轉(zhuǎn)錄后加工課件

轉(zhuǎn)錄后加工轉(zhuǎn)錄后加工1轉(zhuǎn)錄后加工基因轉(zhuǎn)錄的直接產(chǎn)物被稱為初級(jí)轉(zhuǎn)錄物。初級(jí)轉(zhuǎn)錄物一般是無(wú)功能的，它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)必須經(jīng)歷一些結(jié)構(gòu)和化學(xué)的變化即所謂的轉(zhuǎn)錄后加工以后才會(huì)有功能。轉(zhuǎn)錄后加工可能是RNA的功能所必需的，也可能提供基因表達(dá)調(diào)控的一種手段。RNA所能經(jīng)歷的后加工方式可達(dá)10種以上，但后加工反應(yīng)的本質(zhì)要么是增減一些核苷酸序列，要么是修飾某些特定的核苷酸?！D(zhuǎn)錄后加工基因轉(zhuǎn)錄的直接產(chǎn)物被稱為初級(jí)轉(zhuǎn)錄物。初級(jí)轉(zhuǎn)錄物一般2原核細(xì)胞mRNA前體的后加工在細(xì)菌，mRNA很少有后加工。但某些噬菌體mRNA會(huì)發(fā)生最簡(jiǎn)單的剪切反應(yīng)，將一個(gè)多順?lè)醋忧懈畛蓡雾樂(lè)醋?，也有某些噬菌體的mRNA需要經(jīng)過(guò)相對(duì)復(fù)雜的剪接反應(yīng)才能成熟（如T4噬菌體編碼的胸苷酸合酶）。原核細(xì)胞mRNA前體的后加工在細(xì)菌，mRNA很少有后加工。但3真核細(xì)胞mRNA前體的后加工加工形式

1)

5′-端=加帽

2)

3′-端=加尾

3)

內(nèi)部=剪接4)

內(nèi)部=甲基化5)

編碼區(qū)=編輯后加工機(jī)制真核細(xì)胞mRNA前體的后加工加工形式4加帽和甲基化

帽子結(jié)構(gòu)和類型0、I和II型加帽反應(yīng)：共轉(zhuǎn)錄1)酶磷酸水解酶；mRNA鳥(niǎo)苷酸轉(zhuǎn)移酶；鳥(niǎo)嘌呤-7-甲基轉(zhuǎn)移酶2)步驟為什么只有mRNA才會(huì)加帽？功能加帽和甲基化帽子結(jié)構(gòu)和類型5加帽反應(yīng)開(kāi)始于mRNA5′-三磷酸的

γ

磷酸根的水解abgO-P-O-P-O-P-OCH25’OOOOOOO---OHO堿基RNA鏈O-P-O-P-OCH25’OOOOO--OHO堿基RNA鏈Pi磷酸水解酶加帽反應(yīng)開(kāi)始于mRNA5′-三磷酸的γ磷酸根的水解ab6留下的5′-二磷酸進(jìn)攻GTP，與GMP形成共價(jià)交聯(lián)，同時(shí)釋放出PPi.O-P-O-P-OCH25’OOOOO--OHO堿基RNA鏈mRNA鳥(niǎo)苷酸轉(zhuǎn)移酶PPiO-P-O-P-O-P-OCH2OOOOOOO---OHOHG5’RNA鏈O-P-O-P-OCH25’OOOOO--OHO堿基-P-OCH2OOO-OHOHG5’不同尋常的5′-5′三磷酸連接留下的5′-二磷酸進(jìn)攻GTP，與GMP形成共價(jià)交聯(lián)，同時(shí)釋放7鳥(niǎo)嘌呤隨后在N7位置被甲基化，甲基供體為S-腺苷甲硫氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶RNA鏈O-P-O-P-OCH2OOOOO--OHO堿基-P-OCH2OOO-OHOHGRNA鏈O-P-O-P-OCH2OOOOO--OHO堿基-P-OCH2OOO-OHOHGCH35‘m(7)GpppN帽子鳥(niǎo)嘌呤隨后在N7位置被甲基化，甲基供體為S-腺苷甲硫氨酸80型帽子1型帽子2型帽子可能的甲基化修飾0型帽子1型帽子2型帽子可能9為什么要有帽子？提高mRNA的穩(wěn)定性參與識(shí)別起始密碼子的過(guò)程，提高mRNA的可翻譯性有助于mRNA通過(guò)核孔從細(xì)胞核運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞質(zhì)提高剪接反應(yīng)的效率。為什么要有帽子？提高mRNA的穩(wěn)定性10為什么只有mRNA加帽?之所以只有mRNA和某些snRNA才有帽子結(jié)構(gòu)，是因?yàn)樗鼈兌加删酆厦窱I催化，當(dāng)TFIIH磷酸化CTD重復(fù)序列中的Ser5以后，它即可以將轉(zhuǎn)錄因子DSIF招募到轉(zhuǎn)錄復(fù)合物，而新加入到復(fù)合物之中，DSIF隨后將另外一種轉(zhuǎn)錄因子NELF招募進(jìn)來(lái)，以阻滯轉(zhuǎn)錄。上述暫停允許加帽酶進(jìn)入，來(lái)修飾轉(zhuǎn)錄物的5'-端。第三種轉(zhuǎn)錄因子P-TEFb是一種激酶，在帽子結(jié)構(gòu)形成不久也被招募到復(fù)合物，然后磷酸化CTD的Ser2和NELF，NELF隨之失活，聚合酶II繼續(xù)延伸。為什么只有mRNA加帽?之所以只有mRNA和某些snRNA才113′-加尾

