代片底段底凝騾膠袖電泛泳哨分捏離4丙43騙.抑嶼制存消范減扣雜疫交娘原聰理（s鞠u求p揭p芹r編e熱s安s搏i肌o蔬n敞s鐵u糟b逝t廁r惡a楚c閥t盜i盯v騰e恒h蒙y塘b哀r韻i沙d視i碧z墊a占t差i袋o皂n，S帖S溫H）以仿雜龜交忽為花基雅礎(chǔ)屬，毀并小與P陪C努R技千術(shù)俱結(jié)挑合刪的c界D徐N增A消明減鑰雜德交世方抗法慎。應(yīng)做用案：差幟異銳表庫達(dá)宣新慕基邁因純的劃篩模選至與愈克買隆筑。4硬5S俗S萍H原澇理4艱6c渴D勇N鍋A傍C弱h顆i聞p痕a凡n粥d擦M闖i天c節(jié)r霉o罰a謎r授r察a濱y(Ⅲ)基燈因愛芯屋片澆和摘微攪陣壤列4狗7●基棋因姻芯緒片筐上班的粥陣?yán)w列閑是埋由身有福規(guī)讀則腦排罵列紀(jì)的c害D崇N杰A或欺寡壓核弊苷究酸派等植樣節(jié)本眉所瓶組電成噴的徑?！窕囊蛩奖砝芜_(dá)刪高蜜通收量胃分恐析戀法。4膏8D禾N(yùn)籌A微膀陣鞏列炮：●c志D社N用A微仰陣?yán)擦性S（c根D糕N鈔A挺m戀i惠c沿r你o寄a殘r押r塊a角y）●枝寡蕉核曠苷勺酸耳微謝陣淚列潔（o惰l激i財(cái)g起o暗m欠i羅c企r鑰o槍a萌r驗(yàn)r疤a均y）4吩9c伶D創(chuàng)N著A微德陣膚列:在麗一言微遲小各的尖基顏片沖（染硅潑片桌等波）咸表稼面紅集期成車了尊大家量居分走子生識(shí)砌別塑探杏針宅，蒼能趙夠窮平矛行肌分鏡析秩大索量次基姻因周轉(zhuǎn)酸錄悲表園達(dá)餐，毅因逆此昆又邪被犁稱皂為c孕D亮N榜A芯糠片燈。5聞0基因表達(dá)譜芯片主要技術(shù)流程：樣品熒光標(biāo)記芯片制備芯片雜交芯片洗滌和掃描掃描圖像分析1曠0曉25伙1核炮酸份雜棍交碰技瘡術(shù)蘭和枕微桿陣?yán)锪羞h(yuǎn)芯鬼片克懶隆D殃N叼Ac繩D宵N測(cè)A標(biāo)碼記陣國列(紀(jì)A完r邪r塘a妹y仗,史M末a砍c艦r紛o翁a哲r忌r稿a鉛y你)雜筐交仙、序顯案影高觸密柏度微尾陣濁列(凈M廉i期c宣r怨o倍a能r華r貸a置y弊)1爸0色35笑2CBAC霞y舅5震-標(biāo)削記c兩D暫N羽AC痰y焰3寄-標(biāo)刊記c炮D浩N血ACBACBACBACBACBACBA樣冷品1樣神品2C無y新5她/尾C跑y蓋3熒知光濃標(biāo)曾記R族N寸A提層取競克爭疾性既雜真交振顯弱示基樓因勞表揉達(dá)故量攜差鳳異二種樣品競爭性雜交示意圖基因表達(dá)譜芯片的原理1解0誕45婦3生燃物側(cè)學(xué)逗問酬題肉提沾出難，堪表危達(dá)耗基剪因?yàn)┓謩裎鐾?，州樣腔本利分掠類蓋與自實(shí)的驗(yàn)躺預(yù)監(jiān)測(cè).實(shí)怎驗(yàn)這設(shè)藏計(jì)基射因鴨芯元片擱實(shí)獸驗(yàn)圖籍象雪分予析結(jié)洪果鄙標(biāo)照準(zhǔn)項(xiàng)化基例因睛表礦達(dá)獲譜憶芯立片譯研幫究綠應(yīng)其用桂思汽路1沙0窗55晨4某析些殲基銹因軟表董達(dá)肉異私常窗或番存付在規(guī)差油異生芽物事學(xué)乒確蹤蝶證刻和辯解氏釋貝分狹析下擠一凍步惠實(shí)池驗(yàn)應(yīng)設(shè)誼計(jì)5終5●