加尾反應(yīng)由兩步組成：1)

剪切——在3′-UTR一個(gè)特定序列上游10-30核苷酸序列的位置切開(kāi)2)

添加腺苷酸（100-200個(gè)）產(chǎn)生多聚腺苷酸尾巴基因的編碼序列TATAbox+125-30bpmRNA翻譯區(qū)域5′-UTR3′-UTRATG終止密碼子3′-加尾加尾反應(yīng)由兩步組成：基因12mRNA5’CAPAAUAAACPSF1)CPSF=“剪切/多聚腺苷酸化特異性因子（3個(gè)亞基）識(shí)別mRNA前體3′-UTR上的AAUAAA一致序列，并與此結(jié)合。2)招募CFI和CFII=“剪切因子”3)招募PAP=“poly(A)聚合酶”CFICFIIPAP核糖核酸蛋白復(fù)合物mRNA5’CAPAAUAAACPSF1)CPSF=13mRNA5’帽子AAUAAACPSF

mRNA前體在AAUAAA序列下游10-30個(gè)核苷酸的位置被CFI/II切開(kāi)

產(chǎn)生的3′-OH被PAP作為添加腺苷酸的位點(diǎn)。PAP不需要模板，只對(duì)ATP有親和性

Poly(A)尾巴被poly(A)-結(jié)合蛋白結(jié)合（PABP）

CFICFIIPAPAAUAAAAAAAAAAAAAAAA100-200mRNA5’帽子AAUAAACPSFmRNA前體在AAU14加尾信號(hào)加尾信號(hào)15為什么必須有尾巴？保護(hù)mRNA免受3′-外切核酸酶的消化，提高mRNA的穩(wěn)定性。PABP能夠與帽子相互作用增強(qiáng)mRNA的可翻譯性，提高其翻譯的效率；影響最后一個(gè)內(nèi)含子的剪接；某些本來(lái)缺乏終止密碼子的mRNA通過(guò)加尾反應(yīng)創(chuàng)造終止密碼子。在UG后加尾可產(chǎn)生UGA，在UA后加尾產(chǎn)生UAA；通過(guò)選擇性加尾調(diào)節(jié)基因的表達(dá)。為什么必須有尾巴？保護(hù)mRNA免受3′-外切核酸酶的消化，提16為什么只有mRNA才會(huì)加尾？與加帽反應(yīng)一樣，只有mRNA才會(huì)加尾，也是因?yàn)榫酆厦窱I最大亞基上的CTD重復(fù)序列被TFIIH磷酸化，但是磷酸化位點(diǎn)為Ser2。Ser2的磷酸化將加尾因子招募到mRNA前體上進(jìn)行加尾反應(yīng)。為什么只有mRNA才會(huì)加尾？與加帽反應(yīng)一樣，只有mRNA才會(huì)17mRNA前體的剪接剪接這種后加工方式是在發(fā)現(xiàn)基因斷裂的現(xiàn)象后確定的。1977年，由PhillipSharp和RichardRoberts領(lǐng)導(dǎo)兩個(gè)實(shí)驗(yàn)小組幾乎同時(shí)在腺病毒的晚期表達(dá)基因中發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)基因斷裂現(xiàn)象。進(jìn)一步研究表明，基因斷裂是真核細(xì)胞及其病毒的基因組中的普遍現(xiàn)象，在高等生物的基因組中，只有很少的蛋白質(zhì)基因是連續(xù)的（如組蛋白和干擾素），但在低等的真核生物，斷裂基因卻不多見(jiàn)。不同斷裂基因含有的內(nèi)含子數(shù)目不一定相同，同樣內(nèi)含子大小也會(huì)有差別。一般說(shuō)來(lái)，一個(gè)典型的真核生物蛋白質(zhì)的基因由10%的外顯子序列和90%的內(nèi)含子序列組成。mRNA前體的剪接剪接這種后加工方式是在發(fā)現(xiàn)基因斷裂的現(xiàn)象后18變性與成熟的mRNA雜交；在電鏡下觀察R-環(huán)技術(shù):真核基因內(nèi)含子數(shù)目與結(jié)構(gòu)分析DNA模板鏈成熟的mRNA變性與成熟的mRNA雜交；R-環(huán)技術(shù):真核基因內(nèi)含子數(shù)目與結(jié)19R環(huán)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果及其對(duì)結(jié)果的解釋R環(huán)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果及其對(duì)結(jié)果的解釋20雞卵清蛋白基因結(jié)構(gòu)及其Pre-mRNA的后加工雞卵清蛋白基因結(jié)構(gòu)及其Pre-mRNA的后加工21mRNA前體的剪接機(jī)制