cDNA芯片可定量監(jiān)測(cè)大量基因表達(dá)水平，闡述基因功能，探索疾病原因及機(jī)制、發(fā)現(xiàn)診斷及治療靶基因等。cDNA芯片在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用●Northernblot或RT-PCR驗(yàn)證?！窕虮磉_(dá)數(shù)據(jù)的生物信息學(xué)分析。5漢6(Ⅳ)W恥e劈燕s允t插e(cuò)膛r裁n免轟疫宰印丘跡W誼e云s溉t形e篩r妖n座b蓋l息o割t原施理稼與晉核腹酸闖分姓子旦雜餐交單相術(shù)似喉，站只病是老以座偶數(shù)聯(lián)蛇標(biāo)當(dāng)記攻物跡的被抗閱體陳分刪子偽作膚為鈴探促針愛，著檢偽測(cè)嚷轉(zhuǎn)村移義到評(píng)固廁相心支隙持挺物怪上惕的元蛋僅白習(xí)質(zhì)裳分系子攜。5咸75肚8W甩e獸s尺t進(jìn)e斃r潮n塊b爭l李o扎t程松序描：●蛋嘉白六質(zhì)媽樣脖品集制薪備●S糟D閥S質(zhì)-叢P萍A仔G民E分既離●蛋柏白刊質(zhì)明轉(zhuǎn)寒膜●標(biāo)簽記突抗蹈體轎與廣膜艦上術(shù)蛋歇白央質(zhì)正抗去原疾雜賢交●檢搜測(cè)阿并記分闖析漏標(biāo)疲記漂物鋪信桃號(hào)5戒9W騾e胳s吼t賄e戶r么n免撈疫歌印皮跡立信唐號(hào)燙檢濫測(cè)擋原霞理6喂0L妨u顛m叔i行n節(jié)o腿l化膠學(xué)霜發(fā)紋光漲原禁理6鼻1另夸一遍種責(zé)信跨號(hào)說顯喊示前方陳法括是治在制洗銳去怕一司抗棕后迅，炒加搖入勁堿烏性臉磷姿酸題酶便標(biāo)占記繩的撒二磨抗貝，顫再葉用B遙C欄I騾P／N圓B炮T在普膜限上繭直短接糧顯暫色項(xiàng)。6堂2免攪疫屈沉臂淀膚技漫術(shù)是去一菊種島抗堂原崗抗鉛體膊反撐應(yīng)透技梢術(shù)李，睛只綁是今將正抗雄體丹分特子全先敢結(jié)隱合料到送固劉相裕載影體艙如撈磁鹿珠良上忘，缺然失后泊與絨含剩目侵標(biāo)偷蛋著白斯的勺細(xì)島胞滴裂字解奏液倚進(jìn)宅行均液含相槽雜竿交把反躲應(yīng)業(yè)，甜利錄用兆磁冊(cè)場藍(lán)或社離繳心凱等批技拘術(shù)怪將徒結(jié)棕含年在鈔抗亂體快上茂的霧蛋忽白梁質(zhì)鈔收啦集杰起清來芬，超電泊泳局分棵離喊，孔用償于W喇e糞s吳t逃e貪r瘋n雄b爆l早o犬t分現(xiàn)析鎖。6錢3(Ⅴ)聚賭合的酶匪鏈港式狀反府應(yīng)P誓o牧l困y騰m搞e取r利a枝s果e滲C級(jí)h斤a巷i顫n眉R渴e惕a夏c姜t卡i斯o倚n6杯4引拾言●P梢C釀R技表術(shù)曬發(fā)矩明（1希9繞8部5，M謀u些l哄l擋i流s涂K萍.）●P量C狡R及航其皇相駁關(guān)街技筍術(shù)發(fā)殖展?jié)O速紐奉度收驚宜人桂、應(yīng)識(shí)用訴迅均速庫廣顧泛（票分盜子帥生章物志學(xué)勿、鴨醫(yī)皺學(xué)昂、梨生右物回學(xué)故、趕考喂古仆學(xué)配等列學(xué)認(rèn)科酬領(lǐng)衰域較）●獲N輝o刑b雞e晨l化痕學(xué)內(nèi)獎(jiǎng)（1咸9液9邪3，M著u愧l論l但i季s寧K戒.）6辟5講脈授解內(nèi)短容物提明要:一慘、P摧C庫R技療術(shù)頌原昏理二戲、裙耐餡熱D讀N割A(yù)聚蘭合銷酶三稈、P誤C殺R引箭物退及松設(shè)地計(jì)油原流則四蒜、P冷C峰R條暫件膛的滲優(yōu)膛化五遺、P熱C奧R改族進(jìn)啦技石術(shù)6躍6聚號(hào)合擦酶灘鏈?zhǔn)迨焦欧磼邞?yīng)(調(diào)P灑C遞R千)江:一鉤、P兄C戀R技斧術(shù)原原賴?yán)?/p>

Mullis

K.

1985年發(fā)明的一種模擬天然DNA復(fù)制過程的核酸體外擴(kuò)增技術(shù)。

TheNobelPrizeinChemistry19936約7D混N獨(dú)A復(fù)達(dá)制●半朗保亭留傅復(fù)坡制●半妹不燙連沒續(xù)住復(fù)屬制●岡逮崎咸片市段領(lǐng)露頭溜鏈隨橋從壘鏈6周8引林物拴的餓化辰學(xué)難本援質(zhì)業(yè)是囑什紫么呆？單嘩鏈?zhǔn)罟汛群撕踯昭仕酓盆N丘A或R俗N變A片裙段翼。D足N醫(yī)A復(fù)殘制暗引刷物信：殿單漏鏈R鈴N狹A片愿段P腳C歌R引文物屢：臘單沒鏈D隆N井A片想段6盛9（瞇一紗）P怪C姥R基春本伐過鏈程1衛(wèi).順P錫C底R(shí)循惡環(huán)巖由吸三創(chuàng)步瓜組桶成映：①即變蹄性（d揭e花n泥a幅t科u填r肺a串t屆i惜o癢n）②桌退恐火（a懸n破n俗e捷a吐l侵i煎n填g）③牙延扣伸（e和x添t帶e句n姜s仰i蹲o(hù)帆n）7野0PCR原理低凡溫且退寺火高奮溫胃變餅性中梯溫柄延滅伸7涌1在獨(dú)模蓄板D請(qǐng)N異A、語引堡物升、4種d笛N嚼T羅P存鉗在束條中件胳下累，帽依裕賴D垮N仁A聚芒合束酶催嶼化鬼一腳對(duì)抵引說物心間青特要異D鋒N中A片盯段叮合紙成的稈體犬外恒擴(kuò)密增歲技沾術(shù)產(chǎn)。2煌.P差C徑R定鏡義草：7飼23壇.嗽P攜C借R擴(kuò)獲增安終籃產(chǎn)雷物碼大毀小:介斗于轎兩策條牙退碎火夜引飼物5夕′末堵端竟之水間閃的雙欣鏈D息N蔽A片皺段。7樓34下.什盾么銀叫浪引擺物生延宰伸佛產(chǎn)南物哈？比消兩塊引信物癢限嬌定盟區(qū)猴長俗的偽延爹伸凡產(chǎn)示物蠻。僅舍發(fā)砌生梨在造以杏原激始暢模多板D銅N堤A為風(fēng)模年板憂的岸擴(kuò)臟增鴨過發(fā)程投中，到以講倍握數(shù)延形祥式菠擴(kuò)借增(絨2驢n類)。7稼4Y稀=部A（1帆+暴E）nY檔:擴(kuò)蛋增憲產(chǎn)目物撫的目量A天:最肢初趙靶D手N惱A分吧子族數(shù)E摘:P窗C稅R擴(kuò)緩增有效勢(shì)率n封:循封環(huán)密次域數(shù)5唐.刪P垂C饅R產(chǎn)合量當(dāng)E＝1炎0耽0％,芳A異=形1時(shí)Y莊=窄2n>鈔>礦2衰n(引竄物勇延轟伸柿產(chǎn)彎物班的斃量澤）7繁5P倘C截R燙t磁h淘e報(bào)r御m盾a莖l曾c鍵y課c遭l吳e紗rR代o車t道o掠r戰(zhàn)-Gene7裹6P磨C桐R產(chǎn)被物塑的瓊脂次糖縣凝牢膠怪電歇泳骨分前析7頌7（浴二瘡）前平端臺(tái)巧期唐與已平盒臺(tái)歐效誓應(yīng)1傳.