mRNA前體的剪接是高度精確的。其精確性一方面取決于位于外顯子和內(nèi)含子交界處的剪接信號(hào)（可以將其視為內(nèi)因），另外一方面取決于5種被稱為snRNP的核糖核酸蛋白質(zhì)復(fù)合物（可以將其視為外因）。剪接反應(yīng)的“內(nèi)因”——剪接信號(hào)剪接反應(yīng)的“外因”——snRNP和剪接因子剪接反應(yīng)——兩次轉(zhuǎn)酯反應(yīng)剪接體的組裝mRNA前體的剪接機(jī)制mRNA前體的剪接是高度精確的。其精22剪接信號(hào)

G

3′外顯子5′外顯子AGGUAG內(nèi)含子18-40個(gè)核苷酸3.

分支點(diǎn)YNYRAYY=嘧啶R=嘌呤N=任何核苷酸1.5′-剪接點(diǎn)2.3′-剪接點(diǎn)剪接信號(hào)G3′外顯子5′外顯子AGGUAG內(nèi)含子18-23剪接通過(guò)2次轉(zhuǎn)酯反應(yīng)PO-OO-O-XYRNA鏈+R-OHPO-OO-O-RYX-OH+

在轉(zhuǎn)酯反應(yīng)中，1個(gè)磷酸二酯鍵被轉(zhuǎn)移到另外1個(gè)羥基上。沒(méi)有水解，無(wú)能量的損失剪接通過(guò)2次轉(zhuǎn)酯反應(yīng)PO-OO-O-XYRNA鏈+24剪接的兩次轉(zhuǎn)酯反應(yīng)剪接的兩次轉(zhuǎn)酯反應(yīng)25參與剪接反應(yīng)的5種snRNAsnRNA互補(bǔ)性功能U1內(nèi)含子的5'-端識(shí)別和結(jié)合5'-剪接點(diǎn)U2分支點(diǎn)識(shí)別和結(jié)合分支點(diǎn)。在剪接體組裝中，也與U6snRNA

配對(duì)。U4U6snRNA結(jié)合并失活U6。在剪接體組裝中，U4-U6之間的堿基配對(duì)被U2-U6之間的剪接配對(duì)所取代。U6也取代U1與5'-剪接點(diǎn)的相互作用。U5上游外顯子和下游外顯子與相鄰的2個(gè)外顯子結(jié)合，以防止它們離開(kāi)剪接體。U6U4(和U2)在剪接體中與U2結(jié)合。參與剪接反應(yīng)的5種snRNAsnRNA互補(bǔ)性功能U1內(nèi)含子的26轉(zhuǎn)錄后加工ppt課件27snRNP的重要性