平蟲臺(tái)攝效遍應(yīng)（p幟l臥a陰t鄉(xiāng)豐e昆a輛u竄e磁f向f霧e母c軍t）族：P么C裳R經(jīng)態(tài)過始一兔定海數(shù)挖量理的擴(kuò)循死環(huán)折后儲(chǔ)，D媽N陷A片橡段紋不鞭再君呈方指筒數(shù)慕累闖積島，暗而蛛是舞進(jìn)責(zé)入層靜旗止膽期即碗平疲臺(tái)湖期。7準(zhǔn)8PCR平臺(tái)效應(yīng)7及92.平臺(tái)期影響因素：①引物及dNTP底物濃度降低。②酶與模板比例下降。實(shí)際應(yīng)用提示：定量PCR應(yīng)考慮平臺(tái)期效應(yīng)，選擇最適循環(huán)次數(shù)。8僚0二情、淋耐輝熱D織N貓A聚賤合號(hào)酶（充三刮）歷高內(nèi)保扁真湯的喘耐躺熱D罪N關(guān)A聚江合套酶（蛙二沒）T睡a蘭qD種N驚A聚老合梢酶（扒一略）P當(dāng)C句R耐息熱D憤N啄A聚豈合破酶蔽的程發(fā)姓現(xiàn)8陪1（一飄）P個(gè)C導(dǎo)R耐壤熱D粗N漏A聚知合皇酶劇的底發(fā)少現(xiàn)2悼.T庫4與T賊7務(wù)D亮N錯(cuò)A聚劣合昆酶:熱冊(cè)穩(wěn)攻定僑性鳴差與。1殺.大丟腸偷桿盲菌D刊N該A聚父合伴酶ⅠK田l孕e佳n短o季w片久段：①熱排穩(wěn)昨定磨性堆差瞇，銳不惡耐限高港溫襲。②反擇應(yīng)馳溫?fù)舳葔酒珓┑团摚v產(chǎn)鑰生些非吩特里異麗擴(kuò)棍增謊。3媽.T錯(cuò)a甜qD培N痕A聚釀合箏酶:實(shí)律現(xiàn)濃了P問C嚷R自素動(dòng)斜化8趕2（旬二唇）T岸a阿qD曲N葡A聚壺合爪酶從驢嗜嘉熱便水蠶生街菌t嘴h枯e超r塑m蝕u賢s敞a惑q乎u懷a(bǔ)枯t囑i妻c庫sY宏T司-輪1株制中肆直唉接共分越離移出腹來庫?；耙驙钊╅L:補(bǔ)2序,燒4范9倘6右b是p編必碼堆蛋文白劍質(zhì):8導(dǎo)3臟2個(gè)A浸A伯,9慢4附k拋dC端桑結(jié)團(tuán)構(gòu)風(fēng)域:5激′位→肉3悟′外行切待酶外活性N端泉結(jié)喉構(gòu)拐域:聚犁合坡酶甲活蛾性HOOCNH28微31用.較留高嗓的解熱駐穩(wěn)唇定摧性●9茄5棉℃的押半娛衰柱期:4傭0薯m賢i視n●最福適漏溫沾度:家7因2胸℃～8庫0確℃●催亡化胖反碑應(yīng)速減率:1艷5姑0～3痰0竄0核酸苷就酸/秒/酶啞分夾子8婆4T宜a己qD特N汪A聚慮合兔酶六特析性末：●5徒′腦→面3辯′聚田合槽酶象活蠶性棋；●5總′呢→抗3催′外枯切攀酶恐活套性零；●逆壁轉(zhuǎn)長錄刷酶洪活味性寶；●較壺弱孕的趴非得模圈板蛾依掏賴巧性喂；●缺堂乏3綱′戶→貍5虛′外絮切烤酶鴿活曉性起。8拐52闖.無混機(jī)麻離戶子隨及師抑成制殼劑T浸a扛qD盾N炒A聚均合溜酶賊的仇活班性對(duì)M泥g2奪+濃渣度紹和辨單筍價(jià)娃離廊子綢（K+或N援H邀4+）揮的玻性斗質(zhì)衣和脊?jié)饨^度蓮較俊敏制感神。最慣適M慶g2傾+濃檢度：2歐m辭m對(duì)o講l旗/拴LK+濃嘗度：5傭0鋤m貸m斷o睬l煌/茂L8壟63魄.保刷真全性DNA聚合酶3′→5′外切酶活性核苷酸的錯(cuò)誤摻入率T4DNA聚合酶＋1/260000T7DNA聚合酶＋1/190000Klenow片段±1/140000TaqDNA聚合酶－1/410008渴7如旦何鼓提趁高P止C帶R叢D些N連A聚然合攜酶后的昂保久真判性遵？①冶使通用T援a(chǎn)肥qD舍N煤A聚京合妻酶云時(shí)蝦，摻蛇入闖少時(shí)量棋具滑有3孝′辜→潛5參′外屑切摩酶晃活密性群的堵耐講熱D探N杰A聚妹合洲酶,錯(cuò)店配諒率瘦可漏降漁為比原遼來伏的1沒/般1愁0；②狀使四陡種d悠N迅T弊P底晨物寨濃爭度政相天等；③M查g披C毫l2濃鹽度古盡耳可額能和低蒼；④減播少判循蛾環(huán)臭數(shù)劫。8旋8（報(bào)三繪）恩幾綠種錢高虹保聯(lián)真料的冷耐揀熱D塵N芽A聚柱合杠酶1泥.T利t慘hD殃N針A聚火合宵酶2玩.V焰e振n統(tǒng)tD雙N煤A聚率合猴酶3串.P周f軋uD丸N紅A聚座合估酶8揀9三鉤、P幻玉C錄R引趟物嚴(yán)及符設(shè)怒計(jì)度原業(yè)則（篩一慣）示引頌物蔑設(shè)拾計(jì)槐原籮則（傭二怖）取引缸物六用忍量續(xù)計(jì)感算9笛0（君一疑）嬌引棗物痕設(shè)此計(jì)概原邪則引勻物序序申列模及罩其斯與扣模買板移特束異默性東結(jié)尺合是爭決夕定P丟C掙R反銹應(yīng)調(diào)結(jié)違果農(nóng)的主關(guān)儲(chǔ)鍵敵。9襯11.引滅物旁設(shè)榴計(jì)闊原凈則:①引奴物綢長焦度:嗚1酒0～3型0握N恥t②堿綁基貞分瓦布:紙A、T、G、C隨座機(jī)盾分狹布③G須+公C含更量：4奴0～6墊0叉%T肉m瞎=拼4揪(近G京+霧C植)每+斷2語(女A塔+還T詠)④引噴物謠之正間：芹避嘗免3闊′端狼互步補(bǔ)9稀2⑤引殲物皺自漠身：寧不健應(yīng)堪形票成甜二形級(jí)舊結(jié)都構(gòu)⑦引泥物5汪′末蘿端抖堿滴基:可華不醫(yī)與帽模塘板D逆N量A互約補(bǔ)⑥引零物3峽′末升端前堿凳基：誦最螞好敬選T、C、G，桌不飄選A9橡3引物5′端修飾技術(shù)附加核酸序列用途

限制酶位點(diǎn)克?。ㄈ缍ㄏ蚩寺。┦删w啟動(dòng)子合成RNA探針、測(cè)序蛋白質(zhì)結(jié)合序列產(chǎn)物純化、檢測(cè)核糖體結(jié)合序列高效表達(dá)加錯(cuò)配堿基造成突變定點(diǎn)誘變9講42.簡并引物（degenerateprimers）:針對(duì)某一基因編碼蛋白的氨基酸區(qū)域設(shè)計(jì)的一組堿基序列不同，但有相同堿基數(shù)的寡核苷酸混合物。9表5簡綁并舊引攝物青設(shè)飯計(jì)練及應(yīng)屈用搞：①筐對(duì)要純寬化者的堪未銳知南蛋幸白耀測(cè)赴定校一研段嘉短氨盟基箱酸振序服列穩(wěn)。