小分子核核糖核酸蛋白顆粒（發(fā)音為snurps）——

參與剪接

一種snRNP由一個(gè)小分子細(xì)胞核RNA（snRNA）(100-200核苷酸長(zhǎng)）和10種不同的蛋白質(zhì)組成snRNPs和mRNA前體形成剪接體

剪接體大小與核糖體差不多，其組裝需要ATP

snRNP的重要性小分子核核糖核酸蛋白顆粒（發(fā)音為snu28SnRNAs

一般由60nt~300nt組成，且富含U

對(duì)于剪接十分重要調(diào)節(jié)序列的特異性和剪接反應(yīng)的精確性折疊成特定的二級(jí)結(jié)構(gòu)，這對(duì)催化十分重要snRNP中起催化作用的是RNA，不是蛋白質(zhì)參與剪接的只有U1、U2、U4、U5和U6SnRNAs一般由60nt~300nt組成，且富含U29剪接體

5snRNPs(“snurps”)snRNA~10種不同的蛋白質(zhì)小(100-200個(gè)核苷酸)富含UU1,U2,U4,U5,U6snRNAsU1,U2,U4,U5,U6snRNPs剪接體5snRNPs(“snurps”)snRNA~30剪接體的組裝與剪接反應(yīng)分支點(diǎn)結(jié)合蛋白（BBP）識(shí)別分支點(diǎn)并與它結(jié)合，剪接因子U2AF與富含嘧啶的序列結(jié)合；U2-snRNP取代BBP，并與分支點(diǎn)的一致序列配對(duì)。然而，U2-snRNA與分支點(diǎn)一致序列之間的配對(duì)并不完美，在分支點(diǎn)內(nèi)唯獨(dú)有一個(gè)A無(wú)互補(bǔ)配對(duì)的U，因此，這個(gè)“孤零零”的A就突出在雙螺旋外而被激活，為剪接的第一次轉(zhuǎn)酯反應(yīng)提供了便利；U1-snRNP與5'-剪接點(diǎn)的一致序列互補(bǔ)配對(duì)；U4/U6-U5-snRNP三聚體進(jìn)入剪接體。剪接體的組裝與剪接反應(yīng)分支點(diǎn)結(jié)合蛋白（BBP）識(shí)別分支點(diǎn)并與31剪接體的組裝與剪接反應(yīng)（續(xù)）U6一方面代替U1-snRNP與5'-剪接點(diǎn)的一致序列結(jié)合，另一方面與U4脫離，轉(zhuǎn)而與U2結(jié)合；U6的“腳踩兩只船”將分支點(diǎn)上突出的腺苷酸上的2'-OH拉近到5'-剪接點(diǎn)，為第一次轉(zhuǎn)酯反應(yīng)創(chuàng)造了條件；在進(jìn)行第一次轉(zhuǎn)酯反應(yīng)以后，緊接著U5-snRNP經(jīng)歷了依賴于ATP的重排，將相鄰的外顯子并置在一起，為第二次轉(zhuǎn)酯反應(yīng)創(chuàng)造了條件；第一次轉(zhuǎn)酯反應(yīng)中游離出來(lái)的外顯子上的3'-OH親核進(jìn)攻5'-剪接點(diǎn)上的磷酸二酯鍵，導(dǎo)致內(nèi)含子以套索結(jié)構(gòu)釋放出來(lái)并很快被水解，而外顯子則被連接起來(lái)；一旦剪接反應(yīng)完成，剪接體的所有成分即解體，U6-snRNP與U4-snRNP重新結(jié)合參與下一輪剪接反應(yīng)。剪接體的組裝與剪接反應(yīng)（續(xù)）U6一方面代替U1-snRNP與32剪接體的組裝和去組裝

剪接體的組裝和去組裝33在招募U4/U6-U5snRNP時(shí)發(fā)生的RNA相互作用在U1和U4離開(kāi)剪接體以后發(fā)生的RNA相互作用在招募U4/U6-U5snRNP時(shí)發(fā)生的RNA相互作用在U34轉(zhuǎn)錄后加工ppt課件35分支點(diǎn)腺苷酸2‘–羥基的突出以及5’–剪接點(diǎn)和3‘–剪接點(diǎn)的結(jié)構(gòu)