②不趁同齊物吃種侄某廈一第基匙因全編后碼駝的卡保吳守氨診基槽酸桶區(qū)箏域收。應(yīng)冠用：軍基備于溪簡希并鐵引雀物P慈C悅R策梁略宏克扶隆新植基莖因9嬌63冠.引婆物貌設(shè)詠計(jì)可缺燙陷醒而壩引喬起蠶的柳后淺果9斗74擁.優(yōu)摟化救的彈引蛙物地設(shè)寸計(jì)醉實(shí)聚例上姻游幅引受物丈序豎列秧：5扔′G總A許G蘿A槳A誤C澇A朵T株G求G爺T振G婦C捏G墻C寬A蜂G攜G兄T蛇T3洗′下徐游馳引射物委序棋列肅：5半′珍T斧G踢C呢C律C袋A令T珍C酸A諷T深C烏A恢T熊G在A味C錄C此T晌G芒G3趁′9嗓85挎′C削A杏G木T貌T虧A均A邁G柳G太G市G侵G居C郊A押G蓮G雅A頭G敬T尊G念G郊C班G敵C男T風(fēng)G獵C軋T番C牙A頁C抗C餓T巴C眾T繞G勒G要T早G嘗C基C憂A烘A態(tài)A引G熄G凍G榮C專G籃G深C偏G全C廊A斤G規(guī)C塞G俯G惹C罪T免G嚇C規(guī)C駕G觸A罩G碰C購T克C蛋G躲G莖C靠C縱C當(dāng)T樂G梁G護(hù)A怒G綱G擱C療G文G屢CA案G忘A白A夸C答A垮T竊G滔G蟲T值G故C蛙G切C邁A遲G形G頌T選TC屬T緣瑞T壇G索G孕T流G乎A縮慧C館C絹C坑T莊C困C問G旺G仆A裙T旦T促C查G留G貍C壤G番C燙G朗C現(xiàn)G輔T叉G某C暈G什G聯(lián)C巧C唉C樹G止C悅C察G案C微G德A恰G嘗T逝G候A微G洋G另G助T摔T撤T霉T零C像G攻T擺G朋G膜T草T棗C狗A算C弟A舊T妄C閘C并C挨G解C川G污G列C濕T頑C誰A令C迷G吩G毛G摟G董G借A聯(lián)G活T消G叨G辟G冰C兔A唉G拳C夠G香C勢(shì)C俗A氣G利G店G店G護(hù)C距G蹤蝶C農(nóng)C束C猜G筐C考C阻G殼C鞏T若G劃T觸G難G駱C摟C肉C懼T承C冊(cè)G種T乞G守C完T幟G棟A旁T怨G甘C膠T慌A存C鼓T筋G功A懲G妹G客A賭G愉C德C唉A霉G鄰C言G胖T灣C筋T績A悉G毀G律G慰C即A象G盛C揭A滔G鑒C迎C肌G鐵C辰T夏T判C陰C灶T歸A犧G粗A到A鉆G趣AC跳C浩A顛G岔G逢T千C貧A扁T浙G牙A齡T柜G禽A儲(chǔ)T批G祥G漿G霧C父A回GC梯G憂C肉C摸C壘GG國G勻T鑒C副C萬A日G目T覽A顛C妙T株A完C潤T劃A植C冷C兩C靈G軍TA誤G堪T遲G反G饞C粗G禍G著A抄G飽C嘆T駕G烘C碼T磨G殊C口T機(jī)G運(yùn)C銷T糟C共C蛇A敲C容G團(tuán)G嶄C忠G改C敘G涉G夫A離G隨C吹C升C朋A湯A奇C時(shí)T六G阿C嘗G關(guān)C嬌C泰G肺A步C霜C渴C吹C3陳′9故91蘭A2抬6其0o帶l比i閣g著o潤D脂N微A≈3流3蘇μ救gN哄:引甚物堿壯基池?cái)?shù)X：陪合捉成燦的o魂l怎i朝g胡o粘D攻N訓(xùn)AA2劇6邊0單宮位Y：引祝物脊的p頌m腳o小l數(shù)1捧06Y（p膊m良o(jì)塔l）=狐X垂·棋3菊3耗×報(bào)─狠─3要3碌0悼.叛NX=─餡─煎×帽1躺05N(二)引目物蛋用罰量獵計(jì)念算1夏0蘋0四籠、P惹C經(jīng)R條棚件爹的魯優(yōu)巧化(一)T純a贊qD加N析A聚化合敵酶塔濃簡度域：1撈.皆0～2環(huán).拐5首U椒/錄1訴0大0展μ狀l反駕應(yīng)俱液(二)d皇N誘T心P濃貝度府：2梅0～2墨0洪0婆μ敬m憤o匆l搖/陡L(三)M化g2局+濃差度映：0爹.蠢5～2煎.耕5恭m穩(wěn)m握o贏l括/詠L(四)引茄物潮濃壞度悲：0著.序1～0闊.冶5幸μ福m奴o振l什/隸L1穗0尚1P室C波R應(yīng)冶用帶舉繪例①遺預(yù)傳飛病診匆斷旦：兇鐮混狀勉細(xì)無胞虹貧僅血β爽6哈G堂l錢u廢V異a租l(工G隱A專G塘G蒙U潔G逮)P觀C齊R擴(kuò)顏增β帥6唐D香N球A區(qū)麗域②傳殘染爪病診末斷盼：H償B姐V和H箱I您V③腫蕉瘤邪分臣子農(nóng)標(biāo)館志診榆斷:爐b蒼c仁r槽-貼a矮b券lP藍(lán)M疼L智/禿R舊A傳R冬α④個(gè)院體師識(shí)鉤別:親脅子究鑒步定澇與藝刑套事易偵浙破⑤生動(dòng)物考繳古1椒0游2五犬、P昨C售R改后進(jìn)萄技脆術(shù)（緒一么）R殘T繁-嗚P攜C或R(讀r愈e包v炸e暖r即s途e摩t盾r被a伶n砍s頁c唐r判i烏p麗t吵i傅o繭n莊P拾C援R猜)以m乏R扶N揭A為低模秤板偉逆梳轉(zhuǎn)橋錄遞合李成c蒜D律N偶A，腎再僚以目此c愛D讓N通A為課模男板藥進(jìn)宮行P微C中R反傲應(yīng)。1慈0佩3RT-PCR原理1稱0糠4逆手轉(zhuǎn)翅錄款酶①A磚M澤V（a熊v煙i廊a禽n丟m命y幕e身l躍o禁b焰l教a絡(luò)s需t卡o滅s旨i喝s劇v漂i巧r鄉(xiāng)豐u事s）酶紙活損性肚最抽適霧溫掠度4因2剩℃②M弊M筆L休V（M形o飯l拾o缺n骨e方y(tǒng)餡m芒u哀r友i袖n隸e碰l落e腔u勉k監(jiān)e配m浸i屑av舒i桂r蘇u咽s）濃：奶最室適侮溫萄度3惠7硬℃1始0碎5（野二瘋）定幟量R閱T薄-型P朽C遠(yuǎn)R（Q趴R際T依-淚P鼓C泰R）P留C媽R擴(kuò)奔增慮指比數(shù)角期旁內(nèi)淘極棋小污的抵?jǐn)U腫增繩效薄率沫改諷變誦會(huì)煙極畜大妙地您影惰響展產(chǎn)濁量敬。1綠.半荷定嶄量R遙T蹄-波P黨C法R以者樣委本m摔R氏N喪A為脫模串板脂逆申轉(zhuǎn)久錄資合幣成c野D泄N趣A，濃在上不柄同療引桑物平對(duì)粘引獲導(dǎo)閥下安共紅同P牲C爹R擴(kuò)天增“堆看律家屆”留基丑因和目路的示基旁因c辱D麥N全A。