分支點(diǎn)腺苷酸2‘–羥基的突出以及5’–剪接點(diǎn)和3‘–剪36真核細(xì)胞剪接體的裝配示意圖真核細(xì)胞剪接體的裝配示意圖37次要剪接途徑GU-AG規(guī)則適合絕大多數(shù)斷裂基因，以此為剪接信號(hào)的剪接途徑被稱為主要剪接途徑。但近幾年來(lái)，已發(fā)現(xiàn)某些斷裂基因的某些內(nèi)含子的剪接信號(hào)并不遵守GU-AG規(guī)則，例如，人PCNA基因的第6個(gè)內(nèi)含子、人軟骨基質(zhì)蛋白的第7個(gè)內(nèi)含子、Rep-3的第6個(gè)內(nèi)含子和果蠅的一種同源異形盒轉(zhuǎn)錄因子的內(nèi)含子均以AT開(kāi)頭，AC結(jié)尾。除此以外，這一類內(nèi)含子在5'-剪接點(diǎn)和分支點(diǎn)上具有高度保守的序列，分別是ATATCCTY和TCCTTRAY。含有與這兩段保守序列互補(bǔ)序列的U11和U12-snRNAs參與AT-AC內(nèi)含子的剪接，另外兩種snRNAs即U4atac和U6atac分別代替U4和U6參與這種剪接途徑，只有U5被證明同時(shí)參與主要剪接途徑和次要剪接途徑。次要剪接途徑GU-AG規(guī)則適合絕大多數(shù)斷裂基因，以此為剪接信38為什么只有mRNA被snRNPs剪接？RNA聚合酶的CTD是剪接必需的剪接體內(nèi)的剪接因子與CTD作用這保證來(lái)自RNA聚合酶II的轉(zhuǎn)錄物處于和剪接機(jī)構(gòu)正確的相互作用的位置。為什么只有mRNA被snRNPs剪接？RNA聚合酶的CTD是39選擇性剪接和反式剪接選擇性剪接剪接是精確的，但是...一種mRNA前體可以通過(guò)去除不同的內(nèi)含子/外顯子組合而剪接成兩種以上的mRNA，從而導(dǎo)致一個(gè)基因可以編碼多種蛋白質(zhì)選擇性剪接受到調(diào)節(jié)果蠅的性別決定與選擇性剪接有關(guān)反式剪接發(fā)生在兩個(gè)mRNA分子之間的剪接比較罕見(jiàn)自然界只發(fā)現(xiàn)在錐體蟲(chóng)和秀麗線蟲(chóng)選擇性剪接和反式剪接選擇性剪接40轉(zhuǎn)錄后加工ppt課件41加帽加尾反式剪接加帽加尾反式剪接42mRNA前體的編輯定義任何發(fā)生在轉(zhuǎn)錄后編碼區(qū)內(nèi)的序列變化主要類型1)尿苷酸的插入2)C→U(哺乳動(dòng)物的ApoB-48)3)A→I(哺乳動(dòng)物谷氨酸受體的一個(gè)亞基)機(jī)制1)gRNA2)特殊的脫氨酶意義1)提高遺傳信息的容量2)創(chuàng)造終止密碼子和起始密碼子mRNA前體的編輯定義43COXIIDNA：…GTATAAAAGTAGAGAACCTGG…COXIIRNA：…GUAUAAAAGUAGAUUGUAUACCTGG…尿苷酸的插入COXIIDNA：…GTATAAAAGTAGA44錐體蟲(chóng)COXIIImRNA前體在編輯過(guò)程中插入大量的尿苷酸錐體蟲(chóng)COXIIImRNA前體在編輯過(guò)程中插入大量的尿苷酸45雜交編輯雜交編輯雜交編輯雜交編輯46mRNAgRNAmRNAgRNAmRNAgRNAmRNAgRNA47利什曼原蟲(chóng)細(xì)胞色素bmRNA通過(guò)編輯創(chuàng)造終止密碼子利什曼原蟲(chóng)細(xì)胞色素bmRNA通過(guò)編輯創(chuàng)造終止密碼子48小腸上皮細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的ApoB蛋白的Pre-mRNA的編輯小腸上皮細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的ApoB蛋白的Pre-mRNA的編輯49發(fā)生在哺乳動(dòng)物的谷氨酸受體某一個(gè)亞基mRNA上的編輯谷氨酸受體屬于離子通道。已發(fā)現(xiàn)體內(nèi)某些谷氨酸離子通道允許Na+和Ca2+通過(guò)，而某些通道只讓Na+通過(guò)。研究表明，構(gòu)成通道的某一個(gè)亞基的mRNA前體發(fā)生了編輯：在ADARs催化下，其mRNA前體某一特定的A被轉(zhuǎn)變成I，致使編碼Gln的密碼子—CAG變成了編碼Arg的密碼子—CIG。由于這個(gè)被編輯的密碼子編碼的氨基酸殘基正好位于離子通道的壁上，就直接影響到了通道的通透性，當(dāng)帶正電荷的Arg取代了原來(lái)不帶電荷的Gln以后，Ca2+無(wú)法通過(guò)。發(fā)生在哺乳動(dòng)物的谷氨酸受體某一個(gè)亞基mRNA上的編輯谷氨酸受50編輯的意義編輯的意義51rRNA前體的后加工原核生物-剪切、修剪和修飾真核生物1)剪切、修剪和修飾（需要snoRNA）2)剪接（某些真核生物，如四膜蟲(chóng)）rRNA前體的后加工原核生物52原核細(xì)胞rRNA前體的后加工原核細(xì)胞rRNA前體的后加工53真核細(xì)胞核rRNA前體的后加工真核細(xì)胞核rRNA前體的后加工54由snoRNA指導(dǎo)的rRNA前體的修飾由snoRNA指導(dǎo)的rRNA前體的修飾55snoRNA指導(dǎo)的2′-O甲基化核糖和假尿苷形成snoRNA指導(dǎo)的2′-O甲基化核糖和假尿苷形成56rRNA前體的自我剪接1981年，ThomasCech發(fā)現(xiàn)它是一個(gè)不依賴于蛋白質(zhì)的自我催化的過(guò)程。整個(gè)剪接過(guò)程分為兩步：首先是充當(dāng)輔助因子的鳥(niǎo)苷或鳥(niǎo)苷酸上的3′-OH親核進(jìn)攻5′-剪接點(diǎn)上的磷酸二酯鍵，致使外顯子和內(nèi)含子之間的磷酸二酯鍵發(fā)生斷裂。同時(shí)，鳥(niǎo)苷或鳥(niǎo)苷酸與內(nèi)含子的5′-端形成新的磷酸二酯鍵；隨后，剛剛暴露出來(lái)的外顯子的3′-OH進(jìn)攻3′-剪接點(diǎn)上的磷酸二酯鍵，導(dǎo)致這里的磷酸二酯鍵的斷裂，這時(shí)內(nèi)含子隨之被切除，而兩個(gè)外顯子則通過(guò)新的磷酸二酯鍵連接起來(lái)。由于這里所發(fā)生的剪接反應(yīng)沒(méi)有任何蛋白質(zhì)的參與，也不需要提供能量，完全是rRNA的前體自我催化，因此Cech把這種具有催化性質(zhì)的RNA稱為核酶，以區(qū)別于傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)催化劑。四膜蟲(chóng)rRNA前體中的內(nèi)含子一般被稱為第一類內(nèi)含子，以便將它與其它性質(zhì)的內(nèi)含子區(qū)分開(kāi)來(lái)。Cech隨后所做的一系列定點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)證明了起催化作用的部分是由414nt組成的內(nèi)含子（IVS-19），它還有其他酶的活性。

rRNA前體的自我剪接1981年，ThomasCech發(fā)現(xiàn)57四膜蟲(chóng)rRNA前體自我剪接的發(fā)現(xiàn)外顯子1外顯子2內(nèi)含子1外顯子1外顯子2內(nèi)含子1+rRNA前體剪接后的外顯子環(huán)狀內(nèi)含子線狀內(nèi)含子rRNA前體核抽取物GTP++++-+-+-++-剪接產(chǎn)物通過(guò)凝膠電泳見(jiàn)到:蛋白質(zhì)不是剪接必需的成分!需要鳥(niǎo)苷酸(GMP,GDP,GTP)或鳥(niǎo)苷四膜蟲(chóng)rRNA前體自我剪接的發(fā)現(xiàn)外顯子1外顯子2內(nèi)含子1外顯58內(nèi)含子外顯子1外顯子2內(nèi)含子外顯子1外顯子259四膜蟲(chóng)rRNA前體的自我剪接四膜蟲(chóng)rRNA前體的自我剪接60四膜蟲(chóng)rRNA內(nèi)含子的二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)四膜蟲(chóng)rRNA內(nèi)含子的二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)61轉(zhuǎn)錄