1倆0右6①選差擇撫內(nèi)葵對(duì)戴照派基框因組娛織河中旁普今遍率表地達(dá)坡、嗚表蘋達(dá)移量寸比軟較座恒撥定疫的棗“尖看莫家搏”認(rèn)基煤因m筒R羞N介A。錘如G形A控P禿D背H和β拖-頂a倆c殲t柴i繡n計(jì)m寄R嫩N纏A等唉。②半辱定筆量城標(biāo)義準(zhǔn)計(jì)娘算P異C尖R產(chǎn)還物晃：靶c摔D救N漂A艦/液G里A每P籌D耗H違c絞D訓(xùn)N躍A1名0哨7R描T香-獵P積C蔥R驗(yàn)局證G輩-較R種h芒2誘冤導(dǎo)T甚N皺F香α而m敵R徐N殼A表給達(dá)涌上藥調(diào)25μmol/LG-Rh2

12h24h48h72h－+－+－+－+TNFαGAPDH③舉撈例1拘0洋82曠.巾R騾e方a輛l獲-方t賀i群m鎮(zhèn)e憲R少T嬸-塵P秘C港R原直理胖：P遠(yuǎn)C慚R體聽系愿加再入鋪一喉種雙漫色與熒胳光膽標(biāo)罪記捕的嶼寡刊核適苷化酸糧探腿針，所根悅據(jù)返探弓針翻上邀熒摸光振信衫號(hào)敢的泄變立化藍(lán)，癥計(jì)款算群模孤板D哄N險(xiǎn)A的袖含晚量溫。1廁0雄9實(shí)殖時(shí)P拔C倡R應(yīng)河用嗎：用方于國基迎因D爭N皺A拷園貝謎數(shù)腐和m正R免N妻A表揚(yáng)達(dá)余定護(hù)量茫分援析質(zhì)。1四1擠0定逢量諒檢咐測(cè)P貨C疾R產(chǎn)趨物長的奧指淚示墾系貼統(tǒng):T燭a椅q范M友a(bǔ)酒n和M材o靈l闖e鞭c其u右l教a刊r蜜B由e氣a四c械o鄉(xiāng)豐n，林均即依賢賴熒勇光綢共但振母能太量窮轉(zhuǎn)刊移（f售l峽u羅o兼r咬e桐s懶c肆e棍n蒼c蝕e劃r亞e茂s舌o容n氏a按n途c狼e嶄e給n喇e怎r嗚g禍y(cè)霉t營r喇a(chǎn)歇n碧s帳f揭e糧r，F(xiàn)腥R君E精T）麗。1梨1爪1①T儲(chǔ)a班q黃M鎮(zhèn)a壁n爽P謎r陶o債b甲e●寡把核挪苷益酸艦探錢針的5扔′端吉標(biāo)較記聾一欠個(gè)沒報(bào)鴿告均熒廁光凡染嫁料代（r熊e棗p例o醋r榆t伙e料r碑f拼l游u匠o目r庭e皂s旅c慘e度n尿c輔e什d章y覽e）場，3鵲′端須標(biāo)袍記陷一仍個(gè)授淬糟滅站染圣料絕（q捉u猴e球n喊c吐h中e巧r血d幅y寬e）慢。1聾1欲2●當(dāng)棕光魂源尼照杜射棍到銷探袖針亭時(shí)效，買被激噸發(fā)挪的超報(bào)啟告拜熒磁光磁染貪料將擠能爽量晴轉(zhuǎn)釘移停給嫂附萄近虛的淬爬滅殼染肢料而零不皂發(fā)跑光婆。1赤1攏31互1呆4RQ5’3’5’3’5’3’5’3’ExcitationRQQRQRExcitation雙并標(biāo)念記壞探睛針候（T恩a璃q情m毫a龜n珠P凡r叛o胡b唐e）5建′5勤′5垂′3讀′3墻′1換1復(fù)5●當(dāng)P嚼C哈R擴(kuò)閃增分時(shí)拳，T庫a斜qD抱N遙A聚織合替酶